Name: lung fixation under constant pressure for evaluation of emphysema in mice
Uploaded: 2019-09-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice at JoVE.com

עבודה זו היתה נתמכת בחלקו של JSPS KAKENHI גרנט מספר 26461199 (ט. סאטו) והמכון לרפואה מגדר הסביבה, Juntendo האוניברסיטה בוגרת בית הספר לרפואה, גרנט מספר E2920 (ט. סאטו). לפאנדר לא היה כל תפקיד בעיצוב השיטות הנוכחיות ובכתיבת כתב היד.

השיטות הבאות אושרו על ידי הטיפול בבעלי חיים וועדות השימוש של אוניברסיטת Juntendo הספר לרפואה. ההנחיות להתנהלות נאותה של ניסויים בבעלי חיים, מועצת המדע של יפן, 1 ביוני, 2006 הופעלו. ישנם שלושה שלבים עיקריים בשיטה זו: 1) לנתיחה העכבר, 2) הדימום בריאות, ו 3) קיבעון של רקמות ריאות בסיוע ציוד מיוחד. בדרך כל...

<ol>
	<li>Vogelmeier, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+strategy+for+the+diagnosis,+management,+and+prevention+of+chronic+obstructive+lung+disease+2017+report.+GOLD+Executive+Summary.">Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report. GOLD Executive Summary.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).</li><li>Pauwels, R. A., Rabe, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+and+clinical+features+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease+(COPD).">Burden and clinical features of chronic obstructive pulmonary disease (COPD).</a> Lancet. 364 (9434), 613-620 (2004).</li><li>Spurzem, J. R., Rennard, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+COPD.">Pathogenesis of COPD.</a> Seminars in Respiratory and Critical Care Medicine. 26 (2), 142-153 (2005).</li><li>Vlahos, R., Bozinovski, S., Gualano, R. C., Ernst, M., Anderson, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+COPD+in+mice.">Modelling COPD in mice.</a> Pulmonary Pharmacology and Therapeutics. 19 (1), 12-17 (2006).</li><li>Vlahos, R., Bozinovski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+pre-clinical+mouse+models+of+COPD.">Recent advances in pre-clinical mouse models of COPD.</a> Clinical Science (Lond). 126 (4), 253-265 (2014).</li><li>Stevenson, C. S., Belvisi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+animal+models+of+asthma+and+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Preclinical animal models of asthma and chronic obstructive pulmonary disease.</a> Expert Review of Respiratory Medicine. 2 (5), 631-643 (2008).</li><li>Stevenson, C. S., Birrell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+towards+a+new+generation+of+animal+models+for+asthma+and+COPD+with+improved+clinical+relevance.">Moving towards a new generation of animal models for asthma and COPD with improved clinical relevance.</a> Pharmacology and Therapeutics. 130 (2), 93-105 (2011).</li><li>Vandivier, R. W., Ghosh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+Relevance+of+the+Mouse+Cigarette+Smoke+Model+of+COPD:+Peering+through+the+Smoke.">Understanding the Relevance of the Mouse Cigarette Smoke Model of COPD: Peering through the Smoke.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 57 (1), 3-4 (2017).</li><li>Wright, J. L., Cosio, M., Churg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Animal models of chronic obstructive pulmonary disease.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 295 (1), L1-L15 (2008).</li><li>Rennard, S. I., Togo, S., Holz, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+inhibits+alveolar+repair:+a+mechanism+for+the+development+of+emphysema.">Cigarette smoke inhibits alveolar repair: a mechanism for the development of emphysema.</a> Proceedings of the American Thoracic Society. 3 (8), 703-708 (2006).</li><li>Nikula, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+cigarette+smoke-induced+emphysema.">A mouse model of cigarette smoke-induced emphysema.</a> Chest. 117, 246S-247S (2000).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence+marker+protein-30+protects+mice+lungs+from+oxidative+stress,+aging,+and+smoking.">Senescence marker protein-30 protects mice lungs from oxidative stress, aging, and smoking.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 174 (5), 530-537 (2006).</li><li>Braber, S., Verheijden, K. A., Henricks, P. A., Kraneveld, A. D., Folkerts, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+fixation+methods+on+lung+morphology+in+a+murine+model+of+emphysema.">A comparison of fixation methods on lung morphology in a murine model of emphysema.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (6), L843-L851 (2010).</li><li>Hsia, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society/European+Respiratory+Society:+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure.">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 181 (4), 394-418 (2010).</li><li>Kasagi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tomato+juice+prevents+senescence-accelerated+mouse+P1+strain+from+developing+emphysema+induced+by+chronic+exposure+to+tobacco+smoke.">Tomato juice prevents senescence-accelerated mouse P1 strain from developing emphysema induced by chronic exposure to tobacco smoke.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 290 (2), L396-L404 (2006).</li><li>Koike, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+lack+of+vitamin+C+intake+generates+pulmonary+emphysema+in+senescence+marker+protein-30+knockout+mice.">Complete lack of vitamin C intake generates pulmonary emphysema in senescence marker protein-30 knockout mice.