Name: lung fixation under constant pressure for evaluation of emphysema in mice
Uploaded: 2019-09-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice at JoVE.com

Dette arbejde blev delvist støttet af JSPS KAKENHI Grant nummer 26461199 (T. Sato) og instituttet for miljø-og kønsspecifik medicin, Juntendo University Graduate School of Medicine, Tilskudsnummer E2920 (T. Sato). Funder havde ingen rolle i udformningen af de nuværende metoder og i at skrive manuskriptet.

Følgende metoder er blevet godkendt af Udvalget for dyrepasning og-brug i Juntendo University School of Medicine. Retningslinjerne for korrekt gennemførelse af dyreforsøg, videnskabelige råd i Japan, juni 1, 2006 blev fulgt. Der er tre vigtigste trin i denne metode: 1) mus dissektion, 2) lunge exsanguination, og 3) fiksering af lungevævet bistået af specialiseret udstyr. Typisk behandles lunge prøver til nedstøbning efter 48 h fiksering12,15,<s...

<ol>
	<li>Vogelmeier, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+strategy+for+the+diagnosis,+management,+and+prevention+of+chronic+obstructive+lung+disease+2017+report.+GOLD+Executive+Summary.">Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report. GOLD Executive Summary.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).</li><li>Pauwels, R. A., Rabe, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+and+clinical+features+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease+(COPD).">Burden and clinical features of chronic obstructive pulmonary disease (COPD).</a> Lancet. 364 (9434), 613-620 (2004).</li><li>Spurzem, J. R., Rennard, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+COPD.">Pathogenesis of COPD.</a> Seminars in Respiratory and Critical Care Medicine. 26 (2), 142-153 (2005).</li><li>Vlahos, R., Bozinovski, S., Gualano, R. C., Ernst, M., Anderson, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+COPD+in+mice.">Modelling COPD in mice.</a> Pulmonary Pharmacology and Therapeutics. 19 (1), 12-17 (2006).</li><li>Vlahos, R., Bozinovski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+pre-clinical+mouse+models+of+COPD.">Recent advances in pre-clinical mouse models of COPD.</a> Clinical Science (Lond). 126 (4), 253-265 (2014).</li><li>Stevenson, C. S., Belvisi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+animal+models+of+asthma+and+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Preclinical animal models of asthma and chronic obstructive pulmonary disease.</a> Expert Review of Respiratory Medicine. 2 (5), 631-643 (2008).</li><li>Stevenson, C. S., Birrell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+towards+a+new+generation+of+animal+models+for+asthma+and+COPD+with+improved+clinical+relevance.">Moving towards a new generation of animal models for asthma and COPD with improved clinical relevance.</a> Pharmacology and Therapeutics. 130 (2), 93-105 (2011).</li><li>Vandivier, R. W., Ghosh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+Relevance+of+the+Mouse+Cigarette+Smoke+Model+of+COPD:+Peering+through+the+Smoke.">Understanding the Relevance of the Mouse Cigarette Smoke Model of COPD: Peering through the Smoke.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 57 (1), 3-4 (2017).</li><li>Wright, J. L., Cosio, M., Churg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Animal models of chronic obstructive pulmonary disease.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 295 (1), L1-L15 (2008).</li><li>Rennard, S. I., Togo, S., Holz, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+inhibits+alveolar+repair:+a+mechanism+for+the+development+of+emphysema.">Cigarette smoke inhibits alveolar repair: a mechanism for the development of emphysema.</a> Proceedings of the American Thoracic Society. 3 (8), 703-708 (2006).</li><li>Nikula, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+cigarette+smoke-induced+emphysema.">A mouse model of cigarette smoke-induced emphysema.</a> Chest. 117, 246S-247S (2000).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence+marker+protein-30+protects+mice+lungs+from+oxidative+stress,+aging,+and+smoking.">Senescence marker protein-30 protects mice lungs from oxidative stress, aging, and smoking.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 174 (5), 530-537 (2006).</li><li>Braber, S., Verheijden, K. A., Henricks, P. A., Kraneveld, A. D., Folkerts, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+fixation+methods+on+lung+morphology+in+a+murine+model+of+emphysema.">A comparison of fixation methods on lung morphology in a murine model of emphysema.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (6), L843-L851 (2010).</li><li>Hsia, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society/European+Respiratory+Society:+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure.">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 181 (4), 394-418 (2010).</li><li>Kasagi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tomato+juice+prevents+senescence-accelerated+mouse+P1+strain+from+developing+emphysema+induced+by+chronic+exposure+to+tobacco+smoke.">Tomato juice prevents senescence-accelerated mouse P1 strain from developing emphysema induced by chronic exposure to tobacco smoke.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 290 (2), L396-L404 (2006).</li><li>Koike, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+lack+of+vitamin+C+intake+generates+pulmonary+emphysema+in+senescence+marker+protein-30+knockout+mice.">Complete lack of vitamin C intake generates pulmonary emphysema in senescence marker protein-30 knockout mice.