Name: generating homo- and heterografts between watermelon and bottle gourd for the study of cold-responsive micrornas
Uploaded: 2018-11-20T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generating Homo- and Heterografts Between Watermelon and Bottle Gourd for the Study of Cold-responsive MicroRNAs at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية (31772191) ومشروع البحث للمصلحة العامة في مقاطعة تشجيانغ (32027 ج 2017)، مفتاح العلم مشروع لتربية النباتات في تشجيانغ (2016 ج 02051) والبرنامج الوطني الدعم للمهنيين الشباب أرفع (المقصف).

1-التعقيم وإنبات البذور
<ol><li>للتعقيم السطحي، نقع بذور قرع الزجاجة في كوب 500 مل مليئة بالمياه في 58 درجة مئوية مع إثارة العرضية، حتى تنخفض درجة حرارة المياه إلى 40 درجة مئوية.</li>
	<li>وفي الوقت نفسه، وضع 3 كغم من التربة الخصبة في كيس نايلون، وتعقيم، اﻷوتوكﻻف في 120 ° C/0.5 الآلام والكروب الذهنية لمد?...

<ol>
	<li>Schwarz, D., Rouphael, Y., Colla, G., Venema, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting+as+a+tool+to+improve+tolerance+of+vegetables+to+abiotic+stresses:+Thermal+stress,+water+stress+and+organic+pollutants.">Grafting as a tool to improve tolerance of vegetables to abiotic stresses: Thermal stress, water stress and organic pollutants.</a> Scientia Horticulturae. 127, 162-171 (2010).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+tolerance+differences+in+cucumber+seedlings+grafted+on+rootstocks+with+different+tolerance+to+low+temperature+and+weak+light+stresses.">Mechanisms of tolerance differences in cucumber seedlings grafted on rootstocks with different tolerance to low temperature and weak light stresses.</a> Turkish Journal of Botany. 39 (4), 606-614 (2015).</li><li>Li, C. H., Li, Y. S., Bai, L. Q., He, C. X., Yu, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Expression+of+miRNAs+and+Their+Targets+in+the+Response+to+Drought+Stress+of+Grafted+Cucumber+Seedlings.">Dynamic Expression of miRNAs and Their Targets in the Response to Drought Stress of Grafted Cucumber Seedlings.</a> Horticultural Plant Journal. 2 (1), 41-49 (2016).</li><li>Rouphael, Y., Cardarelli, M., Colla, G., Rea, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yield,+mineral+composition,+water+relations,+and+water+use+efficiency+of+grafted+mini-watermelon+plants+under+deficit+irrigation.">Yield, mineral composition, water relations, and water use efficiency of grafted mini-watermelon plants under deficit irrigation.</a> HortScience. 43 (3), 730-736 (2008).</li><li>Savvas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactive+effects+of+grafting+and+manganese+supply+on+growth,+yield,+and+nutrient+uptake+by+tomato.">Interactive effects of grafting and manganese supply on growth, yield, and nutrient uptake by tomato.</a> HortScience. 44 (7), 1978-1982 (2009).</li><li>Aloni, B., Cohen, R., Karni, L., Aktas, H., Edelstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal+signaling+in+rootstock-scion+interactions.">Hormonal signaling in rootstock-scion interactions.</a> Scientia Horticulturae. 127, 119-126 (2010).</li><li>Rouphael, Y., Caradrelli, M., Rea, E., Colla, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+melon+and+cucumber+photosynthetic+activity,+mineral+composition,+and+growth+performance+under+salinity+stress+by+grafting+onto+Cucurbita+hybrid+rootstocks.">Improving melon and cucumber photosynthetic activity, mineral composition, and growth performance under salinity stress by grafting onto Cucurbita hybrid rootstocks.</a> Photosynthetica. 50 (2), 180-188 (2012).</li><li>Louws, F. J., Rivard, C. L., Kubota, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting+fruiting+vegetables+to+manage+soilborne+pathogens,+foliar+pathogens,+arthropods+and+weeds.">Grafting fruiting vegetables to manage soilborne pathogens, foliar pathogens, arthropods and weeds.</a> Scientia Horticulturae. 127 (2), 127-146 (2010).</li><li>Asins, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+rootstock-mediated+nitrogen+(N)+uptake+and+root-to-shoot+signalling+at+contrasting+N+availabilities+in+tomato.">Genetic analysis of rootstock-mediated nitrogen (N) uptake and root-to-shoot signalling at contrasting N availabilities in tomato.</a> Plant Science. 263, 94-106 (2017).</li><li>Yin, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+protective+enzymes+in+tomato+rootstocks+to+resist+root+knot+nematodes.">Role of protective enzymes in tomato rootstocks to resist root knot nematodes.</a> Acta Horticulturae. 1086 (1086), 213-218 (2015).</li><li>Gaion, L. A., Carvalho, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Distance+Signaling:+what+grafting+has+revealed?.">Long-Distance Signaling: what grafting has revealed?.</a> Journal of Plant Growth Regulation. 37 (2), 694-704 (2018).</li><li>Turnbull, C. G., Hennig, L., K&#246;hler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting+as+a+research+tool.">Grafting as a research tool.</a> Plant Developmental Biology. , 11-26 (2010).</li><li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting-responsive+miRNAs+in+cucumber+and+pumpkin+seedlings+identified+by+high-throughput+sequencing+at+whole+genome+level.">Grafting-responsive miRNAs in cucumber and pumpkin seedlings identified by high-throughput sequencing at whole genome level.</a> Physiologia Plantarum. 151 (4), 406-422 (2014).</li><li>Lakhotia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+miRNAome+in+root,+stem,+leaf+and+tuber+developmental+stages+of+potato+(Solanum+tuberosum+L.)+by+high-throughput+sequencing.">Identification and characterization of miRNAome in root, stem, leaf and tuber developmental stages of potato (Solanum tuberosum L.) by high-throughput sequencing.</a> BMC Plant Biology. 14 (1), 6 (2014).