Name: synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles
Uploaded: 2018-09-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי המחקר מפתח הלאומי, תוכנית פיתוח של סין (2016YFC1000402), הקרן מדעי הטבע הלאומית (81571445 ו- 81771617), את מדעי הטבע קרן של בפרובינצית גואנג-דונג (2016A030313178) כדי X.f. ב, קרן מחקר בסיסי שנג'ן (JCYJ20170413165233512) כדי x.f. ב

1. הכנת מלאי פתרונות
<ol><li>הכן תמיסה מימית של 4% אתנול על ידי דילול 4 מ"ל אתנול מוחלטת עם 100 מ של מים הנדסה גנטית. לאחסן את הפתרון ב 4 º C. הערה: הנדסה גנטית מים מוגדר מים ללא מזהמים כגון חיידקים, חלקיקים, יונים או nucleases. הנדסה גנטית מים היה המתקבלים מערכת טיהור מים עם resistivity היעד של 18.2 עד mΩ·cm, כלומר...

<ol>
	<li>Davis, M. E., Shin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+therapeutics:+an+emerging+treatment+modality+for+cancer.">Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771 (2008).</li><li>Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+applications+in+cancer.">Nanotechnology applications in cancer.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).</li><li>Jabir, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+on+the+current+status+of+cancer+nanomedicines.">An overview on the current status of cancer nanomedicines.</a> Current Medical Research and Opinion. 34 (5), 911-921 (2018).</li><li>Pillai, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicines+for+Cancer+Therapy:+An+Update+of+FDA+Approved+and+Those+under+Various+Stages+of+Development.">Nanomedicines for Cancer Therapy: An Update of FDA Approved and Those under Various Stages of Development.</a> SOJ Pharmacy &amp; Pharmaceutical Sciences. 1 (2), 1-13 (2014).</li><li>Marta, T., Luca, S., Serena, M., Luisa, F., Fabio, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+role+of+nanotechnology+in+diagnosis+and+treatment+of+metastatic+breast+cancer?+Promising+Scenarios+for+the+Near+Future.">What is the role of nanotechnology in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer? Promising Scenarios for the Near Future.</a> Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458 (2016).</li><li>Dasari, S., Tchounwou, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisplatin+in+cancer+therapy:+molecular+mechanisms+of+action.">Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action.</a> European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).</li><li>Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+in+cancer+therapy+and+diagnosis.">Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).</li><li>Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+current+nanoparticle+and+targeting+moieties+for+the+delivery+of+cancer+therapeutics.">A review of current nanoparticle and targeting moieties for the delivery of cancer therapeutics.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 48 (3), 416-427 (2013).</li><li>Salanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+human+cancer+by+a+glycosaminoglycan+binding+malaria+protein.">Targeting human cancer by a glycosaminoglycan binding malaria protein.</a> Cancer Cell. 28 (4), 500-514 (2015).</li><li>Seiler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Oncofetal+Glycosaminoglycan+Modification+Provides+Therapeutic+Access+to+Cisplatin-resistant+Bladder+Cancer.">An Oncofetal Glycosaminoglycan Modification Provides Therapeutic Access to Cisplatin-resistant Bladder Cancer.</a> European Urology. 72 (1), 142-150 (2017).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+delivery+of+doxorubicin+by+CSA-binding+nanoparticles+for+choriocarcinoma+treatment.">Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment.</a> Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placenta-specific+drug+delivery+by+trophoblast-targeted+nanoparticles+in+mice.">Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice.</a> Theranostics. 26 (2), 130-137 (2018).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembled+lipid--polymer+hybrid+nanoparticles:+a+robust+drug+delivery+platform.">Self-assembled lipid--polymer hybrid nanoparticles: a robust drug delivery platform.</a> ACS Nano. 2 (8), 1696-1702 (2008).</li><li>Zheng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+assembly+of+DOX/ICG+loaded+lipid-polymer+nanoparticles+for+highly+effective+chemo-photothermal+combination+therapy.">Single-step assembly of DOX/ICG loaded lipid-polymer nanoparticles for highly effective chemo-photothermal combination therapy.</a> ACS. 7 (3), 2056-2067 (2013).</li><li>Fang, R. H., Aryal, S., Hu, C. -. M. J., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quick+synthesis+of+lipid&#8722;+polymer+hybrid+nanoparticles+with+low+polydispersity+using+a+single-step+sonication+method.">Quick synthesis of lipid&#8722; polymer hybrid nanoparticles with low polydispersity using a single-step sonication method.</a> Langmuir. 26 (22), 16958-16962 (2010).</li><li>Gu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folate-modified,+indocyanine+green-loaded+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+targeted+delivery+of+cisplatin.">Folate-modified, indocyanine green-loaded lipid-polymer hybrid nanoparticles for targeted delivery of cisplatin.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 28 (7), 690-702 (2017).