Name: synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles
Uploaded: 2018-09-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles at JoVE.com

Bu eser hibe tarafından ulusal anahtar araştırma ve geliştirme programı of China (2016YFC1000402), Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81571445 ve 81771617) ve Guangdong Eyaleti doğal Bilim Vakfı (2016A030313178) için desteklenen X.F. ve X.F. için Shenzhen temel araştırma fonu (JCYJ20170413165233512)

1. stok çözümleri hazırlanması
<ol><li>%4 etanol sulu bir çözüm mutlak etanol 4 mL 100 mL Ultrasaf Su ile sulandrarak hazırlayın. Çözüm 4 ° C'de depolayın Not: Ultrasaf Su kirleticileri bakteri, partiküller, iyonlar veya enzimler gibi susuz olarak tanımlanır. Ultrasaf Su bir su arıtma sisteminden düşük anyonik kirlenme anlamına gelir kadar 18,2 mΩ·cm bir hedef direnci ile elde edildi.</li>
	<li>1 mg/mL Soya lesitin hisse senedi çözüm Soya lesitin 20 mL % 4 etanol sulu çözeltisi içinde ...

<ol>
	<li>Davis, M. E., Shin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+therapeutics:+an+emerging+treatment+modality+for+cancer.">Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771 (2008).</li><li>Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+applications+in+cancer.">Nanotechnology applications in cancer.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).</li><li>Jabir, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+on+the+current+status+of+cancer+nanomedicines.">An overview on the current status of cancer nanomedicines.</a> Current Medical Research and Opinion. 34 (5), 911-921 (2018).</li><li>Pillai, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicines+for+Cancer+Therapy:+An+Update+of+FDA+Approved+and+Those+under+Various+Stages+of+Development.">Nanomedicines for Cancer Therapy: An Update of FDA Approved and Those under Various Stages of Development.</a> SOJ Pharmacy &amp; Pharmaceutical Sciences. 1 (2), 1-13 (2014).</li><li>Marta, T., Luca, S., Serena, M., Luisa, F., Fabio, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+role+of+nanotechnology+in+diagnosis+and+treatment+of+metastatic+breast+cancer?+Promising+Scenarios+for+the+Near+Future.">What is the role of nanotechnology in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer? Promising Scenarios for the Near Future.</a> Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458 (2016).</li><li>Dasari, S., Tchounwou, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisplatin+in+cancer+therapy:+molecular+mechanisms+of+action.">Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action.</a> European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).</li><li>Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+in+cancer+therapy+and+diagnosis.">Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).</li><li>Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+current+nanoparticle+and+targeting+moieties+for+the+delivery+of+cancer+therapeutics.">A review of current nanoparticle and targeting moieties for the delivery of cancer therapeutics.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 48 (3), 416-427 (2013).</li><li>Salanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+human+cancer+by+a+glycosaminoglycan+binding+malaria+protein.">Targeting human cancer by a glycosaminoglycan binding malaria protein.</a> Cancer Cell. 28 (4), 500-514 (2015).</li><li>Seiler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Oncofetal+Glycosaminoglycan+Modification+Provides+Therapeutic+Access+to+Cisplatin-resistant+Bladder+Cancer.">An Oncofetal Glycosaminoglycan Modification Provides Therapeutic Access to Cisplatin-resistant Bladder Cancer.</a> European Urology. 72 (1), 142-150 (2017).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+delivery+of+doxorubicin+by+CSA-binding+nanoparticles+for+choriocarcinoma+treatment.">Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment.</a> Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placenta-specific+drug+delivery+by+trophoblast-targeted+nanoparticles+in+mice.">Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice.</a> Theranostics. 26 (2), 130-137 (2018).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembled+lipid--polymer+hybrid+nanoparticles:+a+robust+drug+delivery+platform.">Self-assembled lipid--polymer hybrid nanoparticles: a robust drug delivery platform.</a> ACS Nano. 2 (8), 1696-1702 (2008).</li><li>Zheng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+assembly+of+DOX/ICG+loaded+lipid-polymer+nanoparticles+for+highly+effective+chemo-photothermal+combination+therapy.">Single-step assembly of DOX/ICG loaded lipid-polymer nanoparticles for highly effective chemo-photothermal combination therapy.</a> ACS. 7 (3), 2056-2067 (2013).</li><li>Fang, R. H., Aryal, S., Hu, C. -. M. J., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quick+synthesis+of+lipid&#8722;+polymer+hybrid+nanoparticles+with+low+polydispersity+using+a+single-step+sonication+method.">Quick synthesis of lipid&#8722; polymer hybrid nanoparticles with low polydispersity using a single-step sonication method.</a> Langmuir. 26 (22), 16958-16962 (2010).</li><li>Gu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folate-modified,+indocyanine+green-loaded+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+targeted+delivery+of+cisplatin.">Folate-modified, indocyanine green-loaded lipid-polymer hybrid nanoparticles for targeted delivery of cisplatin.