Name: synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles
Uploaded: 2018-09-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles at JoVE.com

Este trabalho foi financiado por doações da pesquisa nacional de chave e programa de desenvolvimento da China (2016YFC1000402), Fundação Nacional de ciências naturais (81571445 e 81771617) e a ciência Natural Fundação da província de Guangdong (2016A030313178) para O fundo de investigação do Basic de Shenzhen (JCYJ20170413165233512) para X.F. e X.F.

1. preparação das soluções estoque
<ol><li>Prepare uma solução aquosa de etanol a 4% diluindo com 100 mL de água ultrapura, 4 mL de etanol absoluto. Armazenar a solução a 4 ° C. Nota: Água ultrapura é definida como a água sem contaminantes, como bactérias, partículas, íons ou nucleases. Água ultrapura foi Obtida de um sistema de purificação de água com uma resistividade de alvo de até 18,2 mΩ·cm, que significa baixa contaminação aniônica.</li>
	<li>Prepare um 1 mg/mL solução de lecitina d...

<ol>
	<li>Davis, M. E., Shin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+therapeutics:+an+emerging+treatment+modality+for+cancer.">Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771 (2008).</li><li>Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+applications+in+cancer.">Nanotechnology applications in cancer.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).</li><li>Jabir, N. 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Promising Scenarios for the Near Future.</a> Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458 (2016).</li><li>Dasari, S., Tchounwou, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisplatin+in+cancer+therapy:+molecular+mechanisms+of+action.">Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action.</a> European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).</li><li>Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+in+cancer+therapy+and+diagnosis.">Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).</li><li>Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+assembly+of+homogenous+lipid&#8722;+polymeric+and+lipid&#8722;+quantum+dot+nanoparticles+enabled+by+microfluidic+rapid+mixing.">Single-step assembly of homogenous lipid&#8722; polymeric and lipid&#8722; quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing.</a> ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).</li><li>Altintas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanobody-albumin+nanoparticles+(NANAPs)+for+the+delivery+of+a+multikinase+inhibitor+17864+to+EGFR+overexpressing+tumor+cells.">Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells.</a> Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).</li><li>Maya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cetuximab+conjugated+O-carboxymethyl+chitosan+nanoparticles+for+targeting+EGFR+overexpressing+cancer+cells.">Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells.</a> Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).</li><li>Deepagan, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+targeted+imaging+and+delivery+of+camptothecin+using+cetuximab-conjugated+multifunctional+PLGA-ZnS+nanoparticles.">In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles.</a> Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).</li><li>Totaro, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+investigation+of+EDC/sNHS-mediated+bioconjugation+reactions+for+carboxylated+peptide+substrates.">Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates.</a> Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).</li><li>Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+cross-linking+and+mass+spectrometry+to+map+three-dimensional+protein+structures+and+protein-protein+interactions.">Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions.</a> Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LDLR-mediated+peptide-22-conjugated+nanoparticles+for+dual-targeting+therapy+of+brain+glioma.">LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma.</a> Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).</li><li>Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-penetrating+TAT+peptide+in+drug+delivery+systems:+proteolytic+stability+requirements.">Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements.</a> Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).</li><li>Chu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+ocular+delivery+to+laser-induced+choroidal+neovascularization+by+dual+internalizing+RGD+and+TAT+peptide-modified+nanoparticles.">Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles.</a> International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).</li></ol>

Este protocolo fornece um método eficiente e reproduzível para a síntese de nanopartículas de lipídios-polímero plCSA-BP-conjugados. O método passo a passo sonication para preparar nanopartículas de lipídios-polímero é rápido, reprodutível e diferente do típico nanoprecipitation métodos que envolvem o aquecimento, evaporação ou num Vortex. Portanto, o método desenvolvido reduz significativamente o tempo de síntese. Além disso, a EDC/NHS bioconjugate utilizado neste protocolo é uma técnica comumente ...

