Name: generating homo- and heterografts between watermelon and bottle gourd for the study of cold-responsive micrornas
Uploaded: 2018-11-20T12:30:00
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इस काम को राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन ऑफ चाइना (३१७७२१९१) द्वारा समर्थित किया गया, झेजियांग प्रांत (2017C32027) में सार्वजनिक हित के लिए अनुसंधान परियोजना, झेजियांग (2016C02051) में पादप प्रजनन की प्रमुख विज्ञान परियोजना, और राष्ट्रीय कार्यक्रम के लिए शीर्ष पायदान युवा पेशेवरों के समर्थन (P.X.) ।

1. बीज नसबंदी और अंकुरण
<ol><li>सतह नसबंदी के लिए, एक ५००-मिलीलीटर पानी से भरा चोंच में बोतल लौकी के बीज भिगोने के लिए ५८ डिग्री सेल्सियस पर सामयिक सरगर्मी के साथ, जब तक पानी के तापमान के लिए बूँदें ४० ° c.</li>
	<li>इस ?...

<ol>
	<li>Schwarz, D., Rouphael, Y., Colla, G., Venema, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting+as+a+tool+to+improve+tolerance+of+vegetables+to+abiotic+stresses:+Thermal+stress,+water+stress+and+organic+pollutants.">Grafting as a tool to improve tolerance of vegetables to abiotic stresses: Thermal stress, water stress and organic pollutants.</a> Scientia Horticulturae. 127, 162-171 (2010).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+tolerance+differences+in+cucumber+seedlings+grafted+on+rootstocks+with+different+tolerance+to+low+temperature+and+weak+light+stresses.">Mechanisms of tolerance differences in cucumber seedlings grafted on rootstocks with different tolerance to low temperature and weak light stresses.</a> Turkish Journal of Botany. 39 (4), 606-614 (2015).</li><li>Li, C. H., Li, Y. S., Bai, L. Q., He, C. X., Yu, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Expression+of+miRNAs+and+Their+Targets+in+the+Response+to+Drought+Stress+of+Grafted+Cucumber+Seedlings.">Dynamic Expression of miRNAs and Their Targets in the Response to Drought Stress of Grafted Cucumber Seedlings.</a> Horticultural Plant Journal. 2 (1), 41-49 (2016).</li><li>Rouphael, Y., Cardarelli, M., Colla, G., Rea, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yield,+mineral+composition,+water+relations,+and+water+use+efficiency+of+grafted+mini-watermelon+plants+under+deficit+irrigation.">Yield, mineral composition, water relations, and water use efficiency of grafted mini-watermelon plants under deficit irrigation.</a> HortScience. 43 (3), 730-736 (2008).</li><li>Savvas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactive+effects+of+grafting+and+manganese+supply+on+growth,+yield,+and+nutrient+uptake+by+tomato.">Interactive effects of grafting and manganese supply on growth, yield, and nutrient uptake by tomato.</a> HortScience. 44 (7), 1978-1982 (2009).</li><li>Aloni, B., Cohen, R., Karni, L., Aktas, H., Edelstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal+signaling+in+rootstock-scion+interactions.">Hormonal signaling in rootstock-scion interactions.</a> Scientia Horticulturae. 127, 119-126 (2010).</li><li>Rouphael, Y., Caradrelli, M., Rea, E., Colla, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+melon+and+cucumber+photosynthetic+activity,+mineral+composition,+and+growth+performance+under+salinity+stress+by+grafting+onto+Cucurbita+hybrid+rootstocks.">Improving melon and cucumber photosynthetic activity, mineral composition, and growth performance under salinity stress by grafting onto Cucurbita hybrid rootstocks.</a> Photosynthetica. 50 (2), 180-188 (2012).</li><li>Louws, F. J., Rivard, C. L., Kubota, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting+fruiting+vegetables+to+manage+soilborne+pathogens,+foliar+pathogens,+arthropods+and+weeds.">Grafting fruiting vegetables to manage soilborne pathogens, foliar pathogens, arthropods and weeds.</a> Scientia Horticulturae. 127 (2), 127-146 (2010).