Name: synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles
Uploaded: 2018-09-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles at JoVE.com

أيد منح هذا العمل من البحوث الرئيسية الوطنية وبرنامج التنمية في الصين (2016YFC1000402) والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية (81571445 و 81771617) ومؤسسة العلوم الطبيعية بمقاطعة قوانغدونغ (2016A030313178) إلى X.F. وصندوق البحوث الأساسية شنتشن (JCYJ20170413165233512) إلى X.F.

1-إعداد حلول الأسهم
<ol><li>إعداد محلول مائي من الإيثانول 4% بإذابة 4 مل إيثانول المطلق مع 100 مل الماء عالي النقاوة. مخزن الحل عند 4 درجة مئوية. ملاحظة: يتم تعريف الماء عالي النقاوة كالماء دون الملوثات مثل البكتيريا، والجسيمات، وأيونات، أو نوكليسيس. تم الحصول على الماء عالي النقاوة من نظام لتن?...

<ol>
	<li>Davis, M. E., Shin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+therapeutics:+an+emerging+treatment+modality+for+cancer.">Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771 (2008).</li><li>Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+applications+in+cancer.">Nanotechnology applications in cancer.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).</li><li>Jabir, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+on+the+current+status+of+cancer+nanomedicines.">An overview on the current status of cancer nanomedicines.</a> Current Medical Research and Opinion. 34 (5), 911-921 (2018).</li><li>Pillai, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicines+for+Cancer+Therapy:+An+Update+of+FDA+Approved+and+Those+under+Various+Stages+of+Development.">Nanomedicines for Cancer Therapy: An Update of FDA Approved and Those under Various Stages of Development.</a> SOJ Pharmacy &amp; Pharmaceutical Sciences. 1 (2), 1-13 (2014).</li><li>Marta, T., Luca, S., Serena, M., Luisa, F., Fabio, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+role+of+nanotechnology+in+diagnosis+and+treatment+of+metastatic+breast+cancer?+Promising+Scenarios+for+the+Near+Future.">What is the role of nanotechnology in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer? Promising Scenarios for the Near Future.</a> Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458 (2016).</li><li>Dasari, S., Tchounwou, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisplatin+in+cancer+therapy:+molecular+mechanisms+of+action.">Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action.</a> European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).</li><li>Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+in+cancer+therapy+and+diagnosis.">Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).</li><li>Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+current+nanoparticle+and+targeting+moieties+for+the+delivery+of+cancer+therapeutics.">A review of current nanoparticle and targeting moieties for the delivery of cancer therapeutics.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 48 (3), 416-427 (2013).</li><li>Salanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+human+cancer+by+a+glycosaminoglycan+binding+malaria+protein.">Targeting human cancer by a glycosaminoglycan binding malaria protein.</a> Cancer Cell. 28 (4), 500-514 (2015).</li><li>Seiler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Oncofetal+Glycosaminoglycan+Modification+Provides+Therapeutic+Access+to+Cisplatin-resistant+Bladder+Cancer.">An Oncofetal Glycosaminoglycan Modification Provides Therapeutic Access to Cisplatin-resistant Bladder Cancer.</a> European Urology. 72 (1), 142-150 (2017).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+delivery+of+doxorubicin+by+CSA-binding+nanoparticles+for+choriocarcinoma+treatment.">Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment.</a> Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placenta-specific+drug+delivery+by+trophoblast-targeted+nanoparticles+in+mice.">Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice.</a> Theranostics. 26 (2), 130-137 (2018).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembled+lipid--polymer+hybrid+nanoparticles:+a+robust+drug+delivery+platform.">Self-assembled lipid--polymer hybrid nanoparticles: a robust drug delivery platform.</a> ACS Nano. 2 (8), 1696-1702 (2008).</li><li>Zheng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+assembly+of+DOX/ICG+loaded+lipid-polymer+nanoparticles+for+highly+effective+chemo-photothermal+combination+therapy.">Single-step assembly of DOX/ICG loaded lipid-polymer nanoparticles for highly effective chemo-photothermal combination therapy.</a> ACS. 7 (3), 2056-2067 (2013).</li><li>Fang, R. H., Aryal, S., Hu, C. -. M. J., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quick+synthesis+of+lipid&#8722;+polymer+hybrid+nanoparticles+with+low+polydispersity+using+a+single-step+sonication+method.">Quick synthesis of lipid&#8722; polymer hybrid nanoparticles with low polydispersity using a single-step sonication method.</a> Langmuir. 26 (22), 16958-16962 (2010).</li><li>Gu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folate-modified,+indocyanine+green-loaded+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+targeted+delivery+of+cisplatin.">Folate-modified, indocyanine green-loaded lipid-polymer hybrid nanoparticles for targeted delivery of cisplatin.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 28 (7), 690-702 (2017).