Name: saccharomyces cerevisiae exponential growth kinetics in batch culture to analyze respiratory and fermentative metabolism
Uploaded: 2018-09-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Saccharomyces cerevisiae Exponential Growth Kinetics in Batch Culture to Analyze Respiratory and Fermentative Metabolism at JoVE.com

Этот проект был поддержан, предоставляет Consejo Nacional de науки y Tecnología (Грант № 293940) и Фонд "Телмекс"-TELCEL (Грант № 162005585), оба с ИКОМ.

1. Культура средства массовой информации и подготовка посевным материалом
<ol><li>Подготовка 100 мл 2% дрожжевой экстракт Пептон декстрозы (YPD) жидкой среды (добавить 1 г дрожжей экстракт, казеина Пептон, 2 g и 2 g глюкозы до 100 мл дистиллированной воды). Отказаться от 3 мл СМИ в 15 мл стерилизуются ?...

<ol>
	<li>Parrella, E., Longo, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chronological+life+span+of+Saccharomyces+cerevisiae+to+study+mitochondrial+dysfunction+and+disease.">The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae to study mitochondrial dysfunction and disease.</a> Methods. 46 (4), 256-262 (2008).</li><li>Rosas Lemus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+glycolysis-derived+hexose+phosphates+in+the+induction+of+the+Crabtree+effect.">The role of glycolysis-derived hexose phosphates in the induction of the Crabtree effect.</a> Journal of Biological Chemistry. , (2018).</li><li>Xu, X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Warburg+effect+or+reverse+Warburg+effect?+A+review+of+cancer+metabolism.">Warburg effect or reverse Warburg effect? A review of cancer metabolism.</a> Oncology Research and Treatment. 38 (3), 117-122 (2015).</li><li>De Deken, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Crabtree+effect:+a+regulatory+system+in+yeast.">The Crabtree effect: a regulatory system in yeast.</a> Journal of General Microbiology. 44 (2), 149-156 (1966).</li><li>Hagman, A., Sall, T., Piskur, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+yeast+short-term+Crabtree+effect+and+its+origin.">Analysis of the yeast short-term Crabtree effect and its origin.</a> The FEBS Journal. 281 (21), 4805-4814 (2014).</li><li>Hammad, N., Rosas-Lemus, M., Uribe-Carvajal, S., Rigoulet, M., Devin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Crabtree+and+Warburg+effects:+Do+metabolite-induced+regulations+participate+in+their+induction?.">The Crabtree and Warburg effects: Do metabolite-induced regulations participate in their induction?.</a> Biochim Biophys Acta. 1857 (8), 1139-1146 (2016).</li><li>Keating, E., Martel, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimetabolic+Effects+of+Polyphenols+in+Breast+Cancer+Cells:+Focus+on+Glucose+Uptake+and+Metabolism.">Antimetabolic Effects of Polyphenols in Breast Cancer Cells: Focus on Glucose Uptake and Metabolism.</a> Frontiers in Nutrition. 5, 25 (2018).</li><li>Pfeiffer, T., Morley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evolutionary+perspective+on+the+Crabtree+effect.">An evolutionary perspective on the Crabtree effect.</a> Frontiers in Molecular Biosciences. 1, 17 (2014).</li><li>Olivares-Marin, I. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+carbon+and+nitrogen+sources+depend+on+RIM15+and+determine+fermentative+or+respiratory+growth+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Interactions between carbon and nitrogen sources depend on RIM15 and determine fermentative or respiratory growth in Saccharomyces cerevisiae.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 102 (10), 4535-4548 (2018).</li><li>Monod, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+growth+of+bacterial+cultures.">The growth of bacterial cultures.</a> Annual Review of Microbiology. 3 (1), 371-394 (1949).</li><li>Cui, S., Xu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+mathematical+models+for+the+growth+of+tumors+with+time+delays+in+cell+proliferation.">Analysis of mathematical models for the growth of tumors with time delays in cell proliferation.</a> Journal of Mathematical Analysis and Applications. 336 (1), 523-541 (2007).</li><li>Benzekry, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical+mathematical+models+for+description+and+prediction+of+experimental+tumor+growth.">Classical mathematical models for description and prediction of experimental tumor growth.</a> Public Library of Science Computational Biology. 10 (8), e1003800 (2014).</li><li>Ramos-Gomez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+induces+mitochondrial+dysfunction+and+decreases+chronological+life+span+of+Saccharomyces+cerevisiae+in+a+glucose-dependent+manner.">Resveratrol induces mitochondrial dysfunction and decreases chronological life span of Saccharomyces cerevisiae in a glucose-dependent manner.</a> Journal of Bioenergetics and Biomembranes. 49 (3), 241-251 (2017).</li><li>Madrigal-Perez, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy-dependent+effects+of+resveratrol+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Energy-dependent effects of resveratrol in Saccharomyces cerevisiae.</a> Yeast. 33 (6), 227-234 (2016).</li><li>Peleg, M., Corradini, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+growth+curves:+what+the+models+tell+us+and+what+they+cannot.">Microbial growth curves: what the models tell us and what they cannot.</a> Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 51 (10), 917-945 (2011).</li></ol>

Много времени прошло с момента J. Monod10 выразил, что изучение роста бактериальных культур является основным методом микробиологии. Появление молекулярной инструменты задержки использования и изучения роста как техника. Несмотря на сложность роста, которая включает в себя м...

Saccharomyces cerevisiae роста служит ценным инструментом для выявления десятки физиологических и молекулярных механизмов. Рост измеряется прежде всего тремя методами: серийных разведений для выборочной проверки, образуя колонии единица подсчета и кривых роста. Эти методы могут использоваться отдельно или в сочетании с различными субстратами, экологических условий, мутантов и химических веществ расследовать конкретные ответы или фенотипов.
Митохондриальное дыхание-это биологический процесс, в котором Кинетика роста успешно применяется для обнаружения неизвестных механизмов. В этом случае добавок питательных сред с без сбраживаемых углерода источников таких как глицерин, лактат или этанол (которые являются исключительно метаболизируется путем митохондриальное дыхание), как единственного источника углерода и энергии позволяет для оценки респираторные роста, который имеет важное значение для выявления возмущений в окислительного фосфорилирования деятельности1. С другой стороны это сложно пользоваться кинетической модели роста как метод для расшифровки механизмов за брожения.
Изучение митохондриального дыхания и брожения имеет важное значение для прояснения молекулярных механизмов за определенные фенотипов например Крабтри и Варбург эффекты2,3. Crabtree эффект характеризуется увеличением гликолитических потока, репрессии митохондриальное дыхание и создание ферментации как основной путь для генерации АТФ в присутствии высоких концентраций сбраживаемых углеводов (> 0,8 мм)4,5. Варбург эффект метаболически аналого-Crabtree эффект, с той разницей, что в клетках млекопитающих, основным продуктом ферментации молочной кислоты6. Действительно Варбург эффект проявляется на различных раковых клеток, вызывая глюкозы и потребления даже в присутствии кислорода7. Таким образом изучая молекулярные основы перехода от дыхания для ферментации в Crabtree эффект в биотехнологических последствия (для производства этанола) и потенциального воздействия исследований рака.
S. cerevisiae рост может быть подходящим инструментом для изучения влияния Crabtree и Варбург. Эта идея основывается на том, что в экспоненциальной фазе дрожжей, Центральный путей, используемых для производства АТФ, митохондриальных дыхания и брожения, которые необходимы для поддержания экономического роста. Например рост S. cerevisiae тесно связано с функции генерации АТФ пути. В S. cerevisiae, митохондриальное дыхание производит приблизительно 18 ATP молекулы на молекулу глюкозы тогда как ферментация генерирует только 2 молекулы АТФ, поэтому ожидается что темпы роста имеет тесные связи с метаболических производства АТФ8. В этой связи когда брожение является основной маршрут для генерации АТФ, дрожжи компенсирует низкий уровень производства АТФ, увеличивая скорость поглощения глюкозы. Напротив потребление глюкозы клетками дрожжей, которые используют митохондриальное дыхание как основной источник АТФ является низким. Это означает, что это важно для дрожжей в смысле наличия углеводов до определения того, как будет создаваться СПС. Таким образом, наличие глюкозы играет важную роль в переключение между ферментации и митохондриальное дыхание в S. cerevisiae. При наличии большого количества глюкозы дрожжи предпочитает ферментации как Центральный маршрут для генерации АТФ. Интересно, что когда дрожжи брожения, темпы роста конкретных поддерживается на своего максимума. С другой стороны под низкий уровень глюкозы, S. cerevisiae производит АТП с использованием митохондриальное дыхание, поддержание темпов роста. Таким образом различия в концентрации глюкозы и использование других источников углерода вызывают изменения в дрожжи предпочтения между роста ферментативной и дыхания. Принимая во внимание этот факт с помощью уравнения экспоненциальный рост, можно получить Биологическая смысль кинетических параметров, таких как удвоение время (Dt) и конкретных прирост (мкг). Например более низкие значения µ были найдены когда дрожжи в качестве основного пути использует митохондриальное дыхание. Напротив в условиях, которые способствуют ферментации, были обнаружены высокие значения µ . Эта методология может использоваться для оценки вероятных механизмов любых химических веществ, влияющих на брожение и митохондриальное дыхание в S. cerevisiae.
Цель этого документа должна предложить метод, основанный на Кинетика роста для проверки воздействия данного вещества/смеси на митохондриальное дыхание или ферментации.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Orbital Shaker</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">4353</td>
			<td style="width:167px;">For inoculum incubation or conical fask cultures</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bioscreen&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Growth curves</td>
			<td style="width:119px;">C MBR</td>
			<td>For batch cultures in microplates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glucose</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">G7021</td>
			<td>For YPD broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Peptone from casein, enzymatic digest</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td align="right" style="width:119px;">82303</td>
			<td>For YPD broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Yeast extract</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">09182-1KG-F</td>
			<td>For YPD broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bacteriological Agar</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">A5306</td>
			<td>For YPD agar preparation</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td>S8282</td>
			<td>For SC broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">(NH4)2SO4</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td>A4418</td>
			<td>For SC broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Yeast nitrogen base without amino acids and ammonium sulfate</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Y1251</td>
			<td>For SC broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Yeast synthetic drop-Out medium supplements</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Y1501</td>
			<td>For SC broth preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ammonium sulfate granular</td>
			<td style="width:71px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:119px;">0792-R</td>
			<td>For medium supplementation example</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Resveratrol</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">R5010</td>
			<td>For medium supplementation example</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Galactose</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td>G8270</td>
			<td>For medium supplementation example</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sucrose</td>
			<td style="width:71px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">S7903</td>
			<td>For medium supplementation example</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Absolut ethanol</td>
			<td style="width:71px;">Merck</td>
			<td align="right">107017</td>
			<td>For medium supplementation example</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glycerol</td>
			<td style="width:71px;">J.T. Baker</td>
			<td>2136-01</td>
			<td>For medium supplementation example</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">GraphPad Prism</td>
			<td style="width:71px;">GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td>For data analysis</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Honeycomb microplates</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td align="right">9502550</td>
			<td>For microplate cultures</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

saccharomyces cerevisiae exponential growth kinetics in batch culture to analyze respiratory and fermentative metabolism