</li><li>Jones-Rhoades, M. W., Bartel, D. P., Bartel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+and+their+regulatory+roles+in+plants.">MicroRNAs and their regulatory roles in plants.</a> Annual Review of Plant Biology. 57, 19-53 (2006).</li><li>Puzey, J. R., Kramer, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+conserved+Aquilegia+coerulea+microRNAs+and+their+targets.">Identification of conserved Aquilegia coerulea microRNAs and their targets.</a> Genetic. 448 (1), 46-56 (2009).</li><li>Matthewman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR395+is+a+general+component+of+the+sulfate+assimilation+regulatory+network+in+Arabidopsis.">miR395 is a general component of the sulfate assimilation regulatory network in Arabidopsis.</a> FEBS Letters. 586 (19), 3242-3248 (2012).</li><li>Ali, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+RNA+silencing+signal+through+grafting+confers+virus+resistance+from+transgenically+silenced+tobacco+rootstocks+to+non-transgenic+tomato+and+tobacco+scions.">Transmission of RNA silencing signal through grafting confers virus resistance from transgenically silenced tobacco rootstocks to non-transgenic tomato and tobacco scions.</a> Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology. 25 (3), 245-252 (2016).</li><li>Li, Y. S., Li, C. H., Bai, L. Q., He, C. X., Yu, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+and+target+gene+responses+to+salt+stress+in+grafted+cucumber+seedlings.">MicroRNA and target gene responses to salt stress in grafted cucumber seedlings.</a> Acta Physiologiae Plantarum. 38 (2), 1-12 (2016).</li><li>Pagliarani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+accumulation+of+miRNAs+differentially+modulated+by+drought+stress+is+affected+by+grafting+in+grapevine.">The accumulation of miRNAs differentially modulated by drought stress is affected by grafting in grapevine.</a> Plant Physiology. 173 (4), 2180-2195 (2017).</li><li>Liu, N., Yang, J. H., Guo, S. G., Xu, Y., Zhang, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+identification+and+comparative+analysis+of+conserved+and+novel+microRNAs+in+grafted+watermelon+by+high-throughput+sequencing.">Genome-wide identification and comparative analysis of conserved and novel microRNAs in grafted watermelon by high-throughput sequencing.</a> PLoS One. 8 (2), e57359 (2013).</li><li>Song, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+2JC-350+automatic+grafting+machine+with+cut+grafting+method+for+vegetable+seedling.">Development of 2JC-350 automatic grafting machine with cut grafting method for vegetable seedling.</a> Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering. 22 (12), 103-106 (2006).</li><li>Kumar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncovering+leaf+rust+responsive+miRNAs+in+wheat+(triticum+aestivum+l.)+using+high-throughput+sequencing+and+prediction+of+their+targets+through+degradome+analysis.">Uncovering leaf rust responsive miRNAs in wheat (triticum aestivum l.) using high-throughput sequencing and prediction of their targets through degradome analysis.</a> Planta. 245 (1), 1-22 (2016).</li><li>Kohli, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+wilt+and+salt+stress-responsive+microRNAs+in+chickpea+through+high-throughput+sequencing.">Identification and characterization of wilt and salt stress-responsive microRNAs in chickpea through high-throughput sequencing.</a> PLoS One. 9 (10), e108851 (2014).</li><li>Salzberg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+challenges+in+next-generation+genomics.+International+Conference+on+Scientific+and+Statistical+Database+Management.">Computational challenges in next-generation genomics. International Conference on Scientific and Statistical Database Management.</a> ACM. 2, (2013).</li><li>Guo, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+draft+genome+of+watermelon+(Citrullus+lanatus)+and+resequencing+of+20+diverse+accessions.">The draft genome of watermelon (Citrullus lanatus) and resequencing of 20 diverse accessions.</a> Nature Genetics. 45, 51-58 (2013).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gourdbase:+a+genome-centered+multi-omics+database+for+the+bottle+gourd+(lagenaria+siceraria),+an+economically+important+cucurbit+crop.">Gourdbase: a genome-centered multi-omics database for the bottle gourd (lagenaria siceraria), an economically important cucurbit crop.</a> Scientific Reports. 8 (1), 306 (2018).</li><li>Wang, X. F., Liu, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Curation+of+miRBase+Annotation+Using+Integrated+Small+RNA+High-Throughput+Sequencing+Data+for+C.+elegans+and+Drosophila.">Systematic Curation of miRBase Annotation Using Integrated Small RNA High-Throughput Sequencing Data for C. elegans and Drosophila.</a> Frontiers in Genetics. 2, 25 (2011).</li><li>Bo, X. C., Wang, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TargetFinder:+a+software+for+antisense+oligonucleotide+target+site+selection+based+on+MAST+and+secondary+structures+of+target+mRNA.">TargetFinder: a software for antisense oligonucleotide target site selection based on MAST and secondary structures of target mRNA.</a> Bioinformatics. 21 (8), 1401-1402 (2005).</li><li>. GOATOOLS: Tools for Gene Ontology Available from: <a target="_blank" href="https://doi.org/10.5281/zenodo.31628">https://doi.org/10.5281/zenodo.31628</a> (2015)</li><li>Wang, L. P., Li, G. J., Wu, X. H., Xu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+proteomic+analyses+provide+novel+insights+into+the+effects+of+grafting+wound+and+hetero-grafting+per+se+on+bottle+gourd.">Comparative proteomic analyses provide novel insights into the effects of grafting wound and hetero-grafting per se on bottle gourd.</a> Scientia Horticulturae. 200 (8), 1-6 (2016).</li></ol>