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 298 (6), L784-L792 (2010).</li><li>Koike, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitamin+C+prevents+cigarette+smoke-induced+pulmonary+emphysema+in+mice+and+provides+pulmonary+restoration.">Vitamin C prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in mice and provides pulmonary restoration.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (2), 347-357 (2014).</li><li>Suzuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen-rich+pure+water+prevents+cigarette+smoke-induced+pulmonary+emphysema+in+SMP30+knockout+mice.">Hydrogen-rich pure water prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in SMP30 knockout mice.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 492 (1), 74-81 (2017).</li><li>Saad, M., Ruwanpura, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Processing+for+Stereological+Analyses+of+Lung+Structure+in+Chronic+Obstructive+Pulmonary+Disease.">Tissue Processing for Stereological Analyses of Lung Structure in Chronic Obstructive Pulmonary Disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1725, 155-162 (2018).</li><li>Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+internal+surface+area+of+nonemphysematous+lungs.">The internal surface area of nonemphysematous lungs.</a> The American Review of Respiratory Disease. 95 (5), 765-773 (1967).</li><li>Saetta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Destructive+index:+a+measurement+of+lung+parenchymal+destruction+in+smokers.">Destructive index: a measurement of lung parenchymal destruction in smokers.</a> The American Review of Respiratory Disease. 131 (5), 764-769 (1985).</li><li>Renne, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendation+of+optimal+method+for+formalin+fixation+of+rodent+lungs+in+routine+toxicology+studies.">Recommendation of optimal method for formalin fixation of rodent lungs in routine toxicology studies.</a> Toxicologic Pathology. 29 (5), 587-589 (2001).</li><li>Schneider, J. P., Ochs, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+of+mouse+lung+tissue+dimensions+during+processing+for+morphometry:+a+comparison+of+methods.">Alterations of mouse lung tissue dimensions during processing for morphometry: a comparison of methods.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 306 (4), L341-L350 (2014).</li><li>Wright, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+pulmonary+arterial+pressure+and+airflow+obstruction+to+emphysema.">Relationship of pulmonary arterial pressure and airflow obstruction to emphysema.</a> Journal of Applied Physiology. 74 (3), 1320-1324 (1993).</li><li>Wright, J. L., Churg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+causes+physiologic+and+morphologic+changes+of+emphysema+in+the+guinea+pig.">Cigarette smoke causes physiologic and morphologic changes of emphysema in the guinea pig.</a> The American Review of Respiratory Disease. 142 (6 Pt 1), 1422-1428 (1990).</li><li>Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Internal+surface+area+and+other+measurements+in+emphysema.">Internal surface area and other measurements in emphysema.</a> Thorax. 22 (6), 483-496 (1967).</li><li>Wright, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airway+remodeling+in+the+smoke+exposed+guinea+pig+model.">Airway remodeling in the smoke exposed guinea pig model.</a> Inhalation Toxicology. 19 (11), 915-923 (2007).</li><li>Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instillation+and+Fixation+Methods+Useful+in+Mouse+Lung+Cancer+Research.">Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52964 (2015).</li><li>Roos, A. B., Berg, T., Ahlgren, K. M., Grunewald, J., Nord, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+generating+pulmonary+neutrophilia+using+aerosolized+lipopolysaccharide.">A method for generating pulmonary neutrophilia using aerosolized lipopolysaccharide.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), (2014).</li><li>Laucho-Contreras, M. E., Taylor, K. L., Mahadeva, R., Boukedes, S. S., Owen, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+measurement+of+pulmonary+emphysema+and+small+airway+remodeling+in+cigarette+smoke-exposed+mice.">Automated measurement of pulmonary emphysema and small airway remodeling in cigarette smoke-exposed mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), 52236 (2015).</li><li>Nakanishi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarithromycin+prevents+smoke-induced+emphysema+in+mice.">Clarithromycin prevents smoke-induced emphysema in mice.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 179 (4), 271-278 (2009).</li><li>Maeno, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+Cells+are+required+for+inflammation+and+destruction+in+cigarette+smoke-induced+emphysema+in+mice.">CD8+ T Cells are required for inflammation and destruction in cigarette smoke-induced emphysema in mice.</a> Journal of Immunology. 178 (12), 8090-8096 (2007).</li><li>Sato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+fixation+for+total+preanalytic+phase+evaluation+in+pathology+laboratories:+a+comprehensive+study+including+immunohistochemistry,+DNA,+and+mRNA+assays.">Optimal fixation for total preanalytic phase evaluation in pathology laboratories: a comprehensive study including immunohistochemistry, DNA, and mRNA assays.</a> Pathology International. 64 (5), 209-216 (2014).</li></ol>

