Name: measurement of ion concentration in the unstirred boundary layer with open patch-clamp pipette: implications in control of ion channels by fluid flow
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Ion Concentration in the Unstirred Boundary Layer with Open Patch-Clamp Pipette: Implications in Control of Ion Channels by Fluid Flow at JoVE.

Denna forskning stöddes av programmet pionjär forskning Center (2011-0027921), av grundläggande vetenskap forskningsprogram (2015R1C1A1A02036887 och NRF-2016R1A2B4014795) genom National Research Foundation Koreas finansieras av ministeriet för vetenskap, IKT & Framtiden planering, och genom ett bidrag i Korea hälsa teknik R & D projekt genom den Korea hälsa industri utveckling Institute (KHIDI), finansierade av ministeriet för hälsa & välfärd, Sydkorea (HI15C1540).

Alla experimenten utfördes i enlighet med de institutionella riktlinjerna Konkuk University.
1. Agarens Salt broar mellan bad lösning och referenselektrod av Ag/Granulatfyllda
Obs: Agaros 3M KCl salt broar tillverkas som tidigare beskrivits12 med smärre variationer.
<ol><li>Bildandet av broar<ol>
<li>Böj de brand glas kapillärrör för att bilda en U-form som är lämpligt. Den inre diametern av kapillärerna bör vara tillräckligt st...

<ol>
	<li>Gerhold, K. A., Schwartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ion+Channels+in+Endothelial+Responses+to+Fluid+Shear+Stress.">Ion Channels in Endothelial Responses to Fluid Shear Stress.</a> Physiology (Bethesda). 31 (5), 359-369 (2016).</li><li>Garcia-Roldan, J. L., Bevan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow-induced+constriction+and+dilation+of+cerebral+resistance+arteries.">Flow-induced constriction and dilation of cerebral resistance arteries.</a> Circulation Research. 66, 1445-1448 (1990).</li><li>Langille, B. L., O&#8217;Donnell, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reductions+in+arterial+diameter+produced+by+chronic+decreases+in+blood+flow+are+endothelium-dependent.">Reductions in arterial diameter produced by chronic decreases in blood flow are endothelium-dependent.</a> Science. 231, 405-407 (1986).</li><li>Pohl, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crucial+role+of+endothelium+in+the+vasodilator+response+to+increased+flow+in+vivo.">Crucial role of endothelium in the vasodilator response to increased flow in vivo.</a> Hypertension. 8, 37-44 (1986).</li><li>Ranade, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+mechanically+activated+ion+channel,+is+required+for+vascular+development+in+mice.">a mechanically activated ion channel, is required for vascular development in mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111, 10347-10352 (2014).</li><li>Hoger, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear+stress+regulates+the+endothelial+Kir2.1+ion+channel.">Shear stress regulates the endothelial Kir2.1 ion channel.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (11), 7780-7785 (2002).</li><li>Mendoza, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV4-mediated+endothelial+Ca2++influx+and+vasodilation+in+response+to+shear+stress.">TRPV4-mediated endothelial Ca2+ influx and vasodilation in response to shear stress.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 298, H466-H476 (2010).</li><li>Brahler, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+deficit+of+SK3+and+IK1+channels+disrupts+the+endothelium-derived+hyperpolarizing+factor+vasodilator+pathway+and+causes+hypertension.">Genetic deficit of SK3 and IK1 channels disrupts the endothelium-derived hyperpolarizing factor vasodilator pathway and causes hypertension.</a> Circulation. 119, 2323-2332 (2009).</li><li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+pressure+modulates+L-type+Ca2++channel+via+enhancement+of+Ca2+-induced+Ca2++release+in+rat+ventricular+myocytes.">Fluid pressure modulates L-type Ca2+ channel via enhancement of Ca2+-induced Ca2+ release in rat ventricular myocytes.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 294, C966-C976 (2008).</li><li>Kim, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+flow+facilitates+inward+rectifier+K++current+by+convectively+restoring+[K+]+at+the+cell+membrane+surface.">Fluid flow facilitates inward rectifier K+ current by convectively restoring [K+] at the cell membrane surface.</a> Scientific Report. 6, 39585 (2016).</li><li>Park, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+fluid+flow+on+voltage-dependent+calcium+channels+in+rat+vascular+myocytes:+fluid+flow+as+a+shear+stress+and+a+source+of+artifacts+during+patch-clamp+studies.">Effects of fluid flow on voltage-dependent calcium channels in rat vascular myocytes: fluid flow as a shear stress and a source of artifacts during patch-clamp studies.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 358 (4), 1021-1027 (2007).</li><li>Barry, P. H., Hope, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroosmosis+in+membranes:+effects+of+unstirred+layers+and+transport+numbers.+I.+Theory.">Electroosmosis in membranes: effects of unstirred layers and transport numbers. I. Theory.</a> Biophysical Journal. 9 (5), 700-728 (1969).</li><li>Barry, P. H., Hope, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroosmosis+in+membranes:+effects+of+unstirred+layers+and+transport+numbers.+II.+Experimental.">Electroosmosis in membranes: effects of unstirred layers and transport numbers. II. Experimental.</a> Biophysical Journal. 9 (5), 729-757 (1969).</li><li>Barry, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+unstirred-layer+transport+number+equations+from+the+Nernst-Planck+flux+equations.">Derivation of unstirred-layer transport number equations from the Nernst-Planck flux equations.</a> Biophysical Journal. 74 (6), 2903-2905 (1998).</li><li>Barry, P. H., Diamond, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+unstirred+layers+on+membrane+phenomena.">Effects of unstirred layers on membrane phenomena.</a> Physiological Reviews. 64 (3), 763-872 (1984).</li><li>Park, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caveolar+remodeling+is+a+critical+mechanotransduction+mechanism+of+the+stretch-induced+L-type+Ca2++channel+activation+in+vascular+myocytes.">Caveolar remodeling is a critical mechanotransduction mechanism of the stretch-induced L-type Ca2+ channel activation in vascular myocytes.</a> Pfl&#252;gers Archiv - European Journal of Physiology. 469 (5-6), 829-842 (2017).</li><li>. A procedure for the formation of agar salt bridges Available from: <a target="_blank" href="https://www.warneronline.com/pdf/whitepapers/agar_bridges.pdf">https://www.warneronline.com/pdf/whitepapers/agar_bridges.pdf</a> (2018)</li><li>Cunningham, K. S., Gotlieb, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+shear+stress+in+the+pathogenesis+of+atherosclerosis.">The role of shear stress in the pathogenesis of atherosclerosis.</a> Laboratory Investigation. 85 (1), 9-23 (2005).</li><li>Resnick, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+shear+stress+and+the+vascular+endothelium:+for+better+and+for+worse.">Fluid shear stress and the vascular endothelium: for better and for worse.</a> Progress in Biophysics &amp; Molecular Biology. 81 (3), 177-199 (2003).</li></ol>