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 28 (7), 690-702 (2017).</li><li>Mandal, B., Mittal, N. K., Balabathula, P., Thoma, L. A., Wood, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+in+vitro+evaluation+of+core-shell+type+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+the+delivery+of+erlotinib+in+non-small+cell+lung+cancer.">Development and in vitro evaluation of core-shell type lipid-polymer hybrid nanoparticles for the delivery of erlotinib in non-small cell lung cancer.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 81, 162-171 (2016).</li><li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+legumain-recognition+and+NIR+controlled+released+of+cisplatin-indocyanine+nanosphere+against+gastric+carcinoma.">Enhanced legumain-recognition and NIR controlled released of cisplatin-indocyanine nanosphere against gastric carcinoma.</a> European Journal of Pharmacology. 794, 184-192 (2017).</li><li>Grabarek, Z., Gergely, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zero-length+crosslinking+procedure+with+the+use+of+active+esters.">Zero-length crosslinking procedure with the use of active esters.</a> Analytical Biochemistry. 185 (1), 131-135 (1990).</li><li>Hadjipanayis, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFRvIII+Antibody-Conjugated+Iron+Oxide+Nanoparticles+for+Magnetic+Resonance+Imaging-Guided+Convection-Enhanced+Delivery+and+Targeted+Therapy+of+Glioblastoma.">EGFRvIII Antibody-Conjugated Iron Oxide Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging-Guided Convection-Enhanced Delivery and Targeted Therapy of Glioblastoma.</a> Cancer Research. 70 (15), 6303-6312 (2010).</li><li>Sadhukha, T., Wiedmann, T. S., Panyam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalable+magnetic+nanoparticles+for+targeted+hyperthermia+in+lung+cancer+therapy.">Inhalable magnetic nanoparticles for targeted hyperthermia in lung cancer therapy.</a> Biomaterials. 34 (21), 5163-5171 (2013).</li><li>Jennings, M., Nicknish, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+a+site+of+intermolecular+cross-linking+in+human+red+blood+cell+band+3+protein.">Localization of a site of intermolecular cross-linking in human red blood cell band 3 protein.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (9), 5472-5479 (1985).</li><li>Staros, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-hydroxysulfosuccinimide+active+esters:+bis(N-hydroxysulfosuccinimide)+esters+of+two+dicarboxylic+acids+are+hydrophilic,+membrane-impermeant,+protein+cross-linkers.">N-hydroxysulfosuccinimide active esters: bis(N-hydroxysulfosuccinimide) esters of two dicarboxylic acids are hydrophilic, membrane-impermeant, protein cross-linkers.</a> Biochemistry. 21 (17), 3950-3955 (1982).</li><li>Valencia, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+assembly+of+homogenous+lipid&#8722;+polymeric+and+lipid&#8722;+quantum+dot+nanoparticles+enabled+by+microfluidic+rapid+mixing.">Single-step assembly of homogenous lipid&#8722; polymeric and lipid&#8722; quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing.</a> ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).</li><li>Altintas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanobody-albumin+nanoparticles+(NANAPs)+for+the+delivery+of+a+multikinase+inhibitor+17864+to+EGFR+overexpressing+tumor+cells.">Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells.</a> Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).</li><li>Maya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cetuximab+conjugated+O-carboxymethyl+chitosan+nanoparticles+for+targeting+EGFR+overexpressing+cancer+cells.">Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells.</a> Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).</li><li>Deepagan, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+targeted+imaging+and+delivery+of+camptothecin+using+cetuximab-conjugated+multifunctional+PLGA-ZnS+nanoparticles.">In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles.</a> Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).</li><li>Totaro, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+investigation+of+EDC/sNHS-mediated+bioconjugation+reactions+for+carboxylated+peptide+substrates.">Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates.</a> Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).</li><li>Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+cross-linking+and+mass+spectrometry+to+map+three-dimensional+protein+structures+and+protein-protein+interactions.">Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions.</a> Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LDLR-mediated+peptide-22-conjugated+nanoparticles+for+dual-targeting+therapy+of+brain+glioma.">LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma.</a> Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).</li><li>Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-penetrating+TAT+peptide+in+drug+delivery+systems:+proteolytic+stability+requirements.">Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements.</a> Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).</li><li>Chu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+ocular+delivery+to+laser-induced+choroidal+neovascularization+by+dual+internalizing+RGD+and+TAT+peptide-modified+nanoparticles.">Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles.</a> International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).</li></ol>