</li><li>Asins, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+rootstock-mediated+nitrogen+(N)+uptake+and+root-to-shoot+signalling+at+contrasting+N+availabilities+in+tomato.">Genetic analysis of rootstock-mediated nitrogen (N) uptake and root-to-shoot signalling at contrasting N availabilities in tomato.</a> Plant Science. 263, 94-106 (2017).</li><li>Yin, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+protective+enzymes+in+tomato+rootstocks+to+resist+root+knot+nematodes.">Role of protective enzymes in tomato rootstocks to resist root knot nematodes.</a> Acta Horticulturae. 1086 (1086), 213-218 (2015).</li><li>Gaion, L. A., Carvalho, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Distance+Signaling:+what+grafting+has+revealed?.">Long-Distance Signaling: what grafting has revealed?.</a> Journal of Plant Growth Regulation. 37 (2), 694-704 (2018).</li><li>Turnbull, C. G., Hennig, L., K&#246;hler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting+as+a+research+tool.">Grafting as a research tool.</a> Plant Developmental Biology. , 11-26 (2010).</li><li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting-responsive+miRNAs+in+cucumber+and+pumpkin+seedlings+identified+by+high-throughput+sequencing+at+whole+genome+level.">Grafting-responsive miRNAs in cucumber and pumpkin seedlings identified by high-throughput sequencing at whole genome level.</a> Physiologia Plantarum. 151 (4), 406-422 (2014).</li><li>Lakhotia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+miRNAome+in+root,+stem,+leaf+and+tuber+developmental+stages+of+potato+(Solanum+tuberosum+L.)+by+high-throughput+sequencing.">Identification and characterization of miRNAome in root, stem, leaf and tuber developmental stages of potato (Solanum tuberosum L.) by high-throughput sequencing.</a> BMC Plant Biology. 14 (1), 6 (2014).</li><li>Jones-Rhoades, M. W., Bartel, D. P., Bartel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+and+their+regulatory+roles+in+plants.">MicroRNAs and their regulatory roles in plants.</a> Annual Review of Plant Biology. 57, 19-53 (2006).</li><li>Puzey, J. R., Kramer, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+conserved+Aquilegia+coerulea+microRNAs+and+their+targets.">Identification of conserved Aquilegia coerulea microRNAs and their targets.</a> Genetic. 448 (1), 46-56 (2009).</li><li>Matthewman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR395+is+a+general+component+of+the+sulfate+assimilation+regulatory+network+in+Arabidopsis.">miR395 is a general component of the sulfate assimilation regulatory network in Arabidopsis.</a> FEBS Letters. 586 (19), 3242-3248 (2012).</li><li>Ali, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+RNA+silencing+signal+through+grafting+confers+virus+resistance+from+transgenically+silenced+tobacco+rootstocks+to+non-transgenic+tomato+and+tobacco+scions.">Transmission of RNA silencing signal through grafting confers virus resistance from transgenically silenced tobacco rootstocks to non-transgenic tomato and tobacco scions.</a> Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology. 25 (3), 245-252 (2016).</li><li>Li, Y. S., Li, C. H., Bai, L. Q., He, C. X., Yu, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+and+target+gene+responses+to+salt+stress+in+grafted+cucumber+seedlings.">MicroRNA and target gene responses to salt stress in grafted cucumber seedlings.</a> Acta Physiologiae Plantarum. 38 (2), 1-12 (2016).</li><li>Pagliarani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+accumulation+of+miRNAs+differentially+modulated+by+drought+stress+is+affected+by+grafting+in+grapevine.">The accumulation of miRNAs differentially modulated by drought stress is affected by grafting in grapevine.</a> Plant Physiology. 173 (4), 2180-2195 (2017).</li><li>Liu, N., Yang, J. H., Guo, S. G., Xu, Y., Zhang, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+identification+and+comparative+analysis+of+conserved+and+novel+microRNAs+in+grafted+watermelon+by+high-throughput+sequencing.">Genome-wide identification and comparative analysis of conserved and novel microRNAs in grafted watermelon by high-throughput sequencing.