</li><li>Mandal, B., Mittal, N. K., Balabathula, P., Thoma, L. A., Wood, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+in+vitro+evaluation+of+core-shell+type+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+the+delivery+of+erlotinib+in+non-small+cell+lung+cancer.">Development and in vitro evaluation of core-shell type lipid-polymer hybrid nanoparticles for the delivery of erlotinib in non-small cell lung cancer.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 81, 162-171 (2016).</li><li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+legumain-recognition+and+NIR+controlled+released+of+cisplatin-indocyanine+nanosphere+against+gastric+carcinoma.">Enhanced legumain-recognition and NIR controlled released of cisplatin-indocyanine nanosphere against gastric carcinoma.</a> European Journal of Pharmacology. 794, 184-192 (2017).</li><li>Grabarek, Z., Gergely, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zero-length+crosslinking+procedure+with+the+use+of+active+esters.">Zero-length crosslinking procedure with the use of active esters.</a> Analytical Biochemistry. 185 (1), 131-135 (1990).</li><li>Hadjipanayis, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFRvIII+Antibody-Conjugated+Iron+Oxide+Nanoparticles+for+Magnetic+Resonance+Imaging-Guided+Convection-Enhanced+Delivery+and+Targeted+Therapy+of+Glioblastoma.">EGFRvIII Antibody-Conjugated Iron Oxide Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging-Guided Convection-Enhanced Delivery and Targeted Therapy of Glioblastoma.</a> Cancer Research. 70 (15), 6303-6312 (2010).</li><li>Sadhukha, T., Wiedmann, T. S., Panyam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalable+magnetic+nanoparticles+for+targeted+hyperthermia+in+lung+cancer+therapy.">Inhalable magnetic nanoparticles for targeted hyperthermia in lung cancer therapy.</a> Biomaterials. 34 (21), 5163-5171 (2013).</li><li>Jennings, M., Nicknish, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+a+site+of+intermolecular+cross-linking+in+human+red+blood+cell+band+3+protein.">Localization of a site of intermolecular cross-linking in human red blood cell band 3 protein.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (9), 5472-5479 (1985).</li><li>Staros, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-hydroxysulfosuccinimide+active+esters:+bis(N-hydroxysulfosuccinimide)+esters+of+two+dicarboxylic+acids+are+hydrophilic,+membrane-impermeant,+protein+cross-linkers.">N-hydroxysulfosuccinimide active esters: bis(N-hydroxysulfosuccinimide) esters of two dicarboxylic acids are hydrophilic, membrane-impermeant, protein cross-linkers.</a> Biochemistry. 21 (17), 3950-3955 (1982).</li><li>Valencia, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+assembly+of+homogenous+lipid&#8722;+polymeric+and+lipid&#8722;+quantum+dot+nanoparticles+enabled+by+microfluidic+rapid+mixing.">Single-step assembly of homogenous lipid&#8722; polymeric and lipid&#8722; quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing.</a> ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).</li><li>Altintas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanobody-albumin+nanoparticles+(NANAPs)+for+the+delivery+of+a+multikinase+inhibitor+17864+to+EGFR+overexpressing+tumor+cells.">Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells.</a> Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).</li><li>Maya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cetuximab+conjugated+O-carboxymethyl+chitosan+nanoparticles+for+targeting+EGFR+overexpressing+cancer+cells.">Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells.</a> Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).</li><li>Deepagan, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+targeted+imaging+and+delivery+of+camptothecin+using+cetuximab-conjugated+multifunctional+PLGA-ZnS+nanoparticles.">In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles.</a> Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).</li><li>Totaro, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+investigation+of+EDC/sNHS-mediated+bioconjugation+reactions+for+carboxylated+peptide+substrates.">Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates.</a> Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).</li><li>Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+cross-linking+and+mass+spectrometry+to+map+three-dimensional+protein+structures+and+protein-protein+interactions.">Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions.</a> Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LDLR-mediated+peptide-22-conjugated+nanoparticles+for+dual-targeting+therapy+of+brain+glioma.">LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma.</a> Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).</li><li>Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-penetrating+TAT+peptide+in+drug+delivery+systems:+proteolytic+stability+requirements.">Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements.</a> Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).</li><li>Chu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+ocular+delivery+to+laser-induced+choroidal+neovascularization+by+dual+internalizing+RGD+and+TAT+peptide-modified+nanoparticles.">Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles.</a> International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).</li></ol>

