Name: lung fixation under constant pressure for evaluation of emphysema in mice
Uploaded: 2019-09-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice Video at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet delvis av JSP KAKENHI Grant Number 26461199 (T. Sato) og Institutt for miljø-og Kjønnsspesifikk medisin, Juntendo University Graduate School of Medicine, Grant Number E2920 (T. Sato). Funder hadde ingen rolle i utformingen av dagens metoder og skriftlig manuskriptet.

Det fulgte metoder ha blitt anerkjent av det dyr bekymre og bruk komiteer av Juntendo universitet skolen av medisin. Retningslinjene for forsvarlig gjennomføring av dyre eksperimenter, Science Council of Japan, 1 juni, 2006 ble fulgt. Det er tre viktigste trinnene i denne metoden: 1) mus disseksjon, 2) lunge exsanguination, og 3) fiksering av lunge vev assistert av spesialisert utstyr. Vanligvis behandles lunge prøver til forankrings etter 48 h av fiksering12,15</sup...

<ol>
	<li>Vogelmeier, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+strategy+for+the+diagnosis,+management,+and+prevention+of+chronic+obstructive+lung+disease+2017+report.+GOLD+Executive+Summary.">Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report. GOLD Executive Summary.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).</li><li>Pauwels, R. A., Rabe, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+and+clinical+features+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease+(COPD).">Burden and clinical features of chronic obstructive pulmonary disease (COPD).</a> Lancet. 364 (9434), 613-620 (2004).</li><li>Spurzem, J. R., Rennard, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+COPD.">Pathogenesis of COPD.</a> Seminars in Respiratory and Critical Care Medicine. 26 (2), 142-153 (2005).</li><li>Vlahos, R., Bozinovski, S., Gualano, R. C., Ernst, M., Anderson, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+COPD+in+mice.">Modelling COPD in mice.</a> Pulmonary Pharmacology and Therapeutics. 19 (1), 12-17 (2006).</li><li>Vlahos, R., Bozinovski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+pre-clinical+mouse+models+of+COPD.">Recent advances in pre-clinical mouse models of COPD.</a> Clinical Science (Lond). 126 (4), 253-265 (2014).</li><li>Stevenson, C. S., Belvisi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+animal+models+of+asthma+and+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Preclinical animal models of asthma and chronic obstructive pulmonary disease.</a> Expert Review of Respiratory Medicine. 2 (5), 631-643 (2008).</li><li>Stevenson, C. S., Birrell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+towards+a+new+generation+of+animal+models+for+asthma+and+COPD+with+improved+clinical+relevance.">Moving towards a new generation of animal models for asthma and COPD with improved clinical relevance.</a> Pharmacology and Therapeutics. 130 (2), 93-105 (2011).</li><li>Vandivier, R. W., Ghosh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+Relevance+of+the+Mouse+Cigarette+Smoke+Model+of+COPD:+Peering+through+the+Smoke.">Understanding the Relevance of the Mouse Cigarette Smoke Model of COPD: Peering through the Smoke.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 57 (1), 3-4 (2017).</li><li>Wright, J. L., Cosio, M., Churg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Animal models of chronic obstructive pulmonary disease.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 295 (1), L1-L15 (2008).</li><li>Rennard, S. I., Togo, S., Holz, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+inhibits+alveolar+repair:+a+mechanism+for+the+development+of+emphysema.">Cigarette smoke inhibits alveolar repair: a mechanism for the development of emphysema.</a> Proceedings of the American Thoracic Society. 3 (8), 703-708 (2006).</li><li>Nikula, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+cigarette+smoke-induced+emphysema.">A mouse model of cigarette smoke-induced emphysema.</a> Chest. 117, 246S-247S (2000).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence+marker+protein-30+protects+mice+lungs+from+oxidative+stress,+aging,+and+smoking.">Senescence marker protein-30 protects mice lungs from oxidative stress, aging, and smoking.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 174 (5), 530-537 (2006).</li><li>Braber, S., Verheijden, K. A., Henricks, P. A., Kraneveld, A. D., Folkerts, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+fixation+methods+on+lung+morphology+in+a+murine+model+of+emphysema.">A comparison of fixation methods on lung morphology in a murine model of emphysema.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (6), L843-L851 (2010).</li><li>Hsia, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society/European+Respiratory+Society:+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure.">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 181 (4), 394-418 (2010).</li><li>Kasagi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tomato+juice+prevents+senescence-accelerated+mouse+P1+strain+from+developing+emphysema+induced+by+chronic+exposure+to+tobacco+smoke.">Tomato juice prevents senescence-accelerated mouse P1 strain from developing emphysema induced by chronic exposure to tobacco smoke.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 290 (2), L396-L404 (2006).</li><li>Koike, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+lack+of+vitamin+C+intake+generates+pulmonary+emphysema+in+senescence+marker+protein-30+knockout+mice.">Complete lack of vitamin C intake generates pulmonary emphysema in senescence marker protein-30 knockout mice.