Name: use of autometallography to localize and semi-quantify silver in cetacean tissues
Uploaded: 2018-10-04T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues at JoVE.com

Мы благодарим Тайвань китообразных мель сети для сбора и хранения, в том числе китообразных общество Тайвань, Taipei; Китообразных научно-исследовательская лаборатория (профессор Лянь Сян Chou), Институт экологии и эволюционной биологии, Национальный университет Тайваня, Тайбэй; Национальный музей естественных наук (доктор Chiou Цзюй Яо), Тайчжун; и морской биологии и китообразных научно-исследовательский центр, Национальный университет Ченг Кунг. Мы также благодарим бюро лесного хозяйства, Советом сельского хозяйства, Исполнительный юань для их разрешения.

Исследование проводилось в соответствии с международными руководящими принципами, и разрешается использование образцов ткани китообразных Советом сельского хозяйства Тайваня (исследования позволяют 104-07.1-SB-62).
1. ткань пробоподготовки для анализа ICP-MS
При?...

<ol>
	<li>McGillicuddy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+in+the+environment:+Sources,+detection+and+ecotoxicology.">Silver nanoparticles in the environment: Sources, detection and ecotoxicology.</a> Science Total Environment. 575, 231-246 (2017).</li><li>Yu, S. J., Yin, Y. G., Liu, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+in+the+environment.">Silver nanoparticles in the environment.</a> Environmental Science: Processes and Impacts. 15 (1), 78-92 (2013).</li><li>Hansen, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoproducts-+what+is+actually+available+to+European+consumers?.">Nanoproducts- what is actually available to European consumers?.</a> Environmental Science: Nano. 3 (1), 169-180 (2016).</li><li>Vance, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+in+the+real+world:+Redeveloping+the+nanomaterial+consumer+products+inventory.">Nanotechnology in the real world: Redeveloping the nanomaterial consumer products inventory.</a> Beilstein Journal of Nanotechnology. 6, 1769-1780 (2015).</li><li>Farre, M., Gajda-Schrantz, K., Kantiani, L., Barcelo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecotoxicity+and+analysis+of+nanomaterials+in+the+aquatic+environment.">Ecotoxicity and analysis of nanomaterials in the aquatic environment.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 393 (1), 81-95 (2009).</li><li>Walters, C. R., Pool, E. J., Somerset, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecotoxicity+of+silver+nanomaterials+in+the+aquatic+environment:+a+review+of+literature+and+gaps+in+nano-toxicological+research.">Ecotoxicity of silver nanomaterials in the aquatic environment: a review of literature and gaps in nano-toxicological research.</a> Journal of Environmental Science and Health. Part A, Toxic/hazardous Substances &amp; Environmental Engineering. 49 (13), 1588-1601 (2014).</li><li>Levard, C., Hotze, E. M., Lowry, G. V., Brown, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+transformations+of+silver+nanoparticles:+impact+on+stability+and+toxicity.">Environmental transformations of silver nanoparticles: impact on stability and toxicity.</a> Environmental Science &amp; Technology. 46 (13), 6900-6914 (2012).</li><li>Massarsky, A., Trudeau, V. L., Moon, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+the+environmental+impact+of+nanosilver.">Predicting the environmental impact of nanosilver.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 38 (3), 861-873 (2014).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity,+bioaccumulation,+and+biotransformation+of+silver+nanoparticles+in+marine+organisms.">Toxicity, bioaccumulation, and biotransformation of silver nanoparticles in marine organisms.</a> Environmental Science and Technology. 48 (23), 13711-13717 (2014).