Name: saccharomyces cerevisiae exponential growth kinetics in batch culture to analyze respiratory and fermentative metabolism
Uploaded: 2018-09-30T14:00:00
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这一项目得到了委员会 Ciencia y Tecnología (赠款号 293940) 和基金会 TELMEX-TELCEL (赠款号 162005585) 的赠款的支助, 两者都是 IKOM。

1. 文化媒体和接种准备
<ol><li>准备100毫升2% 酵母萃取物-蛋白胨-葡萄糖 (YPD) 液体培养基 (添加1克酵母萃取物, 2 克酪蛋白蛋白胨, 2 克葡萄糖到100毫升蒸馏水)。将3毫升的介质放入15毫升消毒锥形管中。在121摄氏度和 1.5 psi 的情况下, 将介质蒸压15分钟。 注: 介质可存储至多一个月的4–8°c。</li>
	<li>用3毫升的凉无菌 2% YPD 汤和 250 ul 的酵母细胞, 在-20 摄氏度的甘油中保存一只锥形管接种.在30?...

<ol>
	<li>Parrella, E., Longo, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chronological+life+span+of+Saccharomyces+cerevisiae+to+study+mitochondrial+dysfunction+and+disease.">The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae to study mitochondrial dysfunction and disease.</a> Methods. 46 (4), 256-262 (2008).</li><li>Rosas Lemus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+glycolysis-derived+hexose+phosphates+in+the+induction+of+the+Crabtree+effect.">The role of glycolysis-derived hexose phosphates in the induction of the Crabtree effect.</a> Journal of Biological Chemistry. , (2018).</li><li>Xu, X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Warburg+effect+or+reverse+Warburg+effect?+A+review+of+cancer+metabolism.">Warburg effect or reverse Warburg effect? A review of cancer metabolism.</a> Oncology Research and Treatment. 38 (3), 117-122 (2015).</li><li>De Deken, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Crabtree+effect:+a+regulatory+system+in+yeast.">The Crabtree effect: a regulatory system in yeast.</a> Journal of General Microbiology. 44 (2), 149-156 (1966).</li><li>Hagman, A., Sall, T., Piskur, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+yeast+short-term+Crabtree+effect+and+its+origin.">Analysis of the yeast short-term Crabtree effect and its origin.</a> The FEBS Journal. 281 (21), 4805-4814 (2014).</li><li>Hammad, N., Rosas-Lemus, M., Uribe-Carvajal, S., Rigoulet, M., Devin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Crabtree+and+Warburg+effects:+Do+metabolite-induced+regulations+participate+in+their+induction?.">The Crabtree and Warburg effects: Do metabolite-induced regulations participate in their induction?.</a> Biochim Biophys Acta. 1857 (8), 1139-1146 (2016).</li><li>Keating, E., Martel, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimetabolic+Effects+of+Polyphenols+in+Breast+Cancer+Cells:+Focus+on+Glucose+Uptake+and+Metabolism.">Antimetabolic Effects of Polyphenols in Breast Cancer Cells: Focus on Glucose Uptake and Metabolism.</a> Frontiers in Nutrition. 5, 25 (2018).</li><li>Pfeiffer, T., Morley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evolutionary+perspective+on+the+Crabtree+effect.">An evolutionary perspective on the Crabtree effect.</a> Frontiers in Molecular Biosciences. 1, 17 (2014).</li><li>Olivares-Marin, I. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+carbon+and+nitrogen+sources+depend+on+RIM15+and+determine+fermentative+or+respiratory+growth+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Interactions between carbon and nitrogen sources depend on RIM15 and determine fermentative or respiratory growth in Saccharomyces cerevisiae.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 102 (10), 4535-4548 (2018).</li><li>Monod, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+growth+of+bacterial+cultures.">The growth of bacterial cultures.</a> Annual Review of Microbiology. 3 (1), 371-394 (1949).</li><li>Cui, S., Xu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+mathematical+models+for+the+growth+of+tumors+with+time+delays+in+cell+proliferation.">Analysis of mathematical models for the growth of tumors with time delays in cell proliferation.</a> Journal of Mathematical Analysis and Applications. 336 (1), 523-541 (2007).</li><li>Benzekry, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical+mathematical+models+for+description+and+prediction+of+experimental+tumor+growth.">Classical mathematical models for description and prediction of experimental tumor growth.</a> Public Library of Science Computational Biology. 10 (8), e1003800 (2014).</li><li>Ramos-Gomez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+induces+mitochondrial+dysfunction+and+decreases+chronological+life+span+of+Saccharomyces+cerevisiae+in+a+glucose-dependent+manner.">Resveratrol induces mitochondrial dysfunction and decreases chronological life span of Saccharomyces cerevisiae in a glucose-dependent manner.</a> Journal of Bioenergetics and Biomembranes. 49 (3), 241-251 (2017).</li><li>Madrigal-Perez, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy-dependent+effects+of+resveratrol+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Energy-dependent effects of resveratrol in Saccharomyces cerevisiae.</a> Yeast. 33 (6), 227-234 (2016).</li><li>Peleg, M., Corradini, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+growth+curves:+what+the+models+tell+us+and+what+they+cannot.">Microbial growth curves: what the models tell us and what they cannot.</a> Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 51 (10), 917-945 (2011).</li></ol>

