Name: synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles
Uploaded: 2018-09-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles at JoVE.com

यह काम चीन के राष्ट्रीय प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (2016YFC1000402), राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (८१५७१४४५ और ८१७७१६१७) और गुआंग्डोंग प्रांत के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (2016A030313178) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था X.F. और द शेन्ज़ेन बेसिक रिसर्च फंड (JCYJ20170413165233512) को X.F.

1. स्टॉक समाधानों की तैयारी
<ol><li>ultrapure पानी की १०० मिलीलीटर के साथ निरपेक्ष इथेनॉल के 4 मिलीलीटर कमजोर द्वारा 4% इथेनॉल का एक जलीय समाधान तैयार करें । 4 डिग्री सेल्सियस पर समाधान की दुकान । नोट: Ultrapure पानी जैसे ?...

<ol>
	<li>Davis, M. E., Shin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+therapeutics:+an+emerging+treatment+modality+for+cancer.">Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771 (2008).</li><li>Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+applications+in+cancer.">Nanotechnology applications in cancer.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).</li><li>Jabir, N. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+assembly+of+homogenous+lipid&#8722;+polymeric+and+lipid&#8722;+quantum+dot+nanoparticles+enabled+by+microfluidic+rapid+mixing.">Single-step assembly of homogenous lipid&#8722; polymeric and lipid&#8722; quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing.</a> ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).</li><li>Altintas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanobody-albumin+nanoparticles+(NANAPs)+for+the+delivery+of+a+multikinase+inhibitor+17864+to+EGFR+overexpressing+tumor+cells.">Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells.</a> Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).</li><li>Maya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cetuximab+conjugated+O-carboxymethyl+chitosan+nanoparticles+for+targeting+EGFR+overexpressing+cancer+cells.">Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells.</a> Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).</li><li>Deepagan, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+targeted+imaging+and+delivery+of+camptothecin+using+cetuximab-conjugated+multifunctional+PLGA-ZnS+nanoparticles.">In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles.</a> Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).</li><li>Totaro, K. 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यह प्रोटोकॉल synthesizing plCSA-बीपी-संयुग्मित लिपिड पॉलिमर नैनोकणों के लिए एक कुशल और reproducible विधि प्रदान करता है । एकल कदम sonication विधि लिपिड बहुलक नैनोकणों तैयार करने के लिए तेजी से है, reproducible और ठेठ nanoprecipitation तरीकों से अलग...