</a> PLoS One. 8 (2), e57359 (2013).</li><li>Song, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+2JC-350+automatic+grafting+machine+with+cut+grafting+method+for+vegetable+seedling.">Development of 2JC-350 automatic grafting machine with cut grafting method for vegetable seedling.</a> Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering. 22 (12), 103-106 (2006).</li><li>Kumar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncovering+leaf+rust+responsive+miRNAs+in+wheat+(triticum+aestivum+l.)+using+high-throughput+sequencing+and+prediction+of+their+targets+through+degradome+analysis.">Uncovering leaf rust responsive miRNAs in wheat (triticum aestivum l.) using high-throughput sequencing and prediction of their targets through degradome analysis.</a> Planta. 245 (1), 1-22 (2016).</li><li>Kohli, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+wilt+and+salt+stress-responsive+microRNAs+in+chickpea+through+high-throughput+sequencing.">Identification and characterization of wilt and salt stress-responsive microRNAs in chickpea through high-throughput sequencing.</a> PLoS One. 9 (10), e108851 (2014).</li><li>Salzberg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+challenges+in+next-generation+genomics.+International+Conference+on+Scientific+and+Statistical+Database+Management.">Computational challenges in next-generation genomics. International Conference on Scientific and Statistical Database Management.</a> ACM. 2, (2013).</li><li>Guo, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+draft+genome+of+watermelon+(Citrullus+lanatus)+and+resequencing+of+20+diverse+accessions.">The draft genome of watermelon (Citrullus lanatus) and resequencing of 20 diverse accessions.</a> Nature Genetics. 45, 51-58 (2013).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gourdbase:+a+genome-centered+multi-omics+database+for+the+bottle+gourd+(lagenaria+siceraria),+an+economically+important+cucurbit+crop.">Gourdbase: a genome-centered multi-omics database for the bottle gourd (lagenaria siceraria), an economically important cucurbit crop.</a> Scientific Reports. 8 (1), 306 (2018).</li><li>Wang, X. F., Liu, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Curation+of+miRBase+Annotation+Using+Integrated+Small+RNA+High-Throughput+Sequencing+Data+for+C.+elegans+and+Drosophila.">Systematic Curation of miRBase Annotation Using Integrated Small RNA High-Throughput Sequencing Data for C. elegans and Drosophila.</a> Frontiers in Genetics. 2, 25 (2011).</li><li>Bo, X. C., Wang, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TargetFinder:+a+software+for+antisense+oligonucleotide+target+site+selection+based+on+MAST+and+secondary+structures+of+target+mRNA.">TargetFinder: a software for antisense oligonucleotide target site selection based on MAST and secondary structures of target mRNA.</a> Bioinformatics. 21 (8), 1401-1402 (2005).</li><li>. GOATOOLS: Tools for Gene Ontology Available from: <a target="_blank" href="https://doi.org/10.5281/zenodo.31628">https://doi.org/10.5281/zenodo.31628</a> (2015)</li><li>Wang, L. P., Li, G. J., Wu, X. H., Xu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+proteomic+analyses+provide+novel+insights+into+the+effects+of+grafting+wound+and+hetero-grafting+per+se+on+bottle+gourd.">Comparative proteomic analyses provide novel insights into the effects of grafting wound and hetero-grafting per se on bottle gourd.</a> Scientia Horticulturae. 200 (8), 1-6 (2016).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल में, हम विस्तार से एक उच्च कुशल और reproducible विधि तरबूज और बोतल लौकी के बीच होमो-और heterografts बनाने के लिए वर्णित है । इस विधि, कोई विशेष उपकरणों की आवश्यकता होती है, बहुत काम करने के लिए आसान है और आम तौ?...