</li><li>Buffet, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+marine+mesocosm+study+on+the+environmental+fate+of+silver+nanoparticles+and+toxicity+effects+on+two+endobenthic+species:+the+ragworm+Hediste+diversicolor+and+the+bivalve+mollusc+Scrobicularia+plana.">A marine mesocosm study on the environmental fate of silver nanoparticles and toxicity effects on two endobenthic species: the ragworm Hediste diversicolor and the bivalve mollusc Scrobicularia plana.</a> Science of the Total Environment. 470, 1151-1159 (2014).</li><li>Chen, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Baseline+metal+concentrations+in+sediments+and+fish,+and+the+determination+of+bioindicators+in+the+subtropical+Chi-ku+Lagoon,+S+W+Taiwan.">Baseline metal concentrations in sediments and fish, and the determination of bioindicators in the subtropical Chi-ku Lagoon, S W Taiwan.</a> Marine Pollution Bulletin. 44 (7), 703-714 (2002).</li><li>Li, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+silver+(Ag)+deposition+in+tissues+from+stranded+cetaceans+by+autometallography+(AMG).">Investigation of silver (Ag) deposition in tissues from stranded cetaceans by autometallography (AMG).</a> Environmental Pollution. , 534-545 (2018).</li><li>Chen, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+concentrations+of+four+Taiwanese+toothed+cetaceans+indicating+the+silver+and+cadmium+pollution+in+the+western+Pacific+Ocean.">Tissue concentrations of four Taiwanese toothed cetaceans indicating the silver and cadmium pollution in the western Pacific Ocean.</a> Marine Pollution Bulletin. 124 (2), 993-1000 (2017).</li><li>Li, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotoxicity+of+silver+nanoparticles+(AgNPs)+on+the+leukocytes+of+common+bottlenose+dolphins+(Tursiops+truncatus).">Immunotoxicity of silver nanoparticles (AgNPs) on the leukocytes of common bottlenose dolphins (Tursiops truncatus).</a> Scientific Reports. , (2018).</li><li>Bornhorst, J. A., Hunt, J. W., Urry, F. M., McMillin, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+sample+preservation+methods+for+clinical+trace+element+analysis+by+inductively+coupled+plasma+mass+spectrometry.">Comparison of sample preservation methods for clinical trace element analysis by inductively coupled plasma mass spectrometry.</a> American Journal of Clinical Pathology. 123 (4), 578-583 (2005).</li><li>Bonta, M., Torok, S., Hegedus, B., Dome, B., Limbeck, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+sample+preparation+strategies+for+biological+tissues+and+subsequent+trace+element+analysis+using+LA-ICP-MS.">A comparison of sample preparation strategies for biological tissues and subsequent trace element analysis using LA-ICP-MS.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (7), 1805-1814 (2017).</li><li>Bischoff, K., Lamm, C., Erb, H. N., Hillebrandt, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+formalin+fixation+and+tissue+embedding+of+bovine+liver+on+copper,+iron,+and+zinc+analysis.">The effects of formalin fixation and tissue embedding of bovine liver on copper, iron, and zinc analysis.</a> Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 20 (2), 220-224 (2008).</li><li>Miller, D. L., Yu, I. J., Genter, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Autometallography+in+Studies+of+Nanosilver+Distribution+and+Toxicity.">Use of Autometallography in Studies of Nanosilver Distribution and Toxicity.</a> International Journal of Toxicology. 35 (1), 47-51 (2016).</li><li>Anderson, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+particle+size+on+persistence+and+clearance+of+aerosolized+silver+nanoparticles+in+the+rat+lung.">Influence of particle size on persistence and clearance of aerosolized silver nanoparticles in the rat lung.</a> Toxicological Sciences. 144 (2), 366-381 (2015).</li><li>Kim, W. Y., Kim, J., Park, J. D., Ryu, H. Y., Yu, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+study+of+gender+differences+in+accumulation+of+silver+nanoparticles+in+kidneys+of+Fischer+344+rats.">Histological study of gender differences in accumulation of silver nanoparticles in kidneys of Fischer 344 rats.