एक प्रभावी कैंसर चिकित्सकीय विधि कम कर देता है और ंयूनतम प्रणालीगत विषाक्तता के साथ ट्यूमर समाप्त । इसलिए, चयनात्मक ट्यूमर लक्ष्यीकरण सफल चिकित्सकीय तरीकों की खोज करने के लिए महत्वपूर्ण है । नैनोकणों कैंसर थेरेपी के लिए एक होनहार अवसर प्रदान करते हैं, और विभिंन कार्यात्मक समूहों के साथ आणविक विधानसभाओं दवा प्रभावकारिता में वृद्धि और जुड़े दुष्प्रभाव1,2को कम करेगा । इसके अलावा, nanoparticle सिस्टम मुख्य रूप से निष्क्रिय और सक्रिय लक्ष्यीकरण का उपयोग करने के लक्ष्य ट्यूमर तक पहुंचने3।
निष्क्रिय लक्ष्यीकरण नैनोकणों की जंमजात विशेषताओं और संवर्धित पारगम्यता और प्रतिधारण (EPR) प्रभाव ट्यूमर कोशिकाओं तक पहुंचने के लिए शोषण करता है । Cationic liposomes सफलतापूर्वक नैदानिक अनुप्रयोगों4,5,6में ट्यूमर के लिए विभिन्न विरोधी दवाओं देने के लिए इस्तेमाल किया गया है । संभावित प्रभावी कैंसर उपचारात्मक प्रभाव, ट्यूमर क्षेत्र में एक कम दवा एकाग्रता और सामान्य ऊतकों से ट्यूमर कोशिकाओं को भेद करने में असमर्थता के बावजूद निष्क्रिय लक्ष्यीकरण नैनोकणों7की दो प्रमुख सीमाएं हैं.
सक्रिय लक्ष्यीकरण रणनीतियां प्रतिजन-एंटीबॉडी, ligand रिसेप्टर और अंय आणविक मांयता बातचीत का लाभ लेने के लिए विशेष रूप से8ट्यूमर के लिए ड्रग्स उद्धार । glycosaminoglycan अपरा chondroitin सल्फेट ए (plCSA) मोटे तौर पर अधिकांश कैंसर कोशिकाओं और अपरा trophoblasts पर व्यक्त की है । इसके अलावा, मलेरिया प्रोटीन VAR2CSA plCSA9,10करने के लिए विशेष रूप से बाइंड कर सकते हैं । इसलिए, VAR2CSA मानव कैंसर कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए एक उपकरण हो सकता है । हालांकि, जब VAR2CSA नैनोकणों करने के लिए संयुग्मित है, पूर्ण लंबाई प्रोटीन ट्यूमर कोशिकाओं में नैनोकणों के प्रवेश को सीमित कर सकते हैं । हाल ही में, हम एक plCSA बाध्यकारी पेप्टाइड (plCSA-बीपी), मलेरिया प्रोटीन VAR2CSA से व्युत्पंन की खोज की । plCSA-बीपी-संयुग्मित लिपिड बहुलक नैनोकणों तेजी से choriocarcinoma कोशिकाओं के लिए बंधुआ और काफी बढ़ डॉक्सोरूबिसिन (DOX) vivo11में विरोधी गतिविधि; इन कणों को भी विशेष रूप से अपरा trophoblasts के लिए बंधुआ और अपरा12को दवाओं के लक्षित वितरण के लिए एक उपकरण के रूप में सेवा कर सकता है ।
लिपिड बहुलक नैनोकणों एक लिपिड monolayer खोल और एक hydrophobic बहुलक कोर से मिलकर बनता है और दवा वितरण के लिए एक नया वाहक का प्रतिनिधित्व करते हैं । इन नैनोकणों liposomes और बहुलक nanocarriers, जैसे कि नियंत्रणीय nanoparticle आकार, उच्च असंगति, निरंतर दवा रिलीज, उच्च दवा लदान दक्षता (ले), और उत्कृष्ट स्थिरता13के लाभों को जोड़ । इस काम में, हम लिपिड बहुलक नैनोकणों संश्लेषित करने के लिए एक एकल कदम sonication विधि का इस्तेमाल किया । इस विधि तेजी से, सुविधाजनक और स्केल अप के लिए उपयुक्त है और व्यापक रूप से हमारे समूह11,14 और अंय15,16,17,18 द्वारा लिपिड बहुलक नैनोकणों तैयार करने के लिए इस्तेमाल किया गया है .
1-एथिल-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide हाइडरोक्लॉराइड (EDC) एक लोकप्रिय carbodiimide crosslinking के लिए एक conjugating एजेंट के रूप में इस्तेमाल किया जाता है जिसमें अमीन और carboxylates19शामिल हैं । EDC के अलावा, N-hydroxysulfosuccinimide (एन एच एस) सतह और nanoparticle विकार प्रतिक्रियाओं में सबसे आम विकार रिएजेंट है20,21। एन एच एस पक्ष प्रतिक्रियाओं की संख्या को कम करने और स्थिरता और एस्टर22,23मध्यवर्ती की उपज को बढ़ाने कर सकते हैं ।
यहां, हम synthesizing plCSA के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन लिपिड-बहुलक नैनोकणों लक्षित । सबसे पहले, एकल कदम sonication के संश्लेषण DOX-भरी लिपिड-बहुलक नैनोकणों (DNPs) का वर्णन किया गया है । फिर, plCSA-बीपी-संयुग्मित लिपिड बहुलक नैनोकणों पैदा करने के लिए एक EDC/एन एच एस bioconjugate तकनीक शुरू की है । इस bioconjugate तकनीक का इस्तेमाल अन्य एंटीबॉडी और पेप्टाइड्स को नैनोकणों करने के लिए भी संयुग्मी किया जा सकता है । अंत में, हम भौतिक गुणों का वर्णन और इन विट्रो में plCSA-लक्षित लिपिड-बहुलक नैनोकणों विशेषताएं परख करते थे । हम मानते है कि इन plCSA-लक्षित लिपिड बहुलक नैनोकणों सबसे मानव कैंसर के लिए दवाओं के लक्षित वितरण के लिए एक प्रभावी प्रणाली का गठन कर सकते है और अपरा को अपरा विकारों के इलाज के लिए पेलोड के लक्षित वितरण ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>plCSA peptide</td>
			<td>Shanghai GL Biochem</td>
			<td>573518</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical</td>
			<td>10009218</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean lecithin</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>441601</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSPE-PEG-COOH</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>880125</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>JKChemical</td>
			<td>113424</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1008621</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLGA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>719897</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic processor</td>
			<td>Sonics</td>
			<td>VCX130</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge filter (MWCO 10 kDa)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC801024</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>3-18KS</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-[morpholino]ethanesulfonic acid(MES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3671</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3450</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-hydroxysuccinimide (NHS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56480</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis bags</td>
			<td>Spectrum</td>
			<td>132592T</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30028.01</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>S-025</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>for various applications</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m sterile syringe filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033RB</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml syringe, polypropylene</td>
			<td>BD</td>
			<td>328421</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern Zetasizer</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>Nano ZS</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM grid</td>
			<td>EMCN</td>
			<td>BZ10024a</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-VIS spectrometer</td>
			<td>Leagene</td>
			<td>DZ0035</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transmission 
			electron microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>JEM-100CXII</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent A</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23228</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent B</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23224</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Multiskan&#8482; GO</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3513</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEG3 cell</td>
			<td>Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu195</td>
			<td>Human placenta</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30272.01</td>
			<td>phenol red-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>10100</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15070063</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>CKK53</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1372021</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A606584</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Life</td>
			<td>P36961</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles

एक प्रभावी कैंसर चिकित्सकीय विधि कम कर देता है और ंयूनतम प्रणालीगत विषाक्तता के साथ ट्यूमर समाप्त । सक्रिय रूप से लक्ष्यीकरण नैनोकणों कैंसर थेरेपी के लिए एक आशाजनक दृष्टिकोण प्रदान करते हैं । glycosaminoglycan अपरा chondroitin सल्फेट ए (plCSA) कैंसर की कोशिकाओं और अपरा trophoblasts की एक विस्तृत श्रृंखला पर व्यक्त किया जाता है, और मलेरिया प्रोटीन VAR2CSA विशेष रूप से plCSA के लिए बाध्य कर सकते हैं । एक रिपोर्ट अपरा chondroitin सल्फेट एक बाध्यकारी पेप्टाइड (plCSA-बीपी), मलेरिया प्रोटीन VAR2CSA से व्युत्पंन, भी विशेष रूप से कैंसर की कोशिकाओं और plCSA अपरा पर trophoblasts के लिए बाध्य कर सकते हैं । इसलिए, plCSA-बीपी-संयुग्मित नैनोकणों मानव कैंसर और अपरा trophoblasts को लक्षित दवा वितरण के लिए एक उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है । इस प्रोटोकॉल में, हम plCSA-BP-संयुग्मित लिपिड-बहुलक नैनोकणों डॉक्सोरूबिसिन (plCSA-DNPs) के साथ भरी हुई संश्लेषित करने के लिए एक विधि का वर्णन; विधि एक एकल sonication चरण और bioconjugate तकनीकों के होते हैं । इसके अलावा, निस्र्पक plCSA-DNPs के लिए कई विधियों, जिनमें अपरा choriocarcinoma (JEG3) कोशिकाओं द्वारा अपने भौतिक गुण और सेलुलर का निर्धारण शामिल है, का वर्णन किया गया है ।

इस प्रोटोकॉल में क्रमशः PLGA, DSPE-खूंटी-COOH और सोयाबीन लेसितिण एक प्रतिनिधि बहुलक, लिपिड-खूंटी-COOH संयुग्मी और लिपिड हैं । एक एकल कदम sonication विधि और एक EDC/एन एच एस तकनीक के माध्यम से plCSA-लक्षित लिपिड बह...

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Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

यहां, हम अपरा chondroitin सल्फेट के संश्लेषण के लिए एक प्रोटोकॉल वर्तमान एक बाध्यकारी पेप्टाइड (plCSA-बीपी)-संयुग्मित लिपिड-बहुलक नैनोकणों के माध्यम से एकल कदम sonication और bioconjugate तकनीक । इन कणों सबसे मानव ट्यूमर और अपरा trophoblasts कैंसर और अपरा विकारों के इलाज के लिए चिकित्सकीय के लक्षित वितरण के लिए एक उपंयास उपकरण का गठन ।

संश्लेषण और अपरा Chondroitin सल्फेट एक (plCSA)-लक्ष्यीकरण लिपिड बहुलक नैनोकणों का लक्षण वर्णन

An effective cancer therapeutic method reduces and eliminates tumors with minimal systemic toxicity. Actively targeting nanoparticles offer a promising ...

यह विधि दवा वितरण क्षेत्र में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद कर सकती है, जैसे मानव कैंसर के लिए चिकित्सीय की लक्षित डिलीवरी और प्लेसेंटा सिस्टोब्लास्ट। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह अन्य कणों में संयुग्मित पेप्टाइड्स को संश्लेषित करने के लिए एक सरल और प्रजनन योग्य विधि है। शुरू करने के लिए, एक बाँझ 10 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब के लिए चार प्रतिशत इथेनॉल के तीन मिलीमीटर जोड़ें ।इसके बाद इसमें 90 माइक्रोग्राम सोयाबीन लेसिथिन स्टॉक सॉल्यूशन, 210 माइक्रोग्राम का पी डीएसपीई-खूंटी-कार्बोक्सिलिक एसिड स्टॉक सॉल्यूशन और 750 माइक्रोग्राम डॉक्स स्टॉक सॉल्यूशन जोड़ें। पीएलजीए स्टॉक समाधान के दो मिलीग्राम पिपेट करने के लिए एक मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करें। एक अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर पर एक आइस बाथ में अपकेंद्रित्र ट्यूब रखें और दो मिनट के लिए सोनिकेट करें।फिर, अपकेंद्रित्र ट्यूब में पीएलजीए स्टॉक समाधान ड्रॉप-वार जोड़ें। DNPs को शुद्ध करने के लिए, 0.1 मोलर एमईएस बफर में समाधान धोने के लिए एक अपकेंद्रित्र फिल्टर का उपयोग करें। इसके बाद चार डिग्री सेल्सियस पर तीन मिनट के लिए 1000 जी पर घोल को सेंट्रलाइज करें।एस्टर एक्टिवेशन शुरू करने के लिए, डीएनपी के एक मिलीलीटर में ईडीसी के 0.4 मिलीग्राम जोड़ें। फिर, प्रतिक्रिया में एनएचएस के ०.२४ मिलीग्राम जोड़ें । फिर, अंधेरे में कमरे के तापमान पर एक घंटे तक प्रतिक्रिया होने दें।इसके बाद रिएक्शन कंपोनेंट्स को अच्छी तरह मिला लें और रिएक्शन को शेकर पर रखें। अमीन प्रतिक्रिया शुरू करने के लिए, बफर पीएच को 7.2 से बढ़ाकर 7.5 करने के लिए पीबीएस का उपयोग करें। फिर, प्रतिक्रिया समाधान के लिए पेप्टाइड को लक्षित करते हुए 0.5 मिलीग्राम पीआईसीएसए जोड़ें।घोल को अच् तादार मिलाकर शेकर पर रखें। फिर, प्रतिक्रिया को अंधेरे में रात भर चार डिग्री सेल्सियस पर आगे बढ़ने दें। अगले दिन, कंसूगेट समाधान के साथ डायलिसिस बैग भरें।अंधेरे में 24 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर PBS बफर के साथ PICSA DNPs शुद्ध । पाठ प्रोटोकॉल के अनुसार कोशिकाओं को बनाने के बाद, मीडिया को हटा दें और पांच प्रतिशत एफबीएस और पीआईसीएसए डीएनपी या डीएनपी के साथ ताजा, कोल्ड मीडिया का एक मिलीलीटर जोड़ें। इसके बाद सेल और नैनो पार्टिकल मिश्रण को चार डिग्री सेल्सियस पर एक घंटे तक इनक्यूबेट करें।इसके बाद मीडिया को हटा दें और कोशिकाओं को पीबीएस से तीन बार धोएं। फिर, ताजा मीडिया के एक मिलीलीटर जोड़ें और 30 मिनट के लिए कोशिकाओं को ३७ डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें । इसके बाद मीडिया को हटा दें और कोशिकाओं को पीबीएस से तीन बार धोएं।फिर, ठंड के दो मिलीलीटर, चार प्रतिशत पीएफए जोड़ें और 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर मिश्रण को इनक्यूबेट करें। पीएफए निकालें और पीबीएस के दो मिलीलीटर के साथ कोशिकाओं को धो लें। फिर, नाभिक धुंधला के लिए DAPI के साथ पीबीएस के एक मिलीलीटर जोड़ें।मिश्रण को 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करने दें। अंत में, बढ़ते मध्यम जोड़ें और फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप के साथ फ्लोरेसेंस छवि। इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए, DNPs को सफलतापूर्वक तैयार किया गया और पीआईसीएसए बीपी के लिए संयोजित किया गया। संजीदशन के बाद, प्राथमिक डीएनपी का व्यास लगभग 109 नैनोमीटर तक बढ़ गया।DNPs और PICSA DNPs के TEM छवियों से पता चला है कि कणों को अच्छी तरह से फैलाया गया था और आम तौर पर गोलाकार आकृति विज्ञान का प्रदर्शन किया । नैनो कणों की जीटा क्षमता नकारात्मक २०.१ और २९.९ मिलीवोलlts थी, जो यह दर्शाती है कि नैनो कण अत्यधिक स्थिर थे । JEG3 सेलुलर तेज परख 30 मिनट के भीतर JEG3 कोशिकाओं के लिए बाध्य pICSA DNPs संकेत दिया ।इसलिए, पीआईसीएसए बीपी को सतह पर कुशलतापूर्वक संयुग्मित किया गया था। इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, पीएलजीए जोड़ने से पहले मिश्रण को एक से दो मिनट के लिए सोनीकेट करना याद रखना महत्वपूर्ण है। इस प्रक्रिया के बाद, एचपीएलसी परख जैसे हमारे तरीकों को अधिक सटीकता से संयुग्मण दक्षता निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है।इसके विकास के बाद, इस तकनीक ने प्रजनन जीव विज्ञान के क्षेत्र में शोधकर्ताओं के लिए गर्भावस्था की जटिलताओं में अपरा-लक्ष्यीकरण उपचार की संभावना का पता लगाने का मार्ग प्रशस्त किया।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A (plCSA)-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NF&#954;B Activity and Breast Cancer Stem Cells

