Name: engineering transplantation-suitable retinal pigment epithelium tissue derived from human embryonic stem cells
Uploaded: 2018-09-06T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Engineering Transplantation-suitable Retinal Pigment Epithelium Tissue Derived from Human Embryonic Stem Cells at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить Жером Larghero и Валери Vanneaux (Hôpital Сент-Луис, Париж, Франция) за их вклад в создание метода, описанного здесь.
Эта работа была поддержана от грантов от НРУ [GPiPS: АНР-2010-RFCS005; SightREPAIR: АНР-16-CE17-008-02], Фонд pour la Recherche сообщала [Программа инженерно био - DBS20140930777] и от LABEX ОЖИВИТЬ [АНР-10-LABX-73] Оливье Goureau и Кристель Монвиля. Оно было поддержано NeurATRIS, поступательные исследовательской инфраструктуры (будущее Investissements) для biotherapies в неврологии [АНР-11-INBS-0011] и INGESTEM, национальной инфраструктуры (будущее Investissements) техника для плюрипотентных и дифференцированные стволовые клетки [АНР-11-INBS-000] Кристель Монвиля. Карим Бен Мбарек была поддержана стипендии от DIM Stempole и LABEX ОЖИВИТЬ [АНР-10-LABX-73]. Стволовых является частью Biotherapies института для редких заболеваний, поддержке французской ассоциации contre les миопатии (AFM)-Téléthon.

Все человеческие материалы, используемые в настоящем протоколе были использованы в соответствии с правилами Европейского союза. Человеческой линии клеток ES, используемые в данном исследовании была получена из уникальных эмбриона. Пара, кто пожертвовал эмбрион был полностью информир?...