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 298 (6), L784-L792 (2010).</li><li>Koike, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitamin+C+prevents+cigarette+smoke-induced+pulmonary+emphysema+in+mice+and+provides+pulmonary+restoration.">Vitamin C prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in mice and provides pulmonary restoration.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (2), 347-357 (2014).</li><li>Suzuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen-rich+pure+water+prevents+cigarette+smoke-induced+pulmonary+emphysema+in+SMP30+knockout+mice.">Hydrogen-rich pure water prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in SMP30 knockout mice.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 492 (1), 74-81 (2017).</li><li>Saad, M., Ruwanpura, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Processing+for+Stereological+Analyses+of+Lung+Structure+in+Chronic+Obstructive+Pulmonary+Disease.">Tissue Processing for Stereological Analyses of Lung Structure in Chronic Obstructive Pulmonary Disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1725, 155-162 (2018).</li><li>Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+internal+surface+area+of+nonemphysematous+lungs.">The internal surface area of nonemphysematous lungs.</a> The American Review of Respiratory Disease. 95 (5), 765-773 (1967).</li><li>Saetta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Destructive+index:+a+measurement+of+lung+parenchymal+destruction+in+smokers.">Destructive index: a measurement of lung parenchymal destruction in smokers.</a> The American Review of Respiratory Disease. 131 (5), 764-769 (1985).</li><li>Renne, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendation+of+optimal+method+for+formalin+fixation+of+rodent+lungs+in+routine+toxicology+studies.">Recommendation of optimal method for formalin fixation of rodent lungs in routine toxicology studies.</a> Toxicologic Pathology. 29 (5), 587-589 (2001).</li><li>Schneider, J. P., Ochs, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+of+mouse+lung+tissue+dimensions+during+processing+for+morphometry:+a+comparison+of+methods.">Alterations of mouse lung tissue dimensions during processing for morphometry: a comparison of methods.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 306 (4), L341-L350 (2014).</li><li>Wright, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+pulmonary+arterial+pressure+and+airflow+obstruction+to+emphysema.">Relationship of pulmonary arterial pressure and airflow obstruction to emphysema.</a> Journal of Applied Physiology. 74 (3), 1320-1324 (1993).</li><li>Wright, J. L., Churg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+causes+physiologic+and+morphologic+changes+of+emphysema+in+the+guinea+pig.">Cigarette smoke causes physiologic and morphologic changes of emphysema in the guinea pig.</a> The American Review of Respiratory Disease. 142 (6 Pt 1), 1422-1428 (1990).</li><li>Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Internal+surface+area+and+other+measurements+in+emphysema.">Internal surface area and other measurements in emphysema.</a> Thorax. 22 (6), 483-496 (1967).</li><li>Wright, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airway+remodeling+in+the+smoke+exposed+guinea+pig+model.">Airway remodeling in the smoke exposed guinea pig model.</a> Inhalation Toxicology. 19 (11), 915-923 (2007).</li><li>Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instillation+and+Fixation+Methods+Useful+in+Mouse+Lung+Cancer+Research.">Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52964 (2015).</li><li>Roos, A. B., Berg, T., Ahlgren, K. M., Grunewald, J., Nord, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+generating+pulmonary+neutrophilia+using+aerosolized+lipopolysaccharide.">A method for generating pulmonary neutrophilia using aerosolized lipopolysaccharide.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), (2014).</li><li>Laucho-Contreras, M. E., Taylor, K. L., Mahadeva, R., Boukedes, S. S., Owen, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+measurement+of+pulmonary+emphysema+and+small+airway+remodeling+in+cigarette+smoke-exposed+mice.">Automated measurement of pulmonary emphysema and small airway remodeling in cigarette smoke-exposed mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), 52236 (2015).</li><li>Nakanishi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarithromycin+prevents+smoke-induced+emphysema+in+mice.">Clarithromycin prevents smoke-induced emphysema in mice.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 179 (4), 271-278 (2009).</li><li>Maeno, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+Cells+are+required+for+inflammation+and+destruction+in+cigarette+smoke-induced+emphysema+in+mice.">CD8+ T Cells are required for inflammation and destruction in cigarette smoke-induced emphysema in mice.</a> Journal of Immunology. 178 (12), 8090-8096 (2007).</li><li>Sato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+fixation+for+total+preanalytic+phase+evaluation+in+pathology+laboratories:+a+comprehensive+study+including+immunohistochemistry,+DNA,+and+mRNA+assays.">Optimal fixation for total preanalytic phase evaluation in pathology laboratories: a comprehensive study including immunohistochemistry, DNA, and mRNA assays.</a> Pathology International. 64 (5), 209-216 (2014).</li></ol>

