Name: elastic staining on paraffin-embedded slides of pt3n0m0 gastric cancer tissue
Uploaded: 2019-05-01T12:30:00
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Os autores agradecem o apoio em parte da Fundação Nacional de ciências naturais (NO. 81401902 e NO. 81501992) e da Fundação de ciência natural de Hunan (NO. 2017SK2134, NO. 2018JJ2238). O manuscrito foi escrito por Guang lei. Todo o experimento é realizado por Guang lei e Haiyan Yang. Os autores agradecem a assistência de patologistas e de companheiros que acompanham os dados dos pacientes.

Entre 1994 e 2005, as amostras de pacientes foram selecionadas por dois patologistas gastrintestinais experientes no hospital de câncer afiliado da escola de medicina de Xiangya, Universidade Central do Sul, de doentes que sofreram gastrectomia de Neoplasias do estômago, com um diagnóstico patológico postoperative do cancro gastric no estágio de pT3N0M0 (de acordo com o sétimo estadiamento de TNM). Este estudo foi aprovado pelo Comitê de ética em revisão.
1. seccionamento
<ol><li>Co...

<ol>
	<li>Jiang, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinicopathologic+characteristics+and+prognosis+of+gastric+cancer+invading+the+subserosa.">Clinicopathologic characteristics and prognosis of gastric cancer invading the subserosa.</a> Journal of Surgical Oncology. 102 (7), 737-741 (2010).</li><li>Amin, M. 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M., Casta&#241;o-Gonz&#225;lez, I., Mompe&#243;-Corredera, B., Ortega-Santana, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segmentation+of+elastic+fibres+in+images+of+vessel+wall+sections+stained+with+Weigert's+resorcin-fuchsin.">Segmentation of elastic fibres in images of vessel wall sections stained with Weigert's resorcin-fuchsin.</a> Computer Methods and Programs in Biomedicine. 142, 43-54 (2017).</li><li>Kojima, M., Nakajima, K., Ishii, G., Saito, N., Ochiai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+elastic+laminal+invasion+of+colorectal+cancer:+the+diagnostic+utility+and+clinicopathologic+relationship.">Peritoneal elastic laminal invasion of colorectal cancer: the diagnostic utility and clinicopathologic relationship.</a> American Journal of Surgical Pathology. 34 (9), 1351-1360 (2010).</li><li>Nakanishi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reappraisal+of+Serosal+Invasion+in+Patients+With+T3+Colorectal+Cancer+by+Elastic+Stain.">Reappraisal of Serosal Invasion in Patients With T3 Colorectal Cancer by Elastic Stain.</a> ARCHIVES OF PATHOLOGY &amp; LABORATORY MEDICINE. 140 (1), 81-85 (2016).</li><li>Grin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+elastic+lamina+invasion:+limitations+in+its+use+as+a+prognostic+marker+in+stage+II+colorectal+cancer.">Peritoneal elastic lamina invasion: limitations in its use as a prognostic marker in stage II colorectal cancer.</a> Human Pathology. 44 (12), 2696-2705 (2013).</li><li>Stewart, C. J., Brennan, B. A., Crook, M. 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A., Kazlouskaya, V., Elston, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+staining+versus.+fluorescent+and+polarized+microscopy+in+the+diagnosis+of+alopecia.">Elastic staining versus. fluorescent and polarized microscopy in the diagnosis of alopecia.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 69 (2), 288-293 (2013).</li><li>Vos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominance+of+Nonatherosclerotic+Internal+Elastic+Lamina+Calcification+in+the+Intracranial+Internal+Carotid+Artery.">Predominance of Nonatherosclerotic Internal Elastic Lamina Calcification in the Intracranial Internal Carotid Artery.</a> Stroke. 47 (1), 221-223 (2016).</li></ol>

Este método proposto fornece uma abordagem precisa para identificar a lâmina elástica subserosal. O método pode ser usado para avaliar se as células tumorais invadiram a lâmina elástica em pT3N0M0 câncer gástrico12. O lamina elástico é avermelhado em seções H & e-manchadas, que não poderiam facilmente ser distinguidos das fibras do colagénio, e outros métodos auxiliares existentes do diagnóstico, tais como a citologia e Immunohistochemistry, igualmente exercida o valor diagnóstic...