في هذا البروتوكول، وصفت لنا بالتفصيل طريقة عالية الكفاءة واستنساخه لجعل إنسان-وهيتيروجرافتس بين البطيخ والقرع زجاجة. من السهل جداً أن تعمل هذا الأسلوب، يتطلب أي معدات خاصة، وعادة بمعدل بقاء عالية جداً للتطعيم. يمكن أيضا استخدام الأسلوب جعل الطعوم لغيرها والقرعيات، كما هو الحال بين البطي...

تطعيم طالما استخدمت كأسلوب زراعية لتحسين إنتاج المحاصيل والتسامح لتؤكد الحيوية وغير الحيوية1،،من23. في أنظمة هيتيروجرافتينج، أصول النخبة يمكن تعزيز امتصاص المياه والمواد الغذائية من النباتات وتعزيز المقاومة للعوامل الممرضة في التربة والحد من الآثار السلبية لسمية المعادن4،5، مما قد يضفي الطعوم معزز قوة النمو وزيادة تحمل الإجهاد البيئي. في كثير من الحالات، يمكن أيضا أن تؤثر هيتيروجرافتينج صفات الفاكهة في النباتات البستانية، مما يؤدي إلى نكهة الفاكهة المحسنة، وزيادة المحتوى من المركبات ذات الصلة بالصحة6،7. فقد وجد أن نقل المسافات الطويلة فيتوهورمونيس والكشف، الببتيدات والبروتينات بين أصول وسليل إليه أساسية لتحوير في النمو والتنمية إعادة برمجة سليل النباتات8،9 ،10. التطعيم قد استخدمت على نطاق واسع في الدراسات يشير إلى مسافات بعيدة والنقل فيما يتعلق بالتكيف البيئي11. تجارب التطعيم قوية خاصة للكشف عن الجزيئات المنقولة في تلقي الأنسجة أو ساب الأوعية الدموية، وتنشيط أو قمع الأهداف الجزيئية بسبب إشارة الإرسال12لا لبس فيها.
ترميز عدم الكشف، فئة كبيرة من الجيش الملكي النيبالي أن تمارس وظائفها التنظيمية الهامة في الخلايا، وأفيد أن تلعب دوراً في تسهيل تكيف النبات للإجهاد اللاأحيائية13. ميرناس الذاتية الصغيرة غير الترميز الكشف من حوالي 20-24 nt. الدراسات كشفت عن الدور التنظيمي ميرناس في مختلف جوانب أنشطة المصنع، مثل إطلاق النار على النمو، والوحشي جذر تشكيل14،،من1516، امتصاص المغذيات، والايض كبريتات والتوازن17، والردود على الحيوية وغير الحيوية التأكيد على18. في الآونة الأخيرة، تتعلق بالتعبير عن ميرناس وجيناتها الهدف الملح التسامح الإجهاد في شتلات خيار هيتيروجرافتيد19. في ترقيع إينتيرفاريتي من العنب، وجد أن تعتمد على النمط الوراثي20ردود التعبير ميرنا لإجهاد الجفاف.
التطور السريع، وانخفاض تكلفة تكنولوجيا التسلسل الفائق وفرت فرصة كبيرة لدراسة الأنظمة ميرنا في النباتات الخواص. بطيخ (سيترولوس صوفي [ثونب]. Mansf.)، ومحصولا هاما كوكوربيت نمت في جميع أنحاء العالم، وهو عرضه لدرجات الحرارة المنخفضة. زجاجة قرع (قرع التزيين [مولينا] (ستاندل.) كوكوربيت أكثر مرونة في مناخ يشيع استخدام المزارعين ل graft مع البطيخ. أن الهدف الأساسي للدراسة الحالية وضع معيار، تتسم بالكفاءة، وأسلوب مناسب لصنع هيتيروجرافتس بين البطيخ (سيترولوس صوفي [ثونب]. منصف). وزجاجة قرع (ستاندلقرع التزيين [مولينا]). كما يوفر هذا البروتوكول مخطط تجريبي تفصيلية والإجراءات التحليلية لدراسة تنظيم التعبيرات ميرنا بعد التطعيم، التي مفيدة للكشف عن الآليات الكامنة وراء مزايا هيتيروجرافتينج.
وتشمل المواد النباتية المستخدمة في هذه الدراسة الصنف البطيخ و landrace زجاجة قرع. هو البطيخ الأصناف المستنبطة الصنف تجاري مع عالية الغلة لكن عرضه لدرجات الحرارة المنخفضة. زجاجة قرع landrace أصول شعبية للتطعيم بالبطيخ، والخيار، وزجاجة قرع، سبب عن التسامح ممتازة لانخفاض درجات الحرارة21.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>TRIzol Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA-free DNase I</td>
			<td>Takara</td>
			<td>D2270A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Truseq Small RNA sample prep Kit</td>
			<td>Illumina</td>
			<td>RS-200-0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2100 Bionalyser</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA Polymerase</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F530S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UEA sRNA workbench 2.4-plant version&#160;(software)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>http://srna-workbench.cmp.uea.ac.uk/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rfam 11.0 database&#160;(website)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>http://rfam.janelia.org</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRBase 22.0&#160;(website)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>http://www.mirbase.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIREAP(software)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>https://sourceforge.net/projects/mireap/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TargetFinder&#160;(software)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>http://targetfinder.org/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generating homo- and heterografts between watermelon and bottle gourd for the study of cold-responsive micrornas