</a> Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 72 (21-22), 1279-1284 (2009).</li><li>Danscher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+autometallography+to+heavy+metal+toxicology.">Applications of autometallography to heavy metal toxicology.</a> Pharmacology Toxicology. 68 (6), 414-423 (1991).</li><li>Deroulers, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+huge+pathology+images+with+open+source+software.">Analyzing huge pathology images with open source software.</a> Diagnostic Pathology. 8, 92 (2013).</li><li>Shu, J., Dolman, G. E., Duan, J., Qiu, G., Ilyas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistical+colour+models:+an+automated+digital+image+analysis+method+for+quantification+of+histological+biomarkers.">Statistical colour models: an automated digital image analysis method for quantification of histological biomarkers.</a> BioMedical Engineering Online. 15, 46 (2016).</li><li>Geraci, J. R., Lounsbury, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specimen+and+data+collection.">Specimen and data collection.</a> Marine mammals ashore: a field guide for strandings. , 167-230 (2005).</li><li>Shih, C. -. C., Liu, L. -. L., Chen, M. -. H., Wang, W. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Investigation of heavy metal bioaccumulation in dolphins from the coastal waters off Taiwan. , (2001).</li><li>Liang, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+the+striatal+dopamine+transporter+and+novelty+seeking+and+cognitive+flexibility+in+opioid+dependence.">The relationship between the striatal dopamine transporter and novelty seeking and cognitive flexibility in opioid dependence.</a> Progress in Neuro-Psychopharmacology and Biological Psychiatry. 74, 36-42 (2017).</li><li>Spiess, A. N., Neumeyer, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evaluation+of+R2+as+an+inadequate+measure+for+nonlinear+models+in+pharmacological+and+biochemical+research:+a+Monte+Carlo+approach.">An evaluation of R2 as an inadequate measure for nonlinear models in pharmacological and biochemical research: a Monte Carlo approach.</a> BMC Pharmacology. 10, 6 (2010).</li><li>Stoltenberg, M., Danscher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histochemical+differentiation+of+autometallographically+traceable+metals+(Au,+Ag,+Hg,+Bi,+Zn):+protocols+for+chemical+removal+of+separate+autometallographic+metal+clusters+in+Epon+sections.">Histochemical differentiation of autometallographically traceable metals (Au, Ag, Hg, Bi, Zn): protocols for chemical removal of separate autometallographic metal clusters in Epon sections.</a> Histochemical Journal. 32 (11), 645-652 (2000).</li><li>Dimitriadis, V. K., Domouhtsidou, G. P., Raftopoulou, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+Hg+and+Pb+in+the+palps,+the+digestive+gland+and+the+gills+in+Mytilus+galloprovincialis+(L.)+using+autometallography+and+X-ray+microanalysis.">Localization of Hg and Pb in the palps, the digestive gland and the gills in Mytilus galloprovincialis (L.) using autometallography and X-ray microanalysis.</a> Environmental Pollution. 125 (3), 345-353 (2003).</li><li>Loumbourdis, N. S., Danscher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autometallographic+tracing+of+mercury+in+frog+liver.">Autometallographic tracing of mercury in frog liver.</a> Environmental Pollution. 129 (2), 299-304 (2004).</li><li>Stoltenberg, M., Larsen, A., Kemp, K., Bloch, D., Weihe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autometallographic+tracing+of+mercury+in+pilot+whale+tissues+in+the+Faroe+Islands.">Autometallographic tracing of mercury in pilot whale tissues in the Faroe Islands.</a> International Journal of Circumpolar Health. 62 (2), 182-189 (2003).</li></ol>