भ्रष्टाचारी लंबे समय से एक कृषि तकनीक के रूप में नियोजित किया गया है फसल उत्पादन और बायोटिक और अजैव के लिए सहिष्णुता में सुधार1,2,3तनाव । heterografting प्रणालियों में, अभिजात वर्ग rootstocks पानी और पोषक तत्वों को बढ़ाने के पौधों की वृद्धि कर सकते हैं, मिट्टी रोगजनकों के प्रतिरोध को मजबूत बनाने, और धातु विषाक्तता4,5, जो भ्रष्टाचारियों एक बढ़ाया प्रदान कर सकते है के नकारात्मक प्रभाव को सीमित विकास शक्ति और पर्यावरण तनाव को बढ़ा सहिष्णुता । कई मामलों में, heterografting भी बागवानी पौधों में फलों के गुणों को प्रभावित कर सकते हैं, बेहतर फलों का स्वाद और स्वास्थ्य से संबंधित6,7यौगिकों की वृद्धि की सामग्री के लिए अग्रणी । यह पाया गया है कि phytohormones, RNAs, पेप्टाइड्स, और rootstock और वंशज के बीच प्रोटीन की लंबी दूरी के हस्तांतरण एक मौलिक तंत्र के विकास और वंशज8,9 पौधों की reprogramminging मॉडुलन है ,10. भ्रष्टाचार व्यापक रूप से लंबी दूरी के संकेत और पर्यावरण अनुकूलन11के संबंध में परिवहन के अध्ययन में इस्तेमाल किया गया है । भ्रष्टाचारी प्रयोगों ऊतक या संवहनी एसएपी प्राप्त करने में संचरित अणुओं के अस्पष्ट का पता लगाने के लिए विशेष रूप से शक्तिशाली हैं, और सक्रियण या आणविक संकेत संचरण12के कारण लक्ष्यों के दमन ।
गैर कोडिंग RNAs, आरएनए का एक बड़ा वर्ग है कि कोशिकाओं में महत्वपूर्ण नियामक कार्य डालती है, अजैव तनाव13को संयंत्र अनुकूलन को सुविधाजनक बनाने में एक भूमिका निभाने की सूचना दी गई है । miRNAs के बारे में 20-24 nt के छोटे गैर कोडिंग RNAs अंतर्जात हैं । अध्ययन संयंत्र गतिविधियों, गोली वृद्धि, पार्श्व जड़ गठन14,15,16के रूप में विभिंन पहलुओं में miRNAs की नियामक भूमिका से पता चला है, पोषक तत्व, सल्फेट चयापचय और17homeostasis, और प्रतिक्रियाओं को बायोटिक और अजैव तनाव18। हाल ही में, miRNAs की अभिव्यक्ति और उनके लक्ष्य जीन heterografted ककड़ी अंकुर19में नमक तनाव सहिष्णुता से संबंधित थे । अंगूर की विविधता भ्रष्टाचारियों में, सूखे तनाव को miRNA अभिव्यक्ति की प्रतिक्रियाओं को जीनोटाइप-निर्भर20पाया गया ।
तीव्र विकास और उच्च प्रवाह अनुक्रमण प्रौद्योगिकी के घटते लागत कृषीय संयंत्रों में miRNA नियमों के अध्ययन के लिए एक महान अवसर प्रदान की है । तरबूज (Citrullus lanatus [Thunb.] Mansf.), एक महत्वपूर्ण cucurbit फसल दुनिया भर में हो, कम तापमान के लिए अतिसंवेदनशील है । बोतल लौकी (Lagenaria siceraria [मोलिना] Standl.) एक अधिक जलवायु लचीला cucurbit आमतौर पर तरबूज के साथ भ्रष्टाचार के लिए किसानों द्वारा इस्तेमाल किया है । वर्तमान अध्ययन का प्राथमिक लक्ष्य तरबूज (Citrullus lanatus [Thunb.] के बीच heterografts बनाने के लिए एक मानक, कुशल और सुविधाजनक विधि स्थापित करना है । Mansf.) और बोतल लौकी (Lagenaria siceraria [मोलिना] Standl) । यह प्रोटोकॉल भी एक विस्तृत प्रायोगिक योजना और विश्लेषणात्मक प्रक्रियाओं miRNA अभिव्यक्ति के विनियमन के अध्ययन के लिए भ्रष्टाचार के बाद, जो अंतर्निहित heterografting लाभ तंत्र खुलासा करने के लिए उपयोगी है प्रदान करता है ।
इस अध्ययन में प्रयुक्त पौध सामग्री में तरबूज की फसल और लौकी की landrace शामिल है । तरबूज फसल उच्च उपज है, लेकिन कम तापमान के लिए अतिसंवेदनशील के साथ एक वाणिज्यिक खेती है । बोतल लौकी landrace तरबूज, ककड़ी, और बोतल लौकी, कम तापमान21की अपनी उत्कृष्ट सहिष्णुता के कारण के साथ भ्रष्टाचार के लिए एक लोकप्रिय rootstock है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>TRIzol Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA-free DNase I</td>
			<td>Takara</td>
			<td>D2270A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Truseq Small RNA sample prep Kit</td>
			<td>Illumina</td>
			<td>RS-200-0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2100 Bionalyser</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA Polymerase</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F530S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UEA sRNA workbench 2.4-plant version&#160;(software)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>http://srna-workbench.cmp.uea.ac.uk/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rfam 11.0 database&#160;(website)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>http://rfam.janelia.org</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRBase 22.0&#160;(website)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>http://www.mirbase.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIREAP(software)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>https://sourceforge.net/projects/mireap/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TargetFinder&#160;(software)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>http://targetfinder.org/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generating homo- and heterografts between watermelon and bottle gourd for the study of cold-responsive micrornas

