Name: employing pressurized hot water extraction (phwe) to explore natural products chemistry in the undergraduate laboratory
Uploaded: 2018-11-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Employing Pressurized Hot Water Extraction PHWE to Explore Natural Products Chemistry in the Undergraduate Laboratory at JoVE.com

Les auteurs reconnaissent la Faculté des Sciences naturelles - chimie, Université de Tasmanie et l’école de chimie, The University of Sydney pour un soutien financier. B.J.D. et J.J. remercient le gouvernement australien de recherche formation programme de bourses d’études.

Remarque : Il est recommandé que toutes les procédures sont effectuées sous une hotte. Les étudiants doivent porter des équipements de protection individuelle approprié en tout temps dans le laboratoire et les fiches de données de sécurité (SDS) associées à chaque réactif doivent être consultés avant toute utilisation.
1. PHWE de clou de girofle : isolement d’eugénol et acetyleugenol
<ol><li>Extraction de l’eugénol et acetyleugenol de clous de g...

<ol>
	<li>Newman, D. J., Cragg, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+Products+as+Sources+of+New+Drugs+from+1981+to+2014.">Natural Products as Sources of New Drugs from 1981 to 2014.</a> Journal of Natural Products. 79, 629-661 (2016).</li><li>Barnes, E. C., Kumar, R., Davis, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+isolated+natural+products+as+scaffolds+for+the+generation+of+chemically+diverse+screening+libraries+for+drug+discovery.">The use of isolated natural products as scaffolds for the generation of chemically diverse screening libraries for drug discovery.</a> Natural Product Reports. 33, 372-381 (2016).</li><li>DeCorte, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Underexplored+Opportunities+for+Natural+Products+in+Drug+Discovery.">Underexplored Opportunities for Natural Products in Drug Discovery.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 59, 9295-9304 (2016).</li><li>Bucar, F., Wube, A., Schmid, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+product+isolation+-+how+to+get+from+biological+material+to+pure+compounds.">Natural product isolation - how to get from biological material to pure compounds.</a> Natural Product Reports. 30, 525-545 (2013).</li><li>Sticher, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+product+isolation.">Natural product isolation.</a> Natural Product Reports. 25, 517-554 (2008).</li><li>Just, J., Deans, B. J., Olivier, W. J., Paull, B., Bissember, A. C., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+Method+for+the+Rapid+Extraction+of+Natural+Products:+Efficient+Isolation+of+Shikimic+Acid+from+Star+Anise.">New Method for the Rapid Extraction of Natural Products: Efficient Isolation of Shikimic Acid from Star Anise.</a> Organic Letters. 17, 2428-2430 (2015).</li><li>Caprioli, G., Cortese, M., Cristalli, G., Maggi, F., Odello, L., Ricciutelli, M., Sagratini, G., Sirocchi, V., Tomassoni, G., Vittori, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+espresso+machine+parameters+through+the+analysis+of+coffee+odorants+by+HS-SPME-GC/MS.">Optimization of espresso machine parameters through the analysis of coffee odorants by HS-SPME-GC/MS.</a> Food Chemistry. 135, 1127-1133 (2012).</li><li>Just, J., Jordan, T. B., Paull, B., Bissember, A. C., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+isolation+of+polygodial+from+Tasmannia+lanceolata:+a+viable+scaffold+for+synthesis.">Practical isolation of polygodial from Tasmannia lanceolata: a viable scaffold for synthesis.</a> Organic Biomolecular Chemistry. 13, 11200-11207 (2015).</li><li>Just, J., Bunton, G. L., Deans, B. J., Murray, N. L., Bissember, A. C., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+Eugenol+from+Cloves+Using+an+Unmodified+Household+Espresso+Machine:+An+Alternative+to+Traditional+Steam+Distillation.">Extraction of Eugenol from Cloves Using an Unmodified Household Espresso Machine: An Alternative to Traditional Steam Distillation.