De acordo com o sistema de estadiamento do câncer de tumor, linfonodo e metástase (TNM), o prognóstico do câncer gástrico no estágio patológico pT4 é significativamente pior do que no pT3 (8º UICC/AJCC)1. Com o câncer gástrico, a classificação do tumor primário (pT) geralmente depende da profundidade da invasão tumoral2. O cancro gastric do pT3 do estágio patológico é definido como o cancro que invade através do própria dos muscularis em tecidos subserosal, visto que pT4 o cancro gastric é definido como o cancro que penetra à superfície do peritoneum visceral. A presença da invasividade da superfície peritoneal é a chave para distinguir os dois estágios2. No entanto, como a camada celular Mesothelial peritoneal é muito fina, pode ser danificada durante a cirurgia, o tratamento pós-operatório e a fixação3. Além disso, alterações inflamatórias relacionadas ao tumor e fibrose podem prejudicar a anatomia normal do peritônio, o que torna muito difícil julgar com precisão a invasão da superfície peritoneal usando apenas a coloração de H & E4. Os métodos auxiliares atuais do diagnóstico tais como a citologia e immunohistochemistry são do valor diagnóstico limitado5,6 porque são falso-positivos ou têm um baixo cost-efetividade.
A membrana serosal inclui o peritônio, a pleura e o pericárdio, e é composta pelo mesothelium, uma membrana basal e uma camada submesothelial7. Uma característica histológica comum da membrana serosal é a presença de uma lâmina elástica na camada submesotelial, adjacente às células mesotheliais8,9. O lamina elástico tem uma habilidade antiprejudicial forte e pode serir como um marcador prognóstico alternativo se as pilhas Mesothelial são destruídas pela inflamação ou pela fibrose tumor-relacionada severa3. A lâmina elástica compreende principalmente do elastina e do Microfibril10, que pode ser visualizado pela mancha elástica. A principal razão por trás do uso da coloração elástica é que a elastina forma uma ligação de hidrogênio com o grupo fenólico de resorcinol na solução de elastina, fazendo com que as fibras elásticas sejam manchadas de cor azul-preta. Após a coloração contrastante de Van Gieson (VG), as fibras colágenas podem ser manchadas de vermelho e as fibras musculares e glóbulos vermelhos podem ser manchadas de amarelo8,11,12,13.
A oitava edição do estadiamento TNM do câncer de pulmão define a invasão pleural visceral (T2) como uma invasão tumoral além da lâmina elástica ou uma invasão na superfície da pleura visceral2. Estudos sobre o cancro colorretal demonstraram que a invasão da lâmina elástica no cancro colorretal pT3 pode ser a razão para prognoses pobres. A taxa de sobrevida total e livre de doença de 5 anos do câncer colorretal também foi comprovada como pT4a,13,14,15. Baseado em nossos estudos precedentes na mancha elástica, a invasão elástica do lamina foi encontrada para ter uma influência negativa significativa no prognóstico do cancro gastric de pT3 e deve ser tratada a mesma maneira que o cancro gastric pT4a12. Assim, este método simples e rentável pode ajudar a eliminar a incerteza nos resultados obtidos através da coloração de H & E, e outras limitações comuns associadas a outros métodos auxiliares de diagnóstico, incluindo citologia e imunoistoquímica, entre Outros. Este método pode ser usado eficientemente para diagnosticar invasões de superfície peritonealny do cancro gastrintestinal, especial em alguns casos ambíguos. É conveniente desde que a mancha de H & e e outras manchas fazem geralmente difícil identificar tais invasões. Este método também garante uma confiabilidade dos resultados, uma vez que é muito seletivo, especialmente para fibras elásticas. Aqui, nós conduzimos a mancha elástica para determinar se as pilhas do tumor invadiram a lâmina elástica em pT3N0M0 o cancro gastric12.
Este método é usado para identificar fibras elásticas nos tecidos em formalin-fixo, seções parafina-encaixadas, e pode ser usado para seções congeladas também. Aqui, nós escolhemos seções parafina-encaixadas para a melhor manutenção da morfologia celular e do tecido. Todas as etapas deste protocolo acontecem à temperatura ambiente. Um kit de coloração comercial que inclui uma solução de permanganato de potássio, uma solução de ácido oxálico, uma solução de elastina e uma solução de Van Gieson é usada no estudo apresentado.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:620px;" width="620">
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:192px;">Elastin-Van Gieson staining kit</td>
			<td style="width:108px;">Baso</td>
			<td style="width:99px;">BA4083B</td>
			<td style="width:221px;">Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:192px;">Permount TM Mounting Medium</td>
			<td style="width:108px;">MXB Biotechnologies</td>
			<td style="width:99px;">DAB-0033</td>
			<td>Used for mounting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:192px;">Ethanol</td>
			<td style="width:108px;">LMAI Bio&#160;</td>
			<td style="width:99px;">LM64-17-5&#160;</td>
			<td align="right">100%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:192px;">Xylene</td>
			<td style="width:108px;">LMAI Bio&#160;</td>
			<td style="width:99px;">LX820585</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

