Name: synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles
Uploaded: 2018-09-18T14:00:00
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広東省 (2016A030313178) の自然科学基礎国立自然科学財団 (81571445 と 81771617) と中国 (2016YFC1000402) の開発プログラム キー研究からへの補助金によってこの作品のサポートだったX. f. と、深セン基本研究基金 (JCYJ20170413165233512) x. f.

1. ストック溶液の調製
<ol><li>100 ml の超純水水エタノール 4 mL を希釈して 4% エタノール水溶液を準備します。4 ° C でソリューションを格納します。 注: 超純水は細菌、微粒子、イオン、核酸などの汚染物質がなく水として定義されます。純水は、ターゲット抵抗低い陰イオン性汚染を意味するまで 18.2 mΩ·cm の水の浄化システムから得られました。</li>
	<li>4% のエタノール水溶液 20 mL に大...

<ol>
	<li>Davis, M. E., Shin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+therapeutics:+an+emerging+treatment+modality+for+cancer.">Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771 (2008).</li><li>Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+applications+in+cancer.">Nanotechnology applications in cancer.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).</li><li>Jabir, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+on+the+current+status+of+cancer+nanomedicines.">An overview on the current status of cancer nanomedicines.</a> Current Medical Research and Opinion. 34 (5), 911-921 (2018).</li><li>Pillai, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicines+for+Cancer+Therapy:+An+Update+of+FDA+Approved+and+Those+under+Various+Stages+of+Development.">Nanomedicines for Cancer Therapy: An Update of FDA Approved and Those under Various Stages of Development.</a> SOJ Pharmacy &amp; Pharmaceutical Sciences. 1 (2), 1-13 (2014).</li><li>Marta, T., Luca, S., Serena, M., Luisa, F., Fabio, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+role+of+nanotechnology+in+diagnosis+and+treatment+of+metastatic+breast+cancer?+Promising+Scenarios+for+the+Near+Future.">What is the role of nanotechnology in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer? Promising Scenarios for the Near Future.</a> Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458 (2016).</li><li>Dasari, S., Tchounwou, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisplatin+in+cancer+therapy:+molecular+mechanisms+of+action.">Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action.</a> European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).</li><li>Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+in+cancer+therapy+and+diagnosis.">Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).</li><li>Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. 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H., Aryal, S., Hu, C. -. M. J., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quick+synthesis+of+lipid&#8722;+polymer+hybrid+nanoparticles+with+low+polydispersity+using+a+single-step+sonication+method.">Quick synthesis of lipid&#8722; polymer hybrid nanoparticles with low polydispersity using a single-step sonication method.</a> Langmuir. 26 (22), 16958-16962 (2010).</li><li>Gu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folate-modified,+indocyanine+green-loaded+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+targeted+delivery+of+cisplatin.">Folate-modified, indocyanine green-loaded lipid-polymer hybrid nanoparticles for targeted delivery of cisplatin.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 28 (7), 690-702 (2017).</li><li>Mandal, B., Mittal, N. K., Balabathula, P., Thoma, L. A., Wood, G. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFRvIII+Antibody-Conjugated+Iron+Oxide+Nanoparticles+for+Magnetic+Resonance+Imaging-Guided+Convection-Enhanced+Delivery+and+Targeted+Therapy+of+Glioblastoma.">EGFRvIII Antibody-Conjugated Iron Oxide Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging-Guided Convection-Enhanced Delivery and Targeted Therapy of Glioblastoma.</a> Cancer Research. 70 (15), 6303-6312 (2010).