Um método terapêutico eficaz câncer reduz e elimina tumores com mínima toxicidade sistêmica. Daí, tumor seletivo segmentação é a chave para explorar métodos terapêuticos bem sucedidos. Nanopartículas para oferecer uma oportunidade promissora para a terapia do câncer, e moleculares assemblies com diferentes grupos funcionais irão melhorar a eficácia da droga e reduzir os efeitos colaterais associados1,2. Além disso, os sistemas de nanopartículas principalmente utilizam passiva e ativa como alvo para atingir o alvo tumores3.
Segmentação passiva explora as características inatas de nanopartículas e permeabilidade reforçada e efeitos de retenção (EPR) para alcançar as células do tumor. Os lipossomas catiônicos têm sido utilizados com sucesso para entregar várias drogas anticâncer para tumores em aplicações clínicas4,5,6. Apesar do potencial efeito terapêutico eficaz do cancro, uma concentração baixa de drogas na região de tumor e uma incapacidade de distinguir as células do tumor de tecidos normais são duas limitações principais de nanopartículas de direcionamento de passivo-7.
Estratégias de segmentação ativas aproveitam do antígeno-anticorpo, ligante-receptor e outras interações de reconhecimento molecular para entregar drogas especificamente tumores8. O sulfato de condroitina placentária glicosaminoglicano um (plCSA) é amplamente expresso na maioria das células cancerosas e trophoblasts placentárias. Além disso, a proteína da malária VAR2CSA especificamente pode ligar para plCSA9,10. Portanto, o VAR2CSA pode ser uma ferramenta para o direcionamento de células cancerosas humanas. No entanto, quando VAR2CSA é conjugada com nanopartículas, a proteína completo pode limitar a penetração de nanopartículas em células tumorais. Recentemente, descobrimos um peptídeo de vinculação de plCSA (plCSA-BP), derivado da proteína da malária VAR2CSA. nanopartículas de lipídios-polímero plCSA-BP-conjugados rapidamente ligado a células de Coriocarcinoma e doxorrubicina significativamente aumentada (DOX) atividade anticancerígena em vivo11; Estas partículas também especificamente ligados a trophoblasts da placenta e podem servir como uma ferramenta para a entrega de alvo de drogas para a placenta12.
Nanopartículas de lipídios-polímero consistem em um escudo de monocamada lipídico e um núcleo de polímero hidrofóbico e representam uma nova transportadora para a entrega da droga. Essas nanopartículas combinam as vantagens de lipossomas e nanocarriers poliméricos, tais como tamanho controlável de nanopartículas, alta biocompatibilidade, liberação de drogas sustentado, eficiência de carregamento de droga alta (LE) e excelente estabilidade13. Neste trabalho, usamos um método passo a passo sonication para sintetizar lipídios-polímero nanopartículas. Este método é rápido, conveniente e apropriado para aumentar e tem sido amplamente utilizado para preparar as nanopartículas de lipídios-polímero do nosso grupo11,14 e outros15,16,17,18 .
1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) cloridrato de carbodiimida (EDC) é uma popular carbodiimida usada como um agente de reticulação para conjugar biomoléculas contendo aminas e carboxilatos19. Além de EDC, N-hydroxysulfosuccinimide (NHS) é o reagente de conjugação mais comum na superfície e nanopartículas conjugação reações20,21. NHS pode reduzir o número de reações colaterais e melhorar a estabilidade e o rendimento do éster intermediários22,23.
Aqui, descrevemos um protocolo para a síntese de nanopartículas de lipídios-polímero plCSA-alvo. Primeiro, a síntese de etapa única sonication de nanopartículas de lipídios-polímero DOX-carregado (DNPs) é descrita. Então, uma técnica de bioconjugate EDC/NHS para a geração de nanopartículas de lipídios plCSA-BP-conjugados-polímero é introduzida. Esta técnica de bioconjugate também pode ser usada para conjugar outros anticorpos e peptídeos de nanopartículas. Finalmente, descrevemos o ensaio físico-químico de propriedades e in vitro usado para caracterizar as nanopartículas de lipídios-polímero plCSA-alvo. Acreditamos que essas nanopartículas de lipídios-polímero plCSA-alvo poderiam constituir um sistema eficaz para a entrega de alvo de drogas para cânceres mais humanos e a alvo entrega de cargas para a placenta para tratar anormalidades da placenta.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>plCSA peptide</td>
			<td>Shanghai GL Biochem</td>
			<td>573518</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical</td>
			<td>10009218</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean lecithin</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>441601</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSPE-PEG-COOH</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>880125</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>JKChemical</td>
			<td>113424</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1008621</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLGA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>719897</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic processor</td>
			<td>Sonics</td>
			<td>VCX130</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge filter (MWCO 10 kDa)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC801024</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>3-18KS</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-[morpholino]ethanesulfonic acid(MES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3671</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3450</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-hydroxysuccinimide (NHS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56480</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis bags</td>
			<td>Spectrum</td>
			<td>132592T</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30028.01</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>S-025</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>for various applications</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m sterile syringe filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033RB</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml syringe, polypropylene</td>
			<td>BD</td>
			<td>328421</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern Zetasizer</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>Nano ZS</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM grid</td>
			<td>EMCN</td>
			<td>BZ10024a</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-VIS spectrometer</td>
			<td>Leagene</td>
			<td>DZ0035</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transmission 
			electron microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>JEM-100CXII</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent A</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23228</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent B</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23224</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Multiskan&#8482; GO</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3513</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEG3 cell</td>
			<td>Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu195</td>
			<td>Human placenta</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30272.01</td>
			<td>phenol red-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>10100</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15070063</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>CKK53</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1372021</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A606584</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Life</td>
			<td>P36961</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
	</tbody>
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synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles

Um método terapêutico eficaz câncer reduz e elimina tumores com mínima toxicidade sistêmica. Nanopartículas ativamente direcionamento oferecem uma abordagem promissora para a terapia do câncer. O sulfato de condroitina placentária glicosaminoglicano um (plCSA) é expressa em uma ampla gama de células cancerosas e trophoblasts da placenta e proteína da malária que var2csa especificamente pode ligar para plCSA. Um peptídeo de sulfato de condroitina placentária relatado A ligação (plCSA-BP), derivado da malária proteína VAR2CSA, especificamente também pode ligar para plCSA em células cancerosas e trophoblasts placentárias. Daí, nanopartículas plCSA-BP-conjugado podem ser usadas como uma ferramenta para entrega de drogas específicas para cânceres humanos e trophoblasts placentárias. Neste protocolo, descrevemos um método para sintetizar lipídios plCSA-BP-conjugados-polímero nanopartículas carregadas com doxorrubicina (plCSA-DNPs); o método consiste em um único sonication passo e bioconjugate técnicas. Além disso, vários métodos para caracterizar plCSA-DNPs, incluindo a determinação de suas propriedades físico-químicas e celular captação pelas células da placenta Coriocarcinoma (JEG3), são descritos.

Neste protocolo, lecitina de soja, DSPE-PEG-COOH e PLGA são um polímero representativo, lipid-PEG-COOH conjugado e lipídios, respectivamente. A síntese de nanopartículas de lipid-polímero plCSA-alvo através de uma única etapa sonication método e uma técnica EDC/NHS é ilustrada na Figura 1. Primeiro, em condições de sonication, lecitina de soja, PLGA e DSPE-PEG-COOH auto-montagem para shell-núcleo de forma estruturada DNPs. O núcleo con...

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Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

Aqui, apresentamos um protocolo para a síntese de sulfato de condroitina placentária A peptídeo de vinculação (plCSA-BP)-conjugados lipid-polímero nanopartículas através de etapa única sonication e bioconjugate técnicas. Estas partículas constituem uma nova ferramenta para a entrega de alvo da terapêutica de tumores mais humanos e trophoblasts da placenta para tratar cancros e anormalidades da placenta.

Síntese e caracterização de placentária Condroitina sulfato de uma (plCSA) - Targeting Lipid - nanopartículas de polímero

An effective cancer therapeutic method reduces and eliminates tumors with minimal systemic toxicity. Actively targeting nanoparticles offer a promising ...