Цель статьи исследования является установить метод адъювантной оценить распределение Ag на уровнях скупщиков и оценить Ag концентрации в тканях китообразных. Текущий протоколы включают в себя 1) определение концентраций Ag в китообразных тканей ICP-MS, 2) AMG анализ образцов тканей, пара согл?...

Наночастиц серебра (AgNPs) широко используются в коммерческих продуктов, в том числе текстильных изделий, косметики и медицинских пунктов, из-за их большой антимикробным эффекты1,2. Таким образом производство AgNPs и количество продуктов, содержащих ССПС увеличиваются за время3,4. Однако AgNPs может быть выпущено в окружающую среду и накапливаются в океан5,6. Они стали основным источником загрязнения Ag, и повышение осведомленности общественности о экологической токсичности Ag.
Статус AgNPs и Ag в морской среды является сложной и постоянно меняющейся. Предыдущие исследования показали, что AgNPs могут оставаться, частицы, совокупные, распустить, реагируют с различных химических видов или регенерироваться из ионов Ag+ ,78. Несколько типов соединений Ag, например AgCl, были найдены в морских отложениях, где они могут быть ingested бентических организмов и ввести в пищевой цепи9,10. По словам предыдущего исследования, проведенного в районе лагуны Чи ку вдоль юго-западного побережья Тайваня Ag концентрации морских отложениях являются крайне низкими и похож на коре, и те из ткани печени рыб, как правило, ниже обнаружения ограничение (< 0,025 мкг/г мокрой/мокрый)11. Однако предыдущие исследования, проведенные в различных странах продемонстрировали относительно высокие концентрации Ag в печень китообразных12,13. Концентрация Ag в печень китообразных зависит от возраста, предполагая, что источник Ag в их тела, скорее всего их добычей12. Эти выводы далее предложить биоусиления Ag в животных на более высоких трофических уровнях. Китообразных, как Апекс хищников в океане, возможно, страдал негативных медицинских последствий, вызванных Ag/Ag соединений12,,1314. Самое главное как китообразных, люди являются млекопитающие и негативных медицинских последствий, вызванных Ag/Ag соединений в китообразных могут возникнуть также в организме человека. Другими словами китообразных могут быть дозорных животных для здоровья людей и морской среды. Таким образом воздействие на здоровье человека, тканей распределение и концентрация Ag в китообразных, большую озабоченность.
Хотя концентрации соединений Ag/Ag в тканях китообразных могут быть измерены индуктивно связанной плазмы масс-спектроскопии (ICP-MS), использование ICP-MS ограничивается его высокие капитальные затраты (инструмент и содержание) и требования для хранения тканей /Preparation12,15. Кроме того обычно трудно собирать образцы всеобъемлющей тканей во всех расследованиях случаев мель китообразных из-за материально-технические трудности, нехватка людских ресурсов и нехватка соответствующих ресурсов12. Замороженные ткани проб для анализа ICP-MS хранятся не легко из-за ограниченного холодильного пространства, и образцы замороженные ткани может отказаться из-за сломанной холодильное оборудование12. Эти вышеупомянутые препятствия мешают исследования уровней загрязнения в тканях китообразных ICP-MS анализа с использованием образцов замороженные ткани. В отличие от фиксированной образцы тканей формалином сравнительно легко собирать в ходе патанатомия мертвых мель китообразных. Таким образом необходимо разработать простой в использовании и недорогой метод для обнаружения/мера тяжелых металлов в китообразных тканей с помощью фиксированной образцы тканей формалином.
Хотя скупщиков распределения и концентрации щелочных и щелочноземельных металлов могут быть изменены во время формалин исправлена, парафин врезанных (FFPE) процесс, только меньшее воздействие на переходных металлов, таких как Ag, было отмечено16. Следовательно FFPE ткани рассматривался как идеальный образец ресурс для металлических локализации и измерения16,17. Autometallography (AMG), гистохимические процесса, может усиливать тяжелых металлов как переменно размера золотисто-желтый черный AMG позитивные сигналы на разделах ткани FFPE, и эти усиленные тяжелые металлы могут быть визуализированы под световой микроскопии18, 19 , 20 , 21. Следовательно, метод AMG предоставляет информацию о скупщиков распределения тяжелых металлов. Он может обеспечить важную дополнительную информацию для изучения метаболических тяжелых металлов в биологических системах, потому что ICP-MS можно измерить только концентрация тяжелых металлов на уровне органов18. Кроме того программное обеспечение для анализа цифровых изображений, таких как ImageJ, был применен к анализу количественного гистологический ткани разделы22,23. Переменно размера золотисто-желтый черный AMG позитивные сигналы разделов ткани FFPE могут быть количественно и использованы для оценки концентраций тяжелых металлов. Хотя абсолютная концентрация Ag не может непосредственно определяется метод AMG с количественного анализа изображений, она может быть оценена путем регрессионной модели, основанные на данных, полученных от количественного анализа изображений и ICP-MS, которая называется китообразных Пробирной гистологического Ag (Чаа). Учитывая трудности измерения концентрации Ag путем анализа ICP-MS в наиболее затруднительном положении китообразных, Чаа является ценным адъювантной методом для оценки концентраций Ag в китообразных тканях, которые не могут быть определены ICP-MS анализа из-за отсутствия замороженная образцы тканей. Этот документ описывает протокол гистохимический метод (метод AMG) для локализации Ag на уровне скупщиков и assay именем Чаа для оценки концентраций Ag в тканях печени и почек китообразных.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58232/58232fig1.jpg"> Рисунок 1: схема, изображающие установление и применение китообразных Пробирной гистологического Ag (Чаа) для оценки концентрации Ag. Чаа = китообразных Пробирной гистологического Ag, FFPE = формалин исправлена, парафин врезанных, ИСП-МС = индуктивно связанной плазмы масс-спектроскопии. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58232/58232fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>HQ Silver enhancement kit</td>
			<td>Nanoprobes</td>
			<td>#2012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgipath Paraplast</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>39601006</td>
			<td>Paraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% Ethanol</td>
			<td>Muto Pure Chemical Co., Ltd</td>
			<td>4026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Xylene</td>
			<td>Muto Pure Chemical Co., Ltd</td>
			<td>4328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silane coated slide</td>
			<td>Muto Pure Chemical Co., Ltd</td>
			<td>511614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass (25 x 50 mm)</td>
			<td>Muto Pure Chemical Co., Ltd</td>
			<td>24501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malinol</td>
			<td>Muto Pure Chemical Co., Ltd</td>
			<td>20092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GM Haematoxylin Staining</td>
			<td>Muto Pure Chemical Co., Ltd</td>
			<td>3008-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin solution</td>
			<td>Chin I Pao Co., Ltd</td>
			<td>---</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip (1000 &#956;L)</td>
			<td>MDBio, Inc.</td>
			<td>1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PIPETMAN Classic P1000</td>
			<td>Gilson, Inc.</td>
			<td>F123602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Centrifuge Tube</td>
			<td>GeneDireX, Inc.</td>
			<td>PC115-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dogfish liver</td>
			<td>National Research Council of Canada</td>
			<td>DOLT-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dogfish muscle</td>
			<td>National Research Council of Canada</td>
			<td>DORM-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS)</td>
			<td>PerkinElmer Inc.</td>
			<td>PE-SCIEX ELAN 6100 DRC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FreeZone 6 liter freeze dry system</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>7752030</td>
			<td>For freeze drying</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAND&#174; SILBERBRAND volumetric flask</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Z326283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 mL standard vial, flat interior with 33 mm closure</td>
			<td>Savillex Corporation</td>
			<td>200-030-12</td>
			<td>For diagestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitric acid, superpur&#174;, 65.0%</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.00441</td>
			<td>For diagestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot Plate/Stirrers</td>
			<td>Corning&#174;</td>
			<td>PC-220</td>
			<td>For diagestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Shear lab mixer</td>
			<td>Silverson</td>
			<td>SL2T</td>
			<td>For homogenization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile polypropylene sample jar (250mL)</td>
			<td>Thermo Scientific&#8482;</td>
			<td>6186L05</td>
			<td>For homogenization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td>Nikon Corporation</td>
			<td>DS-Fi2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Nikon Corporation</td>
			<td>ECLIPSE Ni-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon&#8482; Finesse&#8482; 325 manual microtome</td>
			<td>Thermo Scientific&#8482;</td>
			<td>A78100001H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accu-Cut&#174; SRM&#8482; 200 rotary microtome</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>1429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blade S35</td>
			<td>FEATHER&#174;</td>
			<td>207500000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide staining dish and cover</td>
			<td>Brain Research Laboratories</td>
			<td>#3215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel staining rack</td>
			<td>Brain Research Laboratories</td>
			<td>#3003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon embedding center</td>
			<td>Thermo Scientific&#8482;</td>
			<td>S-EC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Citadel&#174; tissue processor</td>
			<td>Thermo Scientific&#8482;</td>
			<td>69800003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide warmer</td>
			<td>Lab-Line Instruments</td>
			<td>26005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Shandon Capshaw</td>
			<td>3964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1541-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 6.01 for windows</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td>Statistic software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel tissue embedding mould</td>
			<td>Shenyang Roundfin Trade Co., Ltd</td>
			<td>RD-TBM003</td>
			<td>For paraffin emedding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of autometallography to localize and semi-quantify silver in cetacean tissues

