Name: elastic staining on paraffin-embedded slides of pt3n0m0 gastric cancer tissue
Uploaded: 2019-05-01T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue at JoVE.com

המחברים מודים לתמיכה בחלק מן הקרן הלאומית למדע הטבע (NO. 81401902 ו-NO. 81501992) וקרן הונאן למדעי הטבע (NO 2017SK2134, NO. 2018JJ2238). כתב היד נכתב על ידי גואנג ליי. הניסוי כולו מבוצע על ידי גואנג-ליי והיאן יאנג. המחברים מודים לעזרתם של הפתולוגים ושל הבחורים העוקבים אחר נתוני המטופלים.

בין 1994 ו 2005, דגימות החולה נבחרו על ידי שני פתולוגים מנוסים מערכת העיכול בבית החולים לסרטן המזוהה של Xiangya בית הספר לרפואה, מרכז דרום האוניברסיטה, מחולים שסבלו הקיבה של ניקילסקה בבטן, עם אבחון פתולוגי לאחר הניתוח של סרטן קיבה בשלב pT3N0M0 (על פי ההיערכות TNM השביעית). מחקר זה אושר על ידי ועדת הביקור?...

<ol>
	<li>Jiang, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinicopathologic+characteristics+and+prognosis+of+gastric+cancer+invading+the+subserosa.">Clinicopathologic characteristics and prognosis of gastric cancer invading the subserosa.</a> Journal of Surgical Oncology. 102 (7), 737-741 (2010).</li><li>Amin, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> AJCC Cancer Staging Manual. 8th ed. , (2017).</li><li>Kojima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+laminal+invasion+in+colon+cancer:+diagnostic+utility+and+histological+features.">Elastic laminal invasion in colon cancer: diagnostic utility and histological features.</a> Frontiers in Oncology. 2, 179 (2012).</li><li>Ludeman, L., Shepherd, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serosal+involvement7+in+gastrointestinal+cancer:+its+assessment+and+significance.">Serosal involvement7 in gastrointestinal cancer: its assessment and significance.</a> Histopathology. 47 (2), 123-131 (2005).</li><li>Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prognostic+importance+of+peritoneal+involvement+in+colonic+cancer:+a+prospective+evaluation.">The prognostic importance of peritoneal involvement in colonic cancer: a prospective evaluation.</a> Gastroenterology. 112 (4), 1096-1102 (1997).</li><li>Liang, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+evaluation+of+elastic+stain+in+the+assessment+of+serosal+invasion+of+pT3N0+colorectal+cancers.">Retrospective evaluation of elastic stain in the assessment of serosal invasion of pT3N0 colorectal cancers.</a> American Journal of Surgical Pathology. 37 (10), 1565-1570 (2013).</li><li>Carter, D., True, L., Otis, C. N., Mills, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serosal+membranes.">Serosal membranes.</a> Histology for Pathologists. 3rd ed. , 547-562 (2007).</li><li>Knudsen, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+peritoneal+elastic+lamina.">The peritoneal elastic lamina.</a> Journal of Anatomy. 177, 41-46 (1991).</li><li>Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+local+peritoneal+involvement+on+pelvic+recurrence+and+prognosis+in+rectal+cancer.">Influence of local peritoneal involvement on pelvic recurrence and prognosis in rectal cancer.</a> Journal of Clinical Pathology. 48 (9), 849-855 (1995).</li><li>Uitto, J., Li, Q., Urban, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+complexity+of+elastic+fibre+biogenesis+in+the+skin--a+perspective+to+the+clinical+heterogeneity+of+cutis+laxa.">The complexity of elastic fibre biogenesis in the skin--a perspective to the clinical heterogeneity of cutis laxa.</a> Experimental Dermatology. 22 (2), 88-92 (2013).</li><li>Kazlouskaya, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+utility+of+elastic+Verhoeff-Van+Gieson+staining+in+dermatopathology.">The utility of elastic Verhoeff-Van Gieson staining in dermatopathology.</a> Journal of Cutaneous Pathology. 40 (2), 211-225 (2013).