elastic staining on paraffin-embedded slides of pt3n0m0 gastric cancer tissue

O lamina elástico, que é localizado geralmente na camada secundário-Mesothelial, adjacente às pilhas Mesothelial do peritônio, é anfifílico na coloração do hematoxilina e do eosina (H & e) mas pode ser visualizado com a mancha elástica. Um dos benefícios importantes da mancha elástica é que faz fácil determinar se as pilhas do tumor invadiram além do lamina elástico. Isto ajuda em examinar a extensão da invasão peritonealny da superfície, assim distinguindo os estágios de pT3 e de pT4 no cancro gastrintestinal. Neste estudo, nós apresentamos um protocolo para identificar fibras elásticas nas seções formalin-fixadas, parafina-encaixadas pT3N0M0 do tecido do cancro gastric. Nós preparamos seções de parafina de 5 μm fixadas em lâminas e, em seguida, todas as lâminas são desparaffinadas e rehidratados durante o procedimento de coloração. Posteriormente, todas as secções são oxidadas por permanganato de potássio, branqueada por ácido oxálico, manchada por coloração elástica, e contracorada por Van Gieson. Finalmente, examinamos o efeito da coloração; a lâmina elástica é manchada azul-preto e as fibras do colagénio são manchadas vermelhas, quando as pilhas cancerosas forem manchadas em máscaras de variação do amarelo. Também descrevemos detalhadamente os métodos utilizados para determinar a relação posicional entre as células cancerosas e a lâmina elástica. Este método é simples, de baixo custo, e amplamente aplicável na identificação da invasão de superfície peritoneal no cancro gastrintestinal por causa de sua seletividade proeminente para fibras elásticas e resultados autênticos.

Uma coloração elástica bem sucedida revela claramente A lâmina elástica e as células cancerosas em pT3 cancro gástrico. Figura 1 -campo de baixa potência, verificado microscopicamente após coloração da solução de elastina, antes da contratura de Van Gieson de acordo com o protocolo mencionado-mostra que a lâmina elástica está próxima das células mesotheliais serosais e é manchada de cor azul-preta na forma de filamentos, e ainda há uma cer...

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Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Aqui, nós apresentamos um protocolo da mancha elástica para identificar fibras elásticas em tecidos pT3N0M0 do cancro gastric em seções formalin-fixadas, parafina-encaixadas. Subseqüentemente, nós descrevemos um método para determinar se as pilhas do tumor invadem além do lamina elástico.

Coloração elástica em lâminas de parafina-Embedded de pT3N0M0 tecido de câncer gástrico

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Este método ajuda a determinar se a célula tumoral invadiu além da lamina elástica no câncer gástrico pT3. erosão elástica de lamina no quadro prognóstico para câncer gástrico pT3. A principal vantagem dessa técnica é que é conveniente e preciso a abordagem para identificar a lâmina elástica, o que torna mais preciso para o patologista avaliar se as células tumorais invadem além da lamina elástica no câncer gástrico pT3.Esta técnica pode ser para um diagnóstico de estágio de teste patológico de câncer de pulmão e câncer. Este método também pode ser aplicado ao sistema de estágio TNM de câncer de pulmão e câncer colo-retal. Primeiro, mergulhe os slides em xileno em um frasco de Coplin por 10 minutos.Remova os slides deste frasco e mergulhe-os em xileno fresco em um frasco coplin diferente por mais 10 minutos. Mergulhe os slides em 100% etanol por cinco minutos, e depois transfira-os para o fresco 100% etanol por mais cinco minutos. Em seguida, mergulhe os slides em 95% de etanol por dois minutos.Transfira os slides para um frasco contendo 70% de etanol por dois minutos. Depois disso, enxágue os slides brevemente com água destilada em um novo frasco de Coplin. Primeiro, use papel de tecido para limpar qualquer solução em excesso na lâmina ou ao redor do tecido.Coloque os slides em condições que correspondam à temperatura ambiente e à umidade. Adicione algumas gotas de permangã de potássio a cada slide para oxida-las, certificando-se de que o volume adicionado é suficiente para cobrir a seção de tecido em cada lâmina. Após cinco minutos, enxágue os slides oxidados com água destilada em frascos de Coplin, repetindo a lavagem duas a três vezes e usando um novo frasco de água para cada enxágue.O tecido deve ter uma cor marrom observável. Agora, adicione algumas gotas de ácido oxálico a cada lâmina para branqueá-los, certificando-se de que o volume adicionado é suficiente para cobrir a seção de tecido em cada lâmina. Após cinco minutos, enxágue os slides branqueados com água destilada, repetindo a lavagem duas a três vezes e usando um novo frasco de água para cada enxágue.Lave os slides brevemente em 95% de álcool. Mergulhe os slides lavados na solução de elastina por oito a 24 horas. Em seguida, mergulhe os slides diretamente em 95% de etanol por um a dois minutos para diferenciar bem cada seção de tecido.Enxágüe as lâminas completamente com água destilada. Verifique microscopicamente as fibras elásticas azul-pretas e o fundo cinza. Contratente os slides em uma solução van Gieson por um minuto, certificando-se de que o volume usado é suficiente para cobrir completamente a seção de tecido em cada slide.Em seguida, derrube rapidamente 95% de etanol nas fatias de tecido por alguns segundos para diferenciar bem cada seção de tecido. Para começar, mergulhe os slides em 95% de álcool por cinco minutos para desidratá-los rapidamente. Transfira os slides para 100% álcool por cinco minutos para continuar a desidratação.Em seguida, transfira os slides para álcool fresco 100% por cinco minutos adicionais. Mergulhe os slides em duas mudanças diferentes de xileno com cada imersão durando três minutos. Depois disso, adicione uma gota de meio de montagem resinoso ao slide e coloque um deslizamento de tampa por cima.Usando um microscópio, observe as seções teciduais conforme descrito no protocolo de texto. Neste estudo, a coloração elástica é utilizada para identificar visualmente a lâmina elástica subsoeral. Um representante de coloração bem sucedida revela que após a coloração da solução de elastina, mas antes da contra-mancha de Van Gieson, a lâmina elástica pode ser claramente vista na forma de filamentos que são manchados azul-preto.Eles estão perto das células mesotéciais sororesais, e uma certa distância ainda é vista entre a lamina elástica e as células tumorais. Manchas elásticas típicas com a contra-mancha de Van Gieson demonstram que a lâmina elástica está manchada azul-preta. As fibras de colágeno estão manchadas de vermelho, e as fibras musculares e células cancerosas estão manchadas de amarelo.Células cancerígenas penetrando na lâmina elástica é considerada invasão elástica de lamina. Considerando que as células cancerígenas estarem próximas, mas não invadindo a lâmina elástica, são consideradas lamina elásticas não-invasão. Se a coloração revelar uma estrutura repetitiva indicativa de múltiplas camadas de lâmina elástica, e o tumor não invadir além da camada mais externa, a amostra deve ser diagnosticada como lamina elástica não-invasão.A solução elastina é e o tempo de coloração é relativo longo, por isso é melhor imergir todos os slides com a mancha de elastina em um recipiente selado. Após a coloração da solução de elastina, deve ser lavada com água destilada.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