</li><li>Mandal, B., Mittal, N. K., Balabathula, P., Thoma, L. A., Wood, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+in+vitro+evaluation+of+core-shell+type+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+the+delivery+of+erlotinib+in+non-small+cell+lung+cancer.">Development and in vitro evaluation of core-shell type lipid-polymer hybrid nanoparticles for the delivery of erlotinib in non-small cell lung cancer.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 81, 162-171 (2016).</li><li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+legumain-recognition+and+NIR+controlled+released+of+cisplatin-indocyanine+nanosphere+against+gastric+carcinoma.">Enhanced legumain-recognition and NIR controlled released of cisplatin-indocyanine nanosphere against gastric carcinoma.</a> European Journal of Pharmacology. 794, 184-192 (2017).</li><li>Grabarek, Z., Gergely, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zero-length+crosslinking+procedure+with+the+use+of+active+esters.">Zero-length crosslinking procedure with the use of active esters.</a> Analytical Biochemistry. 185 (1), 131-135 (1990).</li><li>Hadjipanayis, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFRvIII+Antibody-Conjugated+Iron+Oxide+Nanoparticles+for+Magnetic+Resonance+Imaging-Guided+Convection-Enhanced+Delivery+and+Targeted+Therapy+of+Glioblastoma.">EGFRvIII Antibody-Conjugated Iron Oxide Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging-Guided Convection-Enhanced Delivery and Targeted Therapy of Glioblastoma.</a> Cancer Research. 70 (15), 6303-6312 (2010).</li><li>Sadhukha, T., Wiedmann, T. S., Panyam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalable+magnetic+nanoparticles+for+targeted+hyperthermia+in+lung+cancer+therapy.">Inhalable magnetic nanoparticles for targeted hyperthermia in lung cancer therapy.</a> Biomaterials. 34 (21), 5163-5171 (2013).</li><li>Jennings, M., Nicknish, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+a+site+of+intermolecular+cross-linking+in+human+red+blood+cell+band+3+protein.">Localization of a site of intermolecular cross-linking in human red blood cell band 3 protein.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (9), 5472-5479 (1985).</li><li>Staros, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-hydroxysulfosuccinimide+active+esters:+bis(N-hydroxysulfosuccinimide)+esters+of+two+dicarboxylic+acids+are+hydrophilic,+membrane-impermeant,+protein+cross-linkers.">N-hydroxysulfosuccinimide active esters: bis(N-hydroxysulfosuccinimide) esters of two dicarboxylic acids are hydrophilic, membrane-impermeant, protein cross-linkers.</a> Biochemistry. 21 (17), 3950-3955 (1982).</li><li>Valencia, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+assembly+of+homogenous+lipid&#8722;+polymeric+and+lipid&#8722;+quantum+dot+nanoparticles+enabled+by+microfluidic+rapid+mixing.">Single-step assembly of homogenous lipid&#8722; polymeric and lipid&#8722; quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing.</a> ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).</li><li>Altintas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanobody-albumin+nanoparticles+(NANAPs)+for+the+delivery+of+a+multikinase+inhibitor+17864+to+EGFR+overexpressing+tumor+cells.">Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells.</a> Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).</li><li>Maya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cetuximab+conjugated+O-carboxymethyl+chitosan+nanoparticles+for+targeting+EGFR+overexpressing+cancer+cells.">Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells.</a> Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).</li><li>Deepagan, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+targeted+imaging+and+delivery+of+camptothecin+using+cetuximab-conjugated+multifunctional+PLGA-ZnS+nanoparticles.">In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles.</a> Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).</li><li>Totaro, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+investigation+of+EDC/sNHS-mediated+bioconjugation+reactions+for+carboxylated+peptide+substrates.">Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates.</a> Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).</li><li>Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+cross-linking+and+mass+spectrometry+to+map+three-dimensional+protein+structures+and+protein-protein+interactions.">Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions.</a> Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LDLR-mediated+peptide-22-conjugated+nanoparticles+for+dual-targeting+therapy+of+brain+glioma.">LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma.</a> Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).</li><li>Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-penetrating+TAT+peptide+in+drug+delivery+systems:+proteolytic+stability+requirements.">Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements.</a> Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).</li><li>Chu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+ocular+delivery+to+laser-induced+choroidal+neovascularization+by+dual+internalizing+RGD+and+TAT+peptide-modified+nanoparticles.">Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles.</a> International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).</li></ol>