Fikserings proceduren for gnavere lunger præsenteret her er ikke roman; Dette system har dog flere fordele. For det første kan det løse mange lunger (maksimum på 20) med samme tilstand på én gang. Foreningen af toksikologisk patologi hedder det, at trykket for tyngdekraften instillation varierer fra 22 – 25 cmH2O22. Flere undersøgelser har især udført lunge fiksering ved et tryk på 25 CMH2O13,19,</sup...

COPD er en af de førende verdensomspændende dødsårsager1. Cigaretrøg er den vigtigste årsag til KOL, men mekanismerne i patogenesen forbliver ufuldstændigt defineret. COPD udviser to hovedkarakteristika, herunder progressiv begrænsning af luftstrømmen og en unormal inflammatorisk reaktion i lungerne. Emphysematous lidelse forekommer hyppigt i lungerne hos KOL-patienter2. De patologiske fund af emfysem er karakteriseret ved alveolær væg ødelæggelse3. Flere dyrearter er blevet anvendt til at frembringe COPD-modeller in vivo (dvs. hunde, marsvin, aber og gnavere)4. Men, musen er blevet den mest almindeligt anvendte i opbygningen af COPD modeller. Dette har mange fordele, herunder dens lave omkostninger, evne til at blive genetisk modificeret, omfattende genomisk information tilgængelighed, tilgængelighed af antistoffer, og evnen til at bruge en række muse stammer5. I øjeblikket er der ingen musemodel, der kan efterligne de fulde funktioner i human COPD; således skal de enkelte forskere vælge, hvilken model der er mest egnet til den specifikke KOL forskning6. Den emphysematous musemodel er en af mange COPD musemodeller, der i øjeblikket er tilgængelige. Yderligere modeller omfatter eksacerbations musemodel, systemisk Co-morbiditeter model, og COPD følsomhed model7.
Den emphysematous musemodel kan genereres af flere typer af eksogene agenter, herunder kemiske agenser og cigaretrøg eksponering4. Kemisk eksponering (f. eks. til elastase) producerer en alvorlig type emfysem, mens cigaretrøg resulterer i mild emfysem8,9. Cigaretrøg menes at være den vigtigste årsag til patogenesen af KOL; Derfor er valget af cigaretrøg som et middel til at skabe en COPD musemodel er rimelig10. Mange undersøgelser har brugt cigaretrøg til at skabe emfysem i musen. For eksempel, Nikula et al. held skabt en emphysematous musemodel fra B6C3F1 hunmus ved at udsætte dem for cigaretrøg i 7 eller 13 måneder11. Vi har også etableret en emphysematous musemodel via senescens markør protein/SMP-30 KO-mus12. Det er afgørende at udføre en lunge fiksering metode, der kan korrekt visualisere denne milde emfysem model ved cigaretrøg eksponering.
Der er etableret forskellige metoder til lunge fiksering13. Men, der er ingen guld standardmetode til lunge væv fiksering til evaluering af emfysem14. Flere undersøgelser fra dette laboratorium har vist, at fikserings systemet præsenteret her er nyttigt ved at skabe en stabil tilstand for evaluering af emfysem12,15,16,17,18. Den største fordel ved det nuværende system er, at det kan fastsætte mange lunger med samme tilstand på én gang uden lungekollaps eller deflation. Det nuværende lunge fikseringssystem bruger noget særligt udstyr, der gør det muligt at oppustet lunge prøver ved et passende konstant tryk i en given periode. Dette specialudstyr består af tre dele, herunder en nedre beholder, øvre beholder og pumpe. Lunge prøver anbringes i den nedre beholder, der er forbundet med tryk fastgørings midler, hvilket resulterer i en 25 cmH2O trykforskel i niveauet af agenter mellem øvre og nedre beholdere19.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% formalin (formalin neutral buffer solution)</td>
			<td>Wako</td>
			<td>060-01667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bent forceps</td>