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 298 (6), L784-L792 (2010).</li><li>Koike, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitamin+C+prevents+cigarette+smoke-induced+pulmonary+emphysema+in+mice+and+provides+pulmonary+restoration.">Vitamin C prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in mice and provides pulmonary restoration.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (2), 347-357 (2014).</li><li>Suzuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen-rich+pure+water+prevents+cigarette+smoke-induced+pulmonary+emphysema+in+SMP30+knockout+mice.">Hydrogen-rich pure water prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in SMP30 knockout mice.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 492 (1), 74-81 (2017).</li><li>Saad, M., Ruwanpura, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Processing+for+Stereological+Analyses+of+Lung+Structure+in+Chronic+Obstructive+Pulmonary+Disease.">Tissue Processing for Stereological Analyses of Lung Structure in Chronic Obstructive Pulmonary Disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1725, 155-162 (2018).</li><li>Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+internal+surface+area+of+nonemphysematous+lungs.">The internal surface area of nonemphysematous lungs.</a> The American Review of Respiratory Disease. 95 (5), 765-773 (1967).</li><li>Saetta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Destructive+index:+a+measurement+of+lung+parenchymal+destruction+in+smokers.">Destructive index: a measurement of lung parenchymal destruction in smokers.</a> The American Review of Respiratory Disease. 131 (5), 764-769 (1985).</li><li>Renne, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendation+of+optimal+method+for+formalin+fixation+of+rodent+lungs+in+routine+toxicology+studies.">Recommendation of optimal method for formalin fixation of rodent lungs in routine toxicology studies.</a> Toxicologic Pathology. 29 (5), 587-589 (2001).</li><li>Schneider, J. P., Ochs, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+of+mouse+lung+tissue+dimensions+during+processing+for+morphometry:+a+comparison+of+methods.">Alterations of mouse lung tissue dimensions during processing for morphometry: a comparison of methods.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 306 (4), L341-L350 (2014).</li><li>Wright, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+pulmonary+arterial+pressure+and+airflow+obstruction+to+emphysema.">Relationship of pulmonary arterial pressure and airflow obstruction to emphysema.</a> Journal of Applied Physiology. 74 (3), 1320-1324 (1993).</li><li>Wright, J. L., Churg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+causes+physiologic+and+morphologic+changes+of+emphysema+in+the+guinea+pig.">Cigarette smoke causes physiologic and morphologic changes of emphysema in the guinea pig.</a> The American Review of Respiratory Disease. 142 (6 Pt 1), 1422-1428 (1990).</li><li>Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Internal+surface+area+and+other+measurements+in+emphysema.">Internal surface area and other measurements in emphysema.</a> Thorax. 22 (6), 483-496 (1967).</li><li>Wright, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airway+remodeling+in+the+smoke+exposed+guinea+pig+model.">Airway remodeling in the smoke exposed guinea pig model.</a> Inhalation Toxicology. 19 (11), 915-923 (2007).</li><li>Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instillation+and+Fixation+Methods+Useful+in+Mouse+Lung+Cancer+Research.">Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52964 (2015).</li><li>Roos, A. B., Berg, T., Ahlgren, K. M., Grunewald, J., Nord, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+generating+pulmonary+neutrophilia+using+aerosolized+lipopolysaccharide.">A method for generating pulmonary neutrophilia using aerosolized lipopolysaccharide.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), (2014).</li><li>Laucho-Contreras, M. E., Taylor, K. L., Mahadeva, R., Boukedes, S. S., Owen, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+measurement+of+pulmonary+emphysema+and+small+airway+remodeling+in+cigarette+smoke-exposed+mice.">Automated measurement of pulmonary emphysema and small airway remodeling in cigarette smoke-exposed mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), 52236 (2015).</li><li>Nakanishi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarithromycin+prevents+smoke-induced+emphysema+in+mice.">Clarithromycin prevents smoke-induced emphysema in mice.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 179 (4), 271-278 (2009).</li><li>Maeno, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+Cells+are+required+for+inflammation+and+destruction+in+cigarette+smoke-induced+emphysema+in+mice.">CD8+ T Cells are required for inflammation and destruction in cigarette smoke-induced emphysema in mice.</a> Journal of Immunology. 178 (12), 8090-8096 (2007).</li><li>Sato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+fixation+for+total+preanalytic+phase+evaluation+in+pathology+laboratories:+a+comprehensive+study+including+immunohistochemistry,+DNA,+and+mRNA+assays.">Optimal fixation for total preanalytic phase evaluation in pathology laboratories: a comprehensive study including immunohistochemistry, DNA, and mRNA assays.</a> Pathology International. 64 (5), 209-216 (2014).</li></ol>