Наночастиц серебра (AgNPs) широко используются в коммерческих продуктов, включая текстиль, косметики и медицинских пунктов, их сильным антимикробным воздействием. Они также могут попадать в окружающую среду и накапливаются в океане. Таким образом AgNPs являются основным источником загрязнения Ag, и повышение осведомленности общественности о экологической токсичности Ag. Предыдущие исследования показали биоаккумуляции (в производителей) и масштаб (в потребителей/хищников) АГ. Китообразных, как Апекс хищников океана, может отрицательно сказались Ag/Ag соединений. Хотя концентрации соединений Ag/Ag в тканях китообразных могут быть измерены индуктивно связанной плазмы масс-спектроскопии (ICP-MS), использование ICP-MS ограничивается его высокие капитальные затраты и требования для хранения/Подготовка тканей. Таким образом autometallography (AMG) метод с количественный анализ изображений с помощью формалин исправлена, парафин врезанных тканей (FFPE) может быть методом адъювант для локализации Ag распределения на уровне скупщиков и оценки концентрации Ag в китообразных тканей. Позитивные сигналы AMG основном коричневый черный гранул различных размеров в цитоплазме проксимальных почечных трубчатых эпителия, гепатоцитов и клеток Купфера. Иногда некоторые аморфного золотисто-желтый коричневый AMG позитивные сигналы, отмечены в просвет и базальной мембраны некоторых проксимальных почечных канальцев. Анализа для оценки концентрации Ag называется Пробирной гистологического Ag китообразных (Чаа), который представляет собой модель регрессии, установленные данным изображения количественный анализ метода AMG и ИСП-МС. Использование AMG с Чаа локализовать и полу количественную оценку тяжелых металлов обеспечивает удобный методологии для исследования пространственно временных и кросс видов.