ميكرورناس (ميرناس) الذاتية الصغيرة غير الترميز الكشف من حوالي 20-24 nt، المعروف أن تلعب أدواراً هامة في تنمية النباتات والتكيف. وهناك تراكم أدلة تبين أن تتغير تعابير معينة ميرناس عند التطعيم، ممارسات زراعية التي يستعملها المزارعون عادة إلى تحسين المحاصيل التسامح الإجهادات الحيوية واللاحيويه. زجاجة قرع المحصول أصلاً قادرة على مواجهة مناخ مقارنة بكثير من الأخرى والقرعيات الرئيسية، بما في ذلك البطيخ، وجعلها واحدة من أصول الأكثر استخداماً لهذا الأخير. النهوض بالتكنولوجيات التسلسل الفائق مؤخرا أتاح فرصاً كبيرة للتحقيق في ميرناس المراعية للبرد ومساهماتها في مزايا هيتيروجرافت؛ ومع ذلك، إجراءات تجريبية كافية شرطا مسبقاً لهذا الغرض. نقدم هنا، بروتوكول مفصل لكفاءة توليد هومو-وهيتيروجرافتس بين البطيخ الباردة عرضه وزجاجة قرع البرد، بالإضافة إلى أساليب أخذ عينات الأنسجة وتوليد البيانات، وتحليل البيانات. الأساليب المقدمة مفيدة أيضا لأنظمة أخرى تطعيم النبات، باستجواب ميرنا الأنظمة تحت الضغوط البيئية المختلفة، مثل الحرارة والجفاف والملوحة.

<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58242/58242fig2.jpg"> رقم 2: تعمل مختلف الطعوم في درجة حرارة الغرفة والظروف الباردة-وأكد- () هذا الفريق يظهر هومو-وشتلات هيتيروجرافتيد في درجة حرارة الغرفة كعنصر التحكم. (ب) يظهر هذا الفريق هومو-وشتلات هيتيروجرافتيد بعد 48 ...

Watch this Scientific Journal Video about Generating Homo- and Heterografts Between Watermelon and Bottle Gourd for the Study of Cold-responsive MicroRNAs at JoVE.com

Generating Homo- and Heterografts Between Watermelon and Bottle Gourd for the Study of Cold-responsive MicroRNAs

توليد هومو-وهيتيروجرافتس بين البطيخ والقرع زجاجة لدراسة MicroRNAs المراعية للبرد

نقدم هنا بروتوكولا مفصلاً لكفاءة صنع إنسان-وهيتيروجرافتس بين البطيخ والقرع زجاجة، بالإضافة إلى أساليب أخذ عينات الأنسجة وتوليد البيانات، وتحليل البيانات، لتحقيق ميكرورناس الباردة المراعية.

MicroRNAs (miRNAs) are endogenous small non-coding RNAs of about 20 - 24 nt, known to play important roles in plant development and adaptation. There is ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في استجابة ميرنا لقدرة على الإجهاد في الطعوم النباتية مثل كيفية تنظيم ميرنا تحت الضغط البارد في طعوم زجاجة البطيخ. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هو أنه من طريقة فعالة للغاية وقابلة للتكرار لجعل الهومو و غير المتغايرة. فإنه لا يتطلب أي معدات محددة، فمن السهل جدا لأداء، وعادة ما يؤدي إلى معدل البقاء على قيد الحياة عالية جدا من التطعيم.من خلال هذه الطريقة، يمكن أن توفر نظرة ثاقبة استجابة ميرنا للإجهاد البارد في نظام الكسب غير المشروع زجاجة البطيخ. ويمكن أيضا أن تطبق على الكائنات الحية الحديثة الأخرى للكشف عن آليات النقل ميرنا المحلية والبعيدة المسافة. العرض التوضيحي المرئي لهذا الأسلوب أمر بالغ الأهمية حيث يصعب تعلم خطوات التطعيم.هذه الخطوة تتطلب مهارات متقدمة وهي مفتاح البقاء على قيد الحياة من النباتات المطعمة. للبدء، نقع بذور القرع زجاجة في منقار 500 ملليلتر من 58 درجة مئوية من الماء. يُحرّك البذور أحيانًا حتى تنخفض درجة حرارة الماء إلى 40 درجة مئوية.بينما يبرد الماء، وضع ثلاثة كيلوغرامات من التربة الخث في كيس النايلون و أوتلاف ذلك. بمجرد أن يصل الماء إلى درجة حرارة الغرفة ، شطف البذور مرتين إلى ثلاث مرات في الماء المقطر واستنزاف المياه الزائدة. السماح للبذور لتنبت في كيس الشاش في 28 درجة مئوية في غرفة النمو المظلمة.بعد الإنبات ، زرع البذور في الأواني البلاستيكية المملوءة بتربة الخث المعقمة. عندما شتلات القرع زجاجة تطوير اثنين كوتيلدونات بالارض، كرر هذه العملية مع بذور البطيخ. تنمو زجاجة القرع وشتلات البطيخ في غرفة النمو.يضاف الماء إلى الشتلات مرة واحدة في اليوم في فترة ما بعد الظهر. بعد ذلك ، قطع hypocotyls من شتلات البطيخ 2-3 سم تحت كوتيلدون. قطع الجزء العلوي من شتلات القرع زجاجة في الجانب، مباشرة فوق كوتيلمدون.ثم استخدام مسواك لجعل ثقب في الجزء العلوي من شتلات زجاجة قلص القرع. إدراج شتلات البطيخ قلصت في حفرة لجعل heterografts. بعد ذلك، إعداد homografts باستخدام الأسلوب الموصوفة مسبقاً.أولاً، لف الشتلات المطعمة في أكياس البولي إيثيلين الشفافة للحفاظ على رطوبة عالية نسبيًا. ثم الحفاظ على الشتلات ملفوفة في غرفة النمو لمدة سبعة أيام. بعد اليوم السابع، قم بإزالة الحقائب والسماح للنباتات بالنمو في ظل نفس الظروف لمدة سبعة إلى 10 أيام.تقسيم الشتلات إلى مجموعتين، واحدة لعلاجات البرد والأخرى للسيطرة. إعادة شتلات التحكم إلى نفس الظروف البيئية. وضع الشتلات المعالجة الباردة في غرفة النمو تعيين إلى ست درجات مئوية مع نفس الظروف المظلمة الخفيفة كمجموعة التحكم.