Name: synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles
Uploaded: 2018-09-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni da nazionali chiave della ricerca e sviluppo programma della Cina (2016YFC1000402), la Fondazione nazionale di scienze naturali (81571445 e 81771617) e la Fondazione con scienze naturali della provincia di Guangdong (2016A030313178) per Il fondo di ricerca di Shenzhen Basic (JCYJ20170413165233512) a X.F. e X.F.

1. preparazione delle soluzioni madri
<ol><li>Preparare una soluzione acquosa di etanolo al 4% diluendo 4 mL di etanolo assoluto con 100 mL di acqua ultrapura. Conservare la soluzione a 4 ° C. Nota: Acqua ultrapura è definita come acqua senza contaminanti come batteri, particelle, ioni o nucleasi. Acqua ultrapura è stata ottenuta da un sistema di purificazione dell'acqua con una resistività di destinazione di mΩ·cm fino a 18,2, che significa bassa contaminazione anionici.</li>
	<li>Preparare un 1 mg/mL di solu...

<ol>
	<li>Davis, M. E., Shin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+therapeutics:+an+emerging+treatment+modality+for+cancer.">Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771 (2008).</li><li>Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+applications+in+cancer.">Nanotechnology applications in cancer.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).</li><li>Jabir, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+on+the+current+status+of+cancer+nanomedicines.">An overview on the current status of cancer nanomedicines.</a> Current Medical Research and Opinion. 34 (5), 911-921 (2018).</li><li>Pillai, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicines+for+Cancer+Therapy:+An+Update+of+FDA+Approved+and+Those+under+Various+Stages+of+Development.">Nanomedicines for Cancer Therapy: An Update of FDA Approved and Those under Various Stages of Development.</a> SOJ Pharmacy &amp; Pharmaceutical Sciences. 1 (2), 1-13 (2014).</li><li>Marta, T., Luca, S., Serena, M., Luisa, F., Fabio, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+role+of+nanotechnology+in+diagnosis+and+treatment+of+metastatic+breast+cancer?+Promising+Scenarios+for+the+Near+Future.">What is the role of nanotechnology in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer? Promising Scenarios for the Near Future.</a> Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458 (2016).</li><li>Dasari, S., Tchounwou, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisplatin+in+cancer+therapy:+molecular+mechanisms+of+action.">Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action.</a> European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).</li><li>Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+in+cancer+therapy+and+diagnosis.">Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).</li><li>Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+current+nanoparticle+and+targeting+moieties+for+the+delivery+of+cancer+therapeutics.">A review of current nanoparticle and targeting moieties for the delivery of cancer therapeutics.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 48 (3), 416-427 (2013).</li><li>Salanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+human+cancer+by+a+glycosaminoglycan+binding+malaria+protein.">Targeting human cancer by a glycosaminoglycan binding malaria protein.</a> Cancer Cell. 28 (4), 500-514 (2015).</li><li>Seiler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Oncofetal+Glycosaminoglycan+Modification+Provides+Therapeutic+Access+to+Cisplatin-resistant+Bladder+Cancer.">An Oncofetal Glycosaminoglycan Modification Provides Therapeutic Access to Cisplatin-resistant Bladder Cancer.</a> European Urology. 72 (1), 142-150 (2017).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+delivery+of+doxorubicin+by+CSA-binding+nanoparticles+for+choriocarcinoma+treatment.">Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment.</a> Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placenta-specific+drug+delivery+by+trophoblast-targeted+nanoparticles+in+mice.">Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice.</a> Theranostics. 26 (2), 130-137 (2018).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembled+lipid--polymer+hybrid+nanoparticles:+a+robust+drug+delivery+platform.">Self-assembled lipid--polymer hybrid nanoparticles: a robust drug delivery platform.</a> ACS Nano. 2 (8), 1696-1702 (2008).</li><li>Zheng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+assembly+of+DOX/ICG+loaded+lipid-polymer+nanoparticles+for+highly+effective+chemo-photothermal+combination+therapy.">Single-step assembly of DOX/ICG loaded lipid-polymer nanoparticles for highly effective chemo-photothermal combination therapy.</a> ACS. 7 (3), 2056-2067 (2013).</li><li>Fang, R. H., Aryal, S., Hu, C. -. M. J., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quick+synthesis+of+lipid&#8722;+polymer+hybrid+nanoparticles+with+low+polydispersity+using+a+single-step+sonication+method.">Quick synthesis of lipid&#8722; polymer hybrid nanoparticles with low polydispersity using a single-step sonication method.</a> Langmuir. 26 (22), 16958-16962 (2010).</li><li>Gu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folate-modified,+indocyanine+green-loaded+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+targeted+delivery+of+cisplatin.">Folate-modified, indocyanine green-loaded lipid-polymer hybrid nanoparticles for targeted delivery of cisplatin.