Name: elastic staining on paraffin-embedded slides of pt3n0m0 gastric cancer tissue
Uploaded: 2019-05-01T12:30:00
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著者らは、国立自然科学財団(NO.81401902およびNO.81501992)と湖南自然科学財団(NO.2017SK2134、NO.2018JJ2238)からの支援に感謝しています。原稿はグアン・レイによって書かれています。全体の実験は、グアンレイとハイヤンヤンによって行われます。著者らは、病理学者と患者のデータをフォローアップする仲間の支援に感謝します。

1994年から2005年の間に、中央南大学西谷医学部付属癌病院の2人の経験豊富な消化管病理学者によって、胃新生物の胃切除術を受けた患者から、患者サンプルが選ばれた。pT3N0M0段階における胃癌の術後病理学的診断(第7TNMステージングによると)。この研究は倫理審査委員会によって承認された。
1. 断面
<ol><li>パラフィンブロックをそりマイクロトームの固定ホルダーに?...

<ol>
	<li>Jiang, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinicopathologic+characteristics+and+prognosis+of+gastric+cancer+invading+the+subserosa.">Clinicopathologic characteristics and prognosis of gastric cancer invading the subserosa.</a> Journal of Surgical Oncology. 102 (7), 737-741 (2010).</li><li>Amin, M. 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J., Brennan, B. A., Crook, M. L., Russell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Value+of+elastin+staining+in+the+assessment+of+peritoneal+implants+associated+with+ovarian+serous+borderline+tumours.">Value of elastin staining in the assessment of peritoneal implants associated with ovarian serous borderline tumours.</a> Histopathology. 51 (3), 313-321 (2007).</li><li>Kojima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+diagnostic+criterion+of+blood+and+lymphatic+vessel+invasion+in+colorectal+cancer:+a+framework+for+developing+an+objective+pathological+diagnostic+system+using+the+Delphi+method,+from+the+Pathology+Working+Group+of+the+Japanese+Society+for+Cancer+of+the+Colon+and+Rectum.">Pathological diagnostic criterion of blood and lymphatic vessel invasion in colorectal cancer: a framework for developing an objective pathological diagnostic system using the Delphi method, from the Pathology Working Group of the Japanese Society for Cancer of the Colon and Rectum.</a> Journal of Clinical Pathology. 66 (7), 551-558 (2013).</li><li>Elston, C. A., Kazlouskaya, V., Elston, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+staining+versus.+fluorescent+and+polarized+microscopy+in+the+diagnosis+of+alopecia.">Elastic staining versus. fluorescent and polarized microscopy in the diagnosis of alopecia.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 69 (2), 288-293 (2013).</li><li>Vos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominance+of+Nonatherosclerotic+Internal+Elastic+Lamina+Calcification+in+the+Intracranial+Internal+Carotid+Artery.">Predominance of Nonatherosclerotic Internal Elastic Lamina Calcification in the Intracranial Internal Carotid Artery.</a> Stroke. 47 (1), 221-223 (2016).</li></ol>

ここで提案されるこの方法は、皮下弾性ラミナを同定するための正確なアプローチを提供する。この方法は、腫瘍細胞がpT3N0M0胃癌12において弾性ラミナに侵入したかどうかを評価するために使用することができる。弾性ラミナは、コラーゲン繊維と容易に区別できないH&E染色部で赤みを帯びており、細胞学や免疫組織化学などの既存の補助診断方法も、限られた診断値を発?...