פרוטוקול זה מספק שיטה לשחזור ויעיל עבור סינתזה plCSA-BP-מצומדת השומנים-פולימר חלקיקים. בשיטת צעד אחר צעד sonication להכין את השומנים-פולימר חלקיקים הוא מהיר, הדירים שונה בשיטות nanoprecipitation טיפוסי כולל חימום, vortexing או אידוי. לפיכך, השיטה שפותחה מפחית באופן משמעותי את הזמן סינתזה. בנוסף, bioconjugate EDC/NHS בשי?...

שיטה טיפולית יעילה לסרטן מפחית ומסלקת גידולים עם רעילות מינימלית מערכתית. ומכאן, גידול סלקטיבי המיקוד הוא המפתח לחקור שיטות טיפוליות מוצלחות. חלקיקים מציעים הזדמנות מבטיחה לטיפול בסרטן, הרכבות מולקולרית עם קבוצות פונקציונליות שונות לשפר את יעילות התרופה ולצמצם את תופעות לוואי המשויך1,2. יתר על כן, ננו-חלקיק מערכות לנצל בעיקר פסיביים ואקטיביים מיקוד כדי להגיע למטרה גידולים3.
פילוח פסיבי מנצלת את מאפייני מולדת של חלקיקים, חדירות משופרת ואפקטים השמירה (EPR) כדי להגיע תאים סרטניים. ליפוזומים cationic שימשו בהצלחה להעביר תרופות נגד סרטן שונים גידולים יישומים קליניים-4,-5,-6. למרות ההשפעה הפוטנציאלי טיפולית יעילה לסרטן, ריכוז נמוך סמים באזור הגידול ואת חוסר היכולת להבחין בין תאים סרטניים מרקמות נורמלי הן שתי מגבלות הגדולות של חלקיקים פסיבית פילוח7.
אסטרטגיות מיקוד פעיל את היתרון של אנטיגן-נוגדן, קולטן ליגנד אחרים ואינטראקציות הכרה מולקולרית במיוחד לספק סמים גידולים8. גליקוזאמינוגליקן היפרדות כונדרויטין סולפט (plCSA), מתבטאת בהרחבה על רוב התאים הסרטניים, היפרדות trophoblasts. יתר על כן, החלבון מלריה VAR2CSA יכול במיוחד לאגד9,plCSA10. לפיכך, VAR2CSA יכול להיות כלי מיקוד תאים סרטניים אנושיים. עם זאת, כאשר VAR2CSA היא מצומדת כדי חלקיקים, החלבון באורך מלא עלולה להגביל את חדירת חלקיקים לתוך תאים סרטניים. לאחרונה גילינו פפטיד איגוד plCSA (plCSA-BP), נגזר החלבון מלריה VAR2CSA. plCSA-BP-מצומדת השומנים-פולימר חלקיקים במהירות בונדד choriocarcinoma תאים, דוקסורוביצין ולעלייה משמעותית (DOX) פעילות נגד סרטן ויוו11; חלקיקים אלה גם באופן ספציפי בונדד כדי היפרדות trophoblasts, יכול לשמש כלי למסירה יישוב של סמים כדי שליה12.
השומנים-פולימר חלקיקים מורכבים של פגז טפט השומנים, גרעין הידרופובי פולימריים ולייצג נשא חדש עבור משלוח סמים. חלקיקים אלה לשלב את היתרונות של ליפוזומים, nanocarriers פולימריים, כגון גודל nanoparticle לשליטה, הביו גבוהה, שחרור התרופה מתמשכת, סמים גבוהה הטעינה יעילות (LE) יציבות מעולה13. בעבודה זו, השתמשנו בשיטה צעד אחר צעד sonication לסנתז השומנים-פולימר חלקיקים. שיטה זו מהירה, נוח ומתאים הסולם, כבר בשימוש נרחב כדי להכין השומנים-פולימר חלקיקים שלנו11,קבוצה14 ואחרים15,16,17,18 .
1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide הידרוכלוריד (EDC) הוא carbodiimide הפופולרי משמש כסוכן crosslinking conjugating מולקולות המכילות אמינים, carboxylates19. בנוסף EDC, N-hydroxysulfosuccinimide (NHS) היא הכימית ההטיה הנפוצה ביותר השטח, ננו-חלקיק ההטיה תגובות20,21. NHS באפשרותך להפחית את מספר ריאקציות צדדיות ולשפר את היציבות ואת התשואה של אסתר intermediates22,23.
כאן, אנו מתארים את פרוטוקול עבור סינתזה השומנים-פולימר, ממוקדות plCSA חלקיקים. ראשית, מתואר הסינתזה sonication צעד אחר צעד של חלקיקים טעונים DOX שומנים בדם-פולימר (DNPs). לאחר מכן, הוא הציג טכניקה bioconjugate EDC/NHS ליצירת חלקיקים plCSA-BP-מצומדת השומנים-פולימר. טכניקה זו bioconjugate יכול לשמש גם כדי נזווג נוגדנים אחרים, פפטידים כדי חלקיקים. לבסוף, אנו מתארים וזמינותו המאפיינים ואת במבחנה physicochemical המשמש לאפיון חלקיקים, ממוקדות plCSA השומנים-פולימר. אנו מאמינים כי חלקיקים אלה השומנים-פולימר, ממוקדות plCSA עשויה להוות מערכת יעילה עבור המשלוח יישוב של תרופות סרטן אנושיים ביותר ואת משלוח יישוב דים לטיפול בהפרעות היפרדות השליה.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>plCSA peptide</td>
			<td>Shanghai GL Biochem</td>
			<td>573518</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical</td>
			<td>10009218</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean lecithin</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>441601</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSPE-PEG-COOH</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>880125</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>JKChemical</td>
