Name: generating homo- and heterografts between watermelon and bottle gourd for the study of cold-responsive micrornas
Uploaded: 2018-11-20T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generating Homo- and Heterografts Between Watermelon and Bottle Gourd for the Study of Cold-responsive MicroRNAs at JoVE.com

Эта работа была поддержана Фонд национального естественных наук Китая (31772191), исследовательский проект для общественный интерес в провинции Чжэцзян (2017C 32027), ключ науки проект по селекции растений в Чжэцзян (2016C 02051) и национальной программы Поддержка первоклассных молодых специалистов (п).

1. стерилизация и всхожесть семян
<ol><li>Для поверхности стерилизации Замочите бутылки Тыква семена в 500 мл стакан с водой на 58 ° C, иногда помешивая, до тех пор, пока температура воды снижается до 40 ° C.</li>
	<li>Между тем, поставить 3 кг торфа почвы в мешке нейлона и стерилизовать, автоклав на 120 ?...

<ol>
	<li>Schwarz, D., Rouphael, Y., Colla, G., Venema, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting+as+a+tool+to+improve+tolerance+of+vegetables+to+abiotic+stresses:+Thermal+stress,+water+stress+and+organic+pollutants.">Grafting as a tool to improve tolerance of vegetables to abiotic stresses: Thermal stress, water stress and organic pollutants.</a> Scientia Horticulturae. 127, 162-171 (2010).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+tolerance+differences+in+cucumber+seedlings+grafted+on+rootstocks+with+different+tolerance+to+low+temperature+and+weak+light+stresses.">Mechanisms of tolerance differences in cucumber seedlings grafted on rootstocks with different tolerance to low temperature and weak light stresses.</a> Turkish Journal of Botany. 39 (4), 606-614 (2015).</li><li>Li, C. H., Li, Y. S., Bai, L. Q., He, C. X., Yu, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Expression+of+miRNAs+and+Their+Targets+in+the+Response+to+Drought+Stress+of+Grafted+Cucumber+Seedlings.">Dynamic Expression of miRNAs and Their Targets in the Response to Drought Stress of Grafted Cucumber Seedlings.</a> Horticultural Plant Journal. 2 (1), 41-49 (2016).</li><li>Rouphael, Y., Cardarelli, M., Colla, G., Rea, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yield,+mineral+composition,+water+relations,+and+water+use+efficiency+of+grafted+mini-watermelon+plants+under+deficit+irrigation.">Yield, mineral composition, water relations, and water use efficiency of grafted mini-watermelon plants under deficit irrigation.</a> HortScience. 43 (3), 730-736 (2008).</li><li>Savvas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactive+effects+of+grafting+and+manganese+supply+on+growth,+yield,+and+nutrient+uptake+by+tomato.">Interactive effects of grafting and manganese supply on growth, yield, and nutrient uptake by tomato.</a> HortScience. 44 (7), 1978-1982 (2009).</li><li>Aloni, B., Cohen, R., Karni, L., Aktas, H., Edelstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal+signaling+in+rootstock-scion+interactions.">Hormonal signaling in rootstock-scion interactions.</a> Scientia Horticulturae. 127, 119-126 (2010).</li><li>Rouphael, Y., Caradrelli, M., Rea, E., Colla, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+melon+and+cucumber+photosynthetic+activity,+mineral+composition,+and+growth+performance+under+salinity+stress+by+grafting+onto+Cucurbita+hybrid+rootstocks.">Improving melon and cucumber photosynthetic activity, mineral composition, and growth performance under salinity stress by grafting onto Cucurbita hybrid rootstocks.</a> Photosynthetica. 50 (2), 180-188 (2012).</li><li>Louws, F. J., Rivard, C. L., Kubota, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting+fruiting+vegetables+to+manage+soilborne+pathogens,+foliar+pathogens,+arthropods+and+weeds.">Grafting fruiting vegetables to manage soilborne pathogens, foliar pathogens, arthropods and weeds.