腫瘍、ノード、および転移(TNM)癌ステージングシステムに起因して、病理学期pT4における胃癌の予後はpT3(第8UICC/AJCC)1よりも有意に悪化している。胃癌では、原発性腫瘍(pT)の分類は、通常、腫瘍侵来2の深さに依存する。病理学的段階pT3胃癌は、筋肉のプロプリアを介して皮下組織に侵入する癌として定義され、一方、pT4胃癌は、内臓頭膜の表面に浸透する癌として定義される。両座面侵襲性の存在は、2つの段階2を区別するための鍵である。しかし、間膜中皮細胞層は非常に薄いため、手術、術後治療、および固定3の間に損傷を受ける可能性がある。さらに、腫瘍関連の炎症性変化および線維症は、両腸骨の正常な解剖学を損傷する可能性があり、H&E染色4のみを用いて腸膜表面の侵来を正確に判断することは非常に困難である。細胞学や免疫組織化学などの現在の補助診断方法は、偽陽性であるか、または低い費用対効果を有するため、限られた診断値5、6である。
血清膜は、胸膜、胸膜、および心膜を含み、中皮、基板膜、および中皮下層7から構成される。血清膜の一般的な組織学的特徴の1つは、中皮細胞8,9に隣接する中皮層中皮中層における弾性層の存在である。弾性ラミナは強い抗損傷能力を有し、中皮細胞が重度の腫瘍関連炎症または線維症3によって破壊された場合、代替予後マーカーとして役立つことができる。弾性ラミナは、主にエラスチンおよびマイクロフィブリル10からなり、弾性染色によって可視化することができる。弾性染色の使用の主な理由は、エラスチンがエラスチン溶液中のレソルシノールのフェノール群と水素結合を形成し、弾性繊維が青黒色に染色されることである。ヴァン・ギーソン(VG)対比染色後、コラーゲン繊維は赤色および筋線維および赤血球を染色することができ、黄色8、11、12、13を染色することができる。
肺癌のTNMステージングの第8版は、内膜胸膜侵開(T2)を弾性ラミナを越えた腫瘍の侵入または内臓胸膜2の表面への侵入として定義する。大腸癌に関する研究は、pT3大腸癌における弾性ラミナ侵食が予後不良の原因である可能性があることを示している。大腸癌の5年間の無病および全体的な生存率はまたpT4a13、14、15のようなものであることが証明されている。弾性染色に関する我々の以前の研究に基づいて、弾性ラミナ侵食はpT3胃癌の予後に有意な悪影響を及ぼすことが判明しており、pT4a胃癌12と同様に治療されるべきである。したがって、このシンプルで費用対効果の高い方法は、H&E染色によって得られた結果の不確実性を排除し、細胞学や免疫組織化学を含む他の補助的な診断方法に関連する他の一般的な制限を排除するのに役立ちます。他。この方法は、特にいくつかのあいまいな場合に、消化管癌の根膜表面の侵入を診断するために効率的に使用することができる。H&Eの汚れやその他の汚れが、通常、このような侵入を識別することが困難にするので便利です。この方法はまた、特に弾性繊維に対して非常に選択的であるため、結果の信頼性を保証する。ここでは、pT3N0M0胃癌12において腫瘍細胞が弾性ラミナに侵入したかどうかを判定するために弾性染色を行う。
この方法は、ホルマリン固定、パラフィン埋め込みセクション上の組織内の弾性繊維を識別するために使用され、同様に凍結セクションに使用することができます。ここでは、細胞および組織形態の最高の維持のためのパラフィン埋め込みセクションを選択します。このプロトコルのすべてのステップは室温で行われます。過マンガン酸カリウム溶液、シュウ酸溶液、エラスチン溶液、およびヴァンギーソンの溶液を含む市販の染色キットを提示された研究で使用する。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:620px;" width="620">
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:192px;">Elastin-Van Gieson staining kit</td>
			<td style="width:108px;">Baso</td>
			<td style="width:99px;">BA4083B</td>
			<td style="width:221px;">Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:192px;">Permount TM Mounting Medium</td>
			<td style="width:108px;">MXB Biotechnologies</td>
			<td style="width:99px;">DAB-0033</td>
			<td>Used for mounting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:192px;">Ethanol</td>
			<td style="width:108px;">LMAI Bio&#160;</td>
			<td style="width:99px;">LM64-17-5&#160;</td>
			<td align="right">100%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:192px;">Xylene</td>
			<td style="width:108px;">LMAI Bio&#160;</td>
			<td style="width:99px;">LX820585</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