I denna studie har vi visat en metod för att mäta verkliga Cl– koncentration i anslutning till Ag/Granulatfyllda referenselektroden unstirred lagret genom att bestämma vätska-metall korsningen potentiella med en öppen patch-clamp pipett fylld med en hög KCl koncentrationen. Förändringen i Cl– koncentration i gränsskiktet kan resultera i en förskjutning av korsningen potential när du byter från statisk till vätska-flöda villkor. Helt enkelt använda en agaros KCl bro mellan referens...

Vätskeflöde är en viktig miljö cue som styr många fysiologiska och patologiska processer såsom flytande flöde-inducerad vasodilatation och vätska shear kraft-beroende vaskulära omdaning och utveckling1,2, 3,4,5. Även om de molekylära mekanismerna för biologiska Svaren till vätskeflöde tvärkraften inte är helt klarlagda, tror man att vätskan flöde-medierad reglering av ion kanal gating kritiskt kan bidra till vätska flöde-inducerad Svaren5 , 6 , 7 , 8. till exempel, aktivering av endotel inåt likriktaren Kir2.1 och Ca2 +-aktiverade K+ (KCa2.3, KCNN3) kanaler efter Ca2 + tillströmning av vätskeflöde har föreslagits bidra till vätska flöde-inducerad vasodilatation6,7,8. Därför många jonkanaler, särskilt mekaniskt aktiverad eller -hämmas kanaler, har studerats i form av vätska flöde/shear kraft känslighet med patch-clamp teknik6,9,10 , 11. men beroende på den experimentella protokoll utförs under patch-clamp inspelning, resultat och tolkning av data på flytande flöde-reglementet av jonkanaler kan vara felaktig10,11.
En källa av vätska flöde-inducerad artefakter i patch-clamp inspelningen är från korsningen potentiella mellan bad vätska och Ag/Granulatfyllda referens elektrod11. Det anses allmänt att vätska/metal korsningen potentiella mellan bad vätska och Ag/Granulatfyllda elektrod är konstant eftersom Cl– koncentrationen av badningen vätska hålls konstant, med tanke på den kemiska reaktionen mellan bad lösningen och Ag/Granulatfyllda elektrod vara:
AG + Cl–↔ Granulatfyllda + elektron (e–) (ekvation 1)
Dock i ett fall där den övergripande elektrokemisk reaktionen mellan bad lösning och referenselektrod av Ag/Granulatfyllda (ekvation 1) intäkter från vänster till höger, Cl– koncentrationen av badningen vätska intill den Ag/Granulatfyllda referera elektroden (unstirred gränsskikt12,13,14,15) kan vara mycket lägre än i huvuddelen av badningen lösning, såvida inte tillräckligt convectional transport säkerställs. Med en gammal eller icke-ideala Ag/Granulatfyllda elektrod med otillräcklig klorering av Ag kan öka risken. Denna vätska flöde-relaterade artefakt på referenselektroden, i själva verket kan uteslutas genom att placera en konventionell agaros-salt bro mellan bad vätska och referens elektrod, eftersom artefakten är baserad på förändringar i verkliga Cl– koncentration intill Ag/Granulatfyllda elektrod11. Det protokoll som presenteras i denna studie beskrivs hur att förhindra flödet-relaterade junction potentiella ändringar och mäta riktiga jonkoncentrationer i unstirred gränsskikt.
Efter att placera en agaros KCl bro mellan bad vätska och referenselektrod av Ag/Granulatfyllda, finns det en annan avgörande faktor som bör beaktas: bara som referens-Ag/Granulatfyllda elektrod som fungerar som en Cl– elektrod, jonkanalerna kan också fungera som en jonselektiv elektrod. Situationen för en unstirred gränsskikt mellan bad vätska och referenselektrod av Ag/Granulatfyllda uppkommer under rörelsen av joner mellan de extracellulära och intracellulära lösningarna genom jonkanaler i membranet. Detta innebär att försiktighet bör iakttas när tolkningen regleringen av ion kanaler genom vätskeflöde. Som diskuterats i vår tidigare studie11, förflyttning av joner genom en lösning där