<ol>
	<li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function.">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological Reviews. 85 (3), 845-881 (2005).</li><li>Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinitis+pigmentosa.">Retinitis pigmentosa.</a> Lancet. 368 (9549), 1795-1809 (2006).</li><li>Daiger, S. P., Sullivan, L. S., Bowne, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+and+mutations+causing+retinitis+pigmentosa.">Genes and mutations causing retinitis pigmentosa.</a> Clinical Genetics. 84 (2), 132-141 (2013).</li><li>Gehrs, K. M., Anderson, D. H., Johnson, L. V., Hageman, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+macular+degeneration--emerging+pathogenetic+and+therapeutic+concepts.">Age-related macular degeneration--emerging pathogenetic and therapeutic concepts.</a> Annals of Medicine. 38 (7), 450-471 (2006).</li><li>Swaroop, A., Chew, E. Y., Rickman, C. B., Abecasis, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+a+multifactorial+late-onset+disease:+from+genetic+susceptibility+to+disease+mechanisms+for+age-related+macular+degeneration.">Unraveling a multifactorial late-onset disease: from genetic susceptibility to disease mechanisms for age-related macular degeneration.</a> Annual Review of Genomics and Human Genetics. 10, 19-43 (2009).</li><li>Khandhadia, S., Cherry, J., Lotery, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+macular+degeneration.">Age-related macular degeneration.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 724, 15-36 (2012).</li><li>Wong, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+prevalence+of+age-related+macular+degeneration+and+disease+burden+projection+for+2020+and+2040:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Global prevalence of age-related macular degeneration and disease burden projection for 2020 and 2040: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet. Global Health. 2 (2), e106-e116 (2014).</li><li>Ben M'Barek, K., Regent, F., Monville, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+human+pluripotent+stem+cells+to+study+and+treat+retinopathies.">Use of human pluripotent stem cells to study and treat retinopathies.</a> World Journal of Stem Cells. 7 (3), 596-604 (2015).</li><li>Ben M'Barek, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+ESC-derived+retinal+epithelial+cell+sheets+potentiate+rescue+of+photoreceptor+cell+loss+in+rats+with+retinal+degeneration.">Human ESC-derived retinal epithelial cell sheets potentiate rescue of photoreceptor cell loss in rats with retinal degeneration.</a> Science Translational Medicine. 9 (421), (2017).</li><li>Schwartz, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+trials+for+macular+degeneration:+a+preliminary+report.">Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report.</a> Lancet. 379 (9817), 713-720 (2012).</li><li>Schwartz, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+embryonic+stem+cell-derived+retinal+pigment+epithelium+in+patients+with+age-related+macular+degeneration+and+Stargardt's+macular+dystrophy:+Follow-up+of+two+open-label+phase+1/2+studies.">Human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium in patients with age-related macular degeneration and Stargardt's macular dystrophy: Follow-up of two open-label phase 1/2 studies.</a> Lancet. 385 (9967), 509-516 (2015).</li><li>Hsiung, J., Zhu, D., Hinton, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polarized+human+embryonic+stem+cell-derived+retinal+pigment+epithelial+cell+monolayers+have+higher+resistance+to+oxidative+stress-induced+cell+death+than+nonpolarized+cultures.">Polarized human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelial cell monolayers have higher resistance to oxidative stress-induced cell death than nonpolarized cultures.</a> Stem Cells Translational Medicine. 4 (1), 10-20 (2015).</li><li>Diniz, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+implantation+of+retinal+pigment+epithelial+cells+derived+from+human+embryonic+stem+cells:+improved+survival+when+implanted+as+a+monolayer.">Subretinal implantation of retinal pigment epithelial cells derived from human embryonic stem cells: improved survival when implanted as a monolayer.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 54 (7), 5087-5096 (2013).</li><li>Kamao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+retinal+pigment+epithelium+cell+sheets+aiming+for+clinical+application.">Characterization of human induced pluripotent stem cell-derived retinal pigment epithelium cell sheets aiming for clinical application.</a> Stem Cell Reports. 2 (2), 205-218 (2014).</li><li>Mandai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+induced+stem-cell-derived+retinal+cells+for+macular+degeneration.">Autologous induced stem-cell-derived retinal cells for macular degeneration.</a> The New England Journal of Medicine. 376 (11), 1038-1046 (2017).</li><li>Thomas, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+functionality+of+hESC-derived+retinal+pigment+epithelium+cells+cultured+as+a+monolayer+on+polymer+substrates+transplanted+in+RCS+rats.">Survival and functionality of hESC-derived retinal pigment epithelium cells cultured as a monolayer on polymer substrates transplanted in RCS rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (6), 2877-2887 (2016).</li><li>Borooah, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+human+induced+pluripotent+stem+cells+to+treat+retinal+disease.">Using human induced pluripotent stem cells to treat retinal disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 37, 163-181 (2013).</li><li>Leach, L. L., Clegg, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+Making+stem+cells+retinal:+Methods+for+deriving+retinal+pigment+epithelium+and+implications+for+patients+with+ocular+disease.">Concise review: Making stem cells retinal: Methods for deriving retinal pigment epithelium and implications for patients with ocular disease.</a> Stem Cells. 33 (8), 2363-2373 (2015).</li><li>Reichman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+confluent+human+iPS+cells+to+self-forming+neural+retina+and+retinal+pigmented+epithelium.">From confluent human iPS cells to self-forming neural retina and retinal pigmented epithelium.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (23), 8518-8523 (2014).