הליך הקיבעון של הריאות מכרסמים הציג כאן הוא לא רומן; עם זאת, למערכת זו יש מספר יתרונות. ראשית, זה יכול לתקן את הריאות הרבה (מקסימום של 20) עם אותו מצב בבת אחת. אגודת הפתולוגיה הגיאולוגית מצהירה כי הלחץ לשינוי הכבידה משתנה מ -22 – 25 cmH2O22. בעיקר, מספר מחקרים ביצעו קיבעון ריאה בלח?...

COPD היא אחת הסיבות המובילות בעולם של מוות1. עשן סיגריות הוא הגורם החשוב ביותר של COPD, אבל מנגנוני הפתוגנזה להישאר מוגדרים לחלוטין. COPD מדגים שני מאפיינים עיקריים, כולל הגבלה מתקדמת של זרימת אוויר ותגובה דלקתית נורמלית של הריאה. הפרעת emphysematous מתרחשת לעתים קרובות בריאות של חולי COPD2. הממצאים הפתולוגיים של אמפיזמה מאופיינים בהשחתת קירות מכתשיים3. מספר מיני בעלי חיים שימשו להפקת דגמי COPD בvivo (כגון, כלבים, שרקנים, קופים ומכרסמים)4. עם זאת, העכבר הפך לנפוץ ביותר בבניית מודלים COPD. זה יש יתרונות רבים, כולל העלות הנמוכה שלה, היכולת להיות מהונדסים גנטית, מידע רב גנומי זמינות, זמינות של נוגדנים, ואת היכולת להשתמש במגוון של זנים של העכבר5. כיום, אין מודל העכבר שיכול לחקות את התכונות המלאות של האדם COPD; לכן, חוקרים בודדים חייבים לבחור איזה מודל מתאים ביותר עבור מחקר COPD ספציפי6. מודל העכבר emphysematous הוא אחד מדגמים רבים של עכבר COPD הזמינים כעת. דגמים נוספים כוללים מודל החרפה של העכבר, מודל שיתוף morbidities מערכתית, ו COPD הרגישות דגם7.
מודל העכבר emphysematous יכול להיווצר על ידי מספר סוגים של סוכנים אקסוגני, כולל סוכנים כימיים וחשיפה עשן סיגריה4. חשיפה כימית (למשל, כדי elastase) מייצרת סוג חמור של אמפיזמה, בעוד עשן סיגריות תוצאות אמפיזמה קלה8,9. עשן סיגריות הוא נחשב הגורם העיקרי לפתוגנזה של COPD; לכן, הבחירה של עשן סיגריה כאמצעי ליצור מודל העכבר COPD הוא הגיוני10. מחקרים רבים השתמשו עשן סיגריות כדי ליצור אמפיזמה בעכבר. לדוגמה, Nikula ואח ' יצרה בהצלחה מודל עכבר emphysematous מ B6C3F1 עכברים נקבה על ידי חשיפת אותם עשן סיגריות עבור 7 או 13 חודשים11. כמו כן הקמנו מודל עכבר emphysematous באמצעות חלבון סמן/SMP-30 KO עכברים12. זה חיוני לבצע קיבוע ריאה שיטה שיכולה להמחיש כראוי זה מודל אמפיזמה מתון על ידי חשיפה עשן סיגריה.
שיטות שונות לקיבוע ריאות הוקמו13. עם זאת, אין שיטה סטנדרטית זהב של קיבוע רקמת ריאות להערכת אמפיזמה14. מספר מחקרים מהמעבדה הראו כי מערכת הקיבעון המוצגת כאן שימושית על ידי יצירת מצב יציב להערכת אמפיזמה12,15,16,17,18. היתרון העיקרי של המערכת הנוכחית הוא שהוא יכול לתקן את הריאות הרבות עם אותו מצב בבת אחת ללא התמוטטות ריאה או בדלציה. מערכת קיבעון הריאה הנוכחית משתמשת בכמה ציוד מיוחד המאפשר דגימות ריאה להיות מנופח בלחץ קבוע מתאים לתקופה נתונה. ציוד מיוחד זה כולל שלושה חלקים, כולל מכולה נמוכה יותר, מכולה עליונה ומשאבה. דגימות ריאות ממוקמות במיכל התחתון המחובר לסוכני תיקון בלחץ, והתוצאה היא 25 הבדל בלחיצה2O ברמה של הסוכנים בין המכולות העליון והתחתון19.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% formalin (formalin neutral buffer solution)</td>
			<td>Wako</td>
			<td>060-01667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bent forceps</td>
			<td>Hammacher</td>
			<td>HSC187-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula, size 20G</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR-FS2032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula, size 22G</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR-OT2225C</td>