Fiksering prosedyre for gnager lungene som presenteres her er ikke romanen; imidlertid har dette systemet flere fordeler. For det første, den kanne fastsette mange lungen (maksimum av 20) med det likt forfatning i sin tid. The Society of toxicologic patologi fastslår at presset for tyngdekraften drypping varierer fra 22 – 25 cmH2O22. Spesielt har flere studier utført lunge fiksering ved et trykk på 25 cmH2O13,19...

KOLS er en av de ledende verdensomspennende årsakene til dødsfall1. Sigarettrøyk er den viktigste årsaken til KOLS, men mekanismene for patogenesen forblir ufullstendig definert. KOLS demonstrerer to hoved egenskaper, inkludert progressiv begrensning av luftstrøm og en unormal betennelsesreaksjon i lungene. Emphysematous lidelse forekommer ofte i lungene til KOLS-pasienter2. Den patologiske funn av emfysem er preget av alveolære vegg ødeleggelse3. Flere dyrearter har blitt brukt til å generere KOLS-modeller i vivo (dvs. hunder, marsvin, aper og gnagere)4. Imidlertid har musen blitt den mest brukte i konstruksjonen av KOLS-modeller. Dette har mange fordeler, inkludert lave kostnader, evne til å være genetisk modifisert, omfattende genomisk informasjon tilgjengelighet, tilgjengelighet av antistoffer, og evne til å bruke en rekke mus stammer5. For øyeblikket er det ingen musemodell som kan etterligne alle funksjonene til humant KOLS; enkelte forskere må derfor velge hvilken modell som egner seg best for den spesifikke KOLS-forskningen6. Den emphysematous muse modellen er en av mange KOLS-musemodeller som er tilgjengelige for øyeblikket. Flere modeller inkluderer forverring musemodell, systemisk Co-morbidities modell, og KOLS mottakelighet modell7.
Den emphysematous muse modellen kan genereres av flere typer eksogene agenter, inkludert kjemiske stoffer og sigarettrøyk eksponering4. Kjemisk eksponering (f.eks. til elastase) gir en alvorlig type emfysem, mens sigarettrøyk resulterer i mild emfysem8,9. Sigarettrøyk antas å være den viktigste årsaken til patogenesen av KOLS; Derfor er valget av sigarettrøyk som et middel til å opprette en Kols musemodell rimelig10. Mange studier har brukt sigarettrøyk for å skape emfysem i musen. For eksempel, Nikula et al. hell skapt en emphysematous musen modell fra B6C3F1 kvinner mus av utsette seg å sigarett Smoke for 7 eller 13 måneder11. Vi har også etablert en emphysematous musemodell via senescence markør protein/SMP-30 KO mus12. Det er avgjørende å utføre en lunge fiksering metode som kan riktig visualisere denne milde emfysem modell av sigarettrøyk eksponering.
Det er opprettet ulike metoder for lunge fiksering13. Men det er ingen gull standard metode for lunge vev fiksering for å evaluere emfysem14. Flere studier fra denne laben har vist at fikserings systemet som presenteres her, er nyttig ved å skape en stabil tilstand for å evaluere emfysem12,15,16,17,18. Den største fordelen med dagens system er at det kan løse mange lunger med samme tilstand på en gang uten lunge kollaps eller deflasjon. Den nåværende lunge fiksering systemet bruker noe spesielt utstyr som gjør at lunge prøver å bli oppblåst ved et passende konstant trykk for en gitt periode. Dette spesialutstyret består av tre deler, inkludert en lavere container, øvre beholder og pumpe. Lunge prøver er plassert i den nedre beholder som er koblet til trykksatt festemidler, noe som resulterer i en 25 cmH2O trykkforskjell i nivået av agentene mellom de øvre og nedre beholdere19.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% formalin (formalin neutral buffer solution)</td>
			<td>Wako</td>
			<td>060-01667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bent forceps</td>
			<td>Hammacher</td>