</li><li>Lustremant, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+induced+pluripotent+stem+cells+as+a+tool+to+model+a+form+of+Leber+congenital+amaurosis.">Human induced pluripotent stem cells as a tool to model a form of Leber congenital amaurosis.</a> Cellular Reprogramming. 15 (3), 233-246 (2013).</li><li>Reichman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+storable+retinal+organoids+and+retinal+pigmented+epithelium+from+adherent+human+iPS+Cells+in+xeno-free+and+feeder-free+conditions.">Generation of storable retinal organoids and retinal pigmented epithelium from adherent human iPS Cells in xeno-free and feeder-free conditions.</a> Stem Cells. 35 (5), 1176-1188 (2017).</li><li>Maruotti, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule-directed,+efficient+generation+of+retinal+pigment+epithelium+from+human+pluripotent+stem+cells.">Small-molecule-directed, efficient generation of retinal pigment epithelium from human pluripotent stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (35), 10950-10955 (2015).</li><li>Stanzel, B. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+RPE+stem+cells+grown+into+polarized+RPE+monolayers+on+a+polyester+matrix+are+maintained+after+grafting+into+rabbit+subretinal+space.">Human RPE stem cells grown into polarized RPE monolayers on a polyester matrix are maintained after grafting into rabbit subretinal space.</a> Stem Cell Reports. 2 (1), 64-77 (2014).</li><li>Ilmarinen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrathin+polyimide+membrane+as+cell+carrier+for+subretinal+transplantation+of+human+embryonic+stem+cell+derived+retinal+pigment+epithelium.">Ultrathin polyimide membrane as cell carrier for subretinal transplantation of human embryonic stem cell derived retinal pigment epithelium.</a> PloS One. 10 (11), e0143669 (2015).</li><li>Thumann, G., Schraermeyer, U., Bartz-Schmidt, K. U., Heimann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Descemet's+membrane+as+membranous+support+in+RPE/IPE+transplantation.">Descemet's membrane as membranous support in RPE/IPE transplantation.</a> Current Eye Research. 16 (12), 1236-1238 (1997).</li><li>Kiilgaard, J. F., Scherfig, E., Prause, J. U., la Cour, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+amniotic+membrane+to+the+subretinal+space+in+pigs.">Transplantation of amniotic membrane to the subretinal space in pigs.</a> Stem Cells International. 2012, 716968 (2012).</li><li>Capeans, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amniotic+membrane+as+support+for+human+retinal+pigment+epithelium+(RPE)+cell+growth.">Amniotic membrane as support for human retinal pigment epithelium (RPE) cell growth.</a> Acta Ophthalmologica Scandinavica. 81 (3), 271-277 (2003).</li><li>Ohno-Matsui, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+amniotic+membrane+on+retinal+pigment+epithelial+cell+differentiation.">The effects of amniotic membrane on retinal pigment epithelial cell differentiation.</a> Molecular Vision. 11, 1-10 (2005).</li><li>Paolin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amniotic+membranes+in+ophthalmology:+long+term+data+on+transplantation+outcomes.">Amniotic membranes in ophthalmology: long term data on transplantation outcomes.</a> Cell and Tissue Banking. 17 (1), 51-58 (2016).</li><li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+approach+for+subretinal+implantation+of+ultrathin+substrates+containing+stem+cell-derived+retinal+pigment+epithelium+monolayer.">A novel approach for subretinal implantation of ultrathin substrates containing stem cell-derived retinal pigment epithelium monolayer.</a> Ophthalmic Research. 48 (4), 186-191 (2012).</li><li>Pennington, B. O., Clegg, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+stem+cell-based+therapies+in+combination+with+substrate+for+the+treatment+of+age-related+macular+degeneration.">Pluripotent stem cell-based therapies in combination with substrate for the treatment of age-related macular degeneration.</a> Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics: The Official Journal of the Association. 32 (5), 261-271 (2016).</li><li>Song, M. J., Bharti, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Looking+into+the+future:+Using+induced+pluripotent+stem+cells+to+build+two+and+three+dimensional+ocular+tissue+for+cell+therapy+and+disease+modeling.">Looking into the future: Using induced pluripotent stem cells to build two and three dimensional ocular tissue for cell therapy and disease modeling.</a> Brain Research. 1638 (Pt A), 2-14 (2016).</li><li>Ramsden, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+in+retinal+regeneration:+Past,+present+and+future).">Stem cells in retinal regeneration: Past, present and future).</a> Development. 140 (12), 2576-2585 (2013).</li><li>da Cruz, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+1+clinical+study+of+an+embryonic+stem+cell-derived+retinal+pigment+epithelium+patch+in+age-related+macular+degeneration.">Phase 1 clinical study of an embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium patch in age-related macular degeneration.</a> Nature Biotechnology. 36 (4), 328-337 (2018).</li><li>Kashani, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bioengineered+retinal+pigment+epithelial+monolayer+for+advanced,+dry+age-related+macular+degeneration.">A bioengineered retinal pigment epithelial monolayer for advanced, dry age-related macular degeneration.</a> Science Translational Medicine. 10 (435), (2018).</li><li>Binder, S., Stanzel, B. V., Krebs, I., Glittenberg, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+RPE+in+AMD.">Transplantation of the RPE in AMD.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 26 (5), 516-554 (2007).</li><li>Dunn, K. C., Aotaki-Keen, A. E., Putkey, F. R., Hjelmeland, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARPE-19,+a+human+retinal+pigment+epithelial+cell+line+with+differentiated+properties.">ARPE-19, a human retinal pigment epithelial cell line with differentiated properties.</a> Experimental Eye Research. 62 (2), 155-169 (1996).</li><li>Salero, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+human+RPE+can+be+activated+into+a+multipotent+stem+cell+that+produces+mesenchymal+derivatives.">Adult human RPE can be activated into a multipotent stem cell that produces mesenchymal derivatives.</a> Cell Stem Cell. 10 (1), 88-95 (2012).</li></ol>

