Name: an efficient strategy for generating tissue-specific binary transcription systems in drosophila by genome editing
Uploaded: 2018-09-19T15:00:00
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我们感谢 f 港博士、奥康纳博士和冯博士就 CRISPR 战略进行讨论;肺结核科恩伯格博士和布卢明顿试剂中心;UMD 成像核心设施;和从 NIH 获得的资金: R00HL114867 和 R35GM124878 到 SR。

1. gRNA 表达载体的设计与构造
<ol><li>要精确替换外显子的长定义区域, 请使用双 gRNA 方法6, 其中每个 gRNA 可以专门针对所选区域的两端。为了获得一个精确的基因特定的时空表达的驱动程序, 选择两个 gRNA 目标网站内的第一编码外显子的基因。</li>
	<li>
对于果蝇, 使用 flyCRISPR 最佳目标查找工具 (http://tools.flycrispr.molbio.wisc.edu/targetFinder/) 选择 gRNA 目标站点。其他可用的...

<ol>
	<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Lai, S. -. L., Lee, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+mosaic+with+dual+binary+transcriptional+systems+in+Drosophila.">Genetic mosaic with dual binary transcriptional systems in Drosophila.</a> Nature Neuroscience. 9 (5), 703-709 (2006).</li><li>Potter, C. J., Tasic, B., Russler, E. V., Liang, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Q+system:+a+repressible+binary+system+for+transgene+expression,+lineage+tracing,+and+mosaic+analysis.">The Q system: a repressible binary system for transgene expression, lineage tracing, and mosaic analysis.</a> Cell. 141 (3), 536-548 (2010).</li><li>Jinek, M., Chylinski, K., Fonfara, I., Hauer, M., Doudna, J. A., Charpentier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+programmable+dual-RNA-guided+DNA+endonuclease+in+adaptive+bacterial+immunity.">A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity.</a> Science. 337 (6096), 816-821 (2012).</li><li>Du, L., Zhou, A., Patel, A., Rao, M., Anderson, K., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+targeted+expression+system+for+branchless+and+characterization+of+novel+cellular+expression+patterns+of+the+gene+in+Drosophila.">Generation of a targeted expression system for branchless and characterization of novel cellular expression patterns of the gene in Drosophila.</a> Developmental Biology. 427 (1), 35-48 (2017).</li><li>Port, F., Chen, H. -. M., Lee, T., Bullock, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+CRISPR/Cas+tools+for+efficient+germline+and+somatic+genome+engineering+in+Drosophila.">Optimized CRISPR/Cas tools for efficient germline and somatic genome engineering in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (29), E2967-E2976 (2014).</li><li>Gratz, S. J., Rubinstein, C. D., Harrison, M. M., Wildonger, J., O'Connor-Giles, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR-Cas9+Genome+Editing+in+Drosophila.">CRISPR-Cas9 Genome Editing in Drosophila.</a> Current Protocols in Molecular Biology. 111 (1), (2015).</li><li>Doench, J. G., Hartenian, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+highly+active+sgRNAs+for+CRISPR-Cas9-mediated+gene+inactivation.">Rational design of highly active sgRNAs for CRISPR-Cas9-mediated gene inactivation.</a> Nature Biotechnology. 32 (12), 1262-1267 (2014).</li><li>Port, F., Bullock, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmenting+CRISPR+applications+in+Drosophila+with+tRNA-flanked+sgRNAs.">Augmenting CRISPR applications in Drosophila with tRNA-flanked sgRNAs.</a> Nature Methods. 13 (10), 852-854 (2016).</li><li>Beumer, K. J., Trautman, J. K., Mukherjee, K., Carroll, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+DNA+Utilization+During+Gene+Targeting+with+Zinc-Finger+Nucleases.">Donor DNA Utilization During Gene Targeting with Zinc-Finger Nucleases.</a> G3. 3 (4), 657-664 (2013).</li><li>Pfeiffer, B. D., Ngo, T. -. T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refinement+of+tools+for+targeted+gene+expression+in+Drosophila.">Refinement of tools for targeted gene expression in Drosophila.</a> Genetics. 186 (2), 735-755 (2010).</li><li>Lin, C. -. C., Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Editing+Transgenic+DNA+Components+by+Inducible+Gene+Replacement+in+Drosophila+melanogaster.">Editing Transgenic DNA Components by Inducible Gene Replacement in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 203 (4), 1613-1628 (2016).</li><li>Li, W., K&#246;ster, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control,+modeling,+and+visualization+of+CRISPR+screens+with+MAGeCK-VISPR.">Quality control, modeling, and visualization of CRISPR screens with MAGeCK-VISPR.</a> Genome Biology. 16 (1), 281 (2015).</li></ol>