en elektrokemisk gradient är närvarande kan ske via tre olika mekanismer: diffusion, migration och konvektion, där diffusion är rörelsen induceras av koncentration gradient, migration är den rörelse som drivs av elektrisk lutning och konvektion är rörelsen genom vätska-flöda. Bland dessa tre transportmekanismer bidrar konvektion läge mest till rörelsen av joner11 (> 1 000 gånger större än diffusion eller migration under vanliga patch-clamp-inställningar). Detta utgör den teoretiska grunden för varför korsningen potentiella mellan bad vätska och referenselektrod av Ag/Granulatfyllda kan mycket under olika statiska och vätska-flöda villkor11.
Enligt hypotesen föreslås ovan, några facilitatorisk effekter av vätskeflöde på den nuvarande jonkanalen kan härledas ur konvektiv återställandet av riktiga jonkoncentrationer intill kanalen inloppet på membran ytan (unstirred gränsskikt) 10. vätska flöde-inducerad effekterna på ion kanal strömmar uppkommit i det här fallet helt enkelt elektrokemiska händelser, inte från regleringen av ion kanal gating. En liknande idé föreslogs tidigare av Barry och kollegor12,13,14,15 baserat på rigorös teoretiska överväganden och experimentella bevis, även känd som unstirred lagret eller transport nummer effekt. Om vissa jonkanaler har tillräcklig kan enskild kanal konduktans och tillräckligt lång öppen-tid att tillhandahålla tillräcklig transport priser genom kanaler (transporter snabbare i membranet än i unstirred membran yta), ett gränsskikt effekt uppstå . Således, konvektion-beroende transport kan bidra till att eventuell vätska-flöde-inducerad lättnader av ion nuvarande10,12,13,14,15.
I denna studie betonar vi vikten av att använda en agar eller agaros salt-bron medan du studerar vätska-flöde-inducerad förordning av ion strömmar. Vi ger också en metod för att mäta verkliga jonkoncentrationer i unstirred gränsskikt intill Ag/Granulatfyllda referens elektrod och membran jonkanaler. Dessutom kan teoretisk tolkning av vätska flöde-inducerad modulering av ion kanal strömmar (dvs konvektion hypotes eller unstirred transport nummer lagereffekt) ge värdefulla insikter för att konstruera och tolka studier på shear kraft-regleringen av jonkanaler. Enligt unstirred gränsskikt transport nummer effekten förutspår vi att ion kanal strömmar genom alla typer av membran jonkanaler kan underlättas genom vätskeflöde, oberoende av deras biologiska känslighet för vätskeflöde tvärkraften, men endast om jonkanalerna har tillräcklig enskild kanal konduktans och öppen-länge. Högre ion kanal strömtätheter kan öka unstirred gränsskikt effekten på cellmembran ytan.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:784px;" width="783">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:239px;">RC-11 open bath chamber&#160;</td>
			<td style="width:229px;">Warner instruments, USA</td>
			<td style="width:149px;">W4 64-0307</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Ag/AgCl electrode pellet</td>
			<td>World Precision Instruments, USA</td>
			<td>EP1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Agarose&#160;</td>
			<td>Sigma-aldrich, USA</td>
			<td>A9793</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Voltage-clamp amplifier&#160;</td>
			<td>HEKA, Germany</td>
			<td>EPC8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Voltage-clamp amplifier&#160;</td>
			<td>Molecular Devices, USA</td>
			<td>Axopatch 200B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Liquid pump</td>
			<td>KNF Flodos, Switzerland</td>
			<td>FEM08</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of ion concentration in the unstirred boundary layer with open patch-clamp pipette: implications in control of ion channels by fluid flow