</a> Scientia Horticulturae. 127 (2), 127-146 (2010).</li><li>Asins, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+rootstock-mediated+nitrogen+(N)+uptake+and+root-to-shoot+signalling+at+contrasting+N+availabilities+in+tomato.">Genetic analysis of rootstock-mediated nitrogen (N) uptake and root-to-shoot signalling at contrasting N availabilities in tomato.</a> Plant Science. 263, 94-106 (2017).</li><li>Yin, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+protective+enzymes+in+tomato+rootstocks+to+resist+root+knot+nematodes.">Role of protective enzymes in tomato rootstocks to resist root knot nematodes.</a> Acta Horticulturae. 1086 (1086), 213-218 (2015).</li><li>Gaion, L. A., Carvalho, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Distance+Signaling:+what+grafting+has+revealed?.">Long-Distance Signaling: what grafting has revealed?.</a> Journal of Plant Growth Regulation. 37 (2), 694-704 (2018).</li><li>Turnbull, C. G., Hennig, L., K&#246;hler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting+as+a+research+tool.">Grafting as a research tool.</a> Plant Developmental Biology. , 11-26 (2010).</li><li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafting-responsive+miRNAs+in+cucumber+and+pumpkin+seedlings+identified+by+high-throughput+sequencing+at+whole+genome+level.">Grafting-responsive miRNAs in cucumber and pumpkin seedlings identified by high-throughput sequencing at whole genome level.</a> Physiologia Plantarum. 151 (4), 406-422 (2014).</li><li>Lakhotia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+miRNAome+in+root,+stem,+leaf+and+tuber+developmental+stages+of+potato+(Solanum+tuberosum+L.)+by+high-throughput+sequencing.">Identification and characterization of miRNAome in root, stem, leaf and tuber developmental stages of potato (Solanum tuberosum L.) by high-throughput sequencing.</a> BMC Plant Biology. 14 (1), 6 (2014).</li><li>Jones-Rhoades, M. W., Bartel, D. P., Bartel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+and+their+regulatory+roles+in+plants.">MicroRNAs and their regulatory roles in plants.</a> Annual Review of Plant Biology. 57, 19-53 (2006).</li><li>Puzey, J. R., Kramer, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+conserved+Aquilegia+coerulea+microRNAs+and+their+targets.">Identification of conserved Aquilegia coerulea microRNAs and their targets.</a> Genetic. 448 (1), 46-56 (2009).</li><li>Matthewman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR395+is+a+general+component+of+the+sulfate+assimilation+regulatory+network+in+Arabidopsis.">miR395 is a general component of the sulfate assimilation regulatory network in Arabidopsis.</a> FEBS Letters. 586 (19), 3242-3248 (2012).</li><li>Ali, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+RNA+silencing+signal+through+grafting+confers+virus+resistance+from+transgenically+silenced+tobacco+rootstocks+to+non-transgenic+tomato+and+tobacco+scions.">Transmission of RNA silencing signal through grafting confers virus resistance from transgenically silenced tobacco rootstocks to non-transgenic tomato and tobacco scions.</a> Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology. 25 (3), 245-252 (2016).</li><li>Li, Y. S., Li, C. H., Bai, L. Q., He, C. X., Yu, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+and+target+gene+responses+to+salt+stress+in+grafted+cucumber+seedlings.">MicroRNA and target gene responses to salt stress in grafted cucumber seedlings.</a> Acta Physiologiae Plantarum. 38 (2), 1-12 (2016).</li><li>Pagliarani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+accumulation+of+miRNAs+differentially+modulated+by+drought+stress+is+affected+by+grafting+in+grapevine.">The accumulation of miRNAs differentially modulated by drought stress is affected by grafting in grapevine.</a> Plant Physiology. 173 (4), 2180-2195 (2017).