Мы описали метод для культуры клеток ПЭС на биологические леску и его подготовка к имплантации в животных моделях. Одним из важнейших шагов протокола является поддержание ориентации Хэм вдоль всей процедуры до его включения в желатин. Действительно родной эпителия мембрану удаляется ...

НПП имеет решающее значение для выживания и гомеостаза фоторецепторов, с которыми это тесно связанные1. Ряд патологических состояний изменить его функциональность и/или выживание, включая RP и AMD.
RP — это группа унаследованных Моногенные мутаций, которые влияют на функции фоторецепторов или НПП клетки или оба2,3. Предполагается, что мутации, которые влияют на специально НПП клетки приходится 5% RP2. AMD является еще одним условием, где изменяется уровень ПЭС, ведущих в конечном итоге на центральное зрение потери. AMD обусловлено сложных взаимодействий генетических и экологических факторов и затрагивает пожилых4,5,6. Согласно прогнозам AMD будет проблемой для 196 миллионов пациентов во всем мире к 2020 году7. Для этих расстройств Существует нет эффективного лечения, и одна из предлагаемых стратегий является трансплантация новых НПП клеток для того чтобы компенсировать мертвых/нефункциональных существовавшие ранее НПП клетки8.
Режим разработки окончательного продукта, чтобы быть привиты имеет важное значение для обеспечения лучших функциональных результатов. НПП клетки вводят в виде суспензии клеток, несмотря на легкий и простой метод доставки, вызывают озабоченность по поводу их выживания, интеграции и функциональность9,10,11,12 , 13. ученые в настоящее время разрабатывают более сложных составов для доставки инженерии тканей сетчатки9,13,14,,1516. В этом контексте мы разработали оригинальный метод для создания в vitro НПП ткани, которые могут быть использованы для трансплантации9.
Банки НПП клеток, полученные из клеток человеческих эмбриональных стволовых (ES) используются в настоящем Протоколе. Однако альтернативные НПП мобильных банков из источников различных клеток (человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, первичный НПП клетки и т.д.) и продифференцировано с другой метод, также пригодны для этого протокола. Она включает в себя направленного дифференцирования протоколов с помощью цитокинов и/или малых молекул,1718,19,20,21,22.
Чтобы быть трансплантированы, инженерии ткани должен быть подготовлен на леске. В последние несколько лет различные строительные леса были разработаны на основе полимера или на матрицу биологического происхождения13,,23-24. Здесь биологического субстрата используется ветчина, но других субстратов, как оголенные мембраны Бруха, могут быть реализованы. Метод, описанный здесь имеет преимущество использования биологических эшафот, что более актуально для родной среде ПЭС.
Человеческие клетки ES клеток ПЭС культивированный для по крайней мере 4 недель для того, чтобы быть полностью организованы как булыжник монослоя. На этом этапе эпителии полученных функциональных и поляризованных9. Наконец как эта ткань морщины легко, он внедрен в тонком слое гидрогеля перевозчика дать ему больше жесткости и упругости и защитить его во время процедуры инъекции. Затем этот продукт хранится при температуре 4 ° C до прививки.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sterile biosafety cabinet</td>
			<td>TechGen International</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid waste disposal system for aspiration</td>
			<td>Vacuubrand</td>
			<td>BVC 21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2-controlled +37&#160;&#176;C cell incubator</td>
			<td>Thermo Electron Corporation</td>
			<td>BVC 21 NT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200&#160;&#181;L pipette: P200</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F144565</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#160;mL pipette: P1000</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F144566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet aid</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>75001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>+4&#160;&#176;C refrigerator</td>
			<td>Liebherr</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1000S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors</td>
			<td>WPI</td>
			<td>501758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (x2)</td>
			<td>WPI</td>
			<td>555227F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Grant subaqua pro</td>
			<td>SUB6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision balance</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>CP225D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorff</td>
			<td>5804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SC30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horizontal Rocking Shaker</td>
			<td>IKA-WERKE</td>
			<td>IKA MTS 214D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>VWR</td>
			<td>LAB DANCER S40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Scalpel</td>
			<td>WPI</td>
			<td>500351</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic paraffin film</td>
			<td>VWR</td>
			<td>PM992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.200 &#181;m single use syringe filter</td>
			<td>SARTORIUS</td>
			<td>16532</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe without needle 50 mL</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>50012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottles 250mL</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>28024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL sterile Falcon tubes</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile Falcon tubes</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>culture insert</td>
			<td>Scaffdex</td>
			<td>C00001N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60&#160;mm cell culture disches: B6</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>353004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 well cell culture plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well culture plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>Ted Pella, Inc</td>
			<td>121-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate glue</td>
			<td>Castorama</td>
			<td>3178040670105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 1X (500&#160;mL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermolysine</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5339880001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose, GlutaMAX</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>61965-026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KSR CTS (KnockOut SR XenoFree CTS)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12618-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM-NEAA (100X)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11140-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>b-mercaptoethanol (50&#160;mM)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>31350-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2-independent medium</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>18045-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>104078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human amniotic membrane</td>
			<td>Tissue bank St Louis hospital (Paris, France)</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