</a> Journal of Chemical Education. 93, 213-216 (2016).</li><li>Deans, B. J., Bissember, A. C., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+Isolation+of+Asperuloside+from+Coprosma+quadrifida+via+Rapid+Pressurised+Hot+Water+Extraction.">Practical Isolation of Asperuloside from Coprosma quadrifida via Rapid Pressurised Hot Water Extraction.</a> Australian Journal of Chemistry. 69, 1219-1222 (2016).</li><li>Deans, B. J., Just, J., Chetri, J., Burt, L. K., Smith, J. N., Kilah, N. L., de Salas, M., Gueven, N., Bissember, A. C., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressurized+Hot+Water+Extraction+as+a+Viable+Bioprospecting+Tool:+Isolation+of+Coumarin+Natural+Products+from+Previously+Unexamined+Correa+(Rutaceae).">Pressurized Hot Water Extraction as a Viable Bioprospecting Tool: Isolation of Coumarin Natural Products from Previously Unexamined Correa (Rutaceae).</a> ChemistrySelect. 2, 2439-2443 (2017).</li><li>Deans, B. J., Olivier, W. J., Girbino, D., Bissember, A. C., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+carboxylic+acid-containing+diterpenoids+from+Dodonaea+viscosa+via+pressurised+hot+water+extraction.">Extraction of carboxylic acid-containing diterpenoids from Dodonaea viscosa via pressurised hot water extraction.</a> Fitoterapia. 126, 65-68 (2018).</li><li>Deans, B. J., Kilah, N. L., Jordan, G. J., Bissember, A. C., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arbutin+Derivatives+Isolated+from+Ancient+Proteaceae:+Potential+Phytochemical+Markers+Present+in+Bellendena,+Cenarrhenes+and+Persoonia+Genera.">Arbutin Derivatives Isolated from Ancient Proteaceae: Potential Phytochemical Markers Present in Bellendena, Cenarrhenes and Persoonia Genera.</a> Journal of Natural Products. 81, 1241-1251 (2018).</li><li>Deans, B. J., Tedone, L., Bissember, A. C., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phytochemical+profile+of+the+rare,+ancient+clone+Lomatia+tasmanica+and+comparison+to+other+endemic+Tasmanian+species+L.+tinctoria+and+L.+polymorpha.">Phytochemical profile of the rare, ancient clone Lomatia tasmanica and comparison to other endemic Tasmanian species L. tinctoria and L. polymorpha.</a> Phytochemistry. 153, 74-78 (2018).</li><li>Deans, B. J., Skierka, B., Karagiannakis, B. W., Vuong, D., Lacey, E., Smith, J. A., Bissember, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Siliquapyranone:+a+Tannic+Acid+Tetrahydropyran-2-one+Isolated+from+the+Leaves+of+Carob+(Ceratonia+siliqua)+by+Pressurised+Hot+Water+Extraction.">Siliquapyranone: a Tannic Acid Tetrahydropyran-2-one Isolated from the Leaves of Carob (Ceratonia siliqua) by Pressurised Hot Water Extraction.</a> Australian Journal of Chemistry. 71, (2018).</li><li>Olivier, W. J., Kilah, N. L., Horne, J., Bissember, A. C., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ent-Labdane+Diterpenoids+from+Dodonaea+viscosa.">ent-Labdane Diterpenoids from Dodonaea viscosa.</a> Journal of Natural Products. 79, 3117-3126 (2016).</li><li>Rihak, K. J., Bissember, A. C., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polygodial:+A+viable+natural+product+scaffold+for+the+rapid+synthesis+of+novel+polycyclic+pyrrole+and+pyrrolidine+derivatives.">Polygodial: A viable natural product scaffold for the rapid synthesis of novel polycyclic pyrrole and pyrrolidine derivatives.</a> Tetrahedron. 74, 1167-1174 (2018).</li><li>Ntamila, M. S., Hassanali, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Oil+of+Clove+and+Separation+of+Eugenol+and+Acetyl+Eugenol.">Isolation of Oil of Clove and Separation of Eugenol and Acetyl Eugenol.</a> Journal of Chemical Education. 53, 263 (1976).</li><li>Still, W. C., Kahn, M., Mitra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+chromatographic+technique+for+preparative+separations+with+moderate+resolution.">Rapid chromatographic technique for preparative separations with moderate resolution.</a> Journal of Organic Chemistry. , 2923-2925 (1978).</li></ol>