MicroRNAs (miRNAs) के बारे में 20-24 nt, संयंत्र के विकास और अनुकूलन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाने के लिए जाना जाता है अंतर्जात छोटे गैर कोडिंग RNAs हैं । वहां एक जमा सबूत दिखा रहा है कि कुछ miRNAs की अभिव्यक्ति जब भ्रष्टाचार कर रहे है बदल रहे हैं, एक कृषि अभ्यास सामांयतः किसानों द्वारा इस्तेमाल के लिए बायोटिक और अजैव तनाव को फसल सहिष्णुता में सुधार होगा । लौकी, तरबूज सहित कई अंय प्रमुख आलू की तुलना में एक स्वाभाविक जलवायु लचीला फसल है, यह एक बाद के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल rootstocks में से एक प्रतिपादन । उच्च प्रवाह अनुक्रमण प्रौद्योगिकियों के हाल ही में उंनति के महान अवसर प्रदान की गई है ठंड उत्तरदाई miRNAs और heterograft लाभ के लिए उनके योगदान की जांच; फिर भी, पर्याप्त प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं इस प्रयोजन के लिए एक शर्त है । यहां, हम ठंडा-अतिसंवेदनशील तरबूज और ठंडे सहिष्णु बोतल लौकी, ऊतक नमूने की विधियों के अलावा, डेटा उत्पादन, और डेटा विश्लेषण के बीच कुशलता से होमो-और heterografts पैदा करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । प्रस्तुत तरीके अंय संयंत्र के लिए भी उपयोगी हैं, सिस्टम भ्रष्टाचार, गर्मी, सूखा, और लवणता के रूप में विभिंन पर्यावरणीय तनावों के तहत miRNA विनियमों, पूछताछ के लिए ।