</li><li>Sadhukha, T., Wiedmann, T. S., Panyam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalable+magnetic+nanoparticles+for+targeted+hyperthermia+in+lung+cancer+therapy.">Inhalable magnetic nanoparticles for targeted hyperthermia in lung cancer therapy.</a> Biomaterials. 34 (21), 5163-5171 (2013).</li><li>Jennings, M., Nicknish, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+a+site+of+intermolecular+cross-linking+in+human+red+blood+cell+band+3+protein.">Localization of a site of intermolecular cross-linking in human red blood cell band 3 protein.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (9), 5472-5479 (1985).</li><li>Staros, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-hydroxysulfosuccinimide+active+esters:+bis(N-hydroxysulfosuccinimide)+esters+of+two+dicarboxylic+acids+are+hydrophilic,+membrane-impermeant,+protein+cross-linkers.">N-hydroxysulfosuccinimide active esters: bis(N-hydroxysulfosuccinimide) esters of two dicarboxylic acids are hydrophilic, membrane-impermeant, protein cross-linkers.</a> Biochemistry. 21 (17), 3950-3955 (1982).</li><li>Valencia, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+assembly+of+homogenous+lipid&#8722;+polymeric+and+lipid&#8722;+quantum+dot+nanoparticles+enabled+by+microfluidic+rapid+mixing.">Single-step assembly of homogenous lipid&#8722; polymeric and lipid&#8722; quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing.</a> ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).</li><li>Altintas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanobody-albumin+nanoparticles+(NANAPs)+for+the+delivery+of+a+multikinase+inhibitor+17864+to+EGFR+overexpressing+tumor+cells.">Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells.</a> Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).</li><li>Maya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cetuximab+conjugated+O-carboxymethyl+chitosan+nanoparticles+for+targeting+EGFR+overexpressing+cancer+cells.">Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells.</a> Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).</li><li>Deepagan, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+targeted+imaging+and+delivery+of+camptothecin+using+cetuximab-conjugated+multifunctional+PLGA-ZnS+nanoparticles.">In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles.</a> Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).</li><li>Totaro, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+investigation+of+EDC/sNHS-mediated+bioconjugation+reactions+for+carboxylated+peptide+substrates.">Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates.</a> Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).</li><li>Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+cross-linking+and+mass+spectrometry+to+map+three-dimensional+protein+structures+and+protein-protein+interactions.">Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions.</a> Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LDLR-mediated+peptide-22-conjugated+nanoparticles+for+dual-targeting+therapy+of+brain+glioma.">LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma.</a> Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).</li><li>Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-penetrating+TAT+peptide+in+drug+delivery+systems:+proteolytic+stability+requirements.">Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements.</a> Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).</li><li>Chu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+ocular+delivery+to+laser-induced+choroidal+neovascularization+by+dual+internalizing+RGD+and+TAT+peptide-modified+nanoparticles.">Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles.</a> International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).</li></ol>