La procédure classique pour isoler l’eugénol du clou de girofle par distillation à la vapeur a fait partie du programme de laboratoire chimie intermédiaire à l’Université de Sydney depuis des décennies, mais a été modernisée pour utiliser une méthodologie PHWE en 2016 (Figure 1). 9 , 18 cela produit un nombre d’avantages. Tout d’abord, utilisant des machines expresso domestiques dans l’environnement de laboratoir...

L’isolement et l’identification des produits naturels sont d’une importance fondamentale pour la communauté scientifique et la société plus généralement. 1 la bioprospection, la recherche de précieuses molécules organiques trouvés dans la nature, reste un processus indispensable à la découverte de nouvelles pistes de médicaments et d’agents thérapeutiques potentiels. On estime que, de 1981 à 2014, ~ 75 % de tous les médicaments pharmaceutiques approuvés petite molécule étaient des produits naturels, naturel naturelle ou produit dérivé produit d’inspiration. 1 en outre, les produits naturels possèdent énorme diversité structurale et chimique. Pour cette raison, ils représentent aussi des échafaudages chimiques précieux qui peuvent être directement utilisés en synthèse organique ou dans le développement de catalyseurs et de ligands chiraux. 2 , 3
Traditionnellement, les procédures relativement beaucoup de temps comme la distillation à la vapeur, macération et extraction Soxhlet ont été les piliers de recherche axée sur l’isolement des métabolites secondaires des plantes. 4 les techniques d’extraction plus modernes, y compris extraction accélérée par solvant, ont mis l’accent sur la réduction des temps d’extraction et d’établir des protocoles plus écologiques. 4 , 5 en 2015, une méthode d’extraction (PHWE) eau chaude sous pression originale a été signalée. 6 utilisé cette technique une machine à expresso domestique non modifié pour faciliter l’extraction rapide et particulièrement efficace de l’acide shikimique de l’anis étoilé. Machines à expresso ont été spécifiquement conçus et fabriqués pour extraire des molécules organiques de manière appropriée les grains de café moulus. Pour réaliser cela, les instruments chauffer l’eau à des températures jusqu'à 96 ° C et à des pressions de bar typiquement 9. 7 dans cette optique, il n’est peut-être pas surprenant que les machines à expresso peuvent être utilisées pour extraire efficacement des produits naturels parmi une gamme de matériel végétal.
Des études ultérieures impliquant une variété d’espèces végétales terrestres ont démontré la capacité de cette technique PHWE pour extraire efficacement des produits naturels dans une gamme relativement large de polarité. 6 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 en outre, composés contenant des groupes fonctionnels un peu sensibles, tels que les aldéhydes, époxydes, glycosides et potentiellement epimerizable stéréogène centres étaient généralement pas affectées par le processus d’extraction. La complémentarité de cette technique par rapport à des méthodes plus traditionnelles a également été démontrée. 12 , 16 PHWE cette méthode a également été utilisée pour isoler des quantités multiples grammes de produits naturels, qui ont été utilisées pour préparer des dérivés nouveaux produits naturels et de synthèse de la molécule complexe plus généralement. 8 , 11 , 17
On a constaté que cette nouvelle méthode PHWE pourrait servir d’outil pédagogique utile qui pourrait être incorporé dans le laboratoire d’études de premier cycle. Cela dérive principalement de la nature rapide de cette technique par rapport aux méthodes traditionnelles d’extraction qui sont souvent incompatibles avec les contraintes de temps associées à des expériences en laboratoire de premier cycle. Par conséquent, cette technique a supplanté l’expérience de laboratoire de chimie premier cycle traditionnel axé sur l’extraction de l’eugénol du clou de girofle qui emploient distillation à la vapeur à l’Université de Tasmanie. 9 , 18 depuis ce temps, les variantes de cette expérience ont été adoptées par les autres universités et une expérience mis à jour le mettant l’accent sur la PHWE de clous de girofle maintenant des fonctionnalités dans le programme de laboratoire de chimie premier cycle à l’Université de Sydney (vide infra ).
Afin de démontrer la praticité et la possibilité d’adapter cette nouvelle approche PHWE à des fins pédagogiques, les deux protocoles sont présentés dans le cadre de cette étude. La première partie du présent rapport met en évidence une expérience sur la PHWE d’eugénol et acetyleugenol de clous de girofle, qui fait partie du programme de deuxième année laboratoire premier cycle à l’Université de Sydney (Figure 1). Cette expérience sert à initier les élèves à la chimie des produits naturels tout en développant des compétences pratiques fondamentales. La deuxième partie dispose d’une expérience sur la PHWE des espèces endémiques de plantes australiennes reflexa Correa , qui fait partie du programme de troisième année laboratoire premier cycle à l’Université de Tasmanie (Figure 2). Cette expérience est conçue pour simuler la bioprospection des produits naturels et de renforcer les techniques de laboratoire de base. 11