			<td>Cannula to exsanguinate lung</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Hammacher</td>
			<td>HSC184-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimtowel</td>
			<td>Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark)</td>
			<td>61000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipe</td>
			<td>Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark)</td>
			<td>62011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lower container (acrylic glass material)</td>
			<td>Tokyo Science</td>
			<td>Custom-made</td>
			<td>Pressure equipment component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller pump</td>
			<td>Nissin Scientific Corp</td>
			<td>NRP-75</td>
			<td>Pump machine to exsanguinate lung</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller pump RP-2000</td>
			<td>Eyela (Tokyo Rikakikai Co. Ltd)</td>
			<td>160200</td>
			<td>Pressure equipment pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone tube &#216; 9 mm</td>
			<td>Sansyo</td>
			<td>94-0479</td>
			<td>Pressure equipment component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Somnopentyl (64.8 mg/mL)</td>
			<td>Kyoritsu Seiyaku</td>
			<td>SOM02-YA1312</td>
			<td>Pentobarbital Sodium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissor</td>
			<td>Hammacher</td>
			<td>HSB014-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture thread, size 0</td>
			<td>Nescosuture</td>
			<td>GA01SW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 mL</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS-01T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 ml with needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS-01T2613S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 mL</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS-10ESZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Three-way stopcock</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>TS-TR1K01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upper container (acrylic glass material)</td>
			<td>Tokyo Science</td>
			<td>Custom-made</td>
			<td>Pressure equipment component</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lung fixation under constant pressure for evaluation of emphysema in mice

אמפיזמה היא תכונה משמעותית של מחלת ריאות חסימתית כרונית (COPD). מחקרים הכרוכים במודל עכבר emphysematous דורשים קיבעון ריאה אופטימלי כדי לייצר דגימות היסטולוגית אמין של הריאה. בשל טבעה של ההרכב המבני של הריאה, המורכב ברובו מאוויר ומרקמות, קיים סיכון שהוא מתמוטט או מרוקן במהלך תהליך הקיבוע. קיימות שיטות שונות של קיבוע ריאה, שלכל אחד מהם יתרונות וחסרונות משלו. שיטת קיבוע הריאה המוצגת כאן משתמשת בלחץ תמידי כדי לאפשר הערכת רקמות אופטימלית למחקרים באמצעות מודל ריאות העכבר emphysematous. היתרון העיקרי הוא שהוא יכול לתקן הרבה ריאות עם אותו מצב בבת אחת. דגימות ריאות מתקבלות מעכברים כרוניים חשופים לעשן סיגריה. קיבוע ריאה מבוצעת באמצעות ציוד מיוחד המאפשר ייצור של לחץ תמידי. הלחץ התמידי הזה שומר. על הריאה במצב מנופח כך, שיטה זו מייצרת דוגמית היסטולוגית של הריאה המתאימה להערכת הסיגריה הנגרמת נפחת מתון.