			<td>Hammacher</td>
			<td>HSC187-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula, size 20G</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR-FS2032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula, size 22G</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR-OT2225C</td>
			<td>Cannula to exsanguinate lung</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Hammacher</td>
			<td>HSC184-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimtowel</td>
			<td>Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark)</td>
			<td>61000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipe</td>
			<td>Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark)</td>
			<td>62011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lower container (acrylic glass material)</td>
			<td>Tokyo Science</td>
			<td>Custom-made</td>
			<td>Pressure equipment component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller pump</td>
			<td>Nissin Scientific Corp</td>
			<td>NRP-75</td>
			<td>Pump machine to exsanguinate lung</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller pump RP-2000</td>
			<td>Eyela (Tokyo Rikakikai Co. Ltd)</td>
			<td>160200</td>
			<td>Pressure equipment pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone tube &#216; 9 mm</td>
			<td>Sansyo</td>
			<td>94-0479</td>
			<td>Pressure equipment component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Somnopentyl (64.8 mg/mL)</td>
			<td>Kyoritsu Seiyaku</td>
			<td>SOM02-YA1312</td>
			<td>Pentobarbital Sodium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissor</td>
			<td>Hammacher</td>
			<td>HSB014-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture thread, size 0</td>
			<td>Nescosuture</td>
			<td>GA01SW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 mL</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS-01T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 ml with needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS-01T2613S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 mL</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS-10ESZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Three-way stopcock</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>TS-TR1K01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upper container (acrylic glass material)</td>
			<td>Tokyo Science</td>
			<td>Custom-made</td>
			<td>Pressure equipment component</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lung fixation under constant pressure for evaluation of emphysema in mice

Emfysem er et signifikant træk ved kronisk obstruktiv lungesygdom (KOL). Undersøgelser, der involverer en emphysematous musemodel, kræver optimal lunge fiksering for at producere pålidelige histologiske prøver af lungerne. På grund af arten af Lundens strukturelle sammensætning, som hovedsagelig består af luft og væv, der er en risiko for, at det kollapser eller presses under fikserings processen. Forskellige lunge fikserings metoder findes, som hver har sine egne fordele og ulemper. Den lunge fikserings metode præsenteret her udnytter konstant tryk for at muliggøre optimal vævs evaluering for undersøgelser ved hjælp af en emphysematous mus lunge model. Den største fordel er, at det kan fastsætte mange lunger med samme tilstand på én gang. Lunge prøver er fremstillet af kroniske cigaretrøg-udsatte mus. Lunge fiksering udføres ved hjælp af specialiseret udstyr, der muliggør produktion af konstant tryk. Dette konstante tryk opretholder lungerne i en forholdsvis oppustet tilstand. Således, denne metode genererer en histologisk prøve af lungerne, der er egnet til at evaluere cigaretrøg-induceret mild emfysem.