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1069px;" width="1070">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">espresso machines</td>
			<td style="width:167px;">Breville/Sunbeam</td>
			<td style="width:520px;">Breville espresso machine model 800ES / Sunbeam EM3820 Caf&#233; Espresso II</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">rotary evporators</td>
			<td style="width:167px;">Buchi and Heidolph</td>
			<td style="width:520px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">cloves (plant material)</td>
			<td>Dijon Food Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Cloves must be ground in a food processor for students.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Correa reflexa (plant material)</td>
			<td>sample obtained in Tasmania</td>
			<td>Sample collected from mature shrubs in the Thomas Crawford Reserve at the University of Tasmania</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">sand</td>
			<td style="width:167px;">Ajax</td>
			<td style="width:520px;">1199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">ethanol</td>
			<td>Redoc Chemicals</td>
			<td>E95 F3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">hexanes</td>
			<td>Ajax</td>
			<td>251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">magnesium sulfate</td>
			<td>Ajax</td>
			<td>1548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">diethyl ether</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1009215000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">silica on aluminium TLC plates</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1055540001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">eugenol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1069620100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">eugenyl acetate</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>W246905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">acetone</td>
			<td>Redox Chemicals</td>
			<td>Aceton13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">cyclohexane</td>
			<td>ChemSupply</td>
			<td>CA019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">silica gel 60</td>
			<td>Trajan</td>
			<td>5134312</td>
			<td style="width:167px;">40 - 63um (230-400mesh)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Congo red paper</td>
			<td>ChemSupply</td>
			<td>IS070-100S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">32% hydrochloric acid</td>
			<td>Ajax</td>
			<td>256</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

employing pressurized hot water extraction (phwe) to explore natural products chemistry in the undergraduate laboratory