传统上,果蝇增强器陷阱是由两种不同的方法产生的。其中一个方法包括随机插入一个驱动程序 (例如, Gal4) 序列在基因组中通过移位 (e., P 元素移位)1 。或者, 驱动程序序列可以放置在一个假定的增强/启动子区域的转录控制的质粒结构, 然后将集成到基因组3,11的异位点。虽然这些方法已经产生了大量的Gal4或<em...

基因工具箱的目标基因表达已经在果蝇中得到了很好的发展, 这使得它成为一个最好的模型系统, 以调查有关基因的功能, 涉及多种细胞过程。二进制表达系统, 如酵母Gal4/UAS (上游活化序列), 首次采用的组织特异性增强诱捕和基因 misexpression 在果蝇遗传模型1 (图 1)。该系统促进了许多技术的发展, 如基因过度表达的时空调控, misexpression, 在选定的细胞组的挖空, 以及细胞消融, 细胞标记, 细胞和分子的实时追踪在发育过程中的胚胎和组织, 沿袭追踪和马赛克分析。一些二进制转录系统, 如细菌莱克萨/莱克萨操作系统 (图 1) 和粗糙Q 系统, 是强大的基因工具, 现在广泛用于果蝇,除了原 Gal4/UAS 系统的目标基因表达1,2,3。
在这里, 我们提出了一个方法来生成高可靠的组织特定的二进制表达系统, 采用基因组编辑技术。最近在 CRISPR/Cas9 基因组编辑技术方面的进步, 使得在广泛的生物体中进行定向基因组改变的机会空前。与其他可用的基因组编辑技术相比, CRISPR/Cas9 系统成本低廉、效率高、可靠。这项技术利用细菌适应性免疫系统的组成部分:化脓链球菌的 Cas9 限制性, 创建双链断裂 (争端), 和嵌合体指南 RNA (gRNA), 它引导 Cas9 到一个特定的基因组站点目标争端4。这些细胞包含用不同途径修复争端的机器。非同源端连接 (NHEJ) 导致小的插入或删除, 以扰乱基因功能, 而同源定向修复 (hdr) 引入一个定义的定向/理想的基因组敲/敲出使用外源 HDR 捐赠者作为模板。基于 HDR 的替换策略可以有效地用于生成一个高度可靠的组织特定的二进制表达式系统, 它可以克服传统增强器陷阱方法的所有局限性。我们描述了一个循序渐进的过程, 利用 CRISPR/Cas9-based HDR 修复生成一个二进制转录驱动程序线的控制下表达的内源转录和转录后调节的果蝇基因。在本协议中, 我们演示了一个特定于branchless (bnl) 基因编码的驱动程序线的生成, 用于调节气管道上皮5的分支形态发生。在这个例子中, bnl基因的第一个编码外显子被细菌莱克萨transactivator 序列的序列所取代, 而不改变bnl基因的任何内源cis调节序列。我们表明, 该策略产生了一个bnl 莱克萨驱动程序线, spatiotemporally 控制在LexAoperator (LexAop或LexO) 下游的记者基因的表达, 完全在bnl-表达上皮细胞/间充质/神经细胞。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>X-Gal/IPTG</td>
			<td>Gentrox (Genesee Scientific)</td>
			<td>18-218</td>
			<td>cloning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB-Agar</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>BD&#160;244520</td>
			<td>cloning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T3253</td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E1161</td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure DNase/RNase-Free Water</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10977-023</td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10%SDS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>71736</td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOAc</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>P1190</td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EtOH</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>04-355-451</td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneJET Miniprep</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>K0503</td>
			<td>Miniprep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PureLink HiPure Plasmid Maxipep kits</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>K210006</td>
			<td>Maxiprep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BbsI</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R0539S</td>
			<td>Restriction enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers</td>
			<td>IDT-DNA</td>
			<td></td>
			<td>PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCFD4</td>
			<td>Kornberg Lab</td>
			<td></td>
			<td>DNA template and vector for gRNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KAPA HiFi Hot Start- (Kapa Biosystems)</td>
			<td>Kapa biosystems</td>
			<td>KK2601</td>
			<td>PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q5-high fidelity Taq</td>
			<td>NEB</td>
			<td>NEB #M0491</td>
			<td>PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibson Assembly Master Mix</td>
			<td>NEB</td>
			<td>NEB #E2611</td>
			<td>DNA assembly</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBPnlsLexA:p65Uw</td>
			<td>Addgene</td>
			<td></td>
			<td>DNA template for LexA amplification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>25530049</td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x PCR PreMix, with dye (red)</td>
			<td>Sydlab</td>
			<td>MB067-EQ2R</td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel elution kit</td>
			<td>Zymo Research (Genesee Scientific)</td>
			<td>11-300</td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRI reagent</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Direct-zol RNA purification kits</td>
			<td>Zymo Research (Genesee Scientific)</td>
			<td>11-330</td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OneTaq One-Step RT-PCR Kit</td>
			<td>NEB</td>
			<td>E5315S</td>
			<td>Molecular Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lexO-CherryCAAX</td>
			<td>Kornberg Lab</td>
			<td></td>
			<td>Fly line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UAS-CD8:GFP</td>
			<td>Kornberg lab</td>
			<td></td>
			<td>Fly line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>btl-Gal4</td>
			<td>Kornberg lab</td>
			<td></td>
			<td>Fly line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MKRS/TB6B</td>
			<td>Kornberg lab</td>
			<td></td>
			<td>Fly line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope SP5X</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Imaging expression pattern</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 station</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>59-122WCU</td>
			<td>fly pushing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ-61</td>
			<td>fly pushing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtube homogenizing pestles</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>03-421-217</td>
			<td>genomic DNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop spectrophotometer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>ND-1000</td>
			<td>DNA quantification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an efficient strategy for generating tissue-specific binary transcription systems in drosophila by genome editing