</li><li>Lei, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+staining-a+rejuvenated+method+to+reassess+prognosis+and+serosal+invasion+in+patients+with+pT3N0M0+gastric+cancer.">Elastic staining-a rejuvenated method to reassess prognosis and serosal invasion in patients with pT3N0M0 gastric cancer.</a> Human Pathology. 65, 79-84 (2017).</li><li>Hern&#225;ndez-Morera, P., Travieso-Gonz&#225;lez, C. M., Casta&#241;o-Gonz&#225;lez, I., Mompe&#243;-Corredera, B., Ortega-Santana, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segmentation+of+elastic+fibres+in+images+of+vessel+wall+sections+stained+with+Weigert's+resorcin-fuchsin.">Segmentation of elastic fibres in images of vessel wall sections stained with Weigert's resorcin-fuchsin.</a> Computer Methods and Programs in Biomedicine. 142, 43-54 (2017).</li><li>Kojima, M., Nakajima, K., Ishii, G., Saito, N., Ochiai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+elastic+laminal+invasion+of+colorectal+cancer:+the+diagnostic+utility+and+clinicopathologic+relationship.">Peritoneal elastic laminal invasion of colorectal cancer: the diagnostic utility and clinicopathologic relationship.</a> American Journal of Surgical Pathology. 34 (9), 1351-1360 (2010).</li><li>Nakanishi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reappraisal+of+Serosal+Invasion+in+Patients+With+T3+Colorectal+Cancer+by+Elastic+Stain.">Reappraisal of Serosal Invasion in Patients With T3 Colorectal Cancer by Elastic Stain.</a> ARCHIVES OF PATHOLOGY &amp; LABORATORY MEDICINE. 140 (1), 81-85 (2016).</li><li>Grin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+elastic+lamina+invasion:+limitations+in+its+use+as+a+prognostic+marker+in+stage+II+colorectal+cancer.">Peritoneal elastic lamina invasion: limitations in its use as a prognostic marker in stage II colorectal cancer.</a> Human Pathology. 44 (12), 2696-2705 (2013).</li><li>Stewart, C. J., Brennan, B. A., Crook, M. L., Russell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Value+of+elastin+staining+in+the+assessment+of+peritoneal+implants+associated+with+ovarian+serous+borderline+tumours.">Value of elastin staining in the assessment of peritoneal implants associated with ovarian serous borderline tumours.</a> Histopathology. 51 (3), 313-321 (2007).</li><li>Kojima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+diagnostic+criterion+of+blood+and+lymphatic+vessel+invasion+in+colorectal+cancer:+a+framework+for+developing+an+objective+pathological+diagnostic+system+using+the+Delphi+method,+from+the+Pathology+Working+Group+of+the+Japanese+Society+for+Cancer+of+the+Colon+and+Rectum.">Pathological diagnostic criterion of blood and lymphatic vessel invasion in colorectal cancer: a framework for developing an objective pathological diagnostic system using the Delphi method, from the Pathology Working Group of the Japanese Society for Cancer of the Colon and Rectum.</a> Journal of Clinical Pathology. 66 (7), 551-558 (2013).</li><li>Elston, C. A., Kazlouskaya, V., Elston, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+staining+versus.+fluorescent+and+polarized+microscopy+in+the+diagnosis+of+alopecia.">Elastic staining versus. fluorescent and polarized microscopy in the diagnosis of alopecia.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 69 (2), 288-293 (2013).</li><li>Vos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominance+of+Nonatherosclerotic+Internal+Elastic+Lamina+Calcification+in+the+Intracranial+Internal+Carotid+Artery.">Predominance of Nonatherosclerotic Internal Elastic Lamina Calcification in the Intracranial Internal Carotid Artery.</a> Stroke. 47 (1), 221-223 (2016).</li></ol>

שיטה זו המוצעת כאן מספקת גישה מדויקת לזיהוי האלסטית הגמישה של subserosal. השיטה יכולה לשמש כדי להעריך אם התאים הסרטניים פלשו לאמה אלסטי בסרטן קיבה pT3N0M012. גומי אלסטי הוא אדמדם בסעיפים H & E-ויטראז ', אשר לא ניתן להבדיל בקלות מסיבי קולגן, ושיטות אחרות אבחון עזר נוסף, כגון ציטולוגיה ו אימ?...