بعد 48 ساعة ، اترك عينات من scion و rootstocks من الطعوم. تجميد العينات على الفور في النيتروجين السائل وتخزينها في ناقص 70 درجة مئوية. نقل العينة المجمدة إلى أنبوب ميكروسنتروجي ملليلتر اثنين في النيتروجين السائل.إضافة حبة الفولاذ المقاوم للصدأ إلى كل أنبوب عينة وتجانس الأنسجة إلى مسحوق ناعم. لكل تركيبة تطعيم، تأخذ كميات متساوية من العينة الأرض من 10 شتلات وخلطها في أنبوب الطرد المركزي 10 ملليلتر. إضافة كمية مناسبة من مبيد هيدروكلوريد غاانيديوم.بعد ذلك، أضف DNase خالية من الحمض النووي الريبي واحد إلى 150 وحدة لكل ملليلتر في 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. ثم تحديد إجمالي كمية الحمض النووي الريبي على نظام الكهرباء والكابري. بعد ذلك، ذاب المكتبة التطبيع الكواشف والمحولات.ثم ligate RNase الصغيرة مع خمسة رئيس الوزراء وثلاثة محولات رئيس الوزراء، و elute وتنقية لهم. عكس نسخ خمسة رئيس الوزراء وثلاثة رئيس RNase صغيرة ligated التالية المبادئ التوجيهية للشركة المصنعة. بعد ذلك، قم بإجراء تضخيم PCR بعد بروتوكول الشركة المصنعة.ثم استخدم نظام الكهرباء الدقيقة لضمان أن عدد النزاهة RNA أكبر من سبعة. قم بتحميل ميكرولتر واحد من مكتبة RNA على نظام الكهرباء الكابري الصغير لضمان أن عدد سلامة الحمض النووي الريبي أكبر من سبعة. وأخيراً، تسلسل مكتبات RNA الصغيرة على أداة تسلسل عالية الإنتاجية.باستخدام هذا البروتوكول، تم الحصول على معدل البقاء على قيد الحياة 98٪ لالطعيم والأنماط الظاهرية لدرجة حرارة الغرفة وظروف الإجهاد البارد. sRNAs من 24 النيوكليوتيدات تشكل أكبر فئة من SRNAs في جميع الجمع تطعيم، بغض النظر عن العلاج درجة الحرارة. بعد 48 ساعة من العلاج البارد ، تم تنظيم 30 و 268 microRNAs ، على التوالي.في أوراق scion في غير المتغايرة ، على العكس من ذلك ، في أوراق الجذر ، كانت 31 و 12 microRNAs أعلى لأسفل ، على التوالي. في البطيخ البطيخ هومجراففت، 64 و 83 microRNAs كانت أعلى و أسفل المنظمة، على التوالي. وهذا ما أثبت أن التغاير تسبب في إعادة برمجة عميقة لتعابير ميكرورنا.أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن نتذكر الحجم والعمر النسبيين لسيقان الابنة ، ويعتبر ابن الطفل أمرًا حاسمًا لصنع الكسب غير المشروع الناجح. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل تسلسل اللانكارا، التنميط البروتيومي من أجل التحقيق في تنظيم اللانكرنا والبروتين ونظام الترميز في نظام التطعيم. بعد تطورها، مهدت هذه التقنية الطريق للبحث في مجال تحمل النباتات اللاأحيائية لاستكشاف آلية ميزة تطعيم النباتات في كوكوربيتاسي وخارجها.لا ننسى أن العمل مع هيدروكلوريد guanidine يمكن أن تكون خطرة للغاية وينبغي دائما اتخاذ الاحتياطات المناسبة مع تنفيذ هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Environment