Imuno-histoquímica de fluorescência de quatro cores das subpopulações de células T em amostras de carcinoma de células escamosas humano oftaríngeas fixadas em formalina, arquivadas, formadas por formalina

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Pesquisa do câncer

Detection of a CDH1 Rare Transcript Variant in Fresh-frozen Gastric Cancer Tissues by Chip-based Digital PCR

Detection of a CDH1 Rare Transcript Variant in Fresh-frozen Gastric Cancer Tissues by Chip-based Digital PCR

Deteção de uma variante de transcrição raro CDH1 em tecidos de câncer gástrico fresco congelado pelo PCR Digital baseada em Chip

CDH1a, a non-canonical transcript of the CDH1 gene, has been found to be expressed in some gastric cancer (GC) cell lines, whereas it is absent in normal ...

Determination of Protein Expression Level in Cultured Cells by Immunocytochemistry on Paraffin-embedded Cell Blocks

Determinação do nível de expressão da proteína em pilhas cultivadas por imunocitoquímica em blocos de parafina

Immunofluorescent staining is currently the method of choice for determination of protein expression levels in cell-culture systems when morphological ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Análise de invasão de células de câncer e usando a matriz de hidrogel Microcâmara (HMCA) de despistagem de drogas antimetastática-baseado placas

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

Painel de imunofluorescência Multiplex automatizada para estudos imuno-oncologia em amostras de Carcinoma fixada em formol

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Evaluation of Biomarkers in Glioma by Immunohistochemistry on Paraffin-Embedded 3D Glioma Neurosphere Cultures

Avaliação de biomarcadores em Glioma por imuno-histoquímica na parafina Glioma 3D Neurosphere culturas

Analysis of protein expression in glioma is relevant for several aspects in the study of its pathology. Numerous proteins have been described as ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Estabelecimento de modelos de xenoenxertos derivados de câncer gástrico e linhas celulares primárias

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

Expandindo a compreensão do microambiente tumoral usando imagens de espectrometria de massa de amostras de tecido fixo e parafina

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

Deciphering Tumor Microenvironment Using mIHC in Lung Squamous Carcinoma

Multiplex Immunohistochemistry Staining for Paraffin-embedded Lung Cancer Tissue

Author Spotlight: Enhancing Multicolor Fluorescence Localization in Lung Carcinoma Sample

Lung cancer is the leading cause of malignant tumor-related morbidity and mortality all over the world, and the complex tumor microenvironment has been ...