自从 j. Monod10表示, 对细菌培养的研究是微生物学的基本方法, 已经过去了很长一段时间。分子工具的出现延缓了生长作为一种技术的使用和研究。尽管增长的复杂性涉及许多相互关联的过程, 但它的基本机制可以用数学模型11来描述。这是一个健壮的方法, 可作为一个补充工具, 以阐明最复杂的分子机制12。
要获得此方法的?...

酿酒酵母的生长已成为识别许多生理和分子机制的宝贵工具。增长主要用三种方法来衡量: 现场测试的串行稀释、集落单元计数和生长曲线。这些技术可以单独使用或结合各种基质、环境条件、突变体和化学物质来调查特定的反应或表型。
线粒体呼吸是一个生物过程中, 生长动力学已成功地应用于发现未知机制。在这种情况下, 补充的增长媒体与非可发酵的碳源, 如甘油, 乳酸, 或乙醇 (这是完全代谢的线粒体呼吸), 作为唯一的碳和能源的来源, 可以评估呼吸生长是检测氧化磷酸化活性1的扰动的重要因素。另一方面, 用生长动力学模型来破译发酵后的机理是很复杂的。
对发酵和线粒体呼吸的研究对于阐明某些表型的分子机制, 如 Crabtree 和华宝效应2,3至关重要。Crabtree 效应的特点是酵通量增加, 线粒体呼吸抑制, 并建立发酵为主要途径生成 ATP 的存在高浓度的可发酵碳水化合物 (>0.8 毫米)4,5。华宝效应是代谢模拟到 Crabtree 效应, 不同的是, 在哺乳动物细胞, 发酵的主要产品是乳酸6。的确, 华宝效应是由多种癌细胞所表现出来的, 即使在氧气7的情况下, 也会引发葡萄糖的摄取和消耗。因此, 研究从呼吸到发酵的 Crabtree 效应的分子基础, 既有生物技术的影响 (乙醇的生产), 也有潜在的癌症研究的影响。
酵母的生长可能是研究 Crabtree 和华宝效应的合适工具。这个想法基于的事实是, 在酵母指数阶段, 用于生产 ATP 的中心途径是线粒体呼吸和发酵, 这是维持生长必不可少的。例如,酵母的生长与 ATP 生成通路的功能密切相关。在美国酿酒酵母中,线粒体呼吸产生的每葡萄糖分子大约有18个 atp 分子, 而发酵只产生2个 atp 分子, 因此预计生长速率与代谢通路有紧密的联系。生产 ATP8。在这方面, 当发酵是生成 atp 的主要途径时, 酵母通过提高葡萄糖摄取率来补偿低 atp 的产量。相反, 使用线粒体呼吸作为主要 ATP 来源的酵母细胞的葡萄糖消耗量是低的。这表明, 在确定 ATP 的生成方式之前, 酵母对碳水化合物的可用性有很重要的意义。因此, 葡萄糖的有效性在酵母发酵和线粒体呼吸之间的转换中起着重要的作用.在大量葡萄糖的存在下, 酵母更倾向于发酵作为生成 ATP 的中心途径。有趣的是, 当酵母发酵时, 特定的生长速率保持在最大值。另一方面, 在低血糖水平下,酵母通过线粒体呼吸产生 ATP, 维持较低的生长速率。因此, 葡萄糖浓度的变化和其他碳源的使用导致酵母在发酵和呼吸生长之间的偏好发生变化。考虑到这一事实的指数增长方程, 可以获得的生物意义的动力学参数, 如加倍时间 (Dt) 和特定增长率 (µ)。例如, 当酵母使用线粒体呼吸作为主要途径时, 发现了较低的µ值。相反, 在有利于发酵的条件下, 发现了较高的µ值。这种方法可用于测量任何影响酵母发酵和线粒体呼吸的化学物质的可能机制.
本文的目的是提出一种基于生长动力学的方法来筛选特定物质/化合物对线粒体呼吸或发酵的影响。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Orbital Shaker</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">4353</td>
			<td style="width:167px;">For inoculum incubation or conical fask cultures</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bioscreen&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Growth curves</td>
			<td style="width:119px;">C MBR</td>
			<td>For batch cultures in microplates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glucose</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">G7021</td>
			<td>For YPD broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Peptone from casein, enzymatic digest</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td align="right" style="width:119px;">82303</td>
			<td>For YPD broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Yeast extract</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">09182-1KG-F</td>
			<td>For YPD broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bacteriological Agar</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">A5306</td>
			<td>For YPD agar preparation</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td>S8282</td>