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 28 (7), 690-702 (2017).</li><li>Mandal, B., Mittal, N. K., Balabathula, P., Thoma, L. A., Wood, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+in+vitro+evaluation+of+core-shell+type+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+the+delivery+of+erlotinib+in+non-small+cell+lung+cancer.">Development and in vitro evaluation of core-shell type lipid-polymer hybrid nanoparticles for the delivery of erlotinib in non-small cell lung cancer.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 81, 162-171 (2016).</li><li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+legumain-recognition+and+NIR+controlled+released+of+cisplatin-indocyanine+nanosphere+against+gastric+carcinoma.">Enhanced legumain-recognition and NIR controlled released of cisplatin-indocyanine nanosphere against gastric carcinoma.</a> European Journal of Pharmacology. 794, 184-192 (2017).</li><li>Grabarek, Z., Gergely, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zero-length+crosslinking+procedure+with+the+use+of+active+esters.">Zero-length crosslinking procedure with the use of active esters.</a> Analytical Biochemistry. 185 (1), 131-135 (1990).</li><li>Hadjipanayis, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFRvIII+Antibody-Conjugated+Iron+Oxide+Nanoparticles+for+Magnetic+Resonance+Imaging-Guided+Convection-Enhanced+Delivery+and+Targeted+Therapy+of+Glioblastoma.">EGFRvIII Antibody-Conjugated Iron Oxide Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging-Guided Convection-Enhanced Delivery and Targeted Therapy of Glioblastoma.</a> Cancer Research. 70 (15), 6303-6312 (2010).</li><li>Sadhukha, T., Wiedmann, T. S., Panyam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalable+magnetic+nanoparticles+for+targeted+hyperthermia+in+lung+cancer+therapy.">Inhalable magnetic nanoparticles for targeted hyperthermia in lung cancer therapy.</a> Biomaterials. 34 (21), 5163-5171 (2013).</li><li>Jennings, M., Nicknish, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+a+site+of+intermolecular+cross-linking+in+human+red+blood+cell+band+3+protein.">Localization of a site of intermolecular cross-linking in human red blood cell band 3 protein.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (9), 5472-5479 (1985).</li><li>Staros, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-hydroxysulfosuccinimide+active+esters:+bis(N-hydroxysulfosuccinimide)+esters+of+two+dicarboxylic+acids+are+hydrophilic,+membrane-impermeant,+protein+cross-linkers.">N-hydroxysulfosuccinimide active esters: bis(N-hydroxysulfosuccinimide) esters of two dicarboxylic acids are hydrophilic, membrane-impermeant, protein cross-linkers.</a> Biochemistry. 21 (17), 3950-3955 (1982).</li><li>Valencia, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+assembly+of+homogenous+lipid&#8722;+polymeric+and+lipid&#8722;+quantum+dot+nanoparticles+enabled+by+microfluidic+rapid+mixing.">Single-step assembly of homogenous lipid&#8722; polymeric and lipid&#8722; quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing.</a> ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).</li><li>Altintas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanobody-albumin+nanoparticles+(NANAPs)+for+the+delivery+of+a+multikinase+inhibitor+17864+to+EGFR+overexpressing+tumor+cells.">Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells.</a> Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).</li><li>Maya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cetuximab+conjugated+O-carboxymethyl+chitosan+nanoparticles+for+targeting+EGFR+overexpressing+cancer+cells.">Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells.</a> Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).</li><li>Deepagan, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+targeted+imaging+and+delivery+of+camptothecin+using+cetuximab-conjugated+multifunctional+PLGA-ZnS+nanoparticles.">In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles.</a> Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).</li><li>Totaro, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+investigation+of+EDC/sNHS-mediated+bioconjugation+reactions+for+carboxylated+peptide+substrates.">Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates.</a> Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).</li><li>Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+cross-linking+and+mass+spectrometry+to+map+three-dimensional+protein+structures+and+protein-protein+interactions.">Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions.</a> Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LDLR-mediated+peptide-22-conjugated+nanoparticles+for+dual-targeting+therapy+of+brain+glioma.">LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma.</a> Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).</li><li>Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-penetrating+TAT+peptide+in+drug+delivery+systems:+proteolytic+stability+requirements.">Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements.</a> Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).</li><li>Chu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+ocular+delivery+to+laser-induced+choroidal+neovascularization+by+dual+internalizing+RGD+and+TAT+peptide-modified+nanoparticles.">Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles.</a> International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).</li></ol>