כפי שמתואר קודם לכן, הציוד התמחה, היוצר לחץ תמידי מורחב, ניתן לחלק לשלושה חלקים (איור 3א). החלק התחתון הוא הנקודה שבה יש להוסיף את דגימת הריאה (איור 4א). הריאה מחוברת באמצעות צינורית (20 גר') לקצה זרימת פורמלין באמצעות התרנגול הפסקת שלושה כיוון ...

Watch this Scientific Journal Video about Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice at JoVE.com

Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice (Video) | JoVE

מוצג כאן הוא פרוטוקול שימושי עבור קיבעון ריאה שיוצר מצב יציב עבור הערכה היסטולוגית של דגימות ריאה ממודל העכבר של אמפיזמה. היתרון העיקרי של מודל זה הוא שהוא יכול לתקן את הריאות הרבה עם הלחץ התמידי אותו ללא התמוטטות ריאה או בדלציה.

קיבעון ריאה תחת לחץ מתמיד על הערכה של אמפיזמה בעכברים

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung ...

הלחץ המתמיד בתוך מכשיר קיבוע שומר על הריאות במצב מנופח למדי יצירת דגימת ריאות היסטולוגית המתאימה להערכת אמפיזמה עשן סיגריות קלה המושרה. היתרון העיקרי של מודל זה הוא שזה יכול לתקן ריאות רבות באותו זמן באמצעות אותו לחץ מתמיד ללא קריסת ריאות או דפלציה. הדגמת ההליך תהיה נאוקו ארנו סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלי.לאחר אישור חוסר תגובה לתנועה רפלקס לעשות חתך בעור ברקמת השריר לאורך הקו המדיאלי של העכבר, מכוון לאזור cephalic, לחתוך באופן מאוחר יותר כדי ליצור מרחב עבודה רחב יותר. לאחר חשיפת שכבת הסרעפת לנקב את הרקמה עם מלקחיים ולפתוח את שטח בית החזה. חותכים את אזור החזה ומאפשר לריאות וללב להיות חזותיים.וחותכים את האולם השמאלי ואת החדר הימני. הכנס 24 מד cannula מחובר משאבת זלוף לתוך אזור החדר הימני ולכוון את cannula לאזור cephalic עד שהוא מגיע לעורק הריאה. לאחר מכן, להפעיל את המשאבה ולבלבל את הרקמה עם כ 200 מיליליטר של PBS במשך שעה אחת עד שכל רקמת הריאה השתנתה לצבע לבן.בסוף התדלוק חתכו את רקמת החיבור המקיפה את קנה הנשימה, הריאות והלב, ולהשתמש בתפר כדי לקשור את הסונפנוס הראשי הנכון. לאחר מכן, לקצור את כל האונות הבודדות של הריאה הימנית ולמקם את הלב ואת האונות של הריאה השמאלית לתוך מזרקים בודדים 10 מיליליטר המכיל תיקון מתאים. נסיגה הבוכנה יצירת ואקום במזרק כדי לנפח את הריאות ולהסיר את הריאה מהמזרק.הכנס 20 מד cannula לתוך קנה הנשימה ולהשתמש בתפר כדי לאבטח את cannula במקום. חבר מזרק מיליליטר אחד מלא fixative ל cannula ולמלא את הריאה עם תיקון נוסף כדי לבדוק דליפות. ודא כי אתר הכניסה היה מאובטח כדי למנוע את דגימת הריאה להתנתק לוח הריאה במהלך הקיבעון.לאחר מכן להעביר את הרקמה לציוד לחץ קיבוע הריאות, הסרת המדגם וקשירת קנה הנשימה עם קשר בסוף תקופת הקיבוע. המרכיב התחתון של ציוד לחץ קיבוע הריאות שלתוכם מוכנסת דגימת הריאה מחובר באמצעות 20 אומד cannula לקצה זרימת הפורמלין עם stopcock שלוש דרך. לחץ נוצר מרמות פני השטח השונות של התיקון בין התאים התחתונים העליונים.הפרש הלחץ הוא 25 ס"מ של מים אבל כפתור התאמת הגובה יכול לשמש כדי להתאים את הלחץ בין 25 ל 30 ס"מ של מים. משאבה מחברת את המכולות התחתונות והתחתונות, תוך שמירה על הפרש של 25 ס"מ בגובה פני השטח המקבע, ומכוונת את זרימת הסוכן. לאחר 48 שעות של קיבעון הריאות מעכברי נוקאאוט SMP30 החשופים לאוויר הסביבה אינן מפגינות הגדלה ניכרת של המרחב האווירי.הגדלת מרחב אווירי משמעותית והרס קיר מכתשי, לעומת זאת, נצפו בעכברי נוקאאוט SMP30 חשופים לעשן סיגריות כרוני. בנוסף, היירוט ליניארי הממוצע והאינדקס ההרסני של דגימות הריאה גדולים משמעותית בעכברי הנוקאאוט SMP30 החשופים לעשן מאשר באוויר שנחשף לבעלי חיים. המעבדה שלנו משתמשת 10% פורמלין אבל החוקרים יכולים להשתמש סוכני קיבעון אחרים על פי הצרכים הניסיוניים שלהם.כפי שדיווחנו באמצעות דגימות ריאות מערכת קיבעון הפגינו ניתן לקצור מודלים שונים של אמפיזמה העכבר להערכה מורפומטרית שלהם. כמו סוכני תיקון יכול להיות מסוכן תמיד ללבוש את ציוד מגן כוח אדם המתאים ולעבוד בחדר מאוורר היטב.