			<td>For SC broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">(NH4)2SO4</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td>A4418</td>
			<td>For SC broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Yeast nitrogen base without amino acids and ammonium sulfate</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Y1251</td>
			<td>For SC broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Yeast synthetic drop-Out medium supplements</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Y1501</td>
			<td>For SC broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ammonium sulfate granular</td>
			<td style="width:71px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:119px;">0792-R</td>
			<td>For medium supplementation example</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Resveratrol</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">R5010</td>
			<td>For medium supplementation example</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Galactose</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td>G8270</td>
			<td>For medium supplementation example</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sucrose</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">S7903</td>
			<td>For medium supplementation example</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Absolut ethanol</td>
			<td style="width:71px;">Merck</td>
			<td align="right">107017</td>
			<td>For medium supplementation example</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glycerol</td>
			<td style="width:71px;">J.T. Baker</td>
			<td>2136-01</td>
			<td>For medium supplementation example</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">GraphPad Prism</td>
			<td style="width:71px;">GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td>For data analysis</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Honeycomb microplates</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td align="right">9502550</td>
			<td>For microplate cultures</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

saccharomyces cerevisiae exponential growth kinetics in batch culture to analyze respiratory and fermentative metabolism

酵母细胞在指数阶段通过发酵和/或线粒体呼吸产生 ATP 来维持其生长。发酵碳浓度主要控制酵母细胞如何产生 ATP;因此, 发酵碳水化合物水平的变化推动了酵母的能量代谢。本文介绍了一种基于指数酵母生长的高通量方法, 以估计浓度变化和碳源性质对呼吸和发酵代谢的影响。通过测定 600 nm 的光密度 (OD), 在微板块或摇动的锥形烧瓶中测定酵母的生长。然后用绘制 OD 与时间的方法建立生长曲线, 允许指数相的识别和选择, 并配以指数增长方程获得动力学参数。低特异增长率以加倍倍的速度通常代表呼吸增长。反之, 更高的特定增长率以低倍倍的速度表明发酵生长。利用已知的呼吸或发酵条件, 如非发酵碳源或较高浓度的发酵糖, 估计加倍时间和特定生长速率的阈值。这是为每个特定的应变得到。最后, 将所计算的动力学参数与阈值进行比较, 确定酵母是否显示发酵和/或呼吸生长。这种方法的优点是它相对简单, 了解物质/化合物对发酵或呼吸代谢的影响。重要的是要强调, 增长是一个复杂和复杂的生物过程;因此, 该方法的初步数据必须通过定量的氧消耗和发酵副产物的积累来证实。因此, 这种技术可以作为初步筛选的化合物/物质, 可能扰乱或提高发酵或呼吸代谢。