Пивоваренные дрожжи клетки в экспоненциальной фазе роста, производя СПС через ферментации и/или митохондриальное дыхание. Концентрация углерода сбраживаемых главным образом регулирует как дрожжевых клеток генерировать СПС; Таким образом различия в уровнях сбраживаемых углеводов диски энергетический метаболизм S. cerevisiae. Этот документ описывает метод высокой пропускной способностью на основе экспоненциального дрожжей роста для оценки последствий изменения концентрации и характер источника углерода на метаболизм дыхания и ферментативной. Рост S. cerevisiae измеряется в Гонав или потрясен конической колбе путем определения оптической плотности (OD) на 600 Нм. Затем кривая роста построен построения ОД против времени, что позволяет выявление и отбор экспоненциальной фазе и оснащен экспоненциальный рост уравнение для получения кинетическими параметрами. Низкие конкретные темпы роста с выше удвоение раз обычно представляют дыхания рост. И наоборот более высокие темпы роста конкретных с нижней удвоение раз указывают на ферментативную рост. Пороговые значения удвоения время и темп роста конкретных оцениваются с помощью хорошо известных дыхания или ферментативную условия, такие как источников без сбраживаемых углерода или более высокие концентрации сбраживаемых Сахаров. Это получается для каждого конкретного штамма. Наконец рассчитанные кинетических параметров сравниваются с пороговые значения установить ли дрожжи показывает ферментативной и/или респираторных роста. Преимуществом данного метода является его относительная простота для понимания воздействия вещества/смеси на ферментативную или дыхательных путей метаболизма. Важно подчеркнуть, что рост является сложной и сложной биологический процесс; Таким образом предварительные данные из этого метода должен быть подтвержден количественная оценка потребления кислорода и накоплением побочные продукты брожения. Таким образом этот метод может использоваться как предварительный скрининг соединений/веществ, которые могут нарушить или улучшают ферментативную или дыхательных путей метаболизма.

Кривые роста может использоваться для предварительно различать дыхания и ферментативным фенотипы в дрожжей S. cerevisiae . Таким образом, мы исполняли партии культуры S. cerevisiae (BY4742) с концентрациями различных глюкозы, представивших побудить ферментативным рост: 1%, ...

Watch this Scientific Journal Video about Saccharomyces cerevisiae Exponential Growth Kinetics in Batch Culture to Analyze Respiratory and Fermentative Metabolism at JoVE.com

Saccharomyces cerevisiae Exponential Growth Kinetics in Batch Culture to Analyze Respiratory and Fermentative Metabolism

Пивоваренные дрожжи Экспоненциальный рост кинетика в культуре партии для анализа дыхания и ферментативным метаболизма

Здесь мы представляем протокол для оценки метаболизм дыхания и ферментативным путем установки экспоненциальный рост Saccharomyces cerevisiae экспоненциальный рост уравнения. Расчета кинетических параметров позволяет для проверки влияния веществ/соединений на брожение или митохондриальное дыхание.