Bu iletişim kuralı plCSA BP Birleşik lipid-polimer nano tanecikleri sentezleme için verimli ve tekrarlanabilir bir yöntem sağlar. Lipid-polimer nano tanecikleri hazırlamak için tek adım sonication Yöntem hızlı, tekrarlanabilir ve Isıtma, vortexing veya buharlaşma içeren tipik nanoprecipitation yöntemlerden farklı değildir. Bu nedenle, Gelişmiş Yöntem sentez zaman önemli ölçüde azaltır. Buna ek olarak, bu protokol için kullanılan EDC/NHS bioconjugate peptidler ve nano tanecikleri antikorlar çe...

Bir etkili kanser tedavi yöntemi azaltır ve tümörleri ile en az sistemik toksisite ortadan kaldırır. Bu nedenle, başarılı tedavi yöntemleri keşfetmek için anahtar Seçici tümör hedefliyor. Nano tanecikleri kanser tedavisi için umut verici bir fırsat sunuyoruz ve moleküler derlemeler farklı fonksiyonel grubu ile ilaç etkinliğini artırmak ve azaltmak ilişkili yan etkileri1,2. Ayrıca, nanopartikül sistemleri esas hedef tümörler3ulaşmak için pasif ve aktif hedefleme yararlanmak.
Pasif hedefleme nano tanecikleri ve gelişmiş geçirgenliği ve tümör hücreleri ulaşmak için saklama (EPR) etkileri doğuştan gelen özellikleri patlatır. Katyonik lipozomlar başarıyla çeşitli antikanser ilaçlar tümör klinik uygulamaları4,5,6' teslim etmek için kullanılmaktadır. Potansiyel etkili kanser tedavi edici etkiye rağmen düşük ilaç konsantrasyonu tümör bölgesi ve tümör hücrelerinin normal dokuların ayırt etmek için bir yetersizlik pasif hedefleme nano tanecikleri7' nin iki önemli sınırlamaları vardır.
Etkin hedefleme stratejileri antijen-antikor, ligand-reseptör ve özellikle uyuşturucu tümörler8' e teslim etmek için diğer moleküler tanıma etkileşimleri yararlanın. Glikozaminoglikan plasental kondroitin sülfat (plCSA) genel olarak çoğu kanser hücreleri ve plasental trophoblasts ifade edilir. Ayrıca, sıtma protein VAR2CSA özellikle plCSA9,10' a bağlayabilirsiniz. Bu nedenle, VAR2CSA insan kanser hücrelerinin hedefleme için bir araç olabilir. Ancak, VAR2CSA için nano tanecikleri Birleşik zaman, tam uzunlukta protein nano tanecikleri penetrasyon tümör hücreleri içine sınırlayabilir. Son zamanlarda, biz Sıtma protein VAR2CSA türetilmiş bir plCSA bağlama peptid (plCSA-BP), keşfetti. plCSA-BP-Birleşik lipid-polimer nano tanecikleri hızla choriocarcinoma hücreleri ve önemli ölçüde artış doksorubisin (DOX) antikanser aktivite vivo içinde11yapıştırılmış; Bu parçacıklar da özellikle plasental trophoblasts gümrüklü ve uyuşturucu hedeflenen teslimat plasenta12için bir araç olarak hizmet verebilir.
Lipid-polimer nano tanecikleri lipid monolayer kabuk ve hidrofobik bir polimer çekirdek oluşur ve ilaç dağıtım için yeni bir taşıyıcı temsil eder. Bu nano tanecikleri lipozomlar ve kontrol edilebilir nanopartikül boyutu, yüksek biyouyumluluk, sürekli uyuşturucu serbest, yüksek ilaç yükleme verimliliği (LE) ve mükemmel istikrar13gibi polimer nanocarriers avantajlarını birleştirir. Bu çalışmada, biz bir tek adım sonication lipid-polimer nano tanecikleri sentezlemek için kullanılan yöntem. Bu yöntem hızlı, pratik ve ölçek-up için uygundur ve yaygın lipid-polimer nano tanecikleri hazırlamak için bizim grup11,14 ve diğerleri tarafından kullanılmıştır15,16,17,18 .
1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hidroklorid (EDC) crosslinking Aracısı içeren aminler ve carboxylates19biomolecules conjugating için kullanılan popüler bir carbodiimide var. EDC ek olarak, en yaygın konjugasyon reaktif yüzey ve nanoparçacık konjugasyon reaksiyonları20,21N-hydroxysulfosuccinimide (NHS) olduğunu. NHS yan tepkileri azaltmak ve istikrarı geliştirmek ve ester verimini22,23ara ürün.
Burada, plCSA hedefli lipid-polimer nano tanecikleri sentezleme için bir protokol açıklayın. İlk olarak, DOX yüklü lipid-polimer nano tanecikleri (DNPs) tek adım sonication sentezi açıklanmıştır. Sonra plCSA-BP-Birleşik lipid-polimer nano tanecikleri üretmek için EDC/NHS bioconjugate tekniği tanıttı. Bu bioconjugate teknik diğer antikorlar ve peptidler nano tanecikleri için çekimlerine de kullanılabilir. Son olarak, biz plCSA hedefli lipid-polimer nano tanecikleri karakterize etmek için kullanılan Fizikokimyasal özellikleri ve vitro tahlil tanımlamak. Bizce bu plCSA hedefli lipid-polimer nano tanecikleri en insani kanser ve plasental bozuklukları tedavi plasenta payloads hedeflenen teslimini ilaçlara hedeflenen teslimat için etkili bir sistem teşkil edebilir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>plCSA peptide</td>
			<td>Shanghai GL Biochem</td>
			<td>573518</td>
			<td>for peptide synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical</td>
