Name: efficient and scalable directed differentiation of clinically compatible corneal limbal epithelial stem cells from human pluripotent stem cells
Uploaded: 2018-10-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

أيده الدراسة أكاديمية فنلندا (رقم المنحة 297886)، وبرنامج قطع الغيار البشرية Tekes، وتمويل الوكالة الفنلندية للتكنولوجيا والابتكار، ومؤسسة مصرف الأنسجة والعين الفنلندية والمؤسسة الثقافية الفنلندية. يشكر المؤلفون فنيي المختبرات الطبية ميلين أوتي وحنا بيكانين فيكشتات أيما هيكيلا أوتي للمساعدة التقنية الممتازة والمساهمة في ثقافة الخلية. أستاذ كاترينا الفأر ألتو-Setälä المسلم لتوفير مرفق "بيوميديتيتش التصوير الأساسية" والخط هيبسك المستخدمة لتوفير المعدات اللازمة للتصوير بالأسفار.

جامعة تامبيري يحظى بموافقة "السلطة الوطنية" للشؤون ميديكوليجال فنلندا (دنرو 1426/32/300/05) لإجراء البحوث على الأجنة البشرية. ويضم المعهد أيضا البيانات الداعمة "اللجنة الأخلاقية" لمنطقة مستشفى بيركانما لاشتقاق، الثقافة، والتفريق بين خطوط هيس (سكوتمان/R05116) واستخدام خطوط هيبسك في أبحاث العيون (سك...

<ol>
	<li>Dua, H. S., Shanmuganathan, V. A., Powell-Richards, A. O., Tighe, P. J., Joseph, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+epithelial+crypts:+a+novel+anatomical+structure+and+a+putative+limbal+stem+cell+niche.">Limbal epithelial crypts: a novel anatomical structure and a putative limbal stem cell niche.</a> The British Journal of Ophthalmology. 89 (5), 529-532 (2005).</li><li>Yazdanpanah, G., Jabbehdari, S., Djalilian, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+and+corneal+epithelial+homeostasis.">Limbal and corneal epithelial homeostasis.</a> Current Opinion in Ophthalmology. 28 (4), 348-354 (2017).</li><li>Di Iorio, E., Barbaro, V., Ruzza, A., Ponzin, D., Pellegrini, G., De Luca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoforms+of+DeltaNp63+and+the+migration+of+ocular+limbal+cells+in+human+corneal+regeneration.">Isoforms of DeltaNp63 and the migration of ocular limbal cells in human corneal regeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9523-9528 (2005).</li><li>Rama, P., Matuska, S., Paganoni, G., Spinelli, A., De Luca, M., Pellegrini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+stem-cell+therapy+and+long-term+corneal+regeneration.">Limbal stem-cell therapy and long-term corneal regeneration.</a> The New England Journal of Medicine. 363 (2), 147-155 (2010).</li><li>Notara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+sickness+and+in+health:+Corneal+epithelial+stem+cell+biology,+pathology+and+therapy.">In sickness and in health: Corneal epithelial stem cell biology, pathology and therapy.</a> Experimental Eye Research. 90 (2), 188-195 (2010).</li><li>Osei-Bempong, C., Figueiredo, F. C., Lako, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+limbal+epithelium+of+the+eye--a+review+of+limbal+stem+cell+biology,+disease+and+treatment.">The limbal epithelium of the eye--a review of limbal stem cell biology, disease and treatment.</a> BioEssays: News and Reviews in Molecular, Cellular and Developmental Biology. 35 (3), 211-219 (2013).</li><li>Kolli, S., Ahmad, S., Lako, M., Figueiredo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+clinical+implementation+of+corneal+epithelial+stem+cell+therapy+for+treatment+of+unilateral+limbal+stem+cell+deficiency.">Successful clinical implementation of corneal epithelial stem cell therapy for treatment of unilateral limbal stem cell deficiency.</a> Stem Cells. 28 (3), 597-610 (2010).</li><li>Sangwan, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+outcomes+of+xeno-free+autologous+cultivated+limbal+epithelial+transplantation:+a+10-year+study.">Clinical outcomes of xeno-free autologous cultivated limbal epithelial transplantation: a 10-year study.</a> The British Journal of Ophthalmology. 95 (11), 1525-1529 (2011).</li><li>Basu, S., Mohan, S., Bhalekar, S., Singh, V., Sangwan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+limbal+epithelial+transplantation+(SLET)+in+failed+cultivated+limbal+epithelial+transplantation+(CLET)+for+unilateral+chronic+ocular+burns.">Simple limbal epithelial transplantation (SLET) in failed cultivated limbal epithelial transplantation (CLET) for unilateral chronic ocular burns.</a> The British Journal of Ophthalmology. , (2018).