Une méthode d’extraction (PHWE) récemment mis au point l’eau chaude sous pression qui utilise une machine à expresso domestique non modifiés pour faciliter la recherche de produits naturels a également trouvé des applications comme un outil pédagogique efficace. Plus précisément, cette technique a servi à introduire les étudiants de deuxième et troisième année aux aspects de la chimie des produits naturels dans le laboratoire. Dans le présent rapport, les deux expériences sont présentées : le PHWE d’eugénol et acetyleugenol de clous de girofle et le PHWE de seselin et (+)-epoxysuberosin des espèces endémiques de plantes australiennes reflexa Correa. En employant des PHWE dans ces expériences, l’extrait de clou de girofle brut, riche en eugénol et acetyleugenol, a été obtenu en 4 à 9 % w/w à partir de clous de girofle par les étudiants de deuxième année et seselin et (+)-epoxysuberosin ont été isolés avec des rendements pouvant atteindre 1,1 % w/w et 0,9 % p/p de C. reflexa par des étudiants de troisième année. L’ancien exercice a été conçu comme un remplacement pour l’expérience de distillation de vapeur traditionnel fournit une introduction aux techniques d’extraction et de séparation, tandis que cette dernière activité vedette pédagogie guidée-enquête dans le but de simuler produits naturels bioprospection. Cela dérive principalement de la nature rapide de cette technique PHWE par rapport aux méthodes traditionnelles d’extraction qui sont souvent incompatibles avec les contraintes de temps associées à des expériences en laboratoire de premier cycle. Cette méthode rapide et pratique de PHWE peut être utilisée pour isoler efficacement les différentes classes de molécules organiques parmi un éventail d’espèces végétales. La complémentarité de cette technique par rapport à des méthodes plus traditionnelles a également été démontrée précédemment.

PHWE de clous de girofle. Lorsque vous essayez d’exécuter l’étape de l’extraction liquide-liquide, étudiants rencontrent souvent des émulsions (l’ajout de la saumure n’est généralement pas efficace). À ce stade, les étudiants devaient laisser le mélange reposer dans l’ampoule à décanter, alors qu’ils ont exploré les effets de la composition de l’éluant sur la séparation de l’eugénol et acetyleugenol par TLC. Il est à noter que l’hexane peut être substi...

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Employing Pressurized Hot Water Extraction PHWE to Explore Natural Products Chemistry in the Undergraduate Laboratory

Ici, nous utilisons une méthode d’extraction (PHWE) eau chaude sous pression, qui utilise une machine à expresso domestique non modifiée afin d’introduire les étudiants de premier cycle à la chimie des produits naturels dans le laboratoire. Deux expériences sont présentées : PHWE d’eugénol et acetyleugenol de clous de girofle et PHWE de seselin et (+)-epoxysuberosin de la plante australienne reflexa Correa.

Utilisant l’Extraction de l’eau chaude sous pression (PHWE) d’étudier la chimie des produits naturels dans le laboratoire d’études de premier cycle

A recently developed pressurized hot water extraction (PHWE) method which utilizes an unmodified household espresso machine to facilitate natural products ...

Cette technique représente une stratégie intrinsèquement pratique et efficace pour l’extraction de produits naturels dans la chimie d’isolement. Et nous pensons que c’est un outil d’extraction utile et gratuit. Parce qu’il s’agit d’un processus d’écoulement rapide, l’extrait n’est chauffé que pendant une courte période et l’extraction de pigments végétaux insolubles qui compliquent souvent la purification est réduite au minimum.Nous pensons que cette technique est bien adaptée pour permettre l’échantillonnage taxonomique de chimio en plus de la chimie médicinale en facilitant la prospection biologique qui est la recherche de molécules précieuses dans la nature. La démonstration visuelle de cette méthode est importante car une préparation d’échantillon dans les étapes d’extraction sont expliquées le plus efficacement visuellement. Cela renforce également la simplicité de l’extraction et son utilisation appropriée dans l’environnement de laboratoire de premier cycle.Placer 12,5 grammes de clous de girofle grossièrement moulus dans un bécher de 250 millilitres. Ajouter 12,5 grammes de sable et bien mélanger. Ensuite, recueillir un portafilter et charger le panier avec l’ensemble du mélange de clou de girofle et de sable.Utilisez une altération pour compresser légèrement l’échantillon en vous assurant de ne pas trop le compresser, ce qui empêcherait le fluide de couler. Chargez le portafilter dans la machine à expresso et placez un bécher clair de 250 millilitres en dessous. Ajouter une solution contenant 30 pour cent d’éthanol dans l’eau au réservoir d’eau.À l’aide de la machine à expresso, recueillir 100 millilitres de l’extrait. Laissez le portafilter finir dégoulinant, puis retirez-le de la machine à expresso. À l’aide d’une spatule, retirer les broyages de clous de girofle du portafilter et les jeter dans un contenant de déchets solides.Rincer les solides résiduels avec l’eau du robinet dans l’évier. Transférer le bécher contenant les extraits de clou de girofle dans un bain de glace et laisser refroidir jusqu’à ce que la température soit réduite à au moins 30 degrés Celsius. Dans une hotte fumigène, verser l’extrait refroidi dans un entonnoir séparateur de 250 millilitres.Ajouter 30 millilitres d’hexane et mélanger en secouant doucement. Placez l’entonnoir séparateur dans une pince d’anneau qui est monté sur un support de riposte et laissez les couches aqueuses et organiques se séparer. Il peut prendre jusqu’à 10 minutes pour que les couches se séparent, nous vous recommandons donc d’effectuer l’optimisation des solvants des TLC pendant que vous attendez.Récupérez la couche aqueuse dans le bécher de 250 millilitres. Transférer la couche organique qui contient le produit dans un flacon conique propre de 250 millilitres. Verser ensuite le sac à dos aqueux dans l’entonnoir séparateur.Extraire la couche aqueuse deux fois supplémentaires avec de l’hexane. Utilisation de 30 millilitres d’hexane à chaque fois. Combinez les couches organiques dans le même flacon conique de 250 millilitres après chaque extraction.Après la troisième extraction liquide verser l’extrait organique combiné dans l’entonnoir séparateur. Lavez l’extrait organique en ajoutant 100 millilitres d’eau et en secouant vigoureusement. Recueillir la couche organique dans un flacon conique propre de 250 millilitres.Et puis séchez-le en ajoutant du sulfate de magnésium et en tourbillonnant. Filtrer le mélange séché à travers du papier filtre cannelé contenu dans un entonnoir en verre dans le flacon du fond rond. À l’aide d’un évaporateur rotatif, évaporer le solvant du filtrate recueilli.Pesez ensuite le flacon contenant l’huile qui en résulte. Ajouter 10 millilitres d’hexane au flacon du fond rond contenant l’eugénol brut contenant de l’extrait. Verser la solution résultante dans un entonnoir séparateur de 250 millilitres.Rincer le flacon du fond rond avec 10 millilitres d’hexane et l’ajouter à l’entonnoir séparateur. Extraire la solution d’hexane deux fois avec trois hydroxyde de sodium aqueux molaire par extraction liquide. Utilisation de 25 millilitres d’hydroxyde de sodium pour chaque extraction.Recueillir les couches aqueuses de chaque extraction et les combiner dans un flacon conique de 250 millilitres. Recueillir la couche organique dans un flacon conique de 50 millilitres. Séchez-le ensuite en ajoutant du sulfate de magnésium au flacon et en le tourbillonnant.Filtrer la solution à travers du papier filtre cannelé contenu dans un entonnoir en verre dans un flacon rond pré-pesé de 100 millilitres. Jetez