engineering transplantation-suitable retinal pigment epithelium tissue derived from human embryonic stem cells

Ряд патологических состояний глаз влияет на функциональность и/или выживание пигментный эпителий сетчатки (ПЭС). К ним относятся некоторые формы пигментный ретинит (RP) и возрастной макулярной дегенерации (AMD). Клеточная терапия является одним из наиболее перспективных терапевтических стратегий, предложенных для лечения этих заболеваний, с уже обнадеживающие предварительные результаты в организме человека. Однако метод подготовки трансплантат имеет значительное влияние на его функциональных результатов в естественных условиях. Действительно НПП клетки, привитые как суспензию клеток менее функциональной, чем те же клетки, пересаженные в ткани сетчатки. Здесь мы опишем простой и воспроизводимый метод инженер НПП ткани и ее подготовка к имплантации в естественных условиях . НПП клетки, полученные из человеческих плюрипотентных стволовых клеток являются семенами на биологических поддержки, человека амниотической мембраны (Хам). По сравнению с искусственных лесов, эта поддержка имеет преимущество базальной мембраны, что близко к мембраны Бруха, где прилагаются эндогенного НПП клетки. Однако его манипуляции не легко, и мы разработали ряд стратегий для ее надлежащего культивирования и подготовки для прививки в естественных условиях.