elastic staining on paraffin-embedded slides of pt3n0m0 gastric cancer tissue

通常、下中皮層に位置する弾性層は、中皮細胞に隣接し、ヘマトキシリンおよびエオシン(H&E)染色に対して両生性であるが、弾性染色を通じて可視化することができる。弾性染色の重要な利点の1つは、腫瘍細胞が弾性ラミナを越えて侵入したかどうかを容易に判断できることです。これは、腸内炎上の侵襲の程度を調べるのに役立ち、それによって消化管癌におけるpT3およびpT4段階を区別する。本研究では、ホルマリン固定パラフィン埋め込みpT3N0M0胃癌組織部における弾性繊維を同定するプロトコルを提示する。スライドに固定された5μmパラフィンセクションを準備し、すべてのスライドが染色手順中に脱パラフィン化および水分補給されます。その後、すべてのセクションは過マンガン酸カリウムによって酸化され、シュウ酸によって漂白され、弾性染色によって染色され、ヴァン・ギーソンによって逆染色される。最後に、染色の効果を調べます。弾性ラミナは青黒色に染まり、コラーゲン繊維は赤色に染まり、癌細胞は黄色の様々な色合いで染色されます。また、癌細胞と弾性ラミナとの位置関係を決定するために用いられる方法についても詳しく述べる。この方法は、弾性繊維と本物の結果のための優れた選択性のために、消化管癌における腹膜表面の侵入の同定に、シンプルで低コストで広く適用可能です。

弾性染色に成功すると、pT3胃癌の弾性ラミナおよび癌細胞が明らかに明らかになっています。図1 -低電力場、エラスチン溶液染色後に顕微鏡的にチェック、前述のプロトコルに従ってヴァン・ギーソンのカウンターステインの前に-弾性層がセロサル中皮細胞に近く、青色黒色に染色されているフィラメントの形態であり、腫瘍細胞と弾性ラミナ...

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Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

ここでは、ホルマリン固定、パラフィン埋め込みセクション上のpT3N0M0胃癌組織における弾性繊維を同定するための弾性染色のプロトコルを提示する。続いて、腫瘍細胞が弾性ラミナを越えて侵入するかどうかを決定する方法について説明する。

pT3N0M0胃癌組織のパラフィン埋め込みスライド上の弾性染色

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

この方法は、pT3胃癌において、腫瘍細胞が弾性薄層を超えて侵入したかどうかを判断するのに役立つ。pT3胃癌の予後画像における弾性薄層浸食。この技術の主な利点は、弾力性のある層を識別するための便利で正確なアプローチであり、病理学者が腫瘍細胞がpT3胃癌の弾性層層を超えて侵入するかどうかを評価する精度が高いということです。この技術は、肺癌および癌の病理学的検査段階診断に向けて可能である。この方法は、肺癌および直腸癌のTNM段階システムにも適用することができる。まず、スライドをコプリン瓶に10分間浸します。この瓶からスライドを取り出し、別のコプリン瓶に新鮮なキシレンに10分間浸します。スライドを5分間100%エタノールに浸し、さらに5分間新鮮な100%エタノールに移します。次に、95%エタノールにスライドを2分間浸します。70%エタノールを含む瓶にスライドを2分間移します。この後、新しいコプリン瓶に蒸留水でスライドを短時間すすいでください。まず、ティッシュペーパーを使用して、スライドまたは組織の周りの余分な溶液を拭き取ります。室温と湿度に合致する条件でスライドを配置します。各スライドに過マンガン酸カリウムを数滴加え、酸化し、追加されたボリュームが各スライドの組織セクションを覆うのに十分であることを確認します。5分後、酸化したスライドをコプリン瓶の蒸留水ですすいで、すすを2〜3回繰り返し、それぞれのすすいに新しい水瓶を使用します。組織は、観察可能な茶色を持っている必要があります。さて、各スライドにシュウ酸を数滴加え、漂白し、追加されたボリュームが各スライドの組織セクションを覆うのに十分であることを確認します。5分後、漂白したスライドを蒸留水ですすい、すすを2〜3回繰り返し、それぞれのすすめに新しい水瓶を使用します。スライドを95%アルコールで短時間洗います。洗浄したスライドをエラスチン溶液に8~24時間浸漬します。その後、スライドを95%エタノールに直接浸し、各組織セクションをうまく区別します。蒸留水でスライドを完全にすすい。青黒の弾性繊維の染色と灰色の背景がないか、顕微鏡的に確認してください。バンギーソン溶液のスライドに1分間対抗し、使用するボリュームが各スライドの組織セクションを完全に覆うのに十分であることを確認します。次に、95%エタノールを数秒間組織スライスに急速にドロップし、各組織セクションを良好に区別します。まず、スライドを95%アルコールに5分間浸して、素早く脱水します。脱水を続けるには、スライドを100%アルコールに5分間移します。その後、スライドを新鮮な100%アルコールにさらに5分間移します。3分間続く各浸漬とキシレンの2つの異なる変更にスライドを浸します。その後、スライドに樹脂製の取り付け媒体を1滴加え、カバースリップを上に置きます。顕微鏡を使用して、テキストプロトコルに概説されているように組織切片を観察する。本研究では、弾性染色を利用して、弾性層の薄層を視覚的に同定する。代表的な染色に成功した場合、エラスチン溶液染色後、ファン・ギーソンの対抗染色の前に、弾性層は青色黒色に染色されたフィラメントの形ではっきりと見られることが明らかになる。それらは漿膜中皮細胞に近く、弾性層と腫瘍細胞の間には一定量の距離が見られる。ファンギーソンのカウンターステインを用いて典型的な弾性染色は、弾性薄層が青黒色に染色されていることを示しています。コラーゲン線維は赤色に染色され、筋線維やがん細胞は黄色に染まっています。弾性層を貫通する癌細胞は、弾性層の浸潤と考えられる。一方、がん細胞は弾性層に近いが侵入していないのに対し、弾性層は非侵入と考えられている。染色によって弾性層の複数の層を示す繰り返し構造が明らかになり、腫瘍が最外層を越えて侵入しない場合、サンプルは弾性薄層非侵襲と診断されるべきである。エラスチン溶液はaであり、染色時間は相対的に長いので、すべてのスライドを密閉容器に入れてエラスチン染色で浸漬するのが最善です。エラスチン溶液染色後、蒸留水で洗い流す必要があります。