Vätskeflöde är en viktig miljömässig stimulans som styr många fysiologiska och patologiska processer, såsom flytande flöde-inducerad vasodilatation. Även om de molekylära mekanismerna för biologiska Svaren till vätska flöde/tvärkraften inte är helt klarlagda, kan vätska flöde-medierad reglering av ion kanal gating bidra kritiskt. Därför har flytande flöde/shear kraft känslighet av jonkanaler studerats med hjälp av patch-clamp teknik. Men beroende på det experimentella protokollet, kan vilka resultat och tolkning av data vara felaktig. Här presenterar vi experimentella och teoretiska bevis för flytande flöde-relaterade fel och ger metoder för skattning, förebygga och korrigera dessa fel. Förändringar i korsningen potentiella mellan Ag/Granulatfyllda referenselektrod och bad vätska mättes med en öppen pipett fylld med 3 M KCl. vätskeflöde kan sedan flytta vätska/metal junction potential att ungefär 7 mV. Omvänt, genom att mäta spänning skiftet framkallas genom vätskeflöde, uppskattade vi ion koncentrationen i unstirred gränsskikt. I statiskt tillstånd når de verkliga jonkoncentrationer intill Ag/Granulatfyllda referens elektrod eller ion kanal inloppet vid cellmembranet ytan så låg som ca 30% av som i flödet villkorar. Att placera en agaros 3 M kan KCl bro mellan de bada vätska och referenselektrod ha hindrat detta problem av korsningen potentiella skiftande. Unstirred lagereffekten angränsande till cellmembran ytan kunde dock inte fastställas på detta sätt. Här, tillhandahåller vi en metod för att mäta verkliga jonkoncentrationer i unstirred gränsskikt med en öppen patch-clamp pipett, betonar vikten av att använda en agaros salt-bron medan du studerar vätska flöde-inducerad förordning av ion strömmar. Därför kan denna nya strategi, som tar hänsyn till de verkliga koncentrationerna av joner i unstirred gränsskikt, tillhandahålla användbar insikt på experimentell design och tolkning av data relaterade till vätska skjuvspänningen reglering av jonkanaler .

Hela cellen spänningsberoende L-typ Ca2 + kanal (VDCCL) strömmar registrerades i den enzymatiskt spridda råtta mesenterica arteriell myocyter, som tidigare beskrivits11. De arteriella myocyter var dialyseras med en Cs-rika pipett lösning under konfigurationen av nystatin-perforerade med tvåvärda katjon-fria bad lösning för att underlätta strömflödet genom VDCCL11,16</su...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Ion Concentration in the Unstirred Boundary Layer with Open Patch-Clamp Pipette: Implications in Control of Ion Channels by Fluid Flow at JoVE.