二进制转录系统是强大的遗传工具, 广泛用于可视化和操作细胞的命运和基因表达在特定群体的细胞或组织的模型有机体。这些系统包含两个组分作为分开的转基因线。一条驱动线在组织特异的促进剂/促增强剂的控制下表达转录激活物, 一个报告/效应线将一个目标基因放置在转录激活器的结合部位。饲养两个组分的动物诱导了靶基因表达的组织特异转录激活。精确的时空表达基因在靶向组织是至关重要的无偏见的解释细胞/基因活动。因此, 开发一种生成专属细胞/组织特定驱动程序线的方法是必不可少的。在这里, 我们提出了一个方法来产生高度组织特定的目标表达系统, 采用 "聚集定期 Interspaced 短回文重复/CRISPR 相关" (CRISPR/Cas) 的基因组编辑技术。在这种方法中, 限制性 Cas9 的目标是两个嵌合导向 rna (gRNA) 到特定地点的第一编码外显子的基因在果蝇基因组, 以创建双链断裂 (争端)。随后, 使用含有 transactivator 序列的外源性捐赠质粒, 细胞自主修复机械能够实现争端处理机构的同源定向修复 (HDR), 从而精确删除和替换外显子与 transactivator序列。被敲入的 transactivator 是完全地表达在被替换的基因的cis调控元素起作用的细胞。在这里提出的详细的分步协议, 以产生一个二进制转录驱动程序表达在果蝇/branchless产生的上皮/神经细胞细胞可以采取任何基因或组织特定的表达。

该协议成功地用于生成一个特定于bnl表达单元5的目标二进制表达式报告器系统。控制复杂时空bnl表达的cis调控元素 (重新审查) 没有特征。因此, 为了在内源bnl调控序列的控制下实现时空表达, 只有bnl的第一编码外显子被设计为以细菌莱克萨transactivator 序列取代。一个改进的 nls-莱克萨::p 65盒已知提供最佳的?...