			<td>HSC187-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula, size 20G</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR-FS2032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula, size 22G</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR-OT2225C</td>
			<td>Cannula to exsanguinate lung</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Hammacher</td>
			<td>HSC184-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimtowel</td>
			<td>Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark)</td>
			<td>61000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipe</td>
			<td>Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark)</td>
			<td>62011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lower container (acrylic glass material)</td>
			<td>Tokyo Science</td>
			<td>Custom-made</td>
			<td>Pressure equipment component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller pump</td>
			<td>Nissin Scientific Corp</td>
			<td>NRP-75</td>
			<td>Pump machine to exsanguinate lung</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller pump RP-2000</td>
			<td>Eyela (Tokyo Rikakikai Co. Ltd)</td>
			<td>160200</td>
			<td>Pressure equipment pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone tube &#216; 9 mm</td>
			<td>Sansyo</td>
			<td>94-0479</td>
			<td>Pressure equipment component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Somnopentyl (64.8 mg/mL)</td>
			<td>Kyoritsu Seiyaku</td>
			<td>SOM02-YA1312</td>
			<td>Pentobarbital Sodium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissor</td>
			<td>Hammacher</td>
			<td>HSB014-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture thread, size 0</td>
			<td>Nescosuture</td>
			<td>GA01SW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 mL</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS-01T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 ml with needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS-01T2613S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 mL</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS-10ESZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Three-way stopcock</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>TS-TR1K01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upper container (acrylic glass material)</td>
			<td>Tokyo Science</td>
			<td>Custom-made</td>
			<td>Pressure equipment component</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lung fixation under constant pressure for evaluation of emphysema in mice

Emfysem er et viktig trekk ved kronisk obstruktiv lungesykdom (KOLS). Studier som involverer en emphysematous musemodell krever optimal lunge fiksering for å produsere pålitelige histologiske prøver av lungene. På grunn av innholdet i lunge strukturelle sammensetning, som hovedsakelig består av luft og vev, er det en risiko for at det kollapser eller deflates under fikseringsprosessen. Ulike lunge fiksering metoder finnes, som hver har sine egne fordeler og ulemper. Den lunge fiksering metoden som presenteres her utnytter konstant press for å muliggjøre optimal vevs evaluering for studier ved hjelp av en emphysematous mus lunge modell. Den største fordelen er at den kan fikse mange lunger med samme tilstand på en gang. Lunge prøver er innhentet fra kroniske sigarettrøyk-eksponert mus. Lung fiksering utføres ved hjelp av spesialisert utstyr som muliggjør produksjon av konstant trykk. Dette konstante trykket opprettholder lungene i en rimelig oppblåst tilstand. Dermed genererer denne metoden en histologiske prøve av lungene som er egnet til å evaluere sigarettrøyk-indusert mild emfysem.