			<td>113424</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1008621</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLGA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>719897</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic processor</td>
			<td>Sonics</td>
			<td>VCX130</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge filter (MWCO 10 kDa)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC801024</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>3-18KS</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-[morpholino]ethanesulfonic acid(MES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3671</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3450</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-hydroxysuccinimide (NHS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56480</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis bags</td>
			<td>Spectrum</td>
			<td>132592T</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30028.01</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>S-025</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>for various applications</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m sterile syringe filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033RB</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml syringe, polypropylene</td>
			<td>BD</td>
			<td>328421</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern Zetasizer</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>Nano ZS</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM grid</td>
			<td>EMCN</td>
			<td>BZ10024a</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-VIS spectrometer</td>
			<td>Leagene</td>
			<td>DZ0035</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transmission 
			electron microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>JEM-100CXII</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent A</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23228</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent B</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23224</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Multiskan&#8482; GO</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3513</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEG3 cell</td>
			<td>Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu195</td>
			<td>Human placenta</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30272.01</td>
			<td>phenol red-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>10100</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15070063</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>CKK53</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1372021</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A606584</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Life</td>
			<td>P36961</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles

שיטה טיפולית יעילה לסרטן מפחית ומסלקת גידולים עם רעילות מינימלית מערכתית. חלקיקים באופן פעיל מיקוד מציעים גישה מבטיחה לטיפול בסרטן. גליקוזאמינוגליקן היפרדות כונדרויטין סולפט (plCSA) מתבטאת במגוון רחב של תאים סרטניים trophoblasts היפרדות, ואת מלריה חלבון ש-var2csa ניתן לאגד במיוחד plCSA. פפטיד מחייב דווח על היפרדות כונדרויטין סולפט A (plCSA-BP), נגזר מלריה חלבון VAR2CSA, באפשרותך לאגוד גם באופן ספציפי כדי plCSA על התאים הסרטניים, היפרדות trophoblasts. לפיכך, plCSA-BP-מצומדת חלקיקים יכול לשמש ככלי למשלוח שיגור תרופות סרטן אנושיים, היפרדות trophoblasts. ב פרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה לסנתז plCSA-BP-מצומדת השומנים-פולימר חלקיקים טעונים עם דוקסורוביצין (plCSA-DNPs); השיטה מורכבת צעד בודד sonication וטכניקות bioconjugate. בנוסף, מספר שיטות אפיון plCSA-DNPs, כולל החלטה physicochemical תכונותיהם ואת ספיגת התאית על ידי תאים choriocarcinoma היפרדות (JEG3), מתוארים.