</li><li>Liu, N., Yang, J. H., Guo, S. G., Xu, Y., Zhang, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+identification+and+comparative+analysis+of+conserved+and+novel+microRNAs+in+grafted+watermelon+by+high-throughput+sequencing.">Genome-wide identification and comparative analysis of conserved and novel microRNAs in grafted watermelon by high-throughput sequencing.</a> PLoS One. 8 (2), e57359 (2013).</li><li>Song, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+2JC-350+automatic+grafting+machine+with+cut+grafting+method+for+vegetable+seedling.">Development of 2JC-350 automatic grafting machine with cut grafting method for vegetable seedling.</a> Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering. 22 (12), 103-106 (2006).</li><li>Kumar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncovering+leaf+rust+responsive+miRNAs+in+wheat+(triticum+aestivum+l.)+using+high-throughput+sequencing+and+prediction+of+their+targets+through+degradome+analysis.">Uncovering leaf rust responsive miRNAs in wheat (triticum aestivum l.) using high-throughput sequencing and prediction of their targets through degradome analysis.</a> Planta. 245 (1), 1-22 (2016).</li><li>Kohli, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+wilt+and+salt+stress-responsive+microRNAs+in+chickpea+through+high-throughput+sequencing.">Identification and characterization of wilt and salt stress-responsive microRNAs in chickpea through high-throughput sequencing.</a> PLoS One. 9 (10), e108851 (2014).</li><li>Salzberg, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+challenges+in+next-generation+genomics.+International+Conference+on+Scientific+and+Statistical+Database+Management.">Computational challenges in next-generation genomics. International Conference on Scientific and Statistical Database Management.</a> ACM. 2, (2013).</li><li>Guo, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+draft+genome+of+watermelon+(Citrullus+lanatus)+and+resequencing+of+20+diverse+accessions.">The draft genome of watermelon (Citrullus lanatus) and resequencing of 20 diverse accessions.</a> Nature Genetics. 45, 51-58 (2013).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gourdbase:+a+genome-centered+multi-omics+database+for+the+bottle+gourd+(lagenaria+siceraria),+an+economically+important+cucurbit+crop.">Gourdbase: a genome-centered multi-omics database for the bottle gourd (lagenaria siceraria), an economically important cucurbit crop.</a> Scientific Reports. 8 (1), 306 (2018).</li><li>Wang, X. F., Liu, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Curation+of+miRBase+Annotation+Using+Integrated+Small+RNA+High-Throughput+Sequencing+Data+for+C.+elegans+and+Drosophila.">Systematic Curation of miRBase Annotation Using Integrated Small RNA High-Throughput Sequencing Data for C. elegans and Drosophila.</a> Frontiers in Genetics. 2, 25 (2011).</li><li>Bo, X. C., Wang, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TargetFinder:+a+software+for+antisense+oligonucleotide+target+site+selection+based+on+MAST+and+secondary+structures+of+target+mRNA.">TargetFinder: a software for antisense oligonucleotide target site selection based on MAST and secondary structures of target mRNA.</a> Bioinformatics. 21 (8), 1401-1402 (2005).</li><li>. GOATOOLS: Tools for Gene Ontology Available from: <a target="_blank" href="https://doi.org/10.5281/zenodo.31628">https://doi.org/10.5281/zenodo.31628</a> (2015)</li><li>Wang, L. P., Li, G. J., Wu, X. H., Xu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+proteomic+analyses+provide+novel+insights+into+the+effects+of+grafting+wound+and+hetero-grafting+per+se+on+bottle+gourd.">Comparative proteomic analyses provide novel insights into the effects of grafting wound and hetero-grafting per se on bottle gourd.</a> Scientia Horticulturae. 200 (8), 1-6 (2016).</li></ol>