Som beskrevet tidligere, kan det specialiserede udstyr, som genererer forlænget konstant tryk, opdeles i tre dele (figur 3A). Den nederste del er det punkt, hvor lunge prøven skal indsættes (figur 4A). Lungerne er forbundet via en kanyle (20 G) til spidsen af formalin flow ved hjælp af en trevejs stophane (figur 4B). Der dannes tryk fra de forskellige overflade niveauer af fastg...

Watch this Scientific Journal Video about Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice at JoVE.com

Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice (Video) | JoVE

Præsenteret her er en nyttig protokol for lunge fiksering, der skaber en stabil tilstand for histologisk evaluering af lunge prøver fra en musemodel af emfysem. Den største fordel ved denne model er, at det kan fastsætte mange lunger med samme konstante tryk uden lungekollaps eller deflation.

Lunge fiksering under konstant tryk for evaluering af emfysem i mus

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung ...

Det konstante tryk i fikseringsanordningen opretholder lungerne i en rimeligt oppustet tilstand, der genererer en histologisk lungeprøve, der er egnet til vurdering af mild cigaretrøg induceret emfysem. Den største fordel ved denne model er, at det kan fastsætte mange lunger på samme tid ved hjælp af samme konstante tryk uden lunge sammenbrud eller deflation. Demonstration af proceduren vil være Naoko Arano en kandidat studerende fra mit laboratorium.Efter at have bekræftet en manglende reaktion på refleks bevægelse gøre et snit i huden og muskelvæv langs den mediale linje af musen, sigter mod cephalic regionen, og skæres sidetisk for at skabe et bredere arbejdsområde. Efter at have udsat mellemgulvet punkterer vævet med saftæt og åbner brystrummet. Skær sternal område tillader lunger og hjerte, der skal visualiseres.Og skær venstre atrium og højre hjertekammer. Indsæt en 24 gauge kanyle forbundet til en perfusion pumpe i højre ventrikel område og direkte kanylen til cephalic området, indtil den når lungepulsåren. Tænd derefter for pumpen og gennems gennemsyrer vævet med ca. 200 milliliter PBS i en time, indtil alt lungevævet er ændret til en hvid farve.I slutningen af perfusion skære bindevæv omkring luftrøret, lunger og hjerte, og bruge en sutur til at binde den rigtige vigtigste bronkus. Dernæst høste alle de enkelte lapper i højre lunge og placere hjerte og lapper i venstre lunge i individuelle 10 milliliter sprøjter, der indeholder en passende fiksativ. Træk stemplet tilbage og æd et vakuum i sprøjten for at puste lungerne op og fjerne lungerne fra sprøjten.Sæt en 20 gauge kanyle i luftrøret og bruge en sutur til at sikre kanylen på plads. Tilslut en en milliliter sprøjte fyldt med fiksativ til kanylen og fyld lungen med ekstra fiksativ for at kontrollere for lækager. Sørg for, at indføringsstedet er sikret for at forhindre, at lungeprøven løsner sig fra lungebrættet under fikseringen.Overfør derefter vævet til lungefikseringstrykudstyret, fjernelse af prøven og binding af luftrøret med en knude ved slutningen af fikseringsperioden. Den nederste del af lungefikseringstrykudstyret, hvori lungeprøven indsættes, forbindes via 20 gauge-kanyle til spidsen af formalinstrømmen med en trevejsstophan. Trykket genereres fra de forskellige overfladeniveauer af fiksativet mellem de nederste og øvre rum.Trykforskellen er 25 centimeter vand, men højdejusteringsknappen kan bruges til at justere trykket til mellem 25 og 30 centimeter vand. En pumpe forbinder de nederste og øvre beholdere, bevare en 25 centimeter forskel i fiksativ overfladehøjde, og dirigerer strømmen af agenten. Efter 48 timers fiksering har lungerne fra SMP30 knockout-mus, der udsættes for omgivende luft, ikke en markant udvidelse af luftrummet.Betydelig luftrumsudvidelse og alveolær ødelæggelse af muren er imidlertid observeret i SMP30 knockout mus udsat for kronisk cigaretrøg. Desuden er den gennemsnitlige lineære skærings- og destruktive indeks for lungeprøverne betydeligt større i de røgudsatte SMP30 knockout-mus end i de luftudsatte dyr. Vores laboratorium bruger 10% formalin, men forskere kan bruge andre fikseringsmidler i henhold til deres eksperimentelle behov.Som vi har rapporteret ved hjælp af det demonstrerede fikseringssystem lungeprøver kan høstes fra forskellige mus emfysem modeller for deres morfometriske evaluering. Da fastgørelsesmidler kan være farlige, skal du altid bære det passende mandskabsværn og arbejde i et godt ventileret rum.