Окорока содержат эпителиального пласта, который должен быть удален перед посевом НПП клеток. Ферментативная обработка мембраны выполняется с thermolysin под встряхивания. В порядке не чтобы не потерять полярности мембраны (эпителий находится на одной стороне), он фиксируе...

Watch this Scientific Journal Video about Engineering Transplantation-suitable Retinal Pigment Epithelium Tissue Derived from Human Embryonic Stem Cells at JoVE.com

Engineering Transplantation-suitable Retinal Pigment Epithelium Tissue Derived from Human Embryonic Stem Cells

Инженерные трансплантации подходит сетчатки пигментного эпителия ткани, полученных из человеческих эмбриональных стволовых клеток

Мы описываем метод инженер ткани сетчатки, состоящий из эпителиальных клеток сетчатки пигмент, производный от человеческих плюрипотентных стволовых клеток, культивируемых на вершине человека амниотической мембраны и подготовки ее к прививке в животных моделях.

Several pathological conditions of the eye affect the functionality and/or the survival of the retinal pigment epithelium (RPE). These include some forms ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Derivation of Cardiac Progenitor Cells from Embryonic Stem Cells

Вывод сердца клеток-предшественников из эмбриональных стволовых клеток

Cardiac progenitor cells (CPCs) have the capacity to differentiate into cardiomyocytes, smooth muscle cells (SMC), and endothelial cells and hold great ...

Efficient Derivation of Retinal Pigment Epithelium Cells from Stem Cells

Эффективное Вывод пигментного эпителия сетчатки клеток из стволовых клеток

No cure has been discovered for age-related macular degeneration  (AMD), the leading cause of vision loss in people over the age of 55. AMD is complex ...

Deriving Retinal Pigment Epithelium (RPE) from Induced Pluripotent Stem (iPS) Cells by Different Sizes of Embryoid Bodies

Deriving Retinal Pigment Epithelium RPE from Induced Pluripotent Stem iPS Cells by Different Sizes of Embryoid Bodies

ОТВЕТСТВЕННОСТЬ пигментного эпителия сетчатки (НПП) и из индуцированных плюрипотентных стволовых (IPS) клетки по-разному размеры эмбриональных телец

Pluripotent stem cells possess the ability to proliferate indefinitely and to differentiate into almost any cell type. Additionally, the development of ...

Three-dimensional Quantification of Dendritic Spines from Pyramidal Neurons Derived from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Трехмерная Количественное дендритных шипиков пирамидальных нейронов из производных человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

Dendritic spines are small protrusions that correspond to the post-synaptic compartments of excitatory synapses in the central nervous system. They are ...

A Quick and Efficient Method for the Purification of Endoderm Cells Generated from Human Embryonic Stem Cells

Быстрый и эффективный метод для очистки эндодермы клеток, полученных из эмбриональных стволовых клеток человека

The differentiation capabilities of pluripotent stem cells such as embryonic stem cells (ESCs) allow a potential therapeutic application for cell ...

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

Выделение и расширения мезенхимальных стволовых / стромальные клетки, полученные из плаценты человека ткани

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

Pluripotent Stem Cell Derived Cardiac Cells for Myocardial Repair

Плюрипотентных стволовых клеток, полученных клеток сердца для инфарктом Ремонт

Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) must be fully differentiated into specific cell types before administration, but conventional protocols for ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Дифференцирование хондроцитов из периферических кроветворных человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Быстрое, режиссер дифференциация клеток эпителия сетчатки пигмента от человеческого эмбриона или индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Культивирование клеток эпителия сетчатки пигментного модель Ex Vivo мембраны Бруха возрасте человека на

Aside from vitamins and antioxidants recommended by the Age-Related Eye Disease Study, there is no effective therapy for &#34;dry,&#34;&#160;or atrophic ...