Research

JoVE Journal

Medicine

Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice (Video) | JoVE

לחץ אוורור מבוקר כדי לגרום פגיעה ריאות חריפה על עכברים

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells (Video) | JoVE

ויזואליזציה המשופרת של גרורות בריאות ברזולוצית תא בודדה בעכברים על ידי משולב<em&gt; באתרו</em&gt; זלוף של רקמת ריאה וכתמי X-גל של<em&gt; LacZ</emגידול תאים&gt; תייג-

Metastasis is the main cause of death in the majority of cancer types and consequently a main focus in cancer research. However, the detection of ...

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice (Video) | JoVE

מדידה אוטומטית של הריאות נפחתו וקטן Airway Remodeling בעכברים שנחשפו לעשן סיגריות

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect (Video) | JoVE

צנתור לב בעכברים כדי למדוד את יחסי נפח לחץ: חקירת אפקט Bowditch

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research (Video) | JoVE

שיטות החדרה וקיבוע שימושיות בחקר סרטן ריאות עכבר

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer ...

Ultrasound-based Pulse Wave Velocity Evaluation in Mice

Ultrasound-based Pulse Wave Velocity Evaluation in Mice (Video) | JoVE

אולטראסאונד מבוסס הערכה מהירה גל דופק של עכברים

Arterial stiffness can be evaluated by calculating pulse wave velocity (PWV), i.e., the speed with which the pulse wave travels in a conduit vessel. This ...

An Intramedullary Locking Nail for Standardized Fixation of Femur Osteotomies to Analyze Normal and Defective Bone Healing in Mice

An Intramedullary Locking Nail for Standardized Fixation of Femur Osteotomies to Analyze Normal and Defective Bone Healing in Mice (Video) | JoVE

מסמר נעילת intramedullary עבור קיבוע סטנדרטי של Osteotomies עצם הירך כדי לנתח רגיל ופגום עצם ריפוי עכברים

Bone healing models are essential to the development of new therapeutic strategies for clinical fracture treatment. Furthermore, mouse models are becoming ...

A Minimally Invasive Model to Analyze Endochondral Fracture Healing in Mice Under Standardized Biomechanical Conditions

A Minimally Invasive Model to Analyze Endochondral Fracture Healing in Mice Under Standardized Biomechanical Conditions (Video) | JoVE

מודל פולשנית לניתוח שבר Endochondral ריפוי בעכברים בתנאים מתוקננים ביו-מכני

Bone healing models are necessary to analyze the complex mechanisms of fracture healing to improve clinical fracture treatment. During the last decade, an ...

Adeno-Associated Virus-Mediated Delivery of CRISPR for Cardiac Gene Editing in Mice

Adeno-Associated Virus-Mediated Delivery of CRISPR for Cardiac Gene Editing in Mice (Video) | JoVE

Adeno-הקשורים משלוח וירוס בתיווך של CRISPR עבור ג'ין לב עריכה בעכברים

The clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system has greatly facilitated genome engineering in both cultured cells and ...

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice (Video) | JoVE

ניתוח בזמן אמת לחץ-נפח של אוטם אקוטי בעכברים

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any ...