Transcript and Metabolite Profiling for the Evaluation of Tobacco Tree and Poplar as Feedstock for the Bio-based Industry

نص والمستقلب التنميط لتقييم شجرة التبغ والحور كمادة وسيطة لصناعة القائمة على الحيوية

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the ...

The Use of High-resolution Infrared Thermography (HRIT) for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

The Use of High-resolution Infrared Thermography HRIT for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

استخدام عالية الدقة الأشعة تحت الحمراء الحراري (HRIT) لدراسة الجليد في النواة والجليد نشر في النباتات

Freezing events that occur when plants are actively growing can be a lethal event, particularly if the plant has no freezing tolerance. Such frost events ...

Empirical, Metagenomic, and Computational Techniques Illuminate the Mechanisms by which Fungicides Compromise Bee Health

التجريبية ومواد وتقنيات حسابية إلقاء الضوء على الآليات "مبيدات الفطريات وسط النحل الصحية"

Growers often use fungicide sprays during bloom to protect crops against disease, which exposes bees to fungicide residues. Although considered ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

بروتوكول للجزيئات البلاستيك الصغيرة أخذ العينات على سطح البحر وتحليل عينة

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

استخراج المبيدات العضوية من البلاستيك الكريات والبلاستيك تحليل نوع

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...

Experimental Column Setup for Studying Anaerobic Biogeochemical Interactions Between Iron (Oxy)Hydroxides, Trace Elements, and Bacteria

Experimental Column Setup for Studying Anaerobic Biogeochemical Interactions Between Iron OxyHydroxides, Trace Elements, and Bacteria

إعداد العمود التجريبية لدراسة التفاعلات الكيميائية الأرضية الأحيائية اللاهوائية بين هيدروكسيدات الحديد (أوكسي)، والعناصر النزرة، والبكتيريا

Fate and speciation of trace elements (TEs), such as arsenic (As) and mercury (Hg), in aquifers are closely related to physio-chemical conditions, such as ...

Ecosystem Fabrication (EcoFAB) Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

Ecosystem Fabrication EcoFAB Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

بروتوكولات النظام الإيكولوجي تلفيق (اكوفاب) لتشييد مختبر النظم الإيكولوجية تهدف إلى دراسة التفاعلات بين الميكروبات والنبات

Beneficial plant-microbe interactions offer a sustainable biological solution with the potential to boost low-input food and bioenergy production. A ...

Experimental Study of the Relationship Between Particle Size and Methane Sorption Capacity in Shale

دراسة تجريبية للعلاقة بين حجم الجسيمات، والقدرة على امتصاص غاز الميثان في الصخري

The amount of adsorbed shale gas is a key parameter used in shale gas resource evaluation and target area selection, and it is also an important standard ...

Harvesting Venom Toxins from Assassin Bugs and Other Heteropteran Insects

حصاد السم السموم من قاتل الحشرات وغيرها من الحشرات هيتيروبتيران

Heteropteran insects such as assassin bugs (Reduviidae) and giant water bugs (Belostomatidae) descended from a common predaceous and venomous ancestor, ...

Choice and No-Choice Bioassays to Study the Pupation Preference and Emergence Success of Ectropis grisescens

Choice and No-Choice Bioassays to Study the Pupation Preference and Emergence Success of Ectropis grisescens

الاختيار والمقايسة لا خيار لدراسة الأفضلية بوبيشن وظهور نجاح جريسيسسينس اكتروبيس

Many insects live above the ground as larvae and adults and as pupate below the ground. Compared to the above-ground stages of their life cycles, less ...