Som beskrevet tidligere, kan det spesialiserte utstyret, som genererer utvidet konstant trykk, deles inn i tre deler (Figur 3A). Den nedre delen er punktet der du skal sette inn lunge prøven (Figur 4A). Lungene er koblet via en kanyle (20 G) til tuppen av formalin Flow ved hjelp av en tre-veis stopp kuk (Figur 4B). Trykket er generert fra de ulike overflate nivåer av festemidler m...

Watch this Scientific Journal Video about Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice Video at JoVE.com

Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice Video (Video) | JoVE

Presentert her er en nyttig protokoll for lunge fiksering som skaper en stabil tilstand for histologiske evaluere lunge prøver fra en mus modell av emfysem. Den største fordelen med denne modellen er at den kan fikse mange lunger med samme konstante trykk uten lunge kollaps eller deflasjon.

Lung fiksering under konstant trykk for evaluering av emfysem i mus

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung ...

Det konstante trykket i fikseringsenheten opprettholder lungene i en rimelig oppblåst tilstand som genererer en histologisk lungeprøve egnet for evaluering av mild sigarettrøyk indusert emfysem. Den største fordelen med denne modellen er at den kan fikse mange lunger samtidig ved hjelp av samme konstante trykk uten lungekollaps eller deflasjon. Å demonstrere prosedyren vil være Naoko Arano en utdannet student fra laboratoriet mitt.Etter å ha bekreftet mangel på respons på refleksbevegelse, gjør et snitt i huden og muskelvevet langs musens mediale linje, med sikte på cephalic-regionen, og kutt sidealt for å skape et bredere arbeidsområde. Etter å ha avslørt membranlaget punkterer vevet med tang og åpner thoraxrommet. Skjær det sternale området slik at lungene og hjertet kan visualiseres.Og kutt venstre atrium og høyre ventrikkel. Sett inn en 24 gauge kanyle koblet til en perfusjonspumpe i høyre ventrikkelområde og rett kanylen til cephalic-området til den når lungearterien. Deretter slår du på pumpen og perfuse vevet med ca 200 milliliter PBS i en time til hele lungevevet har endret seg til en hvit farge.På slutten av perfusjonen kuttet bindevevet rundt luftrøret, lungene og hjertet, og bruk en sutur for å knytte av de riktige hovedbronkiene. Deretter høster du alle de enkelte fliker i høyre lunge og plasserer hjertet og flikene i venstre lunge i individuelle 10 ml sprøyter som inneholder et passende fikseringsmiddel. Trekk stempelet inn og skape et vakuum i sprøyten for å blåse lungene og fjerne lungen fra sprøyten.Sett en kanyle på 20 gauge inn i luftrøret og bruk en sutur for å feste kanylen på plass. Koble en en milliliter sprøyte fylt med fikseringsmiddel til kanylen og fyll lungen med ekstra fikseringsmiddel for å se etter lekkasjer. Pass på at innsettingsstedet var sikret for å hindre at lungeprøven løsner fra lungekortet under fikseringen.Overfør deretter vevet til lungefikseringstrykkutstyret, fjern prøven og binde av luftrøret med en knute på slutten av fikseringsperioden. Den nedre komponenten av lungefikseringstrykksutstyret som lungeprøven settes inn i, kobles via 20 gauge kanyle til spissen av formalinstrømmen med en treveis stoppekran. Trykk genereres fra de forskjellige overflatenivåene av fikseringen mellom nedre og øvre rom.Trykkforskjellen er 25 centimeter vann, men høydejusteringsknappen kan brukes til å justere trykket til mellom 25 og 30 centimeter vann. En pumpe forbinder de nedre og øvre beholderne, bevarer en 25 centimeter forskjell i den fikseringsfulle overflatehøyden, og styrer flyten av midlet. Etter 48 timers fiksering viser lungene fra SMP30 knockout-mus utsatt for omgivelsesluft ikke en markert luftromsutvidelse.Betydelig luftromsutvidelse og alveolrveggødeleggelse observeres imidlertid i SMP30 knockout-mus utsatt for kronisk sigarettrøyk. I tillegg er den gjennomsnittlige lineære avskjæringen og den destruktive indeksen for lungeprøvene betydelig større i røykutsatte SMP30 knockout-mus enn hos de luftutsatte dyrene. Laboratoriet vårt bruker 10 % formalin, men forskere kan bruke andre fikseringsmidler i henhold til deres eksperimentelle behov.Som vi har rapportert ved hjelp av demonstrert fiksering system lungeprøver kan høstes fra ulike mus emfysem modeller for deres morfometrisk evaluering. Siden festemidler kan være farlige, må du alltid bruke egnet personellbeskyttelsesutstyr og arbeide i et godt ventilert rom.