</li><li>Ahmad, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+corneal+epithelial-like+cells+by+in+vitro+replication+of+the+corneal+epithelial+stem+cell+niche.">Differentiation of human embryonic stem cells into corneal epithelial-like cells by in vitro replication of the corneal epithelial stem cell niche.</a> Stem Cells. 25 (5), 1145-1155 (2007).</li><li>Hanson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+human+embryonic+stem+cells+onto+a+partially+wounded+human+cornea+in+vitro.">Transplantation of human embryonic stem cells onto a partially wounded human cornea in vitro.</a> Acta Ophthalmologica. 91 (2), 127-130 (2013).</li><li>Hayashi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+corneal+epithelial+cells+from+induced+pluripotent+stem+cells+derived+from+human+dermal+fibroblast+and+corneal+limbal+epithelium.">Generation of corneal epithelial cells from induced pluripotent stem cells derived from human dermal fibroblast and corneal limbal epithelium.</a> PLoS ONE. 7 (9), e45435 (2012).</li><li>Hewitt, K. J., Shamis, Y., Carlson, M. W., Aberdam, E., Aberdam, D., Garlick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+epithelial+tissues+generated+from+human+embryonic+stem+cells.">Three-dimensional epithelial tissues generated from human embryonic stem cells.</a> Tissue Engineering. Part A. 15 (11), 3417-3426 (2009).</li><li>Shalom-Feuerstein, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+stem+cell+model+reveals+essential+roles+for+miR-450b-5p+and+miR-184+in+embryonic+corneal+lineage+specification.">Pluripotent stem cell model reveals essential roles for miR-450b-5p and miR-184 in embryonic corneal lineage specification.</a> Stem Cells. 30 (5), 898-909 (2012).</li><li>Cieslar-Pobuda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+induced+pluripotent+stem+cell+differentiation+and+direct+transdifferentiation+into+corneal+epithelial-like+cells.">Human induced pluripotent stem cell differentiation and direct transdifferentiation into corneal epithelial-like cells.</a> Oncotarget. 7 (27), 42314-42329 (2016).</li><li>Ludwig, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+human+embryonic+stem+cells+in+defined+conditions.">Derivation of human embryonic stem cells in defined conditions.</a> Nature Biotechnology. 24 (2), 185-187 (2006).</li><li>Chen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+conditions+for+human+iPSC+derivation+and+culture.">Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.</a> Nature Methods. 8 (5), 424-429 (2011).</li><li>Rodin, S., Antonsson, L., Hovatta, O., Tryggvason, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monolayer+culturing+and+cloning+of+human+pluripotent+stem+cells+on+laminin-521-based+matrices+under+xeno-free+and+chemically+defined+conditions.">Monolayer culturing and cloning of human pluripotent stem cells on laminin-521-based matrices under xeno-free and chemically defined conditions.</a> Nature Protocols. 9 (10), 2354-2368 (2014).</li><li>Mikhailova, A., Ilmarinen, T., Uusitalo, H., Skottman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+induction+promotes+corneal+epithelial+cell+differentiation+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Small-molecule induction promotes corneal epithelial cell differentiation from human induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Reports. 2 (2), 219-231 (2014).</li><li>Martinez Garcia de la Torre, R. A., Nieto-Nicolau, N., Morales-Pastor, A., Casaroli-Marano, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+the+Culture+Time+Point+to+Induce+Corneal+Epithelial+Differentiation+in+Induced+Pluripotent+Stem+Cells.">Determination of the Culture Time Point to Induce Corneal Epithelial Differentiation in Induced Pluripotent Stem Cells.</a> Transplantation Proceedings. 49 (10), 2292-2295 (2017).</li><li>Zhang, C., Du, L., Pang, K., Wu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+corneal+epithelial+progenitor+cells+under+defined+conditions.">Differentiation of human embryonic stem cells into corneal epithelial progenitor cells under defined conditions.</a> PLoS One. 12 (8), e0183303 (2017).