			<td>10009218</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean lecithin</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>441601</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSPE-PEG-COOH</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>880125</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>JKChemical</td>
			<td>113424</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1008621</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLGA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>719897</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic processor</td>
			<td>Sonics</td>
			<td>VCX130</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge filter (MWCO 10 kDa)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC801024</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>3-18KS</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-[morpholino]ethanesulfonic acid(MES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3671</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>3450</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-hydroxysuccinimide (NHS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56480</td>
			<td>for peptide conjugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis bags</td>
			<td>Spectrum</td>
			<td>132592T</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30028.01</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>S-025</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>for various applications</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m sterile syringe filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033RB</td>
			<td>for nanoparticles purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml syringe, polypropylene</td>
			<td>BD</td>
			<td>328421</td>
			<td>for nanoparticles synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern Zetasizer</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>Nano ZS</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM grid</td>
			<td>EMCN</td>
			<td>BZ10024a</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-VIS spectrometer</td>
			<td>Leagene</td>
			<td>DZ0035</td>
			<td>for TEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transmission 
			electron microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>JEM-100CXII</td>
			<td>for particle size analyer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent A</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23228</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA reagent B</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23224</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Multiskan&#8482; GO</td>
			<td>for BCA assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3513</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEG3 cell</td>
			<td>Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu195</td>
			<td>Human placenta</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30272.01</td>
			<td>phenol red-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>10100</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15070063</td>
			<td>for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>CKK53</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Shanghai Lingfeng</td>
			<td>1372021</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A606584</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Life</td>
			<td>P36961</td>
			<td>for celluar uptake</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate a (plcsa)-targeting lipid-polymer nanoparticles

Bir etkili kanser tedavi yöntemi azaltır ve tümörleri ile en az sistemik toksisite ortadan kaldırır. Aktif olarak hedefleme nano tanecikleri kanser tedavisi için umut verici bir yaklaşım sunuyoruz. Glikozaminoglikan plasental kondroitin sülfat (plCSA) çok çeşitli kanser hücrelerinin ve plasental trophoblasts ve sıtma protein VAR2CSA özellikle plCSA için bağlayabilirsiniz ifade edilir. Sıtma protein VAR2CSA, türetilmiş bir bildirilen plasental kondroitin sülfat A bağlama peptid (plCSA-BP), de özellikle kanser hücrelerinin ve plasental trophoblasts plCSA bağlayabilirsiniz. Bu nedenle, nano tanecikleri plCSA BP Birleşik bir araç olarak insan kanser ve plasental trophoblasts için hedeflenen ilaç dağıtım için kullanılabilir. Bu protokol için biz (plCSA-DNPs); doksorubisin ile yüklenen plCSA BP Birleşik lipid-polimer nano tanecikleri sentezlemek için bir yöntem tarif Yöntem bir tek sonication adım ve bioconjugate teknikleri oluşur. Buna ek olarak, plCSA-DNPs, Fizikokimyasal özellikleri ve plasental choriocarcinoma (JEG3) hücreler tarafından hücresel alımını belirlemek de dahil olmak üzere karakterize için birkaç yöntem açıklanır.

Bu protokol için PLGA, DSPE-PEG-COOH ve soya lesitin are bir temsilcisi polimer, lipit-PEG-COOH eşlenik ve lipid, anılan sıraya göre. Sonication yöntemi ile tek adım plCSA hedefli lipid-polimer nano tanecikleri ve EDC/NHS tekniği sentezi Şekil 1' de gösterilmiştir. İlk olarak, sonication koşullar altında Soya lesitin, PLGA ve Show DSPE-PEG-COOH formu çekirdek-kabuk için kendi kendine araya DNPs yapılandırılmış. Çekirdek PLGA ve ...

Watch this Scientific Journal Video about Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles at JoVE.com

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A plCSA-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

Burada, plasental kondroitin sülfat A bağlama peptid (plCSA-BP) sentezi için bir iletişim kuralı mevcut-Birleşik lipid-polimer nano tanecikleri ile tek adım sonication ve bioconjugate teknikleri. Bu parçacıklar tedavi hedeflenen teslimat en insan tümörleri ve kanserleri ve plasental bozuklukları tedavisinde plasental trophoblasts için bir roman araç oluşturmaktadır.

Sentez ve karakterizasyonu plasental kondroitin sülfat (plCSA) - Lipid hedefleme - polimer nano tanecikleri

An effective cancer therapeutic method reduces and eliminates tumors with minimal systemic toxicity. Actively targeting nanoparticles offer a promising ...

Bu yöntem ilaç dağıtım alanında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir, insan kanserleri ve plasenta sistoblast için terapötik hedefli teslim gibi. Bu tekniğin en büyük avantajı, diğer parçacıklarda konjuge peptidler sentezlemek için basit ve tekrarlanabilir bir yöntem olmasıdır. Başlamak için, steril bir 10 mililitresantrifüj tüp için yüzde dört etanol üç milimetre ekleyin.Daha sonra, 90 mikrogram soya lesitin stok çözeltisi, 210 mikrogram DSPE-PEG-karboksilik asit çözeltisi ve 750 mikrogram DOX stok çözeltisi ekleyin. Plga stok çözeltisi iki miligram pipet için bir mililitreşşü kullanın. Bir ultrasonik işlemci ve sonicate iki dakika için bir buz banyosu nda santrifüj tüp yerleştirin.Sonra, santrifüj tüp içine PLGA stok çözeltisi damla-bilge ekleyin. DNP'leri arındırmak için çözeltiyi 0,1 molar MES arabelleğinde yıkamak için bir santrifüj filtresi kullanın. Daha sonra çözeltiyi 1000 G'de dört santigrat derecede üç dakika santrifüj edin.Ester aktivasyonuna başlamak için, bir mililitre DNP'ye 0,4 miligram EDC ekleyin. Sonra, reaksiyona 0.24 miligram NHS ekleyin. Daha sonra, reaksiyonkaranlıkta oda sıcaklığında bir saat kadar gerçekleşmesine izin verin.Bundan sonra reaksiyon bileşenlerini iyice karıştırın ve reaksiyonu bir çalkalayıcının üzerine yerleştirin. Amin reaksiyonu başlatmak için, tampon pH'ı 7,2'den 7,5'e çıkarmak için PBS kullanın. Daha sonra, reaksiyon çözeltisine peptidi hedefleyen 0,5 miligram pICSA ekleyin.Çözeltiyi iyice karıştırın ve bir çalkalayıcıüzerine yerleştirin. Daha sonra, reaksiyonun karanlıkta bir gecede dört derece santigrat derecede devam etmesine izin verin. Ertesi gün, eşleç çözeltisi ile diyaliz torbaları doldurun.PICSA DNP'leri pBS tamponu ile oda sıcaklığında 24 saat karanlıkta arındırın. Metin protokolüne göre hücreleri kültüre aldıktan sonra, ortamı kaldırın ve yüzde beş FBS ve pICSA DNPs veya DNPs ile bir mililitre taze, soğuk ortam ekleyin. Sonra, hücre ve nano-parçacık karışımını dört santigrat derecede bir saat kuluçkaya yatırın.Bundan sonra, ortamı çıkarın ve hücreleri PBS ile üç kez yıkayın. Sonra, taze medya bir mililitre ekleyin ve 37 santigrat derece 30 dakika boyunca hücreleri kuluçka. Bundan sonra, ortamı çıkarın ve hücreleri PBS ile üç kez yıkayın.Daha sonra, soğuk iki mililitre ekleyin, dört yüzde PFA ve 10 dakika oda sıcaklığında karışımı kuluçka. PfA çıkarın ve PBS iki mililitre ile hücreleri yıkayın. Sonra, çekirdek boyama için DAPI ile PBS bir mililitre ekleyin.Karışımın oda sıcaklığında 10 dakika kuluçkaya yatmasını bekleyin. Son olarak, montaj ortamı ekleyin ve floresan mikroskobu ile floresan görüntü. Bu protokol kullanılarak, DNP'ler başarıyla hazırlandı ve pICSA BP'ye konjuge edildi. Konjugasyondan sonra primer DNP'lerin çapı yaklaşık 109 nanometreye yükseldi.DNP'lerin ve pICSA DNP'lerin TEM görüntüleri parçacıkların iyi dağıldığını ve genellikle küresel morfolojiyi gösterdiğini göstermiştir. Nano parçacıkların zeta potansiyeli negatif 20.1 ve 29.9 milivolt, nano-parçacıklar son derece kararlı olduğunu gösteren. JEG3 hücresel alım skalası, 30 dakika içinde JEG3 hücrelerine bağlı pICSA DNP'leri gösterdi.Bu nedenle, pICSA BP verimli yüzeye konjuge edildi. Bu yordamı çalışırken, PLGA eklemeden önce bir ila iki dakika boyunca karışımı sonicate hatırlamak önemlidir. Bu prosedürü takiben, konjugasyon verimliliğini daha doğru belirlemek için HPLC testi gibi yöntemlerimiz gerçekleştirilebilir.Bu teknik, gelişiminden sonra üreme biyolojisi alanında araştırmacıların gebelik komplikasyonlarında plasenta hedeflemesi olasılığını keşfetmelerinin önünü açmıştır.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A (plCSA)-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NF&#954;B Activity and Breast Cancer Stem Cells