هذا البروتوكول يوفر طريقة فعالة واستنساخه لتوليف بوليمر دهن بلكسا-بي بي-مترافق جسيمات نانوية. الأسلوب سونيكيشن خطوة واحدة لإعداد جسيمات نانوية دهن البوليمر سريعة واستنساخه وتختلف أساليب نانوبريسيبيتيشن النموذجية التي تشمل التدفئة أو فورتيكسينج أو التبخر. ومن ثم، الأسلوب المتقدمة يقلل ...

طريقة علاجية فعالة سرطان يقلل ويزيل الأورام مع الحد الأدنى من السمية الشاملة. ومن ثم استهداف الورم الانتقائي هو المفتاح لاستكشاف أساليب علاجية ناجحة. جسيمات نانوية فرصة واعدة لعلاج السرطان، وسيعزز فعالية المخدرات التجميعات الجزيئية مع مختلف المجموعات الوظيفية والتقليل من الآثار الجانبية المرتبطة به1،2. وعلاوة على ذلك، تستخدم نظم نانوحبيبات أساسا الاستهداف السلبي والإيجابي للتوصل إلى الهدف الأورام3.
استهداف السلبي يستغل الخصائص الفطرية جسيمات نانوية وزيادة نفاذية والاستبقاء (EPR) تأثيرات للوصول إلى الخلايا السرطانية. الدهنية الموجبة قد استخدمت بنجاح لتسليم المخدرات السرطان المختلفة للأورام في التطبيقات السريرية4،،من56. على الرغم من التأثير العلاجي الفعال السرطان المحتملة، بتركيز منخفض من المخدرات في منطقة الورم وعدم قدرة على التمييز بين الخلايا السرطانية من أنسجة طبيعية هي القيود الرئيسية اثنين من جسيمات نانوية الاستهداف السلبي7.
استراتيجيات الاستهداف النشط الاستفادة ضد مستضد ومستقبلات يجند والتفاعلات الأخرى التعرف الجزيئي لتسليم المخدرات على وجه التحديد إلى أورام8. وأعرب عن كبريتات شوندروتن المشيمية glycosaminoglycan (بلكسا) هو على نطاق واسع في معظم الخلايا السرطانية والمشيمة تروفوبلاستس. وعلاوة على ذلك، البروتين الملاريا VAR2CSA تحديداً ربط بلكسا9،10. ومن ثم فإن VAR2CSA يمكن أن يكون أداة لاستهداف الخلايا السرطانية البشرية. ومع ذلك، عندما يتم مترافق VAR2CSA للجسيمات النانوية، قد تحد من البروتين كامل طول الاختراق من جسيمات نانوية في الخلايا السرطانية. في الآونة الأخيرة، فقد اكتشفنا ببتيد ملزمة بلكسا (بلكسا-BP)، المستمدة من البروتين الملاريا VAR2CSA. جسيمات نانوية بوليمر دهن بلكسا-بي بي-مترافق الرهينة بسرعة إلى خلايا تشوريوكارسينوما وميتوتريكسات زيادة كبيرة (دوكس) نشاط السرطان في فيفو11؛ هذه الجزيئات أيضا على وجه التحديد المستعبدين إلى trophoblasts المشيمة ويمكن أن تستخدم كأداة لإيصال الأدوية المستهدفة ل المشيمة12.
جسيمات نانوية بوليمر الدهن تتكون من قذيفة أحادي الطبقة الدهنية ونواة البوليمرية مسعور وتمثل شركة جديدة لإيصال الأدوية. جسيمات نانوية هذه الجمع بين مزايا الدهنية ونانوكاريرس البوليمرية، مثل حجم نانوحبيبات يمكن السيطرة عليها وعالية توافق مع الحياة، والإفراج عن المخدرات مستمرة، وتحميل المخدرات عالية الكفاءة (LE) والاستقرار الممتاز13. في هذا العمل، استخدمنا أسلوب sonication خطوة واحدة لتجميع جسيمات نانوية بوليمر الدهن. هو سريعة وملائمة ومناسبة للارتقاء بهذا الأسلوب وقد استخدمت على نطاق واسع لإعداد جسيمات نانوية دهن البوليمر لدينا مجموعة11،14 وغيرها15،،من1617،18 .
هيدروكلوريد كاربودييميدي 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) (EDC) كاربودييميدي شعبية المستخدمة كعامل كروسلينكينج للتصريف الجزيئات الحيوية التي تحتوي على كاربوكسيلاتيس والامينات19. بالإضافة إلى تنمية الصادرات، N-هيدروكسيسولفوسوكسينيميدي (NHS) هو الأكثر شيوعاً الكاشف التصريف في المياه السطحية ونانوحبيبات الاقتران ردود فعل20،21. يمكن تقليل عدد ردود فعل الجانب الصحي ويعزز الاستقرار والغلة إستر وسيطة22،23.
هنا، نحن وصف بروتوكول لتوليف جسيمات نانوية بوليمر دهن بلكسا المستهدفة. أولاً، يتم وصف التوليف sonication خطوة واحدة لتحميل دوكس الدهن-بوليمر جسيمات نانوية (DNPs). ثم، يتم عرض أسلوب بيوكونجوجاتي تنمية الصادرات/دائرة الصحة الوطنية لتوليد جسيمات نانوية بوليمر دهن بلكسا-بي بي-مترافق. أيضا يمكن هذا الأسلوب بيوكونجوجاتي متزاوجة الببتيدات إلى جسيمات نانوية والأجسام المضادة الأخرى. وأخيراً، يصف لنا المقايسة خصائص و في المختبر الفيزيائية المستخدمة لتوصيف جسيمات نانوية بوليمر دهن بلكسا المستهدفة. ونحن نعتقد أن هذه الجسيمات النانوية بوليمر دهن بلكسا المستهدفة يمكن أن تشكل نظاما فعالاً للتنفيذ الهادف من المخدرات إلى أمراض السرطان معظم البشرية وتسليم الحمولات المستهدفة للمشيمة لعلاج الاضطرابات المشيمية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>plCSA peptide</td>