Questo protocollo fornisce un metodo efficace e riproducibile per la sintesi di nanoparticelle plCSA-BP-coniugato del lipido-polimero. Il metodo di passo singolo sonicazione per preparare nanoparticelle lipidiche-polimero è veloce, riproducibile e diverso dai metodi di nanoprecipitazione tipici che coinvolgono riscaldamento, Vortex o evaporazione. Quindi, il metodo sviluppato riduce significativamente il tempo di sintesi. Inoltre, l'EDC/NHS bioconjugate utilizzato in questo protocollo è una tecnica comunemente usata e ...

Un metodo terapeutico del cancro efficace riduce ed Elimina i tumori con minima tossicità sistemica. Quindi, targeting tumorale selettiva è la chiave per esplorare metodi di successo terapeutici. Le nanoparticelle offrono un'opportunità promettente per la terapia del cancro, e molecolare assembly con diversi gruppi funzionali saranno che permettono di migliorare l'efficacia dei farmaci e ridurre gli effetti collaterali associati1,2. Inoltre, i sistemi di nanoparticella utilizzano principalmente attivi e passivi di targeting per raggiungere target tumori3.
Passivo di targeting sfrutta le caratteristiche innate di nanoparticelle e permeabilità migliorata ed effetti di ritenzione (EPR) per raggiungere le cellule del tumore. Liposomi cationici sono stati utilizzati con successo per fornire varie droghe anticancro a tumori in applicazioni cliniche4,5,6. Nonostante il potenziale effetto terapeutico del cancro efficace, una concentrazione di farmaco basso nella regione del tumore e un'incapacità di distinguere le cellule del tumore dai tessuti normali sono due principali limitazioni del passivo-targeting nanoparticelle7.
Strategie di targeting attive approfitta di antigene-anticorpo, ligando-recettore e altre interazioni di riconoscimento molecolare per consegnare i farmaci specificamente a tumori8. Il solfato della condroitina placentare glycosaminoglycan un (plCSA) è largamente espresso sulla maggior parte delle cellule tumorali e trofoblasto placentare. Inoltre, la proteina malarica VAR2CSA specificamente possibile associare a plCSA9,10. Quindi, VAR2CSA può essere uno strumento per il targeting di cellule tumorali umane. Tuttavia, quando VAR2CSA è coniugato a nanoparticelle, la proteina full-length può limitare la penetrazione di nanoparticelle nelle cellule del tumore. Recentemente, abbiamo scoperto un peptide di associazione plCSA (plCSA-BP), derivato dalla proteina malarica VAR2CSA. plCSA-BP-coniugato del lipido-polimero nanoparticelle rapidamente legato ad coriocarcinoma cellule e significativamente aumentato doxorubicina (DOX) attività antitumorale in vivo11; Queste particelle anche specificamente legato al trofoblasto placentare e potrebbero servire come strumento per la somministrazione mirata di farmaci per la placenta12.
Le nanoparticelle lipidiche-polimero sono costituiti da un guscio di monostrato lipidico e un nucleo idrofobo polimerico e rappresentano un nuovo vettore per la consegna della droga. Queste nanoparticelle combinano i vantaggi dei liposomi e polimerici nanovettori, quali dimensioni delle nanoparticelle controllabile, elevata biocompatibilità, rilascio prolungato di farmaci, efficienza di carico alta droga (LE) e un'eccellente stabilità13. In questo lavoro, abbiamo usato un metodo a passo singolo sonicazione per sintetizzare nanoparticelle lipidiche-polimero. Questo metodo è veloce, comodo e adatto per scale-up ed è stato ampiamente utilizzato per preparare nanoparticelle lipidiche-polimero dal nostro gruppo11,14 e gli altri15,16,17,18 .
1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide cloridrato (EDC) è un popolare carbodiimide usato come un agente di reticolazione per biomolecole contenenti ammine e carbossilati19di coniugazione. Oltre a EDC, N-Idrossisulfosuccinimide (NHS) è il più comune reagente di coniugazione in superficie e nanoparticelle coniugazione reazioni20,21. NHS può ridurre il numero di reazioni secondarie e migliorare la stabilità e rendimento di estere intermedi22,23.