Research

JoVE Journal

Medicine

Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice (Video) | JoVE

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells (Video) | JoVE

Forbedret Visualisering af lungemetastaser ved Single Cell Opløsning i mus ved kombinerede<em&gt; In-situ</em&gt; Perfusion af lungevæv og X-gal-farvning af<em&gt; LacZ</em&gt;-Mærkede tumorceller

Metastasis is the main cause of death in the majority of cancer types and consequently a main focus in cancer research. However, the detection of ...

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice (Video) | JoVE

Automatiseret Måling af lungeemfysem og Small Airway Remodeling i cigaretrøg-eksponerede mus

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect (Video) | JoVE

Hjertekateterisation i mus til at måle trykket Volume Forholdet: Undersøgelse af Bowditch Effect

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research (Video) | JoVE

Inddrypning og fikseringsmetoder Nyttige i muselunge Cancer Research

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer ...

Ultrasound-based Pulse Wave Velocity Evaluation in Mice

Ultrasound-based Pulse Wave Velocity Evaluation in Mice (Video) | JoVE

Ultralyd-baserede Pulse Wave Velocity Evaluering i mus

Arterial stiffness can be evaluated by calculating pulse wave velocity (PWV), i.e., the speed with which the pulse wave travels in a conduit vessel. This ...

An Intramedullary Locking Nail for Standardized Fixation of Femur Osteotomies to Analyze Normal and Defective Bone Healing in Mice

An Intramedullary Locking Nail for Standardized Fixation of Femur Osteotomies to Analyze Normal and Defective Bone Healing in Mice (Video) | JoVE

Et intramedullært Locking Nail for Standardiseret Fiksering af femur osteotomier at analysere Normal og Defekt Bone Healing i mus

Bone healing models are essential to the development of new therapeutic strategies for clinical fracture treatment. Furthermore, mouse models are becoming ...

A Minimally Invasive Model to Analyze Endochondral Fracture Healing in Mice Under Standardized Biomechanical Conditions

A Minimally Invasive Model to Analyze Endochondral Fracture Healing in Mice Under Standardized Biomechanical Conditions (Video) | JoVE

En minimalt invasiv Model til at analysere Endochondral fraktur Healing i mus Under standardiserede biomekaniske forhold

Bone healing models are necessary to analyze the complex mechanisms of fracture healing to improve clinical fracture treatment. During the last decade, an ...

Adeno-Associated Virus-Mediated Delivery of CRISPR for Cardiac Gene Editing in Mice

Adeno-Associated Virus-Mediated Delivery of CRISPR for Cardiac Gene Editing in Mice (Video) | JoVE

Adeno-associeret Virus-medieret levering af CRISPR for hjerte gen redigering i mus

The clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system has greatly facilitated genome engineering in both cultured cells and ...

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice (Video) | JoVE

Real-time pres-binds analyse af akut myokardieinfarkt i mus

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any ...