Представитель образов AMG позитивных сигналов в китообразных тканях печени и почек показано на рисунке 5. AMG позитивные сигналы включают переменно размера коричневый черный гранул различных размеров в цитоплазме проксимальных почечных трубчатых эпите...

Watch this Scientific Journal Video about Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues at JoVE.com

Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues

Использование Autometallography для локализации и полу количественно серебра в тканях китообразных

Протокол представлен autometallography для локализации Ag в китообразных тканях печени и почек. Кроме того новый пробирного, названный китообразных Пробирной гистологического Ag (Чаа) разработана для оценки концентраций Ag в этих тканях.

Silver nanoparticles (AgNPs) have been extensively used in commercial products, including textiles, cosmetics, and health care items, due to their strong ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области экологической токсикологии о распределении подоборов и концентрации тяжелых металлов в биологических системах. Основным преимуществом этой методики является то, что AMG является простой в использовании и недорогой методологией, то есть ценным адъювантом для исследования тяжелых металлов в тканях. Мы используем ткани дельфинов и китов, чтобы продемонстрировать протокол.Тем не менее, мы считаем, что протокол может быть использован в различных видах животных. Демонстрацией процедуры с Вэнь-Та Ли будет Шунь Тхэн, врач из нашего института. Начните с сбора парных тканей печени и почек для анализа AMG с застрявшего китообразных и фиксации ткани в 10 раз больше объема 10%нейтрального буферного формалина в течение 24-48 часов.Затем используйте одноразовые лезвия микротомы из нержавеющей стали, чтобы обрезать ткани печени и почек, закрепленные формалином, на два сантиметра на один сантиметр, трехмиллиметровые секции, а также поместить секции печени и почек от одного и того же человека в одинаковые кассеты с этикеткой. Обезвоживание секций в тканевой процессор через серию градуированных этанола и ксилена погружений, а затем один час и два часа парафин погружения. После двухчасового парафинового погружения перенесите ткани на дно стальных гистологических форм и ввелите обезвоженные образцы тканей со свежим расплавленным парафином.Охладить формалин фиксированной, парафин-встроенных блоков ткани на холодной пластине, пока парафин затвердевает, и обрезать каждый блок на микротоме, пока поверхность ткани подвергается. Охладите образцы при температуре минус 20 градусов по Цельсию в течение 10 минут и получите секции пятимиметровой ткани на микротоме. Используя пинцет и щетки, поднимите ленты секции тканей по мере их приобретения и поплывуйте по поверхности двухгодостильной водяной бани 45 градусов по Цельсию, пока они не будут разделены, и поместите их на отдельные слайды микроскопа.Затем поместите горки на слайд теплее в течение одного часа, при 60 градусах по Цельсию. Затем поместите слайды в слайд стеллажи, и де-парафинизировать разделы в трех различных окрашивания блюда, содержащие от 200 до 250 миллилитров чистого не-ксилена в течение восьми-пяти-и трехминутных инкубаций. Гидрат де-паррафинированных образцов в различных окрашивания блюд градуированных растворов этанола, а затем полоскания в двойной дистиллированной воды.Промыть разделы один раз в PBS дополняется 5%Triton X 100, несколько раз в PBS в одиночку, и один раз в свежей двойной дистиллированной воды в течение 30 секунд за стирку. После последней стирки, этикетка каждого образца с 300 микролитров смешанного серебра комплект решения, в течение не более 15 минут в темноте при комнатной температуре. В конце инкубации, мыть горки с двойной дистиллированной водой, и контр-пятно разделов в 300 микролитров гематоксилина на слайд, в течение 10 секунд.Вымойте горки проточной водопроводной водой. Высушите их и смонтировать секции с монтажной среды. Затем захват 10 случайных гистологических изображений каждой части ткани, под 40X цель светового микроскопа.Чтобы проанализировать автометаллографию, или AMG, положительность образцов, откройте изображения в соответствующей программе анализа изображений, а также выберите изображение, тип и RGB стек, чтобы разделить первое изображение на красный, синий и зеленый цвет каналов. В синем канале выберите изображение, отрегулируйте и порог, чтобы измерить процент области с AMG-положительными сигналами в каждом изображении, вручную регулируя значение выреза для порога каждого изображения в зависимости от наличия ложноположивых областей в ядрах, или красных кровяных телец. Нажмите анализ, и установить измерения, и проверить площадь фракции, чтобы указать, что площадь фракции записывается.Нажмите проанализировать и измерить, чтобы отобразить положительную процентную область каждого гистологического изображения в процентах от столбца окна результата. Для оценки корреляции между результатами индуктивно-соединенной плазменной массы спектроскопии и AMG-положительными значениями откройте соответствующее программное обеспечение для графики. Создайте новый файл проекта и выберите XY и корреляцию.Вввесть результаты индуктивно-соединенной плазменной массы спектроскопии и AMG анализов, а также выбрать анализ, и корреляции, чтобы проанализировать прочность связи между результатами анализа пирсон корреляции анализа. В параметрах, нелинейном окне регрессии, выберите другую модель регрессии на подгонки страницы и выберите методы сравнения на странице сравнения. Включите дополнительную сумму квадратов F-теста и информационный критерий Акаике.Согласно результатам методов сравнения, выберите относительно соответствующую регрессивную модель в китообразных гистологических серебряных анализах, а также используйте анализ для оценки концентрации серебра в китообразных тканях печени и почек с неизвестными концентрациями серебра. AMG-положительные сигналы включают вариативно размера, коричневый до черного гранулы в цитоплазме гепатоцитов и клеток Купфера, а иногда и аморфные, золотисто-желтые и коричневые AMG-положительные сигналы в люмене и мембране подвала некоторых проксимальных почечных трубочек. Существует положительная корреляция между результатами индуктивно-соединенной плазменной массы спектроскопии и значениями положительности AMG в анализируемой ткани печени и почек, с предпочтительной линейной регрессией через происхождение, согласно дополнительной сумме квадратов F-теста, и информационным критерием Акаике.При попытке этой процедуры, важно помнить, что метод AMG является адъювантным методом, и должны быть использованы с другим конкретным методом, таким как ICPMS, для мониторинга фактического состава тяжелых металлов в тканях.