Research

JoVE Journal

Medicine

Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice Video (Video) | JoVE

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells Video (Video) | JoVE

Forbedret Visualisering av lungemetastaser ved Single Cell Oppløsning i Mus med Kombinert<em&gt; In-situ</em&gt; Perfusjon av lungevev og X-Gal Farging av<em&gt; LacZ</em&gt;-Merket tumorceller

Metastasis is the main cause of death in the majority of cancer types and consequently a main focus in cancer research. However, the detection of ...

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice Video (Video) | JoVE

Automatisert Måling av lungeemfysem og Small Airway Ombygging i sigarettrøyk utsatte Mus

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect Video (Video) | JoVE

Hjertekateterisering i Mus for å måle trykket Volume Forholdet: Gransker Bowditch Effect

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research Video (Video) | JoVE

Drypping og fiksering Nyttig i Mouse Lung Cancer Research

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR Video (Video) | JoVE

Evaluering av Lung metastaser i Mouse Brysttumormodeller av kvantitativ real-time PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...

Ultrasound-based Pulse Wave Velocity Evaluation in Mice

Ultrasound-based Pulse Wave Velocity Evaluation in Mice Video (Video) | JoVE

Ultralyd-basert Pulse Wave Velocity evaluering i Mus

Arterial stiffness can be evaluated by calculating pulse wave velocity (PWV), i.e., the speed with which the pulse wave travels in a conduit vessel. This ...

An Intramedullary Locking Nail for Standardized Fixation of Femur Osteotomies to Analyze Normal and Defective Bone Healing in Mice

An Intramedullary Locking Nail for Standardized Fixation of Femur Osteotomies to Analyze Normal and Defective Bone Healing in Mice Video (Video) | JoVE

En Intramedullære Låse Nail for Standardisert Fiksering av Femur osteotomier å analysere Normal og Defekt Bone Healing i Mus

Bone healing models are essential to the development of new therapeutic strategies for clinical fracture treatment. Furthermore, mouse models are becoming ...

A Minimally Invasive Model to Analyze Endochondral Fracture Healing in Mice Under Standardized Biomechanical Conditions

A Minimally Invasive Model to Analyze Endochondral Fracture Healing in Mice Under Standardized Biomechanical Conditions Video (Video) | JoVE

En minimal invasiv modell for å analysere Endochondral brudd i mus Under standardisert biomekaniske forhold

Bone healing models are necessary to analyze the complex mechanisms of fracture healing to improve clinical fracture treatment. During the last decade, an ...

Adeno-Associated Virus-Mediated Delivery of CRISPR for Cardiac Gene Editing in Mice

Adeno-Associated Virus-Mediated Delivery of CRISPR for Cardiac Gene Editing in Mice Video (Video) | JoVE

Adeno-assosiert Virus-mediert levering av CRISPR for Cardiac genet redigering i mus

The clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system has greatly facilitated genome engineering in both cultured cells and ...