В этом протоколе мы подробно описал высокоэффективной и воспроизводимый метод, чтобы сделать гомо - и heterografts между арбуз и бутылка тыквы. Этот метод, требующий никакого конкретного оборудования, очень прост в эксплуатации и обычно имеет очень высокую выживаемость приживления. Метод мо?...

Прививки давно работал как сельскохозяйственной техники для улучшения производства сельскохозяйственных культур и терпимости к биотическим и абиотическим стрессовым1,2,3. В heterografting системах Элитная Подвои может укрепить поглощению воды и питательных веществ растений, усилить сопротивление почвенными патогеннами и ограничить негативные последствия металла токсичности4,5, который может наделять графтов расширение силой роста и повышения терпимости к экологическим стрессам. Во многих случаях heterografting также может повлиять на плод качества в садовых растений, приводит к улучшению фруктовый аромат и повышенное содержание соединений здравоохранения6,7. Было установлено, что дальней передачи фитогормонов, РНК, пептидов и белков между подвоя и scion является основной механизм плавного роста и развития перепрограммирования scion растений8,9 ,10. Прививка широко используется в исследованиях дальнего сигнализации и транспорта по отношению к экологической адаптации11. Прививочных экспериментов особенно сильны для однозначной обнаружения передаваемых молекул в получении ткани или сосудистая sap и активация или подавление молекулярных целей из-за сигнала передачи12.
Non кодирования РНК, большой класс РНК, которые оказывают важные функции регулирования в клетках, поступили играть определенную роль в содействии адаптации растений к абиотическим стрессом13. интерферирующим эндогенные малые некодирующих RNAs около 20-24 nt. исследования показали регулирующей роли интерферирующим в различных аспектах деятельности предприятия, такие как стрелять роста, боковые корень формирования14,,1516, поглощение питательных веществ, сульфат метаболизм и гомеостаза17и ответы к биотическим и абиотическим подчеркнуть18. Недавно выражение адаптивной и их генов-мишеней были связаны с солью стрессу в heterografted огурец саженцы19. В intervariety графтов винограда ответы Мирна выражения к стрессу засухи были найдены в зависимости от генотипа20.
Быстрое развитие и снижение стоимости технологии высокопроизводительного секвенирования предоставили прекрасную возможность для изучения правил микроРНК в агрономической растений. Арбуз (Citrullus lanatus [Thunb.] Mansf.), важный cucurbit культур, выращенных в мире, чувствительны к низким температурам. Бутылка тыквы (лагенария siceraria [Молина] (Standl.) является более устойчивыми климата cucurbit обычно используется фермерами для графт с арбузом. Основной целью настоящего исследования является разработать стандарт, эффективный и удобный метод для изготовления heterografts между арбуз (Citrullus lanatus [Thunb.] Mansf.) и бутылка тыквы (лагенария siceraria [Молина] Standl). Этот протокол также обеспечивает подробный экспериментальной схемы и аналитических процедур для изучения регуляции Мирна выражений после прививки, что полезно для выявления механизмов лежащих в основе heterografting преимущества.
Завод материалов, используемых в настоящем исследовании включают арбуз сорт и Ландрас бутылка тыквы. Арбуз сорт является коммерческий сорт с высокой урожайностью, но чувствительны к низким температурам. Бутылка тыквы ландрас-это популярный Подвой для прививки с арбузом, огурец и бутылка тыквы, из-за его прекрасную терпимости низких температурах21.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>TRIzol Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA-free DNase I</td>
			<td>Takara</td>
			<td>D2270A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Truseq Small RNA sample prep Kit</td>
			<td>Illumina</td>
			<td>RS-200-0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2100 Bionalyser</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA Polymerase</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F530S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UEA sRNA workbench 2.4-plant version&#160;(software)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>http://srna-workbench.cmp.uea.ac.uk/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rfam 11.0 database&#160;(website)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>http://rfam.janelia.org</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRBase 22.0&#160;(website)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>http://www.mirbase.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIREAP(software)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>https://sourceforge.net/projects/mireap/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TargetFinder&#160;(software)</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>http://targetfinder.org/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generating homo- and heterografts between watermelon and bottle gourd for the study of cold-responsive micrornas

МикроРНК (интерферирующим) эндогенные малые некодирующих RNAs около 20-24 nt, известно, играют важную роль в развитии растений и адаптации. Существует накапливая доказательства того, что выражения некоторых интерферирующим изменяются при прививке, сельскохозяйственной практики, обычно используется фермерами для улучшения урожая толерантности к биотическим и абиотическим стрессовым. Бутылка тыквы является по своей сути Климат эластичные культур, по сравнению с много других крупных тыквенных, включая арбуз, что делает его одним из наиболее широко используемых Подвои для последнего. Недавнее развитие высокопроизводительного секвенирования технологий предоставляет большие возможности для изучения холодной гибкой адаптивной и их вклад в heterograft преимущества; Тем не менее соответствующие экспериментальные процедуры являются предпосылкой для этой цели. Здесь мы представляем подробный протокол для эффективного создания гомо - и heterografts между холодной чувствительными арбуз и холодной терпимо бутылки тыквы, помимо методов выборки ткани, генерации данных и анализа данных. Представленные методы полезны также для других систем, Прививка растений, допросить Мирна положениям различных экологических стрессов, например тепла, засухи и солености.

<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58242/58242fig2.jpg"> Рисунок 2: фенотипов различных имплантатов при комнатной температуре и холодной подчеркнул условий. () Эта группа показывает гомо - и heterografted саженцев при комнатной температуре как элемент управления. (<strong...

Watch this Scientific Journal Video about Generating Homo- and Heterografts Between Watermelon and Bottle Gourd for the Study of Cold-responsive MicroRNAs at JoVE.com

Generating Homo- and Heterografts Between Watermelon and Bottle Gourd for the Study of Cold-responsive MicroRNAs

Создание гомо - и Heterografts между арбуз и бутылка тыквы для изучения холодной отзывчивым микроРНК

Здесь мы представляем подробный протокол для эффективно гомо - и heterografts между арбуз и бутылка тыквы, помимо методов выборки ткани, генерации данных и анализа данных, для расследования холодной отзывчивым микроРНК.