Research

JoVE Journal

Environment

Optimize Flue Gas Settings to Promote Microalgae Growth in Photobioreactors via Computer Simulations

Оптимизация дымовых Настройки Газовые поощрять микроводорослей рост в фотобиореакторы через компьютерных вычислений

Flue gas from power plants can promote algal cultivation and reduce greenhouse gas emissions1. Microalgae not only capture solar energy more efficiently ...

Technique for Studying Arthropod and Microbial Communities within Tree Tissues

Техника для изучения членистоногих и микробных сообществ в Tree тканей

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms.  Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear ...

Transient Gene Expression in Tobacco using Gibson Assembly and the Gene Gun

Переходные экспрессии генов в табак с помощью Gibson Ассамблею и генной пушки

In order to target a single protein to multiple subcellular organelles, plants typically duplicate the relevant genes, and express each gene separately ...

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

Рыба вскармливания Лаборатория биоанализа для оценки состояния Antipredatory активность вторичных метаболитов из тканей морских организмов

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

The Use of High-resolution Infrared Thermography (HRIT) for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

The Use of High-resolution Infrared Thermography HRIT for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

Использование высокого разрешения ИК термографии (HRIT) для изучения ледовой зарождения и распространения ледникового у растений

Freezing events that occur when plants are actively growing can be a lethal event, particularly if the plant has no freezing tolerance. Such frost events ...

The Use of an Automated System (GreenFeed) to Monitor Enteric Methane and Carbon Dioxide Emissions from Ruminant Animals

The Use of an Automated System GreenFeed to Monitor Enteric Methane and Carbon Dioxide Emissions from Ruminant Animals

Использование автоматизированной системы (GreenFeed) для мониторинга Кишечная метана и диоксида углерода выбросов из жвачных животных

Ruminant animals (domesticated or wild) emit methane (CH4) through enteric fermentation in their digestive tract and from decomposition of manure during ...

Use of a Battery of Chemical and Ecotoxicological Methods for the Assessment of the Efficacy of Wastewater Treatment Processes to Remove Estrogenic Potency

Использование батареи химических и экотоксикологических методов для оценки эффективности процессов очистки сточных вод для удаления эстрогенной потенси

Endocrine Disrupting Compounds pose a substantial risk to the aquatic environment. Ethinylestradiol (EE2) and estrone (E1) have recently been included in ...

Use of a Filter Cartridge for Filtration of Water Samples and Extraction of Environmental DNA

Использование фильтра картриджа для фильтрации проб воды и экстракции ДНК окружающей среды

Recent studies demonstrated the use of environmental DNA (eDNA) from fishes to be appropriate as a non-invasive monitoring tool. Most of these studies ...

The Calibration and Use of Capacitance Sensors to Monitor Stem Water Content in Trees

Калибровка и использование емкостных датчиков для мониторинга стволовых содержание воды в деревьях

Water transport and storage through the soil-plant-atmosphere continuum is critical to the terrestrial water cycle, and has become a major research focus ...

Use of Principal Components for Scaling Up Topographic Models to Map Soil Redistribution and Soil Organic Carbon

Использование основных компонентов для масштабирования Топографическая модели для сопоставления перераспределения земли и почвы органического углерода

Landscape topography is a critical factor affecting soil formation and plays an important role in determining soil properties on the earth surface, as it ...