לפי הגידול, צומת, ו גרורות (TNM) מערכת האחסון הזמני של סרטן, הפרוגנוזה של סרטן הקיבה בשלב הפתולוגי pT4 הוא גרוע משמעותית מזה ב pT3 (8th UICC/AJCC)1. עם סרטן קיבה, סיווג של הגידול העיקרי (pT) בדרך כלל תלוי בעומק של הפלישה הגידול2. השלב הפתולוגי pT3 סרטן הקיבה מוגדר כמו הפולשים הסרטן דרך המוסקולאריס קינא לתוך רקמות subserosal, בעוד סרטן הקיבה pT4 מוגדר כמו סרטן חודר אל פני השטח של צפק הקרביים. הימצאות של משטח הצפק הינו המפתח להבחנה בין שני השלבים2. עם זאת, מכיוון ששכבת התא mesothelial הצפק היא רזה מאוד, זה יכול להיות ניזוק במהלך הניתוח, טיפול פוסט-פעיל, וקיבוע3. יתר על כן, הקשורות לגידול שינויים דלקתיים פיברוזיס יכול להזיק אנטומיה נורמלית של צפק, מה שהופך את זה קשה מאוד לשפוט את הפלישה משטח הצפק באמצעות רק H & E צביעת4. שיטות אבחון העזר הנוכחיות, כגון ציטולוגיה ואימונוהיסטוכימיה, הן בעלות אבחון מוגבל של5,6 מכיוון שהן מזויפות, או שיש להן עלויות נמוכות.
קרום serosal כולל את צפק, pleura, ואת קרום הלב, והוא מורכב מmesothelium, קרום המרתף, ו-sub-mesothelial שכבה7. אחת התכונות היסטולוגית נפוצות של קרום serosal היא הנוכחות של לאמנה אלסטי בשכבת sub-mesothelial, בסמוך mesothelial תאים8,9. לאמה אלסטי יש יכולת אנטי מזיק חזק והוא יכול לשמש סמן אלטרנטיבי התחזיות כאשר התאים הmesothelial נהרסים על ידי דלקת חמורה הקשורות לגידול או פיברוזיס3. לאמנה אלסטי בעיקר כוללת אלסטין ומיקרופיבריל10, אשר ניתן לדמיין על ידי כתמים אלסטיים. הסיבה העיקרית מאחורי השימוש של הכתמים האלסטיים היא כי האלסטין יוצר קשר מימן עם הקבוצה פנופילית של ריסיניול בתמיסה אלסטין, גרימת סיבים אלסטיים להיות מוכתם כחול-שחור. לאחר Van gieson (VG) מנוגדים כתמים, סיבי קולגן יכול להיות מוכתם סיבי אדום ושריר ותאי דם אדומים יכול להיות צהוב מוכתם8,11,12,13.
המהדורה השמינית של ההיערכות tnm של סרטן הריאות מגדיר הפלישה הקרביים פלאורלי (T2) כפלישה הגידול מעבר לטרף אלסטי או פלישה על פני השטח של pleura הקרביים2. מחקרים על סרטן המעי הגס הראו כי הפלישה לאמינה אלסטי בסרטן המעי הגס pT3 עשוי להיות הסיבה לתחזיות המסכן. המחלה של 5 שנים ללא שיעור ההישרדות הכוללת של סרטן המעי הגס גם הוכחו להיות כמו pT4a13,14,15. בהתבסס על המחקרים הקודמים שלנו על כתמים אלסטיים, הפלישה לאמנה אלסטי נמצא יש השפעה שלילית משמעותית על הפרוגנוזה של סרטן קיבה pT3 וצריך להיות מטופלים באותו אופן כמו סרטן קיבה pT4a12. מכאן, זו שיטה פשוטה וחסכונית יכול לעזור למנוע חוסר ודאות בתוצאות שהתקבלו באמצעות כתמים H & E, ומגבלות נפוצות אחרות הקשורות לשיטות אחרות לאבחון עזר, כולל ציטולוגיה ואימונוהיסטוכימיה, בין אחרים. שיטה זו ניתן להשתמש ביעילות כדי לאבחן פלישות הקרקע הצפק של סרטן העיכול, במיוחד במקרים מסוימים רב-משמעיים. זה נוח מאז הכתם H & E וכתמים אחרים בדרך כלל להקשות לזהות פלישות כאלה. שיטה זו גם מבטיחה מהימנות של תוצאות מכיוון שהיא סלקטיבית מאוד, במיוחד לסיבים אלסטיים. כאן, אנו מבצעים כתמים אלסטיים כדי לקבוע אם התאים הסרטניים פלשו לאמינה אלסטי בסרטן קיבה pT3N0M012.
שיטה זו משמשת לזיהוי סיבים אלסטיים ברקמות על מקטעים של formalin-קבוע, פרפין, וניתן להשתמש בהם גם עבור מקטעים קפואים. כאן, אנו בוחרים פרפין-מקטעים מוטבעים עבור התחזוקה הטובה ביותר של מורפולוגיה תאית ורקמות. כל השלבים בפרוטוקול זה מתקיימים בטמפרטורת החדר. ערכת כתמים מסחרית הכוללת הפתרון אשלגן הפרמנגנט, פתרון חומצה אוקסלית, פתרון אלסטין, והפתרון של ואן גיסון משמש במחקר המוצג.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:620px;" width="620">
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:192px;">Elastin-Van Gieson staining kit</td>
			<td style="width:108px;">Baso</td>
			<td style="width:99px;">BA4083B</td>
			<td style="width:221px;">Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:192px;">Permount TM Mounting Medium</td>
			<td style="width:108px;">MXB Biotechnologies</td>
			<td style="width:99px;">DAB-0033</td>
			<td>Used for mounting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:192px;">Ethanol</td>
			<td style="width:108px;">LMAI Bio&#160;</td>
			<td style="width:99px;">LM64-17-5&#160;</td>
			<td align="right">100%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:192px;">Xylene</td>
			<td style="width:108px;">LMAI Bio&#160;</td>
			<td style="width:99px;">LX820585</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