MicroRNAs (miRNAs) are endogenous small non-coding RNAs of about 20 - 24 nt, known to play important roles in plant development and adaptation. There is ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в miRNA ответ на способность к стрессу в растительных трансплантатов, таких как, как miRNA регулируются при холодном стрессе в арбуз бутылке тыквы трансплантатов. Основным преимуществом этой техники является то, что это высокоэффективный и воспроизводимый метод, чтобы сделать гомо и гетеротрансплантатов. Это не требует специального оборудования, это очень легко выполнить, и, как правило, приводит к очень высокой выживаемости прививки.С помощью этого метода, может обеспечить понимание miRNA ответ на холодный стресс в арбуз бутылке тыквы трансплантата системы. Он также может быть применен к другим современным организмам для выявления механизмов местного и дальнего транспортировки миРНК. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, поскольку прививки шаги трудно узнать.Этот шаг требует передовых навыков и являются ключом к выживанию привитых растений. Для начала замочите семена тыквы бутылки в 500 миллилитров стакан 58 градусов по Цельсию воды. Перемешать семена время от времени, пока температура воды падает до 40 градусов по Цельсию.Пока вода остынет, положите три килограмма торфяной почвы в нейлоновый мешок и автоматически поместите его. Как только вода достигнет комнатной температуры, промыть семена два-три раза в дистиллированной воде и слейте лишнюю воду. Разрешить семена прорастать в марлевом мешке при 28 градусов по Цельсию в темной камере роста.После прорастания, сеять семена в пластиковые горшки заполнены стерилизованной торфяной почвы. Когда саженцы тыквы бутылки разовьют два сплющенных котилендона, повторите этот процесс с семенами арбуза. Выращиваем бутылочку тыквы и саженцы арбуза в камере роста.Добавить воду в рассаду один раз в день во второй половине дня. Затем вырежьте гипокотилы саженцев арбуза на два-три сантиметра ниже котилендонов. Вырезать верхней части бутылки тыквы саженцы на стороне, непосредственно над cotyledons.Затем используйте зубочистку, чтобы сделать отверстие в верхней части подстриженной бутылки тыквы саженцев. Вставьте обрезанные саженцы арбуза в отверстие, чтобы сделать гетеротрансплантаты. После этого подготовь гомографты с помощью ранее описанного метода.Во-первых, оберните привитые саженцы в прозрачные полиэтиленовые пакеты для поддержания относительно высокой влажности. Затем поддерживать завернутые саженцы в камеру роста в течение семи дней. После седьмого дня снимите мешки и дайте растениям расти в тех же условиях в течение семи-10 дней.Разделите саженцы на две группы: одну для холодной обработки и одну для контроля. Верните контрольные саженцы в те же экологические условия. Поместите холодные обработанные саженцы в камеру роста, установленную до шести градусов по Цельсию с теми же светлыми темными условиями, что и контрольная группа.Через 48 часов оставьте образцы отпрыска и подвоя из трансплантатов. Заморозить образцы немедленно в жидком азоте и хранить их при температуре минус 70 градусов по Цельсию. Перенесите замороженный образец в двухми миллилитровую микроцентрифугную трубку в жидком азоте.Добавьте шарик из нержавеющей стали к каждой пробной трубке и гомогенизируйте ткани в мелкий порошок. Для каждой прививки комбинации, принять равное количество земли образца из 10 саженцев и смешать их в 10 миллилитров центрифуг трубки. Добавьте соответствующее количество гидрохлоридного реагента гуанидия.Затем добавьте РНК-бесплатный DNase от 1 до 150 единиц на миллилитр при 37 градусах по Цельсию в течение одного часа. Затем определите общее количество РНК в микрокапильярной электрофорезной системе. После этого оттаивают в библиотеке нормализуемые реагенты и адаптеры.Затем ligate небольшой RNase с пятью премьер и три премьер адаптеры, и elute и очистить их. Обратный транскрибировать пять премьер и три премьер лигатированных малых RNase следующие руководящие принципы производителя. Далее выполните усиление ПЦР в соответствии с протоколом производителя.Затем используйте систему микрокайлярного электрофореза, чтобы гарантировать, что число целостности РНК больше семи. Загрузите один микролитер рнк-библиотеки на микрокапильярновую электрофорезную систему, чтобы гарантировать, что число целостности РНК превышает семь. Наконец, последовательность небольших библиотек РНК на инструменте секвенирования высокой пропускной способности.Используя этот протокол, 98%выживаемость для прививки и фенотипы для комнатной температуры и холодных стрессовых условий были получены. sRNAs 24 нуклеотидов составил самый большой класс sRNAs во всех прививки комбинации, независимо от температуры лечения. После 48 часов лечения простуды, 30 и 268 микроРНК были вверх и вниз регулируется, соответственно.В листьях отпрыска в гетеротрансплантатах, наоборот, в листьях подвоя, 31 и 12 микроРНК были вверх и вниз регулируется, соответственно. В арбузно-арбузных гомотрансплантатах, 64 и 83 микроРНК были вверх и вниз регулируется, соответственно. Это показало, что гетеротрансплантация вызвала глубокое перепрограммирование выражений микроРНК.При попытке этой процедуры, важно помнить, относительный размер и возраст дочери стебель и отпрыск имеет решающее значение для успешного трансплантата. После этой процедуры, другие методы, такие как секвенирование lncRNA, протеомное профилирование может быть выполнено для того, чтобы исследовать регулирование lncRNA и белка и системы кодирования в системе прививки. После своего развития, этот метод проложил путь для исследований в области толерантности растений абиотических изучить механизм прививки растений преимущество в Cucurbitaceae и за его пределами.Не забывайте, что работа с гидрохлоридом гуанидина может быть чрезвычайно опасной и при выполнении этой процедуры всегда следует принимать соответствующие меры предосторожности.