<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58242/58242fig2.jpg"> चित्रा 2: कमरे के तापमान और ठंडे तनाव की स्थिति में विभिंन भ्रष्टाचारियों के Phenotypes । (क) इस पैनल के नियंत्रण के रूप में कमरे के तापमान पर होमोसेक्सु...

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Generating Homo- and Heterografts Between Watermelon and Bottle Gourd for the Study of Cold-responsive MicroRNAs

पैदा होमो-और Heterografts ठंड उत्तरदायी MicroRNAs के अध्ययन के लिए तरबूज और बोतल लौकी के बीच

यहाँ हम ठंडे-उत्तरदायी microRNAs की जांच के लिए, ऊतक नमूने की विधियों, डेटा उत्पादन, और डेटा विश्लेषण के अलावा, तरबूज और बोतल लौकी के बीच कुशलतापूर्वक होमो-और heterografts बनाने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं ।

MicroRNAs (miRNAs) are endogenous small non-coding RNAs of about 20 - 24 nt, known to play important roles in plant development and adaptation. There is ...

इस विधि में मदद कर सकते है miRNA प्रतिक्रिया में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब में इस तरह के रूप में कैसे miRNA तरबूज की बोतल लौकी कलम में ठंडे तनाव के तहत विनियमित कर रहे है संयंत्र कलम में तनाव की क्षमता के लिए । इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह होमो और हेट्रोग्रेफ्ट बनाने के लिए अत्यधिक कुशल और प्रजनन योग्य विधि है। इसके लिए कोई विशिष्ट उपकरण की आवश्यकता नहीं है, यह प्रदर्शन करना बहुत आसान है, और आम तौर पर ग्राफ्टिंग की बहुत उच्च जीवित रहने की दर में परिणाम होता है।इस विधि के माध्यम से, तरबूज की बोतल लौकी भ्रष्टाचार प्रणाली में ठंडे तनाव के लिए miRNA प्रतिक्रिया में अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकते हैं । यह स्थानीय और लंबी दूरी के मिरना परिवहन के तंत्र का खुलासा करने के लिए अन्य आधुनिक जीवों पर भी लागू किया जा सकता है। इस विधि का दृश्य प्रदर्शन महत्वपूर्ण है क्योंकि ग्राफ्टिंग चरणों को सीखना मुश्किल है।इस कदम के लिए उन्नत कौशल की आवश्यकता होती है और ग्राफ्ट किए गए पौधों के अस्तित्व की कुंजी होती है। शुरू करने के लिए, लौकी के बीज को 58 डिग्री सेल्सियस पानी के 500 मिलीलीटर बीकर में भिगोएं। बीज ों को कभी-कभी हिलाएं जब तक कि पानी का तापमान 40 डिग्री सेल्सियस तक न गिर जाए।जबकि पानी ठंडा हो जाता है, तीन किलोग्राम पीट मिट्टी को एक नायलॉन बैग में डालकर ऑटोक्लेव कर देते हैं। एक बार जब पानी कमरे के तापमान तक पहुंच जाता है, तो आसुत पानी में दो से तीन बार बीज कुल्लाएं और अतिरिक्त पानी को छान लें। बीज को अंधेरे विकास कक्ष में 28 डिग्री सेल्सियस पर एक धुंध बैग में अंकुरित करने की अनुमति दें।अंकुरण के बाद, बंध्याकरण पीट मिट्टी से भरे प्लास्टिक के बर्तनों में बीज बोएं। जब लौकी की पौध दो चपटी कोटिलेडोन विकसित होती है, तो तरबूज के बीजों के साथ इस प्रक्रिया को दोहराएं। लौकी और तरबूज के रोपण को एक विकास कक्ष में उगाएं।दोपहर में प्रति दिन एक बार रोपण में पानी डालें। इसके बाद, तरबूज के पौध के हाइपोकोटिल को कोटिलेडोन के नीचे दो से तीन सेंटीमीटर काट लें। कोटिलेडॉन के तुरंत ऊपर, लौकी के रोपण के ऊपर को काट लें।फिर छंटनी की गई लौकी के रोपण के शीर्ष में छेद करने के लिए टूथपिक का उपयोग करें। हेट्रोग्राफ बनाने के लिए छेद में छंटनी की तरबूज रोपण डालें। इसके बाद, पहले वर्णित विधि का उपयोग करके होमोग्राफ तैयार करें।सबसे पहले, अपेक्षाकृत उच्च आर्द्रता बनाए रखने के लिए पारदर्शी पॉलीथीन बैग में ग्राफ्टेड रोपण लपेटें। फिर लिपटे हुए रोपण को सात दिनों तक एक विकास कक्ष में बनाए रखें। सातवें दिन के बाद, बैग निकालें और पौधों को सात से 10 दिनों तक समान परिस्थितियों में बढ़ने दें।