elastic staining on paraffin-embedded slides of pt3n0m0 gastric cancer tissue

לאמינה אלסטי, אשר ממוקם בדרך כלל בשכבת sub-mesothelial, בסמוך צפק mesothelial תאים, הוא אמפיפיפילית על המטאוקסילין ואאוזין (H & E) הצביעת אבל יכול להיות מדמיין דרך כתמים אלסטיים. אחד היתרונות החשובים של כתמים אלסטיים הוא שזה מקל לקבוע אם התאים הסרטניים פלשו מעבר לאמינה אלסטי. זה עוזר לבחון את היקף הפלישה משטח הצפק, ובכך להבחין בשלבים pT3 ו pT4 בסרטן העיכול. במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול לזיהוי סיבים אלסטיים ב-formalin קבוע, פרפין-מוטבע pT3N0M0 רקמות סרטן הקיבה סעיפים. אנו מכינים מקטעים פרפין 5-μm שתוקנו בשקופיות, ולאחר מכן כל השקופיות מdeparaffinated ומהתייבשות במהלך הליך הצביעת. לאחר מכן, כל הסעיפים תחמוצת על ידי אשלגן פרמנגנט, מולבן על ידי חומצה אוקסלית, מוכתם על ידי כתמים אלסטיים, ומוכתם על ידי ואן גיסון של. לבסוף, אנו בודקים את השפעת ההכתמים; לאמינה אלסטי הוא סיבים כחול-שחור וקולגן מוכתם אדום, בעוד תאים סרטניים מוכתמים בגוונים שונים של צהוב. כמו כן, אנו מתארים בפרוטרוט את השיטות המשמשות לקביעת מערכת היחסים המקובעת בין תאים סרטניים לבינה אלסטית. שיטה זו פשוטה, בעלות נמוכה, וישימה באופן נרחב בזיהוי של הפלישה משטח הצפק בסרטן העיכול בגלל הסלקטיביות המדהימה שלה לסיבים אלסטיים ותוצאות אותנטיות.

מכתים אלסטי מוצלח בבירור מגלה לאמינה אלסטי תאים סרטניים בסרטן קיבה pT3. איור 1 -כוח נמוך השדה, נבדק באופן מאכל אחר לצביעת התמיסה, לפני כתם הנגד של ואן ג'יוסון לפי הפרוטוקול שהוזכר-מראה את לאמינה אלסטי קרוב לתאים mesothelial serosal והוא מוכתם כחול-שחור ב ועדיין קיים מ?...

Watch this Scientific Journal Video about Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue at JoVE.com

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של כתמים אלסטיים כדי לזהות סיבים אלסטיים ברקמות סרטן קיבה pT3N0M0 על formalin-קבוע, פרפין חלקים מוטבעים. לאחר מכן, אנו מתארים שיטה כדי לקבוע אם תאים סרטניים לפלוש מעבר ללבינה אלסטי.

מכתים אלסטי על פרפין-שקופיות מוטבעות של רקמת סרטן pT3N0M0 קיבה

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

שיטה זו מסייעת לקבוע אם תא הגידול פלש מעבר לאמינה אלסטית בסרטן קיבה pT3. שחיקת למינה אלסטית בתמונה הפרוגנוסטית לסרטן קיבה pT3. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שזה נוח, וגישה מדויקת לזהות את lamina אלסטי, מה שהופך אותו מדויק יותר עבור פתולוג כדי להעריך אם תאים סרטניים לפלוש מעבר לאמינה אלסטית בסרטן קיבה pT3.טכניקה זו יכולה להיות לקראת אבחון שלב בדיקה פתולוגית של סרטן ריאות וסרטן. שיטה זו יכולה להיות מיושמת גם על מערכת שלב TNM של סרטן ריאות וסרטן קולו-רקטלי. ראשית, לטבול את השקופיות קסילן בצנצנת קופלין במשך 10 דקות.הסר את השקופיות מן הצנצנת הזאת לטבול אותם קסילן טרי בצנצנת קופלין אחרת במשך 10 דקות נוספות. לטבול את השקופיות ב 100% אתנול במשך חמש דקות, ולאחר מכן להעביר אותם טרי 100% אתנול במשך חמש דקות נוספות. לאחר מכן, לטבול את השקופיות ב 95%אתנול במשך שתי דקות.מעבירים את השקופיות לצנצנת המכילה 70% אתנול לשתי דקות. לאחר מכן, לשטוף את המגלשות בקצרה עם מים מזוקקים בצנצנת קופלין חדשה. ראשית, השתמש בנייר טישו כדי למחוק כל פתרון עודף על השקופית או סביב הרקמה.מקם את השקופיות בתנאים התואמים לטמפרטורת החדר ולחות. הוסף כמה טיפות של אשלגן permanganate לכל שקופית כדי לחמצן אותם, לוודא כי נפח הוסיף מספיק כדי לכסות את סעיף הרקמה על כל שקופית. לאחר חמש דקות, שוטפים את המגלשות המחמצנות במים מזוקקים בצנצנות קופלין, חוזרים על שטיפה פעמיים עד שלוש פעמים ולהשתמש בצנצנת מים חדשה לכל שטיפה.לרקמה צריך להיות צבע חום ניתן לצפייה. עכשיו, להוסיף כמה טיפות של חומצה אוקסלית לכל שקופית כדי להלבין אותם, לוודא כי עוצמת הקול הוסיף מספיק כדי לכסות את סעיף הרקמה על כל שקופית. לאחר חמש דקות, שוטפים את המגלשות הלבנות במים מזוקקים, חוזרים על שטיפה פעמיים עד שלוש פעמים ולהשתמש בצנצנת מים חדשה לכל שטיפה.לשטוף את השקופיות לזמן קצר 95% אלכוהול. לטבול את השקופיות שטף פתרון אלסטין במשך שמונה עד 24 שעות. ואז לטבול את השקופיות ישירות 95%אתנול במשך 1 עד 2 דקות כדי להבדיל כל קטע רקמה היטב.שוטפים את המגלשות לחלוטין במים מזוקקים. בדקו מיקרוסקופית את הכתמת הסיבים האלסטיים הכחולים-שחורים ואת הרקע האפור. נטרל את השקופיות בתסרון ואן גיסון למשך דקה אחת, וודא שאמצעי האחסון שבו נעשה שימוש מספיק כדי לכסות את מקטע הרקמה בכל שקופית לחלוטין.לאחר מכן, במהירות טיפה 95% אתנול על פרוסות הרקמה במשך כמה שניות כדי להבדיל כל קטע רקמה היטב. כדי להתחיל, לטבול את המגלשות ב 95% אלכוהול במשך חמש דקות כדי לייבש אותם במהירות. מעבירים את המגלשות ל-100% אלכוהול למשך חמש דקות כדי להמשיך את ההתייבשות.לאחר מכן, להעביר את המגלשות טרי 100% אלכוהול במשך חמש דקות נוספות. לטבול את השקופיות בשני שינויים שונים של קסילן עם כל טבילה שנמשך שלוש דקות. לאחר מכן, הוסף טיפה אחת של מדיום הרכבה שף לשקופית והצב תלוש כיסוי על גבי.באמצעות מיקרוסקופ, התבונן במקטעי הרקמה כמתואר בפרוטוקול הטקסט. במחקר זה, כתמים אלסטיים מנוצלים כדי לזהות חזותית לאמינה אלסטית תת-תת-תת-ארוסאלית. הכתמה מוצלחת מייצגת מגלה כי לאחר הכתמת תספורת אלסטין, אך לפני ההכתמה הנגדית של ואן גיסון, ניתן לראות בבירור את הלמינה האלסטית בצורה של סיבים מוכתמים בכחול-שחור.הם קרובים לתאי mesothelial serosal, כמות מסוימת של מרחק עדיין נראה בין למינה אלסטית לתאי הגידול. כתמים אלסטיים אופייניים עם הנגד של ואן גיסון מראים שהלמינה האלסטית מוכתמת בכחול-שחור. סיבי הקולגן מוכתמים באדום, וסיבי השריר ותאי הסרטן מוכתמים בצהוב.תאים סרטניים חודרים למינה אלסטית נחשב פלישה אלסטית למינה. בעוד תאים סרטניים להיות קרוב אבל לא לפלוש לאמינה אלסטית נחשב אלסטי למינה אי פלישה. אם הכתם מגלה מבנה חוזר המעיד על שכבות מרובות של למינה אלסטית, והגידול אינו פולש מעבר לשכבה החיצונית ביותר, יש לאבחן את המדגם כלא פלישה אלסטית.פתרון אלסטין הוא זמן הכתמים ארוך יחסית, ולכן עדיף לטבול את כל השקופיות עם כתמי אלסטין במיכל אטום. לאחר כתמי תווי אלסטין, יש לשטוף אותם במים מזוקקים.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