ב פרוטוקול זה, לציטין PLGA, DSPE-פג-COOH, סויה הן נציג פולימר, המספר המשלים השומנים-פג-COOH השומנים, בהתאמה. הסינתזה של חלקיקים השומנים-פולימר, ממוקדות plCSA ויה צעד אחר צעד sonication שיטה, טכניקה EDC/NHS מודגם באיור1. ראשית, בתנאים sonication, לציטין סויה, PLGA, DSPE-פג-COOH בעצמם טופ...

Watch this Scientific Journal Video about Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles at JoVE.com

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול לסינתזה של היפרדות כונדרויטין סולפט א איגוד פפטיד (plCSA-BP)-מצומדת השומנים-פולימר חלקיקים באמצעות צעד אחר צעד sonication bioconjugate וטכניקות. חלקיקים אלה מהווים כלי הרומן למסירה יישוב של הרפוי גידולים האנושי ביותר, היפרדות trophoblasts לטיפול סרטן והפרעות היפרדות.

סינתזה ואפיון של היפרדות כונדרויטין גופרתי (plCSA) - מיקוד השומנים - חלקיקי הפולימר

An effective cancer therapeutic method reduces and eliminates tumors with minimal systemic toxicity. Actively targeting nanoparticles offer a promising ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום אספקת התרופות, כגון משלוח ממוקד של טיפולים לסרטן אנושי ואת שליה cystoblast. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שזו שיטה פשוטה לשחזור לסנתז פפטידים נדנים בחלקיקים אחרים. כדי להתחיל, להוסיף שלושה מילימטרים של ארבעה אחוז אתנול לצינור צנטריפוגה סטרילי 10 מיליליטר.לאחר מכן, להוסיף 90 מיקרוגרם של פתרון מלאי לציטין סויה, 210 מיקרוגרם של פתרון מלאי חומצה DSPE-PEG-carboxylic, ו 750 מיקרוגרם של פתרון מלאי DOX. השתמש במזרק מיליליטר אחד כדי pipette שני מיליגרם של פתרון מלאי PLGA. מניחים את צינור הצנטריפוגה באמבט קרח על מעבד קולי sonicate במשך שתי דקות.לאחר מכן, להוסיף פתרון מניות PLGA טיפה חכם לתוך צינור צנטריפוגה. כדי לטהר את DNPs, השתמש במסנן צנטריפוגה כדי לשטוף את הפתרון במאגר MES טוחנת 0.1. לאחר מכן, צנטריפוגה הפתרון ב 1000 G במשך שלוש דקות בארבע מעלות צלזיוס.כדי להתחיל בהפעלת אסתר, הוסף 0.4 מיליגרם של EDC למיליליטר אחד של DNPs. לאחר מכן, להוסיף 0.24 מיליגרם של NHS לתגובה. לאחר מכן, אפשר לתגובה להתרחש עד שעה בטמפרטורת החדר בחושך.לאחר מכן, מערבבים את מרכיבי התגובה ביסודיות ומ מניחים את התגובה על שייקר. כדי להתחיל את תגובת המין, השתמש PBS כדי להגדיל את pH חיץ מ 7.2 ל 7.5. לאחר מכן, להוסיף 0.5 מיליגרם של פפטיד מיקוד pICSA לפתרון התגובה.מערבבים היטב את הפתרון ומ מניחים אותו על שייקר. לאחר מכן, לאפשר לתגובה להמשיך בארבע מעלות צלזיוס לילה בחושך. למחרת, מלאו שקיות דיאליזה בתתכנון ההטיה.לטהר את DNPs pICSA עם מאגר PBS בטמפרטורת החדר במשך 24 שעות בחושך. לאחר culturing תאים על פי פרוטוקול הטקסט, להסיר את המדיה ולהוסיף מיליליטר אחד של מדיה טרייה, קרה עם חמישה אחוזים FBS ו pICSA DNPs או DNPs. לאחר מכן, הדגירה את תערובת התא והננו-חלקיקים במשך שעה אחת בארבע מעלות צלזיוס.לאחר מכן, להסיר את המדיה ולשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS. לאחר מכן, מוסיפים מיליליטר אחד של מדיה טרייה ו דגירה התאים במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, להסיר את המדיה ולשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS.לאחר מכן, מוסיפים שני מיליליטר של קור, ארבעה אחוז PFA ו דגירה את התערובת בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. הסר את PFA ולשטוף את התאים עם שני מיליליטר של PBS. לאחר מכן, להוסיף מיליליטר אחד של PBS עם DAPI עבור כתמי גרעינים.