Saccharomyces cerevisiae cells in the exponential phase sustain their growth by producing ATP through fermentation and/or mitochondrial respiration. The ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в биотехнологических и биомедицинских областях, таких как молекулярная основа варбурга и эффекты Крабтри. Основным преимуществом этой методики является то, что она позволяет высокой пропускной способностью изучать влияние определенных веществ на респираторный и ферментативный обмен веществ. Начните с инокуляции 15-миллилитровой конической трубки, содержащей три миллилитра холодных, стерильных 2%дрожжевых экстрактов пептон-декстрозы, или бульона YPD, с 250 микролитров дрожжевых клеток S.cerevisiae, сохранившихся в глицероле при отрицательном 20 градусах цельсия.Инкубировать дрожжи на ночь в орбитальном шейкере при 30 градусах по Цельсию и 200 об/мин. для полос на 60-миллилитр, 2%YPD агар заполненные Петри блюдо на следующее утро. Культура блюдо при 30 градусов по Цельсию, пока изолированные колонии наблюдаются.Затем привить одну изолированную колонию в новой конической трубке, содержащей 10 миллилитров прохладного, стерильного 2%YPD бульона для ночной культуры при 30 градусах по Цельсию со тряской. Для установки микропластицы роста-кривой, добавьте 145 микролитров соответствующей экспериментальной культурной среды к каждой колодец стерильной микроплоциты 10 на 10 с крышкой и привить каждый колодец с пятью микролитров ночной культуры. Затем инкубировать многоясную пластину в считыватель микроплатформы при 30 градусах по Цельсию с постоянным возбуждением при 200 об/мин в течение 48 часов, измеряя оптическую плотность на 600 нанометров каждые 30 или 60 минут.Для встряхивания конической колбы роста кривой установки, привить 20 миллилитров конической колбы, содержащие 4,8 миллилитров соответствующих стерильных средств культуры с 200 микролитров доинокулум культуры на 600 нанометров оптической плотности два для инкубации при 30 градусов по Цельсию и 250 об / мин. Агитация на 250 оборотов в минуту имеет решающее значение для достижения подходящего роста в низких концентрациях источников углерода, которые оказывают респираторный рост, как мы наблюдали снижение роста дрожжей в респираторных условиях на более низких скоростях возбуждения. Чтобы обеспечить измерение оптической плотности на 600 нанометров каждые два часа в течение 24 часов, разбавить 100 микролитров встряхиваемой конической культуры колбы в 900 микролитров дистиллированной воды в одноми миллилитровом спектрофотометре и аккуратно перемешать пипеткой.Для обработки данных в соответствующем программном обеспечении статистического пакета создайте новый файл проекта, откройте новую таблицу и меню графиков и выберите XY. В меню выборочных данных выберите начало с пустой таблицы данных и точек и соединительной линии графика. Оставьте раздел X невыбранным в подколумнах для репликаций или значений ошибок. В разделе Y выберите введите 10 значений репликации в побочных подколумнах, а также среднее и ошибка участка SD. Затем нажмите создать.Введите время получения измерений OD в столбце X и значений OD, полученных из культур в колонке Y. Чтобы определить экспоненциальную фазу роста, трансформируемую данными столбца Y в логаритмы, нажмите на анализ и выберите анализ преобразования. Используйте Y равно журнал Y, чтобы выбрать значения Y и открыть галерею результатов.Выберите таблицу данных преобразования, нажмите анализ и выберите линейный анализ регрессии, исключая оптические значения плотности, которые не следуют линейному тренду, выбрав значения в таблице и угнетая контроль и E.In галерею таблиц данных, выберите данные одной таблице и нажмите анализ. Выберите нелинейную кривую регрессии, пригодную для анализа, и наборы данных для анализа и нажмите OK. Затем примените наименее квадраты, подходящие для данных, оставив раздел интерполята неизбранным, и нажмите OK. Затем откройте новый файл проекта, а в новом меню таблицы и графика выберите выбор столбца, начните с пустой таблицы данных и желаемого графика. Установите график, чтобы построить среднее со стандартным отклонением, и нажмите создать.Скопировать среднее или дельта-значения времени из нелинейной таблицы результатов в галерее результатов и вставить данные в столбец. Наконец, нажмите проанализировать и выбрать анализ интереса в меню анализа столбца для сравнения кинетических параметров различных питательных условий. Значения кинетического порога роста различаются между сильными сторонами и должны оцениваться в соответствии с условиями, которые мы используем в анализе.Культуры, демонстрирующие ферментативный фенотип, имеют небольшую фазу отставания и экспоненциальную фазу с высокими темпами роста. Культуры, которые получают энергию главным образом путем окислительного фосфорилирования, демонстрируют более длинную фазу отставания с медленными темпами роста в экспоненциальной фазе. Расчет конкретных темпов роста и удвоения времени кривых роста с использованием экспоненциального уравнения роста позволяет установить пороговые значения для респираторных и ферментативных значений роста.Например, в этих репрезентативных экспериментах, влияние различных концентраций ресвератрола на S.cerevisiae BY4742 клетки показывают изменение энергетического статуса клетки в ответ на различные концентрации глюкозы. Здесь, добавки с 10%глюкозы показывает, что более низкие концентрации аммония пользу ферментативного метаболизма, о чем свидетельствует расширенная экспоненциальная фаза роста в этих культурах, в то время как более высокая концентрация вызывает респиро-ферментативный метаболизм, о чем свидетельствует расширенный этап отставания и более медленные темпы роста в течение экспоненциальной фазы. Наконец, между этими двумя различными штаммами дрожжей, выращенными в одинаковых условиях, наблюдаются устойчивые различия в ферментативных значениях времени удвоения, что подчеркивает необходимость проверки порога удвоения времени для каждого анализируемого штамма.При попытке этой процедуры, важно помнить, что этот протокол используется только для проверки фенотипа. Специфическое воздействие на дыхание и брожение должно быть подтверждено анализами потребления кислорода или накоплением побочных продуктов брожения соответственно.