生长曲线可用于对酵母菌的呼吸和发酵表型进行初步判别。因此, 我们进行了不同的葡萄糖浓度的酵母(BY4742) 的批次培养, 这些都被报告为诱导发酵生长: 1%, 2% 和 10% (瓦特/v)9。显示发酵表型的文化有一个小的滞后阶段和一个指数阶段以高增长率 (图 1)。乙醇、甘油和乳酸是一种只有通过呼吸才能代谢的碳源;因此, 我们使...

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Saccharomyces cerevisiae Exponential Growth Kinetics in Batch Culture to Analyze Respiratory and Fermentative Metabolism

酿酒酵母间歇培养中的指数生长动力学分析呼吸和发酵代谢

在这里, 我们提出了一个协议, 以估计的呼吸和发酵代谢通过适当的指数增长的酿酒酵母的指数增长方程。动力学参数的计算允许筛选物质/化合物对发酵或线粒体呼吸的影响。

Saccharomyces cerevisiae cells in the exponential phase sustain their growth by producing ATP through fermentation and/or mitochondrial respiration. The ...

这种方法可以帮助回答生物技术和生物医学领域的关键问题，例如沃堡效应和蟹树效应背后的分子基础是什么。该技术的主要优点是，它允许高通量研究某些物质在呼吸和发酵代谢中的作用。首先接种含有三毫升冷却、无菌 2%酵母提取物肽葡萄糖或 YPD 肉汤的 15 毫升圆锥形管，其中 250 微升的 S.cerevisiae 酵母细胞保存在负 20 摄氏度的甘油中。在30摄氏度和200转/小时的轨道摇床中孵育酵母。条纹到 60 毫升， 2% Ypd 阿加填充的彼得里菜第二天早上。在30摄氏度下培养菜，直到观察到孤立的菌落。然后在含有10毫升冷却、无菌2%YPD肉汤的新锥形管中接种单个隔离菌落，在30摄氏度下进行夜间培养，并摇动。对于微孔板生长曲线设置，在无菌的 10-10 孔微孔的每孔中加入 145 微升适当的实验培养介质，并接种每孔的 5 微升过夜培养。然后在30摄氏度的微孔板读卡器中孵育多孔板，在200 rpm下持续搅拌48小时，每30或60分钟测量600纳米的光学密度。对于摇动锥形烧瓶生长曲线设置，接种含有 4.8 毫升适当无菌培养基的 20 毫升圆锥形烧瓶，用 200 微升的预接种培养基，光学密度为 600 纳米，光密度为 2，在 30 摄氏度和 250 rpm 时孵育。每分钟 250 转的搅拌对于实现低浓度碳源的合适生长至关重要，因为我们已经观察到，在呼吸条件中，酵母生长在较低的搅拌速度下减少。为了在24小时内每两小时以600纳米测量光学密度，在900微升蒸馏水中稀释100微升的摇锥形烧瓶，用一毫升分光度计将光度计混合，然后通过移液器轻轻混合。对于数据处理，在适当的统计包软件中，创建新的项目文件，打开新的表和图形菜单，然后选择 XY。在示例数据菜单下，选择从空数据表和点以及连接线图开始。在子列中为复制或错误值保留未选择的 X 节。在 Y 部分中，选择在并排子列中输入 10 个复制值，并绘制均值和误差 SD。然后单击"创建"。输入在 X 列中获取 OD 测量的时间以及从 Y 列中的区域性获取的 OD 值。要确定将 Y 列数据转换为对数的指数增长阶段，请单击"分析"并选择变换分析。使用 Y 等于日志 Y 选择 Y 值并打开结果库。选择变换数据表，单击分析，并选择线性回归分析，通过选择表中的值和抑制控件和 E.In 数据表库，选择数据一个表并单击分析，排除不遵循线性趋势的光学密度值。选择要分析的非线性回归曲线拟合分析和数据集，然后单击"确定"。然后对数据应用适合的最少正方形，使插值部分未选中，然后单击"确定"。接下来，打开一个新的项目文件，并在新的表和图形菜单中，选择列选项，从空数据表和所需的图形开始。设置图形以绘制具有标准偏差的平均值，然后单击"创建"。从结果库中的非线性拟合结果表中复制均值或增量时间值，然后将数据粘贴到列中。最后，点击分析并选择列分析菜单中感兴趣的分析，比较不同营养条件的动力学参数。生长动能阈值因强度而异，必须根据我们在分析中使用的条件进行评估。表现出发酵表型的培养物具有小滞后阶段和高增长率的指数相。主要通过氧化磷酸化获得能量的培养物在指数阶段表现出较长的滞后阶段，生长速度缓慢。使用指数增长方程计算增长曲线的特定增长率和倍增时间，可以设置呼吸和发酵生长值的阈值。例如，在这些具有代表性的实验中，不同白藜芦醇浓度对S.cerevisiae BY4742细胞的影响揭示了细胞能量状态对不同葡萄糖浓度的反应的改变。在这里，补充10%葡萄糖表明，低浓度的铵有利于发酵代谢，这些培养物的延长指数生长阶段就证明了这一点，而较高的浓度则诱发回发酵代谢，在指数阶段的延长滞后阶段和生长速度较慢就证明了这一点。最后，在相同条件下生长的这两种不同酵母菌株之间，可以观察到发酵加倍时间值的显著差异，这突出了验证所分析的每个菌株的倍增时间阈值的必要性。在尝试此过程时，重要的是要记住，此协议仅用于筛选表型。对呼吸和发酵的具体影响必须分别通过耗氧测定或发酵副产品的积累来确认。