रोपण को दो समूहों में विभाजित करें, एक ठंडे उपचार के लिए और एक नियंत्रण के लिए। नियंत्रण रोपण को उसी पर्यावरणीय स्थितियों में वापस करें। ठंड का इलाज रोपण एक विकास कक्ष में रखें जो नियंत्रण समूह के समान हल्के अंधेरे स्थितियों के साथ छह डिग्री सेल्सियस तक सेट हो।48 घंटे के बाद, ग्राफ्ट से वंशज और रूटस्टॉक्स के नमूनों को छोड़ दें। नमूनों को तुरंत तरल नाइट्रोजन में फ्रीज करें और उन्हें शून्य से 70 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। तरल नाइट्रोजन में एक दो मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में जमे हुए नमूने को स्थानांतरित करें।प्रत्येक नमूना ट्यूब में एक स्टेनलेस स्टील मनका जोड़ें और ऊतकों को एक ठीक पाउडर से समरूप करें। प्रत्येक ग्राफ्टिंग संयोजन के लिए, 10 रोपण से जमीन के नमूने की बराबर मात्रा लें और उन्हें 10 मिलीलीटर सेंट्रलाइज ट्यूब में मिलाएं। ग्वानिडियम हाइड्रोक्लोराइड रीएजेंट की उचित मात्रा जोड़ें।इसके बाद, आरएनए-फ्री DNase एक घंटे के लिए ३७ डिग्री सेल्सियस पर १५० इकाइयों प्रति मिलीलीटर जोड़ें । फिर एक माइक्रोकैपिलरी इलेक्ट्रोफोरेसिस सिस्टम पर कुल आरएनए मात्रा निर्धारित करें। इसके बाद, पुस्तकालय सामान्यीकरण रिएजेंट्स और एडाप्टर को पिघलाएं।फिर पांच प्राइम और थ्री प्राइम एडाप्टर के साथ छोटे आरएनएसे को लिगेट करें, और उन्हें एल्यूट और शुद्ध करें। रिवर्स ने निर्माता के दिशा-निर्देशों का पालन करते हुए पांच प्राइम और तीन प्राइम लिटेड स्मॉल आरनैस को टाइप किया । इसके बाद, निर्माता के प्रोटोकॉल का पालन करते हुए पीसीआर प्रवर्धन करें।फिर यह सुनिश्चित करने के लिए माइक्रोकैलरी इलेक्ट्रोफोरेसिस सिस्टम का उपयोग करें कि आरएनए अखंडता संख्या सात से अधिक है। यह सुनिश्चित करने के लिए कि आरएनए अखंडता संख्या सात से अधिक है, माइक्रोकैपिलरी इलेक्ट्रोफोरेसिस सिस्टम पर आरएनए लाइब्रेरी का एक माइक्रोलीटर लोड करें। अंत में, एक उच्च थ्रूपुट अनुक्रमक यंत्र पर छोटे आरएनए पुस्तकालयों अनुक्रम।इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके, ग्राफ्टिंग के लिए 98% जीवित रहने की दर और कमरे के तापमान और ठंडे तनाव की स्थिति के लिए फेनोटाइप प्राप्त किए गए थे। 24 न्यूक्लियोटाइड्स के एसआरएनए ने तापमान उपचार की परवाह किए बिना, सभी ग्राफ्टिंग संयोजन में एसआरएन का सबसे बड़ा वर्ग बनाया। ठंड के उपचार के 48 घंटे के बाद, क्रमशः 30 और 268 माइक्रोआरएनए अप और डाउन-रेगुए गए थे।हेट्रोग्राफ्ट में वंशज की पत्तियों में, इसके विपरीत, रूटस्टॉक की पत्तियों में, क्रमशः 31 और 12 माइक्रोआरएनए ऊपर और नीचे विनियमित थे। तरबूज-तरबूज होमोग्राफ में क्रमशः 64 और 83 माइक्रोआरएनए अप और डाउन-रेगुए गए थे। इससे यह प्रदर्शित हुआ कि विषमता के कारण माइक्रोआरएनए अभिव्यक्तियों का गहन पुनर्प्रोग्रामिंग हुआ।इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, बेटी के डंठल के सापेक्ष आकार और आयु को याद रखना महत्वपूर्ण है और वंशज एक सफल भ्रष्टाचार करने के लिए महत्वपूर्ण है। इस प्रक्रिया के बाद, एलएनसीआरएनए अनुक्रमण, प्रोटेओमिक प्रोफाइलिंग जैसे अन्य तरीकों को लागू करने और प्रोटीन के नियमन और ग्राफ्टिंग प्रणाली में कोडिंग प्रणाली की जांच करने के लिए किया जा सकता है। इसके विकास के बाद, इस तकनीक ने क्यूकर्बिटेसी और उससे आगे में पौधे ग्राफ्टिंग लाभ के तंत्र का पता लगाने के लिए संयंत्र अजैविक सहिष्णुता के क्षेत्र में अनुसंधान का मार्ग प्रशस्त किया।यह न भूलें कि ग्वानिडीन हाइड्रोक्लोराइड के साथ काम करना बेहद खतरनाक हो सकता है और इस प्रक्रिया को करने के साथ उचित सावधानी बरतनी चाहिए।