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An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing

在这里, 我们提出了一个方法, 以产生组织特定的二进制转录系统的果蝇, 取代第一编码外显子的基因与转录驱动。CRISPR/Cas9-based 方法在被替换的基因的内生调控下放置一个 transactivator 序列, 从而促进 transctivator 表达专门在基因特定的时空模式。

基于基因组编辑的果蝇组织特异二进制转录系统的高效生成策略

Binary transcription systems are powerful genetic tools widely used for visualizing and manipulating cell fate and gene expression in specific groups of ...

此方法的总体目标是生成一个高度组织特异性靶向表达系统。在这种方法中，我们演示了针对我们的果蝇FGF同源，无分支的二进制转录驱动程序的生成。无分支的动态、时空表达调节气管气道上皮的分支血性。虽然这种方法可以提供洞察无分支产生细胞的时空表达和迁移，但它可以很容易地应用于果蝇或其他模型生物体中的其他基因和组织，如C.Elegans和斑马鱼。该技术的主要优点是，它产生表达系统，是高度可靠的，组织和基因特异性，并仅在细胞中活性被替换基因的cis调控元素是功能。二元转录系统是靶向基因表达和操作的基本工具。在基因的 cis 调控元素的控制之下表达的转活化剂，如 GAL4 或 LexA，驱动特定转录结合位点下游的效应器转基因，如 GAL4 的 UAS 和/或 LexO 的 LexO。这种方法用转录驱动器取代了无分支基因的第一个编码 exon。基于CRISPR Cas9的方法将LexA转活器序列在无分支基因的内源调控下，因此，促进在无分支特定的时空模式中专门进行转活化表达。首先选择两个专门针对选定感兴趣区域两端的引导RNA靶点。打开您选择的 CRISPR 设计工具。此处使用飞 CRISPR 最佳目标查找器。点击选择基因组'插入感兴趣的序列，并选择最近上传的果蝇黑色素体基因组注释，目前R下划线六，在下拉菜单。接下来，单击"选择导距长度"并输入 20。选择"所有CRISPR目标"，然后单击"查找CRISPR目标"。通过为字符串设置最大值和仅为 PAM 设置 NGG 来评估所有候选引导 RNA 目标。为了生成串联导导RNA表达载体，首先PCR放大DNA片段，将两个原生空间序列引入pCFD4RNA表达载体骨干。使用正向和反向底法，每个底法具有原分空间序列，并使用高保真聚合酶和 pCFD4 模板 DNA 与 PCR 中的 pCFD4 矢量序列重叠。要准备用于克隆的pCFD4，请用Bbs1酶消化质粒。在适当的消化缓冲液中设置反应，其中含有2至5微克的pCFD4质粒和一个微升Bbs1酶和50微升的最终体积。通过轻敲管子，通过短暂旋转收集从管壁到底部的所有散落液滴，混合反应内容物。在运行PCR产品后，在37摄氏度下孵育反应混合物两小时，并在1%的阿加罗斯凝胶上消化质粒。使用标准凝胶纯化柱净化 6.4 千基对线性质粒和 600 基对 PCR 产品。根据制造商的协议设置DNA组装反应。对于 GAL4 或 LexA 序列的基因组敲击，设计一个包含转活化序列的双链 HDR 供体，侧翼为两个同源臂。为了避免将导向RNA重新定位到工程位点，设计替代捐赠者的方式，使引导RNA识别位点被引入的外源序列打乱。此外，为了避免改变 cis 调节元素的纯度，请始终选择编码 exon 区域内的引导 RNA 识别位点。要生成替换盒，请规划 DNA 组装策略，将四个部分连接在一起。五等和三原源同源臂、中外源性转活化DNA序列和线性克隆载体骨干。PCR 从适当的载体放大 GAL4 或 LexA 表达盒，PCR 从选择注射的母飞行线中提取的基因组 DNA 放大同源臂。在每个 PCR 中使用高保真聚合酶生成目标片段。要设置DNA组装反应，请按照制造商的说明，将PCR克隆产生的线性克隆载体和目标片段与DNA组装母体混合和最终反应体积混合到20微升。在50摄氏度下孵育反应混合物一小时。当Nos-Cas9胚胎以前注射了引导RNA表达质粒和替代捐赠者，发育成成人，交叉G0苍蝇单独平衡你的苍蝇从适合目标等位基因的线。在二氧化碳垫上对每个 G0 十字架上的 F1 后代进行麻醉。在立体显微镜下随机挑选10至20名男性。从适合目标等位基因的行中单独将每个选定的雄叉到平衡器女性。当 F2 幼虫孵化时，从每个十字架上挑选 F1 父亲。通过用移液器尖端挤压每只苍蝇 10 到 15 秒来提取基因组 DNA，其中包含 50 微升的压扁缓冲液，而无需分配缓冲液。然后，将剩余的缓冲液放入管中混合。在37摄氏度下孵育20至30分钟。孵育后，将管子放在95摄氏度的热块中一至两分钟，以灭活蛋白酶K.在旋转5分钟后，在10，000次G下旋转5分钟，将制备物储存在4摄氏度，用于进一步PCR分析。使用前向一个应用，执行基于 PCR 的三步屏幕，然后反转一个以筛选是否存在插入或替换。使用正向 2 执行 PCR 并反转两个底转，以验证从三个主要区域插入或替换。使用底转 M13F 执行 PCR，并反转三个以检查末端'HDR。使用已确认的结束 HDR 保持飞行线，并建立 F2 代的平衡库存。平衡器再次穿过，以去除其他染色体上任何意外的突变。无分支，或bnl表达，在这里显示红色在第三星幼虫翼盘，与受体喘不过气来表达细胞，以绿色显示，在生长的空气囊原。无分支表达细胞如图所示在 TR5 横向连接分支和 TR2 后分支中。无呼吸的表达气管细胞在这里显示为绿色。无呼吸表达细胞以绿色显示，标志着从第九阶段到第14阶段的胚胎气管发育，无分支表达细胞以红色显示。此图显示了在缺氧条件下，相对于控制而言，在异位组织位置诱导的无分支表达。该方法旨在保留无分支基因转录的所有原始时空规则。因此，必须用LexA转活化器编码序列替换该基因的第一个编码exon。经过开发，这种新的基因工具集为探索无分支基因的新组织表达模式铺平了道路。它还使基因表达错误，并完全在无分支表达细胞中击倒，并有助于监测细胞的线性迁移和信号相互作用。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