Research

JoVE Journal

Biology

Saccharomyces cerevisiae Exponential Growth Kinetics in Batch Culture to Analyze Respiratory and Fermentative Metabolism

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Препарирование Saccharomyces CEREVISIAE Сумки

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae ...

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

Количественные Phosphoproteomics в жирные кислоты Вынужденное Saccharomyces CEREVISIAE</em

This protocol describes the growth and stimulation, with the fatty acid oleate, of isotopically heavy and light S. cerevisiae cells. Cells are ground ...

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

Microarray анализа для Saccharomyces CEREVISIAE</em

In this protocol, gene expression in yeast (Saccharomyces cerevisiae) is changed after exposure to oxidative stress induced by the addition of hydrogen ...

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

Флуоресценция Пробирной микроскопии для мониторинга Mitophagy в Дрожжи Saccharomyces CEREVISIAE

Autophagy is important for turnover of cellular components under a range of different conditions. It serves an essential homeostatic function as well as a ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Визуализации и анализа молекул мРНК с помощью флуоресцентной<em&gt; В Ситу</em&gt; Гибридизация в<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

В сочетании Анализы для мониторинга рефолдинг Белок в<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em

Proteostasis, defined as the combined processes of protein folding/biogenesis, refolding/repair, and degradation, is a delicate cellular balance that must ...

Combining Magnetic Sorting of Mother Cells and Fluctuation Tests to Analyze Genome Instability During Mitotic Cell Aging in Saccharomyces cerevisiae

Combining Magnetic Sorting of Mother Cells and Fluctuation Tests to Analyze Genome Instability During Mitotic Cell Aging in Saccharomyces cerevisiae

Сочетание Magnetic сортировка материнские клетки и колебания испытаний для анализа геномной нестабильности Во время митотического клеточного старения в<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em

Saccharomyces cerevisiae has been an excellent model system for examining mechanisms and consequences of genome instability. Information gained from this ...

Rapid Identification of Chemical Genetic Interactions in Saccharomyces cerevisiae

Rapid Identification of Chemical Genetic Interactions in Saccharomyces cerevisiae

Быстрая идентификация химических генетических взаимодействий в<em&gt; Saccharomyces Cerevisiae</em

Determining the mode of action of bioactive chemicals is of interest to a broad range of academic, pharmaceutical, and industrial scientists. ...

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

Определение на основе экономического роста и биохимическая Подтверждение генетическим требованиям белка деградации в<em&gt; Saccharomyces Cerevisiae</em

Regulated protein degradation is crucial for virtually every cellular function. Much of what is known about the molecular mechanisms and genetic ...

Directed Evolution Method in Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Creation and Screening

Directed Evolution Method in Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Creation and Screening

Направленный метод Эволюция<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em&gt;: Mutant Создание и скрининг библиотеки

Directed evolution in Saccharomyces cerevisiae offers many attractive advantages when designing enzymes for biotechnological applications, a process that ...