</li><li>Aberdam, E., Petit, I., Sangari, L., Aberdam, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell-derived+limbal+epithelial+cells+(LiPSC)+as+a+cellular+alternative+for+in+vitro+ocular+toxicity+testing.">Induced pluripotent stem cell-derived limbal epithelial cells (LiPSC) as a cellular alternative for in vitro ocular toxicity testing.</a> PLoS One. 12 (6), e0179913 (2017).</li><li>Kamarudin, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+the+Activity+of+Endogenous+Bone+Morphogenetic+Protein+Signaling+Impact+on+the+Ability+of+Induced+Pluripotent+Stem+Cells+to+Differentiate+to+Corneal+Epithelial-Like+Cells.">Differences in the Activity of Endogenous Bone Morphogenetic Protein Signaling Impact on the Ability of Induced Pluripotent Stem Cells to Differentiate to Corneal Epithelial-Like Cells.</a> Stem Cells. 36 (3), 337-348 (2018).</li><li>Rodin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+culturing+of+human+embryonic+stem+cells+on+laminin-521/E-cadherin+matrix+in+defined+and+xeno-free+environment.">Clonal culturing of human embryonic stem cells on laminin-521/E-cadherin matrix in defined and xeno-free environment.</a> Nature Communications. 5, 3195 (2014).</li><li>Hongisto, H., Ilmarinen, T., Vattulainen, M., Mikhailova, A., Skottman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xeno-+and+feeder-free+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+two+distinct+ocular+epithelial+cell+types+using+simple+modifications+of+one+method.">Xeno- and feeder-free differentiation of human pluripotent stem cells to two distinct ocular epithelial cell types using simple modifications of one method.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 4 (2017).</li><li>Skottman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+and+characterization+of+three+new+human+embryonic+stem+cell+lines+in+Finland.">Derivation and characterization of three new human embryonic stem cell lines in Finland.</a> In vitro Cellular &amp; Developmental Biology. Animal. 46 (3-4), 206-209 (2010).</li><li>Ahola, A., Kiviaho, A. L., Larsson, K., Honkanen, M., Aalto-Set&#228;l&#228;, K., Hyttinen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Video+image-based+analysis+of+single+human+induced+pluripotent+stem+cell+derived+cardiomyocyte+beating+dynamics+using+digital+image+correlation.">Video image-based analysis of single human induced pluripotent stem cell derived cardiomyocyte beating dynamics using digital image correlation.</a> Biomedical Engineering Online. 13, 39 (2014).</li><li>Ojala, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutation-Specific+Phenotypes+in+hiPSC-Derived+Cardiomyocytes+Carrying+Either+Myosin-Binding+Protein+C+Or+&#945;-Tropomyosin+Mutation+for+Hypertrophic+Cardiomyopathy.">Mutation-Specific Phenotypes in hiPSC-Derived Cardiomyocytes Carrying Either Myosin-Binding Protein C Or &#945;-Tropomyosin Mutation for Hypertrophic Cardiomyopathy.</a> Stem Cells International. 2016, 1684792 (2016).</li><li>Ali, R. R., Sowden, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+medicine:+DIY+eye.">Regenerative medicine: DIY eye.</a> Nature. 472 (7341), 42-43 (2011).</li><li>International Stem Cell Initiative, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+ethnically+diverse+human+embryonic+stem+cells+identifies+a+chromosome+20+minimal+amplicon+conferring+growth+advantage.">Screening ethnically diverse human embryonic stem cells identifies a chromosome 20 minimal amplicon conferring growth advantage.</a> Nature Biotechnology. 29 (12), 1132-1144 (2011).</li><li>Foster, J. W., Wahlin, K., Adams, S. M., Birk, D. E., Zack, D. J., Chakravarti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cornea+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Cornea organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> Scientific Reports. 7, 41286 (2017).</li><li>Susaimanickam, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generating+minicorneal+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Generating minicorneal organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> Development. 144 (13), 2338-2351 (2017).</li></ol>

والنتيجة المتوقعة من هذا البروتوكول هو توليد ليسكس ناجحة وقوية من تعليق خلية مفردة هبسك فرنك فرنسي خلال أسبوعين تقريبا 3.5. كما يطور ظهارة القرنية من الأديم الظاهر السطحية29، تهدف الخطوة الأولى من البروتوكول التوجيهي هبسكس تجاه هذه النسب. وتستخدم تحريض ح 24 قصيرة مع تحويل عامل ا...