Research

JoVE Journal

Environment

Transcript and Metabolite Profiling for the Evaluation of Tobacco Tree and Poplar as Feedstock for the Bio-based Industry

जैव आधारित उद्योग के लिए फीडस्टॉक के रूप में तंबाकू ट्री और चिनार के मूल्यांकन के लिए ट्रांसक्रिप्ट और metabolite रूपरेखा

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the ...

The Use of High-resolution Infrared Thermography (HRIT) for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

The Use of High-resolution Infrared Thermography HRIT for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

संयंत्रों में बर्फ nucleation और आइस-प्रचार के अध्ययन के लिए उच्च संकल्प इन्फ्रारेड Thermography (HRIT) का प्रयोग

Freezing events that occur when plants are actively growing can be a lethal event, particularly if the plant has no freezing tolerance. Such frost events ...

Empirical, Metagenomic, and Computational Techniques Illuminate the Mechanisms by which Fungicides Compromise Bee Health

अनुभवजंय, Metagenomic, और गणना तकनीक तंत्र जो द्वारा कवक समझौता मधुमक्खी स्वास्थ्य रोशन

Growers often use fungicide sprays during bloom to protect crops against disease, which exposes bees to fungicide residues. Although considered ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

समुद्र सतह और नमूना विश्लेषण पर Microplastics सैम्पलिंग के लिए प्रोटोकॉल

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

प्लास्टिक छर्रों और प्लास्टिक प्रकार विश्लेषण से ऑगानोक्लोरीन कीटनाशकों का निकास

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...

Experimental Column Setup for Studying Anaerobic Biogeochemical Interactions Between Iron (Oxy)Hydroxides, Trace Elements, and Bacteria

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आयरन (ऑक्सी) Hydroxides, ट्रेस तत्वों, और बैक्टीरिया के बीच Anaerobic Biogeochemical इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए प्रायोगिक कॉलम सेटअप

Fate and speciation of trace elements (TEs), such as arsenic (As) and mercury (Hg), in aquifers are closely related to physio-chemical conditions, such as ...

Ecosystem Fabrication (EcoFAB) Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

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पारिस्थितिकी तंत्र निर्माण (EcoFAB) संयंत्र-सूक्ष्म जीव बातचीत का अध्ययन करने के लिए डिज़ाइन प्रयोगशाला पारिस्थितिकी प्रणालियों के निर्माण के लिए प्रोटोकॉल

Beneficial plant-microbe interactions offer a sustainable biological solution with the potential to boost low-input food and bioenergy production. A ...

Experimental Study of the Relationship Between Particle Size and Methane Sorption Capacity in Shale

शेल में कण आकार और मीथेन Sorption क्षमता के बीच संबंधों का प्रायोगिक अध्ययन

The amount of adsorbed shale gas is a key parameter used in shale gas resource evaluation and target area selection, and it is also an important standard ...

Harvesting Venom Toxins from Assassin Bugs and Other Heteropteran Insects

हत्यारा कीड़े और अंय Heteropteran कीड़ों से विष विषाक्त पदार्थों की कटाई

Heteropteran insects such as assassin bugs (Reduviidae) and giant water bugs (Belostomatidae) descended from a common predaceous and venomous ancestor, ...

Choice and No-Choice Bioassays to Study the Pupation Preference and Emergence Success of Ectropis grisescens

Choice and No-Choice Bioassays to Study the Pupation Preference and Emergence Success of Ectropis grisescens

पसंद और कोई विकल्प नहीं है Pupation वरीयता और Ectropis grisescens के उद्भव सफलता का अध्ययन करने के लिए परख

Many insects live above the ground as larvae and adults and as pupate below the ground. Compared to the above-ground stages of their life cycles, less ...