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NFÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚ÂºB Activity and Breast Cancer Stem Cells

संश्लेषण और एक एस्पिरिन-fumarate प्रोड्रग की विशेषता है कि NFκB गतिविधि और स्तन कैंसर स्टेम कोशिकाओं को रोकता है

Inflammation is a cancer hallmark that underlies cancer incidence and promotion, and eventually progression to metastasis. Therefore, adding an ...

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

फेफड़ों के कैंसर-लक्षित नैनोकणों के साथ Photodynamic थेरेपी के कैंसर विरोधी प्रभावकारिता

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

लक्ष्य सेल पूर्व संवर्धन और पूरे जीनोम प्रवर्धन एकल कोशिका बहाव लक्षण वर्णन के लिए

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics

कोशिका झिल्ली एक्सटेंशन के लक्षण वर्णन और कैंसर कोशिका आसंजन गतिशीलता में उनकी भूमिका का अध्ययन

The cell membrane&#39;s extension repertoire modulates various malignant behaviors of cancer cells, including their adhesive and migratory potentials. The ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

ट्यूमर कोशिकाओं परिचालित ट्यूमर कोशिकाओं पर कब्जा करने के लिए एक चिकित्सा तार का उपयोग कर के लक्षण वर्णन: एक 3 डी दृष्टिकोण इम्यूनोफ्लोरेसेंस और डीएनए मछली पर आधारित

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

अलगाव और सरकोमा रोगी व्युत्पन्न Xenografts से ट्यूमर शुरू कोशिकाओं की विशेषता

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

संवर्धन और ट्यूमर प्रतिरक्षा और गैर प्रतिरक्षा Microenvironments के लक्षण विस्थापन में स्थापित चमड़े के नीचे Murine ट्यूमर

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

स्थापना और छोटे आंत्र neuroendocrine ट्यूमर Spheroids की विशेषता

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models

रोगी-व्युत्पन्न अग्नाशय डक्टल एडेनोकार्सिनोमा ऑर्गेनॉइड मॉडल का अलगाव और लक्षण वर्णन

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is amongst the most lethal malignancies. Recently, next-generation organoid culture methods enabling the ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

ऑर्थोटोपिक अग्नाशय ट्यूमर की पीढ़ी और ट्यूमर के पूर्व वीवो लक्षण वर्णन-घुसपैठ टी सेल साइटोटॉक्सिकिटी

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...