Research

JoVE Journal

Biology

Saccharomyces cerevisiae Exponential Growth Kinetics in Batch Culture to Analyze Respiratory and Fermentative Metabolism

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

剖析酿酒酵母 ASCI

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae ...

科研

生物学

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

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脂肪酸定量磷酸化刺激酿酒酵母</em

This protocol describes the growth and stimulation, with the fatty acid oleate, of isotopically heavy and light S. cerevisiae cells. Cells are ground ...

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

微阵列分析FOR酿酒酵母</em

In this protocol, gene expression in yeast (Saccharomyces cerevisiae) is changed after exposure to oxidative stress induced by the addition of hydrogen ...

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

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在酵母用于监测Mitophagy荧光显微镜检测酿酒酵母

Autophagy is important for turnover of cellular components under a range of different conditions. It serves an essential homeostatic function as well as a ...

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

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囊性纤维化跨膜传导调节蛋白表达和纯化酿酒酵母

The  cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride  channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in  ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

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可视化和分析的mRNA分子，使用荧光<em&gt;在原位</em&gt;杂交<em&gt;酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

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耦合检测监控蛋白复性<em&gt;酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）</em

Proteostasis, defined as the combined processes of protein folding/biogenesis, refolding/repair, and degradation, is a delicate cellular balance that must ...

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结合母细胞和波动测试磁分选，以分析基因组不稳定性的过程中有丝分裂细胞衰老<em&gt;酿酒酵母</em

Saccharomyces cerevisiae has been an excellent model system for examining mechanisms and consequences of genome instability. Information gained from this ...

Rapid Identification of Chemical Genetic Interactions in Saccharomyces cerevisiae

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化学遗传相互作用的快速鉴定<em&gt;酿酒酵母</em

Determining the mode of action of bioactive chemicals is of interest to a broad range of academic, pharmaceutical, and industrial scientists. ...

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

成长型测定和遗传需求生化确认的蛋白质降解<em&gt;酿酒酵母</em

Regulated protein degradation is crucial for virtually every cellular function. Much of what is known about the molecular mechanisms and genetic ...