			<td>Shanghai GL Biochem</td>
			<td>573518</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical</td>
			<td>10009218</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean lecithin</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>441601</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSPE-PEG-COOH</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>880125</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>JKChemical</td>
			<td>113424</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1008621</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLGA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>719897</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic processor</td>
			<td>Sonics</td>
			<td>VCX130</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge filter (MWCO 10 kDa)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC801024</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>3-18KS</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-[morpholino]ethanesulfonic acid(MES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3671</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3450</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-hydroxysuccinimide (NHS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56480</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis bags</td>
			<td>Spectrum</td>
			<td>132592T</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30028.01</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>S-025</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>for various applications</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m sterile syringe filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033RB</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml syringe, polypropylene</td>
			<td>BD</td>
			<td>328421</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern Zetasizer</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>Nano ZS</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM grid</td>
			<td>EMCN</td>
			<td>BZ10024a</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-VIS spectrometer</td>
			<td>Leagene</td>
			<td>DZ0035</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transmission 
			electron microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>JEM-100CXII</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent A</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23228</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent B</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23224</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Multiskan&#8482; GO</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3513</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEG3 cell</td>
			<td>Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu195</td>
			<td>Human placenta</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30272.01</td>
			<td>phenol red-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>10100</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15070063</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>CKK53</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1372021</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A606584</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Life</td>
			<td>P36961</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles

طريقة علاجية فعالة سرطان يقلل ويزيل الأورام مع الحد الأدنى من السمية الشاملة. جسيمات نانوية نشطة تستهدف تقدم نهجاً واعداً لعلاج السرطان. يتم التعبير عن كبريتات شوندروتن المشيمية glycosaminoglycan (بلكسا) على مجموعة واسعة من الخلايا السرطانية و trophoblasts المشيمة، والبروتين الملاريا على وجه التحديد يمكن ربط VAR2CSA بلكسا. يمكنك ربط كبريتات شوندروتن المشيمية عنها بربط ببتيد (بلكسا-BP)، المستمدة من البروتين الملاريا VAR2CSA، أيضا على وجه التحديد بلكسا على الخلايا السرطانية والمشيمة تروفوبلاستس. ومن ثم، يمكن استخدام جسيمات نانوية بلكسا-بي بي-مترافق كأداة لإيصال الأدوية المستهدفة للسرطانات البشرية والمشيمة تروفوبلاستس. في هذا البروتوكول، يصف لنا طريقة لتجميع جسيمات نانوية بوليمر دهن بلكسا-بي بي-مترافق محملة ميتوتريكسات (بلكسا-دنبس)؛ وتتألف الطريقة تقنيات خطوة وبيوكونجوجاتي sonication واحد. وبالإضافة إلى ذلك، يرد وصف أساليب عدة لوصف بلكسا-دنبس، بما في ذلك تحديد الخصائص الفيزيائية الكيميائية والخلوية امتصاص الخلايا المشيمية تشوريوكارسينوما (JEG3)،.

في هذا البروتوكول، تعتبر بلجا، دسبي-شماعة-COOH، وفول الصويا الليسيثين البوليمر الممثل، المتقارن الدهن-شماعة-COOH والدهن، على التوالي. ويتضح تركيب جسيمات نانوية بوليمر دهن بلكسا المستهدفة عن طريق خطوة واحدة أسلوب sonication وأسلوب تنمية الصادرات/دائرة الصحة الوطنية في <strong ...

Watch this Scientific Journal Video about Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles at JoVE.com

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

نقدم هنا، بروتوكولا لتوليف كبريتات شوندروتن المشيمة بربط الببتيد (بلكسا-BP)-مترافق دهن البوليمر جسيمات نانوية عبر خطوة واحدة سونيكاتيون وبيوكونجوجاتي تقنيات. وتشكل هذه الجسيمات أداة جديدة للتنفيذ الهادف للتداوي للأورام البشرية الأكثر والمشيمة تروفوبلاستس لعلاج السرطان والاضطرابات المشيمية.

التوليف وتوصيف للمشيمة شوندروتن سلفات (بلكسا)-استهداف المحتوى الدهني-بوليمر جسيمات نانوية

An effective cancer therapeutic method reduces and eliminates tumors with minimal systemic toxicity. Actively targeting nanoparticles offer a promising ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال تسليم الدواء، مثل التسليم المستهدف للعلاجات لسرطانات الإنسان ومشيمة المثانة. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها طريقة بسيطة وقابلة للاستنساخ لتجميع الببتيدات المترافقة في جسيمات أخرى. للبدء، إضافة ثلاثة ملليمترات من أربعة في المئة الإيثانول إلى أنبوب جهاز طرد مركزي معقمة 10 ملليلتر.ثم، إضافة 90 ميكروغرام من فول الصويا الليسيثين حل الأسهم، 210 ميكروغرام من حمض حمض DSPE-PEG-حل، و 750 ميكروغرام من محلول المخزون DOX. استخدام حقنة ملليلتر واحد إلى ماصة اثنين ملليغرام من محلول الأسهم PLGA. ضع أنبوب الطرد المركزي في حمام ثلج على معالج بالموجات فوق الصوتية و sonicate لمدة دقيقتين.ثم، إضافة PLGA الأسهم حل إسقاط الحكمة في أنبوب الطرد المركزي. لتنقية DNPs، استخدم فلتر الطرد المركزي لغسل الحل في 0.1 مُضجر مُخزنة. ثم، الطرد المركزي الحل في 1000 G لمدة ثلاث دقائق في أربع درجات مئوية.لبدء تنشيط استر، إضافة 0.4 ملليغرام من EDC إلى ملليلتر واحد من DNPs. ثم، إضافة 0.24 ملليغرام من NHS إلى رد الفعل. ثم، السماح للتفاعل أن يحدث لمدة تصل إلى ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.بعد ذلك ، اخلط مكونات التفاعل تمامًا ووضع رد الفعل على شاكر. لبدء تفاعل أمين، استخدم برنامج تلفزيوني لزيادة درجة اله المخزن المؤقت من 7.2 إلى 7.5. ثم، إضافة 0.5 ملليغرام من pICSA استهداف الببتيد إلى حل رد الفعل.اخلط الحل جيداً وضعه على شاكر. ثم، السماح لرد فعل للمضي قدما في أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها في الظلام. في اليوم التالي، تعبئة أكياس غسيل الكلى مع حل مترافق.تنقية DNPs pICSA مع حاجز برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة في الظلام. بعد زراعة الخلايا وفقا لبروتوكول النص، وإزالة وسائل الإعلام وإضافة ملليلتر واحد من الطازجة، وسائل الإعلام الباردة مع خمسة في المئة FBS وPICSA DNPs أو DNPs. ثم، احتضان الخلية وخليط الجسيمات النانوية لمدة ساعة واحدة في أربع درجات مئوية.بعد ذلك، قم بإزالة الوسائط واغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني. ثم، إضافة ملليلتر واحد من وسائل الإعلام الطازجة واحتضان الخلايا لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية. بعد ذلك، قم بإزالة الوسائط واغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني.ثم، إضافة ملليلترين من البرد، أربعة في المئة PFA واحتضان الخليط في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. إزالة PFA وغسل الخلايا مع مليلتر اثنين من برنامج تلفزيوني. ثم، إضافة ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني مع DAPI لتلوين النوى.السماح للخليط لاحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. وأخيرا، إضافة المتوسطة المتصاعدة والصورة الفلوريسنس مع المجهر الفلوريسين. باستخدام هذا البروتوكول، تم إعداد DNPs بنجاح ومترافقة مع pICSA BP. وبعد اقترانها، زاد قطر الـ DNPs الأولية إلى حوالي 109 نانومتر.وأظهرت صور TEM للDNPs وDNPs pICSA أن الجسيمات كانت مشتتة بشكل جيد وظهرت عموما مورفولوجيا كروية. وكانت إمكانات زيتا للجسيمات النانوية سالبة 20.1 و29.9 ميليفولت، مما يشير إلى أن الجسيمات النانوية مستقرة للغاية. وأشار فحص امتصاص الخلية JEG3 DNPs pICSA ملزمة إلى خلايا JEG3 في غضون 30 دقيقة.لذلك، تمت الاقتران PICSA BP بكفاءة إلى السطح. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر أن sonicate الخليط لمدة دقيقة إلى دقيقتين قبل إضافة PLGA. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ أساليبنا مثل فحص HPLC من أجل تحديد كفاءة الاقتران بشكل أكثر دقة.بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال البيولوجيا الإنجابية لاستكشاف إمكانية علاج استهداف المشيمة في مضاعفات الحمل.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A (plCSA)-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NF&#954;B Activity and Breast Cancer Stem Cells

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NFÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚ÂºB Activity and Breast Cancer Stem Cells

توليف وتوصيف للدواء مساعد الأسبرين-فومرت أن يمنع آخر عامل نووي معزز لسلسلة ضوء كابا في الخلايا البائية النشطة والثدي خلايا السرطان الجذعية

Inflammation is a cancer hallmark that underlies cancer incidence and promotion, and eventually progression to metastasis. Therefore, adding an ...

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

المضادة للسرطان فعالية من العلاج الضوئي مع النانوية المستهدفة السرطان والرئة

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

الخلية الهدف الجينوم قبل التخصيب وكله التضخيم لتوصيف المصب خلية مفردة

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics

وصف ملحقات غشاء الخلية ودراسة أدوارهم في ديناميات التصاق خلايا السرطان

The cell membrane&#39;s extension repertoire modulates various malignant behaviors of cancer cells, including their adhesive and migratory potentials. The ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

تحديد خصائص الخلايا السرطانية باستخدام سلك طبي لالتقاط تعميم الخلايا السرطانية: نهجاً ثلاثي الأبعاد استناداً إلى الفلورة والأسماك الحمض النووي

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

عزل وتوصيف الخلايا التي تبدأ الورم من الساركوما المستمدة من المرضى Xenografts

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

تخصيب اليورانيوم وتوصيف ميكرونفيرونمينتس المناعي والمناعة غير ورم في المنشأة الأورام مورين تحت الجلد

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

إنشاء وتوصيف الأمعاء العصبية الصغيرة ورم الغدد الصماء خزان

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models

العزلة وتوصيف المرضي المستمدة من البنكرياس اقنيه الغدد السرطانية الأورام العضوية

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is amongst the most lethal malignancies. Recently, next-generation organoid culture methods enabling the ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

توليد أورام البنكرياس التقويمية وتوصيف الجسم السابق للخلايا التي تتسلل إلى الخلايا T

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...