Qui, descriviamo un protocollo per la sintesi di nanoparticelle di targeting per plCSA del lipido-polimero. In primo luogo, la sintesi di passo singolo sonicazione delle nanoparticelle di DOX-caricati del lipido-polimero (DNPs) è descritto. Quindi, una tecnica di bioconjugate EDC/NHS per la generazione di nanoparticelle plCSA-BP-coniugato del lipido-polimero è stato introdotto. Questa tecnica di bioconjugate è utilizzabile anche per coniugare altri anticorpi e peptidi alle nanoparticelle. Infine, descriviamo l'analisi fisico-chimica di proprietà e in vitro utilizzato per caratterizzare le nanoparticelle di targeting per plCSA del lipido-polimero. Crediamo che queste nanoparticelle di targeting per plCSA del lipido-polimero potrebbero costituire un sistema efficace per la somministrazione mirata di farmaci per tumori più umani e la somministrazione mirata di payload di placenta per trattare i disordini placentari.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>plCSA peptide</td>
			<td>Shanghai GL Biochem</td>
			<td>573518</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical</td>
			<td>10009218</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean lecithin</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>441601</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSPE-PEG-COOH</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>880125</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>JKChemical</td>
			<td>113424</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1008621</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLGA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>719897</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic processor</td>
			<td>Sonics</td>
			<td>VCX130</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge filter (MWCO 10 kDa)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC801024</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>3-18KS</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-[morpholino]ethanesulfonic acid(MES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3671</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3450</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-hydroxysuccinimide (NHS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56480</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis bags</td>
			<td>Spectrum</td>
			<td>132592T</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30028.01</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>S-025</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>for various applications</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m sterile syringe filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033RB</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml syringe, polypropylene</td>
			<td>BD</td>
			<td>328421</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern Zetasizer</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>Nano ZS</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM grid</td>
			<td>EMCN</td>
			<td>BZ10024a</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-VIS spectrometer</td>
			<td>Leagene</td>
			<td>DZ0035</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transmission 
			electron microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>JEM-100CXII</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent A</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23228</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent B</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23224</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Multiskan&#8482; GO</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3513</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEG3 cell</td>
			<td>Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu195</td>
			<td>Human placenta</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30272.01</td>
			<td>phenol red-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>10100</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15070063</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>CKK53</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1372021</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A606584</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Life</td>
			<td>P36961</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles

Un metodo terapeutico del cancro efficace riduce ed Elimina i tumori con minima tossicità sistemica. Le nanoparticelle attivamente targeting offrono un approccio promettente per la terapia del cancro. Il solfato della condroitina placentare glycosaminoglycan un (plCSA) è espresso su una vasta gamma di cellule tumorali e trofoblasto placentare e malarica proteine che var2csa in particolare può essere associato a plCSA. Un peptide di associazione segnalata placentare condroitina solfato A (plCSA-BP), derivato dalla proteina malarica VAR2CSA, specificamente anche possibile associare a plCSA sulle cellule tumorali e trofoblasto placentare. Quindi, plCSA-BP-coniugato nanoparticelle potrebbero essere usate come uno strumento per somministrazione di farmaci mirati a cancri umani e trofoblasto placentare. In questo protocollo, descriviamo un metodo per sintetizzare nanoparticelle plCSA-BP-coniugato del lipido-polimero caricate con doxorubicina (plCSA-DNPs); il metodo consiste in un singolo sonicazione passo e bioconjugate tecniche. Inoltre, sono descritti diversi metodi per la caratterizzazione plCSA-DNPs, compresa la determinazione di loro proprietà fisico-chimiche e l'assorbimento cellulare di cellule placentari coriocarcinoma (JEG3).

In questo protocollo, PLGA, DSPE-PEG-COOH e soia lecitina sono un polimero rappresentativo, coniugato del lipido-PEG-COOH e lipidi, rispettivamente. La sintesi di nanoparticelle plCSA-mirati del lipido-polimero tramite un singolo passaggio sonicazione metodo e una tecnica EDC/NHS è illustrata nella Figura 1. In primo luogo, in condizioni di sonicazione, lecitina di soia, PLGA e DSPE-PEG-COOH si autoassemblano per formare nucleo-conchiglia strutturat...

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Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

Qui, presentiamo un protocollo per la sintesi del peptide di associazione placentare condroitina solfato A (plCSA-BP)-coniugato del lipido-polimero nanoparticelle via passo singolo sonicazione e bioconjugate tecniche. Queste particelle costituiscono un nuovo strumento per la somministrazione mirata di terapeutica di tumori più umani e trofoblasto placentare per trattare tumori e disturbi placentare.

Sintesi e caratterizzazione di placenta condroitina solfato un (plCSA) - Targeting del lipido - nanoparticelle polimeriche

An effective cancer therapeutic method reduces and eliminates tumors with minimal systemic toxicity. Actively targeting nanoparticles offer a promising ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della somministrazione di farmaci, come la somministrazione mirata di terapie ai tumori umani e il citoblasto della placenta. Il principale vantaggio di questa tecnica è che è un metodo semplice e riproducibile per sintetizzare peptidi coniugati in altre particelle. Per iniziare, aggiungere tre millimetri di etanolo al quattro per cento di etanolo a un tubo di centrifuga sterile da 10 millilitri.Quindi, aggiungere 90 microgrammi di soluzione stock di lecitina di soia, 210 microgrammi di soluzione di stock di acido DSPE-PEG-carbossilico e 750 microgrammi di soluzione stock DOX. Utilizzare una siringa millilitro per pipettare due milligrammi di soluzione stock PLGA. Posizionare il tubo di centrifuga in un bagno di ghiaccio su un processore ad ultrasuoni e sonicare per due minuti.Quindi, aggiungere la soluzione stock PLGA per quanto riguarda la caduta nel tubo di centrifuga. Per purificare i DNP, utilizzare un filtro di centrifuga per lavare la soluzione in tampone MES molare 0.1. Quindi, centrifugare la soluzione a 1000 G per tre minuti a quattro gradi Celsius.Per iniziare l'attivazione dell'estere, aggiungere 0,4 milligrammi di EDC a un millilitro di DNP. Quindi, aggiungere 0,24 milligrammi di NHS alla reazione. Quindi, consentire alla reazione di verificarsi fino a un'ora a temperatura ambiente al buio.Successivamente, mescolare accuratamente i componenti di reazione e posizionare la reazione su uno shaker. Per iniziare la reazione dell'ammina, utilizzare PBS per aumentare il pH tampone da 7,2 a 7,5. Quindi, aggiungere 0,5 milligrammi di peptide di targeting pICSA alla soluzione di reazione.Mescolare bene la soluzione e posizionarla su uno shaker. Quindi, consentire alla reazione di procedere a quattro gradi Celsius durante la notte al buio. Il giorno dopo, riempire i sacchetti di dialisi con la soluzione coniugata.Purificare i DNP pICSA con tampone PBS a temperatura ambiente per 24 ore al buio. Dopo aver coltivato le cellule in base al protocollo di testo, rimuovere il supporto e aggiungere un millilitro di supporti freschi e freddi con il cinque percento di DNP o DNP FBS e pICSA. Quindi, incubare la miscela cellulare e nanoparticelle per un'ora a quattro gradi Celsius.Successivamente, rimuovere il supporto e lavare le celle tre volte con PBS. Quindi, aggiungere un millilitro di mezzi freschi e incubare le cellule per 30 minuti a 37 gradi Celsius. Successivamente, rimuovere il supporto e lavare le celle tre volte con PBS.Quindi, aggiungere due millilitri di PFA freddo e quattro percento e incubare la miscela a temperatura ambiente per 10 minuti. Rimuovere il PFA e lavare le celle con due millilitri di PBS. Quindi, aggiungere un millilitro di PBS con DAPI per la colorazione dei nuclei.Lasciare incubare la miscela a temperatura ambiente per 10 minuti. Infine, aggiungere il supporto di montaggio e l'immagine della fluorescenza con un microscopio a fluorescenza. Utilizzando questo protocollo, i DNP sono stati preparati con successo e coniugati a pICSA BP. Dopo la coniugazione, il diametro dei DNP primari aumentò a circa 109 nanometri.Le immagini TEM dei DNP e dei DNP pICSA mostravano che le particelle erano ben disperse e generalmente dimostravano morfologia sferica. Il potenziale zeta delle nanoparticelle era negativo 20,1 e 29,9 millivolt, indicando che le nanoparticelle erano altamente stabili. Il saggio di assorbimento cellulare JEG3 ha indicato i DNP pICSA legati alle cellule JEG3 entro 30 minuti.Pertanto, il pICSA BP è stato coniugato in modo efficiente alla superficie. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di sonicare la miscela per uno o due minuti prima di aggiungere PLGA. Seguendo questa procedura, i nostri metodi come il test HPLC possono essere eseguiti al fine di determinare l'efficienza coniugazione in modo più accurato.Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha spianato la strada ai ricercatori nel campo della biologia riproduttiva per esplorare la possibilità di un trattamento mirato alla placenta nelle complicanze della gravidanza.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A (plCSA)-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NF&#954;B Activity and Breast Cancer Stem Cells

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NFÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚ÂºB Activity and Breast Cancer Stem Cells

Sintesi e caratterizzazione di un profarmaco Aspirina-fumarato che inibisce NFκB attività e della mammella cellule tumorali staminali

Inflammation is a cancer hallmark that underlies cancer incidence and promotion, and eventually progression to metastasis. Therefore, adding an ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Anticancro Efficacia della terapia fotodinamica con cancro del polmone con targeting nanoparticelle

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

Amplificazione dell'obiettivo delle cellule pre-arricchimento e intero genoma per singola cella a valle caratterizzazione

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics

Caratterizzazione delle estensioni della membrana cellulare e studiando i loro ruoli nella dinamica di adesione delle cellule cancro

The cell membrane&#39;s extension repertoire modulates various malignant behaviors of cancer cells, including their adhesive and migratory potentials. The ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

Caratterizzazione delle cellule del tumore usando un filo medico per l'acquisizione di cellule tumorali circolanti: un approccio 3D basato sul DNA pesce e immunofluorescenza

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

Isolamento e caratterizzazione delle cellule che invitano il tumore dalle cellule che hanno invitato il tumore da Sarcoma Xenotrapianto derivato dal paziente

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Arricchimento e caratterizzazione dei tumore immuni e Non immuni microambienti in tumori murini sottocutanei stabiliti

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

Istituzione e caratterizzazione degli spheroeroidi del tumore intestinale piccolo intestinale

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models

Isolamento e caratterizzazione dei modelli organoidi dell'adenocarcinoma duttale pancreatico derivato dal paziente

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is amongst the most lethal malignancies. Recently, next-generation organoid culture methods enabling the ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Generazione di tumori pancreatici ortotopici e caratterizzazione ex vivo della citotossicità delle cellule T infiltranti di tumore

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...