Measurement of Ion Concentration in the Unstirred Boundary Layer with Open Patch-Clamp Pipette: Implications in Control of Ion Channels by Fluid Flow

Mechanosensitive jonkanaler studeras ofta när det gäller flytande flöde/shear kraft känslighet med patch-clamp inspelning. Men beroende på det experimentella protokollet, kan resultatet på flytande flöde-reglemente av jonkanaler vara felaktig. Här, ger vi metoder för att förebygga och korrigera sådana fel med en teoretisk bas.

Mätning av jonkoncentration i Unstirred gränsskikt med öppna Patch-Clamp pipett: konsekvenser i kontroll av jonkanaler genom vätska rinna

Fluid flow is an important environmental stimulus that controls many physiological and pathological processes, such as fluid flow-induced vasodilation. ...

Denna inlämningssal kan hjälpa till att besvara viktiga frågor i den elektrofysiologiska sfären, såsom vätskeflödet i bara jonkanalernas föreskrifter. Den största fördelen med denna teknik är att den kan uppskatta den faktiska jonkoncentrationen i det otisenterade gränsskiktet av membranytan för datatolkning som rör vätskeflödesreglering av jonkanaler. För att börja detta förfarande, böj den eldade-glas kapillärröret för att bilda en U-form.Kapillärens innerdiameter bör vara tillräckligt stor för att minska seriemotståndet vid inspelning av stora jonströmmar. Därefter lös tre gram agaros i 100 milliliter av tre-molar kaliumklorid, och placera den på en värmeplatta mellan 90 och 100 grader Celsius. Sedan, ladda bron med kaliumklorid uppstod, genom att fördjupa glasbron i lösningen.Håll den över natten i rumstemperatur för agaros att ställa in och härda. Nästa dag, försiktigt gräva ut agaros kaliumklorid-lastade glas bro från härdade agarossalt. Förvara bron i en bredhalsad flaska av tre-molar kaliumklorid i kylskåp.I detta förfarande, placera en behållare lastad med badlösning, ovanför patch-clamp kammaren. Därefter fyller plåster-klämma kammare med badlösningen genom att suga röret. För att stoppa vätskeflödet, klipp röret vid behållarens sida, för att blockera vätskeflödet.Klipp sedan röret vid sugsidan för att stoppa sugen samtidigt. Detta är det stationära kontrolltillståndet. För att applicera vätskeflödesskjuvkraft, öppna båda rören på behållaren och sugsidorna samtidigt.Före eller efter applicering av vätskeflödesskjuvkraften på cellen, beräkna flödet i milliliter per minut genom att mäta minskningen av vätskevolymen under en viss tidpunkt. För att mäta förändringar i vätske-metall junction potential, förbereda en normal fysiologisk-salt salt salt för badkammaren, och jämföra dem i frånvaro och närvaro av agar kaliumklorid bro. Därefter placerar du en patchpipett som innehåller tre molig kaliumkloridlösning i kammaren, för att minimera korsningen potentiell förskjutning mellan pipetten och badlösningar.Ställ sedan in spänningsklämmans förstärkare i det aktuella klämläget. Efter att den initiala offsetpotentialen har upphävts, mät de förändringar i spänning som framkallas genom att variera flödeshastigheterna. För att kontrollera att förändringarna i spänning är vätske-metall korsning potentialer, ompröva effekten av vätskeflödet på korsningen potential, med hjälp av agaros saltbryggan mellan badlösningen och referenselektroden.Med resultaten av förändringarna i flytande-metall junction potential, dra funktionen potentiella flödeshastigheten relationer, och uppskatta mättande värdet av junction potential shift av supra-fluid flödeshastighet. Ändra sedan kloridkoncentrationen i badvätskan, och dra korsningen potentiella kloridkoncentrationsförhållande. Observera att vätskehastigheten bör vara konstant, och tillräckligt hög för att förhindra minskningen av kloridkoncentrationen till den som angränsar till referenselektroden silver-silverklorid.Från de två relationskurvorna, uppskatta förändringarna i kloridkoncentrationen från den uppmätta korsningen potentialskifte. VDCC-L strömmar spelades in i den enzymatisk spridda råtta mesenteriala kranskärlens myocytes, med nystatin perforerade patch-clamp inspelning. Med Agaros kaliumkloridbrygga kunde knutpunktspotentialen mellan referenselektroden och badlösningarna minimeras, och vätskeflödet ökade VDCC-L-strömmens spänning oberoende av varandra.Men när silver-silver klorid referenselektrod var direkt ansluten till badvätskan, utan en agaros kaliumklorid bro, IV förhållandet i närvaro av vätska flöde flyttas till höger, jämfört med den av DESCC-L strömmar under ett statiskt tillstånd. Den vätskeflödesinducerade ökningen av Kerr 2.1 strömmar, som registrerades i råtta basofila leukemiceller med agarose bron, kan förklaras av den ostirra skikt effekt. Efter dess utveckling banade denna teknik vägen för forskare i över electro-fysiologi.Så det är för reglering av vätskeflöde i jonkanalströmmarna. När det gäller elektrokemiska fenomen, i det otirrad gränsskiktet vid cellmembranytan.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Patch Clamp Recordings on Intact Dorsal Root Ganglia from Adult Rats