このプロトコルは、plCSA BP 共役脂質高分子ナノ粒子を合成するため効率的かつ再現性のある方法を提供します。脂質高分子ナノ粒子を準備するシングル ステップ超音波法は高速、再現性と暖房、ボルテックス、または蒸発を伴う典型的な nanoprecipitation メソッドとは異なる。したがって、開発した方法は、合成時間を著しく短縮します。さらに、このプロトコルで使われる EDC/NHS ナノ診断は?...

効果的ながん治療法は減り、最小限の全身毒性を有する腫瘍をなくします。したがって、ターゲットに選択的な腫瘍は、成功した治療法を探索するための鍵です。ナノ粒子がん治療の有望な機会を提供する、異なる官能基を持つ分子薬の有効性を強化し、関連する副作用1,2削減します。さらに、ナノ粒子系は主にパッシブとアクティブの目標ターゲット腫瘍3を利用します。
受動的ターゲティング ナノ粒子と高められた透磁率および腫瘍細胞に到達する保持 (EPR) 効果の生得的な性質を悪用します。カチオン性リポソームは、臨床応用4,5,6腫瘍に様々 な抗がん剤を提供する正常に使用されています。潜在的な効果的な癌治療効果にもかかわらず腫瘍領域と正常組織と腫瘍細胞を区別することができない低薬物濃度でナノ粒子の受動ターゲット7の 2 つの主要な制限は。
アクティブなターゲット戦略から抗原抗体、リガンド受容体、特に腫瘍8に薬を提供する他の分子認識の相互作用を活用します。グリコサミノグリカン胎盤コンドロイチン硫酸 (plCSA) は広く、ほとんどのがん細胞や胎盤トロホブ表されます。また、マラリアの蛋白質 VAR2CSA はすることができます具体的に plCSA9,10にバインドします。したがって、VAR2CSA は、ひと癌細胞をターゲットとするためのツールをすることができます。しかしときに、VAR2CSA のナノ粒子に共役は、実物大の蛋白質は腫瘍細胞へのナノ粒子の浸透を制限があります。最近、我々 はマラリア タンパク質 VAR2CSA 由来 plCSA 結合ペプチド (plCSA-BP) を発見しました。plCSA 共役 BP 脂質高分子ナノ粒子は急速に絨毛癌細胞と大幅に増加したドキソルビシン (DOX) 抗癌活性生体内で11に結合これらの粒子は具体的にも胎盤トロホブに接着し、胎盤12への薬物の対象となる配信のためのツールとして役立つことができます。
脂質高分子ナノ粒子はから成っている脂質単分子膜シェルと疎水性高分子コア、ドラッグデリバリーのための新しいキャリアを表します。これらのナノ粒子は、リポソームと制御可能なナノ粒子のサイズ、高い生体適合性、持続的な薬物放出、高い薬剤積載効率 (ル)、安定性に優れる13などの高分子ナノキャリアの利点を結合します。この作品は、脂質高分子ナノ粒子を合成するのにシングル ステップ超音波処理法を使用しました。このメソッドは、高速、便利でスケール アップに適した、脂質高分子ナノ粒子を準備する私たちグループ11,14等で広く使用されています15,16,17,18.
1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) カルボジイミド塩酸塩 (EDC) はアミンとカルボン酸の19を含む生体分子の活用の架橋剤として使用される人気のあるカルボジイミド。EDC は、に加えて N hydroxysulfosuccinimide (NHS) は表面およびナノ粒子抱合反応20,21の最も一般的な活用試薬です。NHS は副反応の数を削減でき、安定性を高めるし、収量エステル中間体22,23。
ここでは、plCSA をターゲットとした脂質高分子ナノ粒子を合成するためのプロトコルについて述べる。まず、DOX ロード脂質高分子ナノ粒子 (DNPs) のシングル ステップ超音波合成を説明します。さらに、plCSA BP 共役脂質高分子ナノ粒子を生成するための EDC/NHS ナノ診断技術を導入します。このナノ診断手法は、他の抗体とナノ粒子にペプチド共役に使用もできます。最後に、我々 は plCSA をターゲットとした脂質高分子ナノ粒子を特徴付けるために使用プロパティと体外の物理化学的アッセイをについて説明します。我々 は、これらの plCSA をターゲットとした脂質高分子ナノ粒子がほとんどの人間のがん、胎盤疾患を治療するために胎盤にペイロードのターゲットを絞った配信に薬のターゲットを絞った配信のための効果的なシステムを構成する可能性が信じています。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>plCSA peptide</td>
			<td>Shanghai GL Biochem</td>
			<td>573518</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical</td>
			<td>10009218</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean lecithin</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>441601</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSPE-PEG-COOH</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>880125</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>JKChemical</td>
			<td>113424</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1008621</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLGA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>719897</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic processor</td>
			<td>Sonics</td>
			<td>VCX130</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge filter (MWCO 10 kDa)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC801024</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>3-18KS</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-[morpholino]ethanesulfonic acid(MES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3671</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3450</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-hydroxysuccinimide (NHS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56480</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis bags</td>
			<td>Spectrum</td>
			<td>132592T</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30028.01</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>S-025</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>for various applications</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m sterile syringe filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033RB</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml syringe, polypropylene</td>
			<td>BD</td>
			<td>328421</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern Zetasizer</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>Nano ZS</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM grid</td>
			<td>EMCN</td>
			<td>BZ10024a</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-VIS spectrometer</td>
			<td>Leagene</td>
			<td>DZ0035</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transmission 
			electron microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>JEM-100CXII</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent A</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23228</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent B</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23224</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Multiskan&#8482; GO</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3513</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEG3 cell</td>
			<td>Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu195</td>
			<td>Human placenta</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30272.01</td>
			<td>phenol red-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>10100</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15070063</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>CKK53</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1372021</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A606584</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Life</td>
			<td>P36961</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles

効果的ながん治療法は減り、最小限の全身毒性を有する腫瘍をなくします。積極的にターゲットのナノ粒子は、ガン治療の有望なアプローチを提供しています。グリコサミノグリカン胎盤コンドロイチン硫酸 (plCSA) は、がん細胞と胎盤トロホブと VAR2CSA が plCSA にバインドできます特にマラリアの蛋白質の広い範囲で表されます。マラリア蛋白質 VAR2CSA から派生した報告された胎盤コンドロイチン硫酸 A 結合ペプチド (plCSA BP)、具体的にも、がん細胞と胎盤トロホブ plCSA にバインドできます。したがって、ひと腫瘍および胎盤トロホブへの標的化薬物送達のツールとして plCSA BP 共役系ナノ粒子を使用可能性があります。このプロトコルを装荷したドキソルビシン (plCSA DNPs); plCSA BP 共役脂質高分子ナノ粒子を合成する手法について述べるメソッドは、単一の超音波処理ステップやナノ診断技術で構成されます。さらに、plCSA-DNPs 胎盤絨毛癌 (JEG3) 細胞による細胞内取り込み、物理化学的性質などの特性評価法のいくつかを説明します。

このプロトコルでは、PLGA、DSPE-ペグ-COOH、大豆レシチン、代表的なポリマー、脂質-ペグ-COOH 共役と脂質がそれぞれ。PlCSA をターゲットとした脂質高分子ナノ粒子を介してシングル ステップ超音波処理法の EDC/NHS 法合成は図 1に示します。まず、超音波照射条件下で大豆レシチン、PLGA と DSPE-ペグ-COOH フォーム コア-シェルに自己組み立てる...

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Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

ここでは、胎盤のコンドロイチン硫酸 A 結合ペプチド (plCSA BP) の合成のためのプロトコルを提案する-共役脂質高分子ナノ粒子を介してシングル ステップ超音波処理とナノ診断技術。これらの粒子は、最もひと腫瘍と癌、胎盤疾患を治療するために胎盤トロホブに治療のターゲットを絞った配信するための新しいツールを構成します。

胎盤のコンドロイチンの合成とキャラクタリゼーション (plCSA) の硫酸塩 - 脂質のターゲット設定 - 高分子ナノ粒子

An effective cancer therapeutic method reduces and eliminates tumors with minimal systemic toxicity. Actively targeting nanoparticles offer a promising ...

この方法は、ヒト癌および胎盤細胞芽細胞への治療の標的送達など、薬物送達分野の重要な質問に答えるのに役立つ。この技術の主な利点は、他の粒子に結合したペプチドを合成する簡便で再現性の高い方法である点である。まず、滅菌10ミリリットル遠心管に4%エタノールの3ミリメートルを加えます。次に、90マイクログラムの大豆レシチンストック溶液、210マイクログラムのDSPE-PEG-カルボン酸ストック溶液、および750マイクログラムのDOXストック溶液を添加します。PLGAストック溶液の2ミリグラムをピペットに1ミリリットルのシリンジを使用してください。遠心管を超音波処理機の氷浴に入れ、2分間超音波処理します。次に、PLGAストック溶液を遠心管に滴下して加えます。DMPを精製するには、遠心分離フィルターを使用して溶液を0.1モルMESバッファーで洗浄します。次いで、摂氏4度で3分間1000Gで溶液を遠心する。エステル活性化を開始するには, DMP の 1 ミリリットルに EDC の 0.4 ミリグラムを追加します。.その後、反応にNHSの0.24ミリグラムを追加します。次いで、暗闇の中で室温で1時間まで反応を起こさせます。その後、反応成分を十分に混ぜ合わせ、シェーカーに反応を入れます。アミン反応を開始するには、PBSを使用してバッファー pH を 7.2 から 7.5 に増やします。次いで、反応溶液に0.5ミリグラムのピチカ標的ペプチドを加える。溶液をよく混ぜて、シェーカーの上に置きます。その後、暗闇の中で一晩摂氏4度で反応を進行させます。翌日、コンジュゲート溶液で透析袋を充填します。暗所で24時間室温でPBSバッファーでピクスカDMPを精製します。テキストプロトコルに従って細胞を培養した後、メディアを取り除き、FBSとPICSA DMPまたはDMPを5%の新鮮なコールドメディア1ミリリットル追加します。次に、細胞とナノ粒子混合物を摂氏4度で1時間インキュベートする。この後、培地を取り出し、PBSで細胞を3回洗浄します。その後、新鮮な培地を1ミリリットル加え、30分間摂氏37度で培養します。この後、培地を取り出し、PBSで細胞を3回洗浄します。その後、2ミリリットルの冷たい、4%のPFAを加え、室温で10分間インキュベートします。PFAを取り出し、2ミリリットルのPBSで細胞を洗います。次に、核染色用のDAPIを用いてPBSを1ミリリットル加える。混合物を室温で10分間インキュベートする。最後に、取り付け媒体を加え、蛍光顕微鏡で蛍光を画像化します。このプロトコルを使用して、DMP は正常に準備され、PICSA BP に結合されました。結合後、一次DMPの直径は約109ナノメートルに増加した。DDNPとピクスカDMPのTEM画像は、粒子が十分に分散し、一般的に球面形態を実証していることを示した。ナノ粒子のゼータ電位は20.1ミリボルトと29.9ミリボルトの陰性であり、ナノ粒子が非常に安定していたことを示している。JEG3細胞取り込みアッセイは、30分以内に株中のジクサのDMPがJEG3細胞に結合することを示した。そのため、ピクスABPを表面に効率的に共役させた。この手順を試みている間、PLGAを追加する前に1〜2分間混合物を超音波処理することを忘れないでください。この手順に従って、HPLCアッセイのような我々の方法は、より正確に活用効率を決定するために行うことができる。その開発後、この技術は、生殖生物学の分野の研究者が妊娠合併症における胎盤標的治療の可能性を探求する道を開いた。

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A (plCSA)-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NF&#954;B Activity and Breast Cancer Stem Cells

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NFκB活性および乳癌幹細胞を阻害するアスピリン、フマル酸プロドラッグの合成とキャラクタリゼーション

Inflammation is a cancer hallmark that underlies cancer incidence and promotion, and eventually progression to metastasis. Therefore, adding an ...

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肺癌標的化ナノ粒子と光線力学療法の抗がん効能

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

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Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics

細胞膜の拡張機能と癌細胞の接着の役割を勉強のキャラクタリゼーション

The cell membrane&#39;s extension repertoire modulates various malignant behaviors of cancer cells, including their adhesive and migratory potentials. The ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

循環腫瘍細胞を取り込むため医療用ワイヤー線を用いた腫瘍細胞の特性解析: 蛍光抗体法や DNA 魚に基づく 3 D アプローチ

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

肉腫患者由来異種移植片からの腫瘍始発細胞の単離と特徴付け

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

濃縮と確立された皮下マウス腫瘍における腫瘍免疫と免疫のない微小のキャラクタリゼーション

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

小腸神経内分泌腫瘍スフェロイドの確立と特徴付け

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models

患者由来膵管腺癌オルガノイドモデルの単離と特徴付け

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is amongst the most lethal malignancies. Recently, next-generation organoid culture methods enabling the ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

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直交トピック膵腫瘍の生成と腫瘍浸潤T細胞細胞傷害のEx生体内特性評価

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...