يسمح للضوء بالدخول الشبكية القرنية شفافة على سطح العين وتوفر معظم القوة الانكسارية للعين. يتم إعادة إنشاء الطبقة الأبعد، ظهارة القرنية الطبقية، بشكل مستمر بالخلايا الجذعية حوفي الظهارية (). الموجودة في الطبقة القاعدية لمنافذ حوفي1،مفرق كورنيوسكليرال2. ليسكس تفتقر إلى علامات محددة وفريدة من نوعها، حيث هويتهم يتطلب إجراء تحليل أكثر شمولاً لمجموعة من علامات المفترضة. P63 عامل النسخ الظهارية، ولا سيما ن لا شفاء منها مبتوراً نسخة عن isoform ألفا من p63 (ΔNp63α)، وقد اقترح كذات صلة إيجابية ليس علامة3،4. شعبة غير متماثلة من ليسكس يسمح لهم بتجديد نفسها، ولكن أيضا إنتاج ذرية التي تهاجر سينتريبيتالي والأسفل. كما الخلايا تقدم نحو سطح القرنية أنهم تدريجيا تفقد بهم ستيمنيس وأخيراً لا شفاء منها التفريق للخلايا الحرشفية السطحية التي فقدت بشكل مستمر من سطح القرنية.
الأضرار بأي من طبقات القرنية يمكن أن يؤدي إلى إعاقة بصرية شديدة، وعيوب القرنية وبالتالي واحدة من الأسباب الرئيسية لفقدان البصر في جميع أنحاء العالم. في عوز الخلايا الجذعية حوفي (جلبتين)، ليمبوس دمرها المرض أو الصدمة مما يؤدي إلى كونجونكتيفاليزيشن وعتامه سطح القرنية وفقدان الرؤية5،6لاحقاً. ويقدم العلاج استبدال الخلية باستخدام الطعوم حوفي ذاتي أو متمكنة استراتيجية علاج للمرضى الذين يعانون من جلبتين4،7،،من89. بيد أن حصاد ترقيع ذاتي يحمل خطر المضاعفات على العين السليمة والأنسجة المانحة هو نقص في المعروض. يمكن أن الخلايا الجذعية البشرية pluripotent (هبسكس)، على وجه التحديد في الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (هيسكس) والخلايا الجذعية البشرية المستحثة pluripotent (هيبسكس)، بمثابة مصدر غير محدود من أنواع الخلايا سريرياً ذات الصلة، بما في ذلك الخلايا الظهارية القرنية. ولذلك، المستمدة من هبسك (هبسك-) تمثل مصدرا خلية جديدة جذابة للعلاج باستبدال خلايا العين.
تقليديا، قد اعتمدت أساليب الثقافة هبسك غير متمايزة وبروتوكوليها التمايز إلى ليسكس على استخدام خلايا تغذية غير معرف أو الأمصال الحيوانية، وسائل الإعلام مشروطة أو أغشية السلي10،11، 12 , 13 , 14 , 15-في الآونة الأخيرة، أدت الجهود المبذولة في اتجاه أكثر أماناً خلية العلاج بمنتجات البحث عن بروتوكولات موحدة وخالية من كرة الثقافة والتمايز أكثر. نتيجة لذلك عدة أساليب محددة وخالية من كرة لثقافة طويلة الأجل من هبسكس غير متمايزة هي الآن متوفرة تجارياً16،،من1718. كسلسلة متصلة، توجيه التمايز بروتوكولات الاعتماد على الرموز الجزيئية لتوجيه هبسكس إلى مصير الظهارة القرنية وقد تم مؤخرا عرض19،،من2021،22، 23. بعد العديد من هذه البروتوكولات المستخدمة أما هبسكس تغذية على أساس غير محدد، كابتداء من مواد، أو زجاجات المعقدة، إكسينوجينيك عامل النمو للتمايز.
والغرض من هذا البروتوكول توفير كرة قوية، محسن،-وأسلوب ثقافة خالية من تغذية هبسك والتمايز اللاحقة إلى القرنية. ثقافة أحادي الطبقة هبسكس pluripotent laminin-521 (LN-521) المصفوفة في هبسك محددة وخالية من الزلال المتوسطة (8 تحديداً الأساسية فليكس) يسمح للإنتاج السريع لمادة انطلاق متجانسة للاختلاف. بعد ذلك أدلة بسيطة، استراتيجية التمايز خطوتين هبسكس تجاه مصير الأدمة السطحية في التعليق، متبوعاً بتمايز ملتصقة على ليسكس. يتم الحصول على عدد سكان خلