Name: hyaluronic-acid based hydrogels for 3-dimensional culture of patient-derived glioblastoma cells
Uploaded: 2018-08-24T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Hyaluronic-Acid Based Hydrogels for 3-Dimensional Culture of Patient-Derived Glioblastoma Cells at JoVE.com

Este trabalho foi financiado com recursos do NIH (R21NS093199) e prêmio do UCLA ARC 3R. Nossos sinceros agradecimentos vão para o laboratório do Dr. Harley Kornblum para fornecimento das linhas celulares HK301 e HK157. Agradecemos também núcleo de patologia laboratório de UCLA tecido (TPCL) para cryosectioning, instalação de núcleo de microscopia de luz avançado/espectroscopia (ALMS) em Califórnia nanosistemas Institute (CNSI) na UCLA para uso do microscópio confocal, UCLA Crump Instituto para Imagem molecular para o uso de sistema de imagem IVIS, UCLA Molecular instrumentação Center (MIC) para fornecer a espectroscopia de ressonância magnética e fluxo Cytometry núcleo em Jonsson abrangente Cancer Center (JCCC) na UCLA para fornecimento de instrumentação para o fluxo de citometria.

Todas as etapas de coleta de tecido humano foram realizadas sob protocolos aprovados institucionalmente.
1. Thiolation de ácido hialurônico
Nota: Rácios Molar são demonstrados em relação ao número total de grupos carboxilato, a menos que especificado de outra forma.
<ol><li>Dissolva 500 mg de hialuronato de sódio (HA, 500-750 kDa) 10 mg/ml em água destilada, deionizada (DiH2O) em uma autoclave esterilizada, Erlenmeyer de 250 mL. Agite a soluç?...

<ol>
	<li>Xiao, W., Sohrabi, A., Seidlits, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Integrating the glioblastoma microenvironment into engineered experimental models. , (2017).</li><li>Tibbitt, M. W., Anseth, K. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-specific+orthotopic+glioblastoma+xenograft+models+recapitulate+the+histopathology+and+biology+of+human+glioblastomas+in+situ.">Patient-specific orthotopic glioblastoma xenograft models recapitulate the histopathology and biology of human glioblastomas in situ.</a> Cell Reports. 3 (1), 260-273 (2013).</li><li>Oh, Y. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+validation+of+personalized+treatment+strategy+based+on+genetic+characteristics+of+glioblastoma.">Translational validation of personalized treatment strategy based on genetic characteristics of glioblastoma.</a> PloS one. 9 (8), e103327 (2014).</li><li>Pedron, S., Becka, E., Harley, B. A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+glioma+cell+phenotype+in+3D+matrices+by+hyaluronic+acid.">Regulation of glioma cell phenotype in 3D matrices by hyaluronic acid.</a> Biomaterials. 34 (30), 7408-7417 (2013).</li><li>Wang, C., Tong, X., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineered+3D+brain+tumor+model+to+elucidate+the+effects+of+matrix+stiffness+on+glioblastoma+cell+behavior+using+PEG-based+hydrogels.">Bioengineered 3D brain tumor model to elucidate the effects of matrix stiffness on glioblastoma cell behavior using PEG-based hydrogels.</a> Molecular pharmaceutics. 11 (7), 2115-2125 (2014).</li><li>Zhu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioactive+modification+of+poly(ethylene+glycol)+hydrogels+for+tissue+engineering.">Bioactive modification of poly(ethylene glycol) hydrogels for tissue engineering.</a> Biomaterials. 31 (17), 4639-4656 (2010).</li><li>Stern, R., Asari, A. 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L., Zerner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ellman's+reagent:+5,+5&#8242;-dithiobis+(2-nitrobenzoic+acid)-a+reexamination.">Ellman's reagent: 5, 5&#8242;-dithiobis (2-nitrobenzoic acid)-a reexamination.</a> Analytical biochemistry. 94 (1), 75-81 (1979).</li><li>Jin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+characterization+of+hyaluronic+acid-poly+(ethylene+glycol)+hydrogels+via+Michael+addition:+An+injectable+biomaterial+for+cartilage+repair.">Synthesis and characterization of hyaluronic acid-poly (ethylene glycol) hydrogels via Michael addition: An injectable biomaterial for cartilage repair.</a> Acta biomaterialia. 6 (6), 1968-1977 (2010).</li><li>Ozawa, T., James, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+intracranial+brain+tumor+xenografts+with+subsequent+analysis+of+tumor+growth+and+response+to+therapy+using+bioluminescence+imaging.">Establishing intracranial brain tumor xenografts with subsequent analysis of tumor growth and response to therapy using bioluminescence imaging.</a> Journal of visualized experiments. 41, 3-7 (2010).</li></ol>

Geração de dados podem ser reproduzidos usando este sistema de cultura 3D requer: 1) consistente para lotes thiolation de HA, 2) prática para atingir eficiente mistura de precursores de hidrogel e manipulação de hidrogel culturas para evitar danos e 3) otimizado de semeadura densidade para cada linha de celular usada.
Quando uma porcentagem de peso específico de HA é desejada no hidrogel, o grau de thiolation de HA determina a densidade de ligação cruzada. Recomendamos usar uma quanti...

Sistemas tridimensionais (3D) cultura recapitulate interações entre células e a sua envolvente da matriz extracelular (ECM) em tecidos nativos melhores que seus bidimensional (2D) homólogos1,2. Avanços na engenharia de tecidos têm rendido plataformas sofisticada cultura 3D que permitem investigações controladas em componentes 1) como químicas e físicas da matriz microambiente afetam célula comportamentos e 2) a eficácia de novas terapêuticas estratégias para uma série de doenças, incluindo câncer2. Enquanto modelos em vitro não podem considerar fatores sistêmicos, tais como sinais do sistema endócrino e imunes e, portanto, não podem substituir completamente modelos na vivo , eles fornecem várias vantagens, incluindo a reprodutibilidade, controle experimental, acessibilidade e velocidade. Aqui, descrevemos o uso do cérebro-mimética hidrogel em 3D que culturas de células de tumor de cérebro de paciente-derivado capturar muitos aspectos da fisiologia de tumor, em particular, a dinâmica de aquisição de resistência do tratamento3. Em comparação com outros métodos em vitro , essas culturas melhor representam modelos de tumor na vivo e observações clínicas3.
Glioblastoma (GBM) é o câncer mais frequente e letal, originários do cérebro, com uma sobrevida média de apenas 1-2 anos,4,5. Nos últimos anos, muitos estudos têm incidido sobre a influência do ambiente de matriz de tumor em GBM6,7,8. O único cérebro ECM tem sido relatado para afetar resistência terapêutica6,7,8,9,10,11 , proliferação e migração de células GBM , 12. ácido hialurônico (Ah) é um glicosaminoglicano abundante (GAG) no cérebro, onde ele interage com outros GAGs e proteoglicanos para formar um hidrogel, como malha13. Muitos estudos têm relatado a superexpressão de HA em tumores GBM e seus efeitos subsequentes sobre câncer progressão8,9,13,14,15,16 ,17. Outros componentes de ECM também afetam GBM tumor crescimento e invasão6,7,15,18. Por exemplo, fibronectina e vitronectina, que normalmente são overexpressed em GBM, induzem a heterodimerization de receptores de superfície integrinas celular através da ligação à sequência de "RGD" e iniciar o complexas cascatas de sinalização que promovem a sobrevivência de tumor19 ,20,21. Além de influências bioquímicas, propriedades físicas da matriz de tecido também afetam GBM progressão22,23.
Aquisição contínua de resistência às terapias é um dos principais motores do GBM letalidade4. Mostrando resultados promissores em modelos 2D ou gliomasphere de drogas falharam em estudos subsequentes em animais e casos clínicos3, indicando que os efeitos dos fatores microenvironmental contribuíram significativamente para GBM tumor resposta1. Enquanto modelos animais podem fornecer um 3D, fisiologicamente adequadas microambiente para xenografted células doentes e gerar resultados clinicamente relevantes24,25, a complexidade do cérebro microambiente na vivo torna-se desafiador para determinar quais recursos, incluindo interações célula-matriz, são os resultados-chave para específica biológicos. Identificação de novos alvos terapêuticos beneficiará da utilização de plataformas de cultura simplificado de propriedades bioquímicas e biofísicas definidas.
Ao contrário dos modelos anteriormente relatados biomaterial do GBM tumor microambiente26,27 que não alcançaram o verdadeiro controle ortogonal sobre características físicas e bioquímicas individuais de ECM, a plataforma de biomateriais relatados aqui permite desacoplamento das contribuições dos vários recursos independentes de fenótipo de células GBM. Aqui, apresentamos um sistema de hidrogel HA-based, ortogonalmente ajustáveis, para cultura 3D do paciente-derivado de células de GBM. Hidrogel é formados a partir de dois componentes de polímero: HA 1) biologicamente ativo e 2) biologicamente inerte polietileno glicol (PEG). PEG é um material biocompatível e hidrofílico amplamente utilizado com adsorção de baixa proteína e imunogenicidade mínimo28. Aqui, cerca de 5% de partes de ácido glicurônico HA correntes são acrescida com grupos tiol para habilitar ligando para um comercialmente disponível 4-braço-PEG finalizado com maleimides através da adição de Michael-tipo. Na sua forma mais comum no corpo, HA existe em cadeias de alto peso molecular (HMW). Aqui, um baixo grau de modificação de HMW HA (500-750 kDa) ajuda a preservar interações nativas de HA e seus receptores celulares, incluindo CD4429. Substituindo PEG-tiol para HA-tiol, mantendo uma constante relação molar de tióis totais de maleimides, HA concentração pode ser dissociada da propriedades mecânicas de hidrogel a resultante. Além disso, controles estequiométricos podem ser usados para conjugar terminada em cisteína peptídeos para um número definido de médio de braços maleimide terminada em cada 4-braço-PEG. Incorporação de peptídeos derivados de ECM, adesivos permite interações com integrinas em culturas de células, através do qual os sinais bioquímicos e químicos são transduzidas1. Adição de maleimide-tiol ocorre muito rapidamente em condições fisiológicas, minimizando o tempo necessário para encapsulamento de célula e maximizando a sobrevivência de células derivadas de paciente. Além disso, culturas de hidrogel podem ser tratadas como amostra de tecido típico e são compatíveis com as técnicas de caracterização padrão incluindo mancha ocidental, citometria de fluxo e mancha da imunofluorescência. O protocolo seguinte descreve os procedimentos para a fabricação de hidrogel, estabelecer 3D culturas de células GBM derivado de paciente e técnicas de análise bioquímica.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:2204px;" width="2203">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">pH meter</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">N/A</td>
			<td style="width:1579px;">Any pH meter that has pH 2-10 sensitivity</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Stir plate</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">N/A</td>
			<td>General lab equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Erlenmeyer flask (125mL)</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">FB-501-125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">dialysis tubes</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">21-152-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">2L polypropylene beaker</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">S01916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">sodium hyaluronan</td>
			<td style="width:136px;">Lifecore</td>
			<td style="width:121px;">HA700k-5</td>
			<td>500-750 kDa range</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC)</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">PI-22980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">N-hydroxysuccinimide (NHS)</td>
			<td style="width:136px;">sigma aldrich</td>
			<td style="width:121px;">130672-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Hydrochloric acid (HCl)</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">SA48-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">SS266-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Cystamine dihydrochloride</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">AC111770250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Dithiolthreitol (DTT)</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">BP172-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:368px;">Ellman&#39;s test reagent (5-(3-Carboxy-4-nitrophenyl)disulfanyl-2-nitrobenzoic acid</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:121px;">D218200-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Deuterated water (deuterium oxide)</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">AC166301000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">0.22&#181;m vacuum driven filter</td>
			<td style="width:136px;">CellTreat</td>
			<td style="width:121px;">229706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">P32080-100T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Hanks&#39; balanced salt saline (HBSS)</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">MT-21-022-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">4-arm-PEG-maleimide</td>
			<td style="width:136px;">JenKem Technology</td>
			<td style="width:121px;">A7029-1</td>
			<td>molecular weight around 20kDa</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">4-arm-PEG-thiol</td>
			<td style="width:136px;">JenKem Technology</td>
			<td style="width:121px;">A7039-1</td>
			<td>molecular weight around 20kDa</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">L-Cysteine&#160;</td>
			<td style="width:136px;">sigma aldrich</td>
			<td style="width:121px;">C7880-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">RGD ECM mimetic peptide</td>
			<td style="width:136px;">Genscript Biotech</td>
			<td style="width:121px;">N/A</td>
			<td>Custom peptide with sequence &#34;GCGYGRGDSPG&#34;, N-terminal should be acetylated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">silicone molds</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:121px;">GBL664201-25EA</td>
			<td>Use razor blade to cut into single pieces</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">complete culture medium</td>
			<td style="width:136px;">Various</td>
			<td style="width:121px;">Various</td>
			<td>DMEM/F12 (Thermofisher) with non-serum supplement (G21 from GeminiBio), epidermal growth factor 50ng/mL (Peprotech), fibroblast growth factor 20ng/mL (Pepro Tech) and heprain 25&#181;g/mL (Sigma Aldrich), culture medium varies in different labs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">patient derived GBM cell</td>
			<td style="width:136px;">N/A</td>
			<td style="width:121px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">20G needle</td>
			<td style="width:136px;">BD medical</td>
			<td style="width:121px;">305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">1mL syringe</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">14-823-434</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">10mL syringe</td>
			<td style="width:136px;">BD medical</td>
			<td style="width:121px;">302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">RIPA Buffer</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">PI-89901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">protease/phosphatase inhibitor mini tablet</td>
			<td style="width:136px;">sigma aldrich</td>
			<td style="width:121px;">5892970001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">vortex shaker</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">12-814-5Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">TrypLE express</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">12604013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">70&#181;m cell strainer</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">22-363-548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">AC416785000</td>
			<td>Dissolve 4% (w/v) in PBS, keep pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">D-sucrose</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">BP220-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Optimal Cutting Temperature (O.C.T.) compound</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">NC9373881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Cell culture incubator</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">N/A</td>
			<td>Any General One with 5% CO2 and 37C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">fridge/freezer</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">N/A</td>
			<td>Any General Lab equipment with -20C and -80C capacity</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Disposable embedding molds</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">12-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Lyapholizer</td>
			<td style="width:136px;">Labconco</td>
			<td style="width:121px;">N/A</td>
			<td>Any -105C freeze dryers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">HEPES</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">BP310-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Amber vial</td>
			<td style="width:136px;">Kimble Chase</td>
			<td style="width:121px;">60912D-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Wide orifice pipette tips</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">9405120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">2-methylbutane</td>
			<td style="width:136px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:121px;">03551-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:368px;">Dry Ice</td>
			<td style="width:136px;">N/A</td>
			<td style="width:121px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hyaluronic-acid based hydrogels for 3-dimensional culture of patient-derived glioblastoma cells

Glioblastoma (GBM) é o câncer mais comum, ainda mais letal, do sistema nervoso central. Nos últimos anos, muitos estudos têm focado como a matriz extracelular (ECM) do ambiente exclusivo do cérebro, como o ácido hialurónico (HA), facilita a invasão e a progressão do GBM. No entanto, a maioria em vitro cultura de modelos incluem células GBM fora do contexto de um ECM. Xenografts murino de células GBM são usados geralmente também. No entanto, na vivo modelos dificultam a isolar as contribuições das características individuais do microambiente do tumor complexo comportamento do tumor. Aqui, descrevemos uma plataforma de base de hidrogel, tridimensional (3D) cultura HA que permite que os pesquisadores independentemente alterar a rigidez e a concentração de HA. Alto peso molecular HA e polietileno glicol (PEG) compõem o hidrogel, que são a quitosana através da adição de Michael-tipo na presença de células vivas. Culturas de hidrogel 3D do paciente-derivado viabilidade de exposição de células GBM e proliferação taxas tão bom quanto, ou melhor, quando cultivadas como padrão gliomaspheres. O sistema de hidrogel também permite a incorporação de peptídeos ECM-mimética para isolar os efeitos de interações específicas célula-ECM. Hidrogel é opticamente transparente para que células vivas podem ser fotografadas na cultura 3D. Finalmente, HA hidrogel culturas são compatíveis com as técnicas convencionais para análises moleculares e celulares, incluindo PCR, mancha ocidental e cryosectioning seguido por mancha da imunofluorescência.

Para cada lote de thiolated HA, o grau de thiolation deve ser verificado usando H1-NMR ou teste de um Ellman. HA modificação usando o procedimento descrito aqui consistentemente gera ~ 5% thiolation (definido como a razão molar de tióis de dissacarídeos HA) (Figura 1).
Configurando esta nova plataforma de cultura vai exigir cada laboratório para realizar testes rigo...

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Hyaluronic-Acid Based Hydrogels for 3-Dimensional Culture of Patient-Derived Glioblastoma Cells

Aqui, apresentamos um protocolo para cultura tridimensional de células de glioblastoma paciente-derivado dentro ortogonalmente sintonizáveis biomateriais projetados para imitar a matriz do cérebro. Essa abordagem fornece uma em vitro, plataforma experimental que mantém muitas características de na vivo glioblastoma células tipicamente perdidas na cultura.

Ácido hialurônico baseado hidrogel para 3-Dimensional cultura de células de Glioblastoma derivado de paciente

Glioblastoma (GBM) is the most common, yet most lethal, central nervous system cancer. In recent years, many studies have focused on how the extracellular ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Micropatterned Surfaces to Study Hyaluronic Acid Interactions with Cancer Cells

Superfícies micropatterned para estudar as interações ácido hialurônico com células de câncer

Cancer invasion and progression involves a motile cell phenotype, which is under complex regulation by growth factors/cytokines and extracellular matrix ...

Bioengenharia

Fabrication of Micropatterned Hydrogels for Neural Culture Systems using Dynamic Mask Projection Photolithography

Fabricação de hidrogéis micropatterned para Sistemas de Cultura Neural usando fotolitografia Projeção Dinâmica Máscara

Increasingly, patterned cell culture environments are becoming a relevant technique to study cellular characteristics, and many researchers believe in the ...

A Method for Ovarian Follicle Encapsulation and Culture in a Proteolytically Degradable 3 Dimensional System

Um método para Encapsulation ovário folículo e Cultura em um proteoliticamente Degradáveis ​​3 Sistema Dimensional

The ovarian follicle is the functional unit of the ovary that secretes sex hormones and supports oocyte maturation. In vitro  follicle techniques provide ...

Alginate Hydrogels for Three-Dimensional Organ Culture of Ovaries and Oviducts

Hidrogéis alginato para Tridimensional Cultura Órgão de ovários e tubas uterinas

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer deaths in women and has a 63% mortality rate in the United States1. The cell type of origin for ...

Organotypic Collagen I Assay: A Malleable Platform to Assess Cell Behaviour in a 3-Dimensional Context

Organotípica Colágeno Ensaio I: Uma Plataforma maleável para Avaliar Comportamento celular em um contexto de 3-Dimensional

Cell migration is fundamental to many aspects of biology, including development, wound healing, the cellular responses of the immune system, and ...

Rotating Cell Culture Systems for Human Cell Culture: Human Trophoblast Cells as a Model

Sistemas Célula de rotação de cultura para cultura de células humanas: células trofoblásticas Humanos como um modelo

The field of human trophoblast research aids in  understanding the complex environment established during placentation. Due to the  nature of these ...

Cultivation of Human Neural Progenitor Cells in a 3-dimensional Self-assembling Peptide Hydrogel

Cultivo de células progenitoras neurais em um hidrogel Peptide 3-dimensional de auto-montagem

The  influence of 3-dimensional (3D) scaffolds on growth, proliferation and finally  neuronal differentiation is of great interest in order to find new ...

Self-reporting Scaffolds for 3-Dimensional Cell Culture

Andaimes auto-relato para cultura de células 3-Dimensional

Culturing cells in 3D on appropriate scaffolds is thought to better mimic the in vivo microenvironment and increase cell-cell interactions. The resulting ...

The Synthesis of RGD-functionalized Hydrogels as a Tool for Therapeutic Applications

A Síntese de hidrogéis RGD-funcionalizado como uma ferramenta para aplicações terapêuticas

The use of polymers as biomaterials has provided significant advantages in therapeutic applications. In particular, the possibility to modify and ...

Light-mediated Formation and Patterning of Hydrogels for Cell Culture Applications

Formação Light-mediada e padronização de hidrogéis para aplicações de cultura celular

Click chemistries have been investigated for use in numerous biomaterials applications, including drug delivery, tissue engineering, and cell culture. In ...