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo de entrega de medicamentos, como a entrega direcionada de terapêuticas a cânceres humanos e o cistoblasto da placenta. A principal vantagem dessa técnica é que é um método simples e reprodutível para sintetizar peptídeos conjugados em outras partículas. Para começar, adicione três milímetros de 4% de etanol a um tubo de centrífuga de 10 mililitros estéril.Em seguida, adicione 90 microgramas de solução de estoque de lecitina de soja, 210 microgramas de solução de estoque de ácido DSPE-PEG-carboxílica e 750 microgramas de solução de estoque DOX. Use uma seringa de um mililitro para pipetar dois miligramas de solução de estoque PLGA. Coloque o tubo de centrífuga em um banho de gelo em um processador ultrassônico e sonicate por dois minutos.Em seguida, adicione a solução de estoque PLGA em termos de gota no tubo centrífuga. Para purificar os DNPs, use um filtro de centrífuga para lavar a solução em 0,1 amortecedor MES molar. Em seguida, centrifugar a solução a 1000 G por três minutos a quatro graus Celsius.Para iniciar a ativação do éster, adicione 0,4 miligramas de EDC a um mililitro de DNPs. Em seguida, adicione 0,24 miligramas de NHS à reação. Em seguida, permita que a reação ocorra por até uma hora à temperatura ambiente no escuro.Depois disso, misture bem os componentes de reação e coloque a reação em um agitador. Para iniciar a reação de amina, use PBS para aumentar o pH tampão de 7,2 para 7,5. Em seguida, adicione 0,5 miligramas de peptídeo de mira pICSA à solução de reação.Misture bem a solução e coloque-a em um shaker. Então, permita que a reação prossiga a quatro graus Celsius durante a noite no escuro. No dia seguinte, encha sacos de diálise com a solução conjugada.Purifique os DNPs pICSA com tampão PBS à temperatura ambiente por 24 horas no escuro. Depois de esculpir células de acordo com o protocolo de texto, remova a mídia e adicione um mililitro de mídia fresca e fria com 5% de FBS e DNPs pICSA ou DNPs. Em seguida, incubar a célula e a mistura de nanopartículas por uma hora a quatro graus Celsius.Depois disso, remova a mídia e lave as células três vezes com PBS. Em seguida, adicione um mililitro de mídia fresca e incuba as células por 30 minutos a 37 graus Celsius. Depois disso, remova a mídia e lave as células três vezes com PBS.Em seguida, adicione dois mililitros de frio, 4% PFA e incubar a mistura à temperatura ambiente por 10 minutos. Remova o PFA e lave as células com dois mililitros de PBS. Em seguida, adicione um mililitro de PBS com DAPI para coloração de núcleos.Deixe a mistura incubar à temperatura ambiente por 10 minutos. Por fim, adicione o meio de montagem e a imagem da fluorescência com um microscópio de fluorescência. Utilizando este protocolo, os DNPs foram preparados com sucesso e conjugados para pICSA BP. Após a conjugação, o diâmetro dos DNPs primários aumentou para aproximadamente 109 nanômetros.As imagens TEM dos DNPs e dos DNPs pICSA mostraram que as partículas estavam bem dispersas e geralmente demonstravam morfologia esférica. O potencial zeta das nanopartículas foi negativo 20,1 e 29,9 milivolts, indicando que as nanopartículas eram altamente estáveis. O ensaio de captação celular JEG3 indicou os DNPs pICSA ligados às células JEG3 dentro de 30 minutos.Portanto, a pICSA BP foi eficientemente conjugada à superfície. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de sonicar a mistura por um a dois minutos antes de adicionar PLGA. Após este procedimento, nossos métodos como o ensaio HPLC podem ser realizados a fim de determinar a eficiência da conjugação com mais precisão.Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores do campo da biologia reprodutiva explorarem a possibilidade de tratamento direcionado à placenta em complicações da gravidez.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A (plCSA)-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NF&#954;B Activity and Breast Cancer Stem Cells

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NFÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚ÂºB Activity and Breast Cancer Stem Cells

Síntese e Caracterização de um pró-fármaco Aspirina-fumarato que inibe a actividade NFkB e da mama câncer de células estaminais

Inflammation is a cancer hallmark that underlies cancer incidence and promotion, and eventually progression to metastasis. Therefore, adding an ...

Pesquisa do câncer

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Anticancer eficácia da terapia fotodinâmica com Nanopartículas Lung Cancer segmentadas

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

Amplificação de genoma pré-enriquecimento e toda célula alvo para jusante caracterização única célula

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics

Caracterização de extensões da membrana celular e estudando seus papéis na dinâmica de adesão celular câncer

The cell membrane&#39;s extension repertoire modulates various malignant behaviors of cancer cells, including their adhesive and migratory potentials. The ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

Caracterização de células tumorais, usando um fio de médico para a captura de células tumorais de circulação: uma abordagem 3D baseado no DNA peixe e imunofluorescência

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

Isolamento e caracterização de células iniciantes tumorais de sarcoma de xenoenxertos derivados do paciente

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Enriquecimento e caracterização do microambiente que imune e não imune Tumor em tumores murino subcutâneos estabelecidas

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

Estabelecimento e caracterização de spheroids do tumor neuroendócrino das entranhas pequenas

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models

Isolamento e caracterização de modelos organóides de adenocarcinoma ductatopansa pâncreas derivados do paciente

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is amongst the most lethal malignancies. Recently, next-generation organoid culture methods enabling the ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Geração de tumores pancreáticos ortotópicos e caracterização ex vivo da citotoxicidade de células T infiltrada tumoral

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...