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在小鸡视网膜有效的基因转移的原代细胞培养研究：<em&gt;前OVO</em&gt;电穿孔法

The cone photoreceptor-enriched cultures derived from embryonic chick retinas have become an indispensable tool for researchers around the world studying ...

科研

发育生物学

Genome-wide Snapshot of Chromatin Regulators and States in Xenopus Embryos by ChIP-Seq

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染色质监管机构和各国的全基因组快照<em&gt;爪</em&gt;通过胚胎的ChIP-SEQ

The recruitment of chromatin regulators and the assignment of chromatin states to specific genomic loci are pivotal to cell fate decisions and tissue and ...

Generating CRISPR/Cas9 Mediated Monoallelic Deletions to Study Enhancer Function in Mouse Embryonic Stem Cells

生成CRISPR / Cas9介导的单等位基因缺失来研究小鼠胚胎干细胞功能增强

Enhancers control cell identity by regulating tissue-specific gene expression in a position and orientation independent manner. These enhancers are often ...

Identification of Critical Conditions for Immunostaining in the Pea Aphid Embryos: Increasing Tissue Permeability and Decreasing Background Staining

临界条件在免疫染色豌豆蚜虫胚胎鉴定：增加组织通透性和降低背景染色

The pea aphid Acyrthosiphon pisum, with a sequenced genome and abundant phenotypic plasticity, has become an emerging model for genomic and developmental ...

Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks

显微注射转基因的基因组，并在编辑Threespine刺鱼

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rna 干扰和热休克诱导转录因子表达在重编程生殖细胞到神经元中的应用C. 线虫

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

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