ארבע צבע הקרינה אימונוהיסטוכימיה של T- תאים subpopulations ב פורמולה קבוע פורמאלית, פרפין, מוטבע האדם דגימות שלפוחית ​​השתן דגימות קרצינומה של תאי קשקש

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Detection of a CDH1 Rare Transcript Variant in Fresh-frozen Gastric Cancer Tissues by Chip-based Digital PCR

Detection of a CDH1 Rare Transcript Variant in Fresh-frozen Gastric Cancer Tissues by Chip-based Digital PCR

זיהוי של Variant התעתיק נדיר CDH1 ברקמות מוקפאות סרטן קיבה על ידי מבוססי שבב דיגיטלי PCR

CDH1a, a non-canonical transcript of the CDH1 gene, has been found to be expressed in some gastric cancer (GC) cell lines, whereas it is absent in normal ...

Determination of Protein Expression Level in Cultured Cells by Immunocytochemistry on Paraffin-embedded Cell Blocks

קביעת רמת ביטוי חלבונים בתאים בתרבית על ידי Immunocytochemistry על בלוקי תא פרפין-מוטבע

Immunofluorescent staining is currently the method of choice for determination of protein expression levels in cell-culture systems when morphological ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

ניתוח של סרטן תאים הפלישה ושל סמים אנטי גרורתי הקרנת באמצעות מערך הידרוג מיקרו-תא (HMCA)-המבוסס על צלחות

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

לוח Immunofluorescence מולטיפלקס אוטומטיות חיסונית-אונקולוגיה במחקרים על דגימות רקמה קרצינומה פורמלין-קבוע

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Evaluation of Biomarkers in Glioma by Immunohistochemistry on Paraffin-Embedded 3D Glioma Neurosphere Cultures

הערכה של סמנים Glioma מאת אימונוהיסטוכימיה על תרבויות Neurosphere פרפין-מוטבע Glioma תלת-ממד

Analysis of protein expression in glioma is relevant for several aspects in the study of its pathology. Numerous proteins have been described as ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

הקמת החולה סרטן קיבה-מודלים נגזרים הנגזרות וקווי התא הראשי

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

הרחבת ההבנה של המיקרו-סביבה של הגידול באמצעות הדמיית ספקטרומטריית מסה של דגימות רקמה קבועות פורמלין ומשובצות פרפין

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

Deciphering Tumor Microenvironment Using mIHC in Lung Squamous Carcinoma

Multiplex Immunohistochemistry Staining for Paraffin-embedded Lung Cancer Tissue

Author Spotlight: Enhancing Multicolor Fluorescence Localization in Lung Carcinoma Sample

Lung cancer is the leading cause of malignant tumor-related morbidity and mortality all over the world, and the complex tumor microenvironment has been ...