les résidus solides puis utilisez un évaporateur rotatif pour enlever le solvant. Après cela peser le flacon de fond rond qui contient maintenant l’huile résultante sur un équilibre de casserole supérieure.Placez ensuite le flacon conique qui contient les couches aqueuses combinées dans un bain d’eau glacée. Faites tourbillonner le flacon tout en ajoutant lentement une solution molaire de 10 molaire d’acide chlorhydrique jusqu’à ce qu’une émulsion blanche soit formée. Utilisez une pipette pour transférer une goutte de cette solution sur du papier rouge congo pour tester son acidité.Le papier doit devenir bleu. Après ce transfert, l’émulsion aqueuse laiteuse à un flacon séparant de 250 millilitres. Assurez-vous que l’émulsion est à température ambiante, puis effectuez l’extraction liquide liquide deux fois à l’aide de 30 millilitres d’hexane par extraction.Mélanger les deux extraits d’hexane dans un flacon conique propre de 100 millilitres. Ajouter le sulfate de magnésium pour sécher la solution. Filtrer la solution à travers du papier filtre cannelé contenu dans un entonnoir en verre dans le flacon rond pré-pesé de 100 millilitres.Ensuite, utilisez un évaporateur rotatif pour enlever le solvant. Après cela peser le flacon de fond rond qui contient maintenant l’huile résultante sur un équilibre de casserole supérieure. À l’aide d’un broyeur d’épices électrique broyer 10 grammes de feuilles de correa reflexa pendant 20 à 30 secondes.Transférer le matériau végétal moulu dans un bécher de 250 millilitres. Ajouter environ deux grammes de sable grossier. Mélanger le sable et le matériel végétal, puis le transférer dans le panier d’un portafilter.Utilisez une falsification pour compresser légèrement l’échantillon en vous assurant de ne pas trop le compresser. Ajouter environ 300 millilitres d’éthanol à 35 pour cent dans l’eau au réservoir de la machine à expresso. Chargez le portafilter dans la machine à expresso et placez un bécher de 250 millilitres en dessous.Puis recueillir environ 100 millilitres d’extrait. Attendez environ une minute, puis recueillir un autre 100 millilitres d’extrait. Transférer ce mélange dans un bain de glace pour refroidir.Utilisez un évaporateur rotatif avec une température de bain d’eau de 40 degrés Celsius pour évaporer l’éthanol. Ensuite, transférez l’extrait aqueux dans un entonnoir séquençant. Extraire la solution deux fois avec de l’acétate d’éthyle à l’aide de 50 millilitres d’acétate d’éthyle par extraction.Mélanger les extraits organiques. Ajouter le sulfate de magnésium et faire tourbillonner le flacon pour sécher la solution. Ensuite, utilisez un entonnoir en verre centré pour filtrer la solution et utiliser un évaporateur rotatif pour obtenir l’extrait brut.Dans cette procédure, les étudiants reçoivent un rapport solvant TLC d’acétone et de cyclohexane et reçoivent des normes pures d’eugénol et d’acétyl-eugenol. L’analyse du TLC est effectuée et les effets de la composition des solvants sur le facteur de rétention sont pris en considération. Les compositions optimales de solvants sont considérées comme se situent généralement entre cinq et 20 pour cent de cyclohexane d’acétone.Avec un facteur de rétention delta de 0,1 à 0,2. Les différentes propriétés à base d’acide des deux principales molécules organiques sont ensuite exploitées pour les séparer par extraction liquide. Typiquement eugenol a été isolé dans un rendement de 45 à 65 pour cent de l’extrait brut tandis que l’acétyl-eugenol a été isolé dans un rendement de cinq à 10 pour cent.Les élèves ont ensuite utilisé l’eluant optimisé pour déterminer le succès de leur extraction liquide liquide en comparant leurs extraits aux échantillons de référence purs par TLC. Les étudiants avancés soumettent ensuite la moitié de leur pétrole brut isolé à la chromatographie des colonnes flash. Tandis que la séparation complète de l’eugenol de l’acétyl-eugenol est rarement réalisée en raison de leurs facteurs étroits de conservation, quelques fractions contenant l’eugenol pur sont généralement rassemblées.Suivant cette procédure, des méthodes comme la spectroscopie de résonance magnétique nucléaire et la spectrométrie de masse de chromatographie de gaz peuvent être exécutées caractérisé les composés isolés. N’oubliez pas que travailler avec des liquides chauds, des pressions relativement élevées et des liquides corrosifs peut être dangereux, de sorte que des précautions telles que le port d’équipement de protection individuelle doivent être prises.

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