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

ホルマリン固定パラフィン包埋ヒト卵黄扁平上皮癌試料におけるT細胞亜集団の四色蛍光免疫組織化学

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Detection of a CDH1 Rare Transcript Variant in Fresh-frozen Gastric Cancer Tissues by Chip-based Digital PCR

Detection of a CDH1 Rare Transcript Variant in Fresh-frozen Gastric Cancer Tissues by Chip-based Digital PCR

チップを使ったデジタル PCR による新鮮凍結胃癌組織内CDH1まれなトラン スクリプト変種の検出

CDH1a, a non-canonical transcript of the CDH1 gene, has been found to be expressed in some gastric cancer (GC) cell lines, whereas it is absent in normal ...

Determination of Protein Expression Level in Cultured Cells by Immunocytochemistry on Paraffin-embedded Cell Blocks

セルのパラフィン包埋ブロックの免疫細胞化学による培養細胞の蛋白質発現レベルの定量

Immunofluorescent staining is currently the method of choice for determination of protein expression levels in cell-culture systems when morphological ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

がん細胞の浸潤と転移防止薬剤のスクリーニングのハイドロゲル マイクロチャンバー アレイを用いた (HMCA) の解析-ベース プレート

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

ホルマリン固定癌組織標本の腫瘍免疫研究の自動多重蛍光パネル

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Evaluation of Biomarkers in Glioma by Immunohistochemistry on Paraffin-Embedded 3D Glioma Neurosphere Cultures

パラフィン埋め込まれた 3 D 神経膠腫 Neurosphere 文化に免疫組織化学による神経膠腫におけるバイオ マーカーの評価

Analysis of protein expression in glioma is relevant for several aspects in the study of its pathology. Numerous proteins have been described as ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

胃癌患者由来異種移植片モデルおよび原発細胞株の確立

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

ホルマリン固定およびパラフィン包埋組織サンプルの質量分析イメージングを用いた腫瘍微小環境の理解を広げる

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

Deciphering Tumor Microenvironment Using mIHC in Lung Squamous Carcinoma

Multiplex Immunohistochemistry Staining for Paraffin-embedded Lung Cancer Tissue

Author Spotlight: Enhancing Multicolor Fluorescence Localization in Lung Carcinoma Sample

Lung cancer is the leading cause of malignant tumor-related morbidity and mortality all over the world, and the complex tumor microenvironment has been ...