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NFÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚ÂºB Activity and Breast Cancer Stem Cells

NFKB Aktivite ve Meme Kanseri Kök Hücreler önler Sentezi ve bir Aspirin-fumarat ön-ilacının Karakterizasyonu

Inflammation is a cancer hallmark that underlies cancer incidence and promotion, and eventually progression to metastasis. Therefore, adding an ...

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Akciğer Kanseri Hedefli Nanopartiküller ile Fotodinamik Tedavi antikanser Etkinliği

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

Hedef hücre ön zenginleştirme ve tüm genom amplifikasyon tek hücre aşağı akım karakterizasyonu için

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

Characterization of Cell Membrane Extensions and Studying Their Roles in Cancer Cell Adhesion Dynamics

Hücre zarının uzantıları ve rolleri kanser hücre adezyon dinamikleri eğitim karakterizasyonu

The cell membrane&#39;s extension repertoire modulates various malignant behaviors of cancer cells, including their adhesive and migratory potentials. The ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

Tümör hücrelerinin tümör hücreleri dolaşan yakalamak için tıbbi bir tel kullanarak karakterizasyonu: 3D bir yaklaşım tabanlı ayirt ve DNA balık

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

Sarkom hasta türevi xenografts tümör-başlatma hücrelerinin yalıtım ve karakterizasyonu

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Zenginleştirme ve kurulan subkutan fare tümör tümör bağışıklık ve Non-immün Microenvironments karakterizasyonu

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

İnce Barsak Nöroendokrin Tümör Spheroidlerinin Kurulması ve Karakterizasyonu

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models

Hasta Kaynaklı Pankreas Duktal Adenokarsinom Organoid Modellerinin İzolasyon ve Karakterizasyonu

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is amongst the most lethal malignancies. Recently, next-generation organoid culture methods enabling the ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Ortotopik Pankreas Tümörlerinin Üretimi ve Tümör Efiltrasyonu T Hücre Sitotoksisitesinin Ex vivo Karakterizasyonu

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...