Patch Clamp Inspelningar på Intact dorsalrotsganglier från vuxna råttor

Patch clamp studies from dorsal root ganglia (DRGs) neurons have increased our understanding of the peripheral nervous system. Currently, the majority of ...

Online Size-exclusion and Ion-exchange Chromatography on a SAXS Beamline

Online Storlek-utanförskap och Jonbyteskromatografi på en SAXS beamline

Biological small angle X-ray scattering (BioSAXS) is a powerful technique in molecular and structural biology used to determine solution structure, ...

Capturing the Interaction Kinetics of an Ion Channel Protein with Small Molecules by the Bio-layer Interferometry Assay

Fånga interaktion kineticsen av en jonkanal Protein med små molekyler av Bio-lager interferometri analysen

The bio-layer interferometry (BLI) assay is a valuable tool for measuring protein-protein and protein-small molecule interactions. Here, we first describe ...

Characterization of Glycoproteins with the Immunoglobulin Fold by X-Ray Crystallography and Biophysical Techniques

Karakterisering av glykoproteiner med immunglobulin luckan av röntgenkristallografi och biofysiska tekniker

Glycoproteins on the surface of cells play critical roles in cellular function, including signalling, adhesion and transport. On leukocytes, several of ...

Expression and Purification of Mammalian Bestrophin Ion Channels

Uttryck och rening av däggdjur Bestrophin jonkanaler

The human genome encodes four bestrophin paralogs, namely BEST1, BEST2, BEST3, and BEST4. BEST1, encoded by the BEST1 gene, is a Ca2+-activated Cl- ...

Ion Exchange Chromatography (IEX) Coupled to Multi-angle Light Scattering (MALS) for Protein Separation and Characterization

Ion Exchange Chromatography IEX Coupled to Multi-angle Light Scattering MALS for Protein Separation and Characterization

Jonbyteskromatografi (IEX) kopplat till multi-Angle ljusspridning (MALS) för Protein Separation och karakterisering

Ion-exchange chromatography with multi-angle light scattering (IEX-MALS) is a powerful method for protein separation and characterization. The combination ...

Interactions with and Membrane Permeabilization of Brain Mitochondria by Amyloid Fibrils

Interaktioner med och membran permeabilisering av hjärnans Mitokona av amyloid fibriller

A growing body of evidence indicates that membrane permeabilization, including internal membranes such as mitochondria, is a common feature and primary ...

Preparation of High-Quality Fermented Fish Product

Beredning av högkvalitativ fermenterad fisk produkt

This protocol provides a method for preparation of industrialized fermented fish product with sturgeon (Aquilaria sinensis) meat product. The procedures ...

Analysis of Neutral Lipid Synthesis in Saccharomyces cerevisiae by Metabolic Labeling and Thin Layer Chromatography

Analysis of Neutral Lipid Synthesis in Saccharomyces cerevisiae by Metabolic Labeling and Thin Layer Chromatography

Analys av neutral lipidsyntes i Sackaromyces cerevisiae av metabolisk märkning och tunnskiktskromatografi

Neutral lipids (NLs) are a class of hydrophobic, chargeless biomolecules that play key roles in energy and lipid homeostasis. NLs are synthesized de ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Uracil-DNA Glykosylasanalys av Matrix-assisterad laserdesorption/joniseringStid för flygning Masspektrometrianalys

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...