אפשר לתערובת דגירה בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. לבסוף, מוסיפים מדיום הרכבה ומדמיין את הפלואורסצנטיות במיקרוסקופ פלואורסצנטי. באמצעות פרוטוקול זה, DNPs הוכנו בהצלחה והוכנסו ל- pICSA BP. לאחר ההתייחדות, קוטר ה-DNPs הראשי עלה לכ-109 ננומטר.תמונות TEM של DNPs ו DNPs pICSA הראו כי החלקיקים היו מפוזרים היטב ובדרך כלל הפגינו מורפולוגיה כדורית. פוטנציאל הזטה של הננו-חלקיקים היה שלילי 20.1 ו-29.9 מילי-וולט, מה שמצביע על כך שהננו-חלקיקים היו יציבים מאוד. ההסתערות על ספיגת התאים JEG3 הצביעה על ה-PICSA DNPs הקשורים לתאי JEG3 בתוך 30 דקות.לכן, BP pICSA היה נדמד ביעילות על פני השטח. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור sonicate את התערובת במשך 1 עד 2 דקות לפני הוספת PLGA. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע את השיטות שלנו כגון בדיקת HPLC על מנת לקבוע את יעילות ההנקה בצורה מדויקת יותר.לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הביולוגיה הרבייה כדי לבחון את האפשרות של טיפול שליה מיקוד בסיבוכי הריון.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A (plCSA)-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NF&#954;B Activity and Breast Cancer Stem Cells

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NFÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚ÂºB Activity and Breast Cancer Stem Cells

סינתזה ואפיון של prodrug אספירין-fumarate המעכבת תאי גזע סרטניים פעילות השד NFκB

Inflammation is a cancer hallmark that underlies cancer incidence and promotion, and eventually progression to metastasis. Therefore, adding an ...

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

יעילות אנטי סרטנית של טיפול פוטודינמי עם ריאות חלקיקים סרטן ממוקד

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

הגברה עושר מראש ולא כל הגנום תא היעד עבור אפיון במורד הזרם תא בודד

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics

אפיון של קרום התא הרחבות ולימוד תפקידיהם סרטן התא אדהזיה דינמיקה

The cell membrane&#39;s extension repertoire modulates various malignant behaviors of cancer cells, including their adhesive and migratory potentials. The ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

איפיון תאים סרטניים באמצעות חוט רפואי עבור לכידת מחזורי תאים סרטניים: בגישה 3D בהתבסס על Immunofluorescence ודגים דנ א

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

בידוד ואפיון של הגידול-ליזום תאים מחולה סרקומה-Xenografts נגזרים

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

העשרה ואפיון של Microenvironments המערכת החיסונית והחיסון של הגידול הוקמה גידולים מאתר תת עורית

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

הקמה ואפיון של המעי הקטן נוירואנדוקרינים הגידול האנדוקרינית

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models

בידוד ואפיון של החולה-הלבלב הנגזר דוטל אדנוקרצינומה מודלים אורגאיד

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is amongst the most lethal malignancies. Recently, next-generation organoid culture methods enabling the ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

הדור של הלבלב אורתוטואט גידולים ואפיון Vivo Ex של תאים הסתננות של הגידול תא T

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...