Research

JoVE Journal

Environment

Transcript and Metabolite Profiling for the Evaluation of Tobacco Tree and Poplar as Feedstock for the Bio-based Industry

Стенограмма и метаболитов профилирования по оценке табака Дерево и тополя в качестве сырья для био-основанной промышленности

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the ...

The Use of High-resolution Infrared Thermography (HRIT) for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

The Use of High-resolution Infrared Thermography HRIT for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

Использование высокого разрешения ИК термографии (HRIT) для изучения ледовой зарождения и распространения ледникового у растений

Freezing events that occur when plants are actively growing can be a lethal event, particularly if the plant has no freezing tolerance. Such frost events ...

Empirical, Metagenomic, and Computational Techniques Illuminate the Mechanisms by which Fungicides Compromise Bee Health

Эмпирическая, метагеномных и вычислительные методы освещают механизмы которых фунгициды компромисса Bee здравоохранения

Growers often use fungicide sprays during bloom to protect crops against disease, which exposes bees to fungicide residues. Although considered ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

Протокол Microplastics Отбор проб на поверхности моря и анализа проб

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

Экстракция органохлоридных пестицидов из пластиковых гранул и анализ пластического типа

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...

Experimental Column Setup for Studying Anaerobic Biogeochemical Interactions Between Iron (Oxy)Hydroxides, Trace Elements, and Bacteria

Experimental Column Setup for Studying Anaerobic Biogeochemical Interactions Between Iron OxyHydroxides, Trace Elements, and Bacteria

Установка экспериментальной столбца для изучения анаэробных биогеохимических взаимодействий между гидроксидов железа (Окси), микроэлементов и бактерий

Fate and speciation of trace elements (TEs), such as arsenic (As) and mercury (Hg), in aquifers are closely related to physio-chemical conditions, such as ...

Ecosystem Fabrication (EcoFAB) Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

Ecosystem Fabrication EcoFAB Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

Экосистема изготовление (EcoFAB) протоколы для строительства лаборатории экосистем, предназначенных для изучения растений микробных взаимодействий

Beneficial plant-microbe interactions offer a sustainable biological solution with the potential to boost low-input food and bioenergy production. A ...

Experimental Study of the Relationship Between Particle Size and Methane Sorption Capacity in Shale

Экспериментальное исследование взаимосвязи между размера частиц и сорбционная емкость метана в сланца

The amount of adsorbed shale gas is a key parameter used in shale gas resource evaluation and target area selection, and it is also an important standard ...

Harvesting Venom Toxins from Assassin Bugs and Other Heteropteran Insects

Заготовка Venom токсины от убийца ошибок и других насекомых, Heteropteran

Heteropteran insects such as assassin bugs (Reduviidae) and giant water bugs (Belostomatidae) descended from a common predaceous and venomous ancestor, ...

Choice and No-Choice Bioassays to Study the Pupation Preference and Emergence Success of Ectropis grisescens

Choice and No-Choice Bioassays to Study the Pupation Preference and Emergence Success of Ectropis grisescens

Выбор и No-выбор Bioassays для изучения предпочтений Окукливание и появление успеха Ectropis grisescens

Many insects live above the ground as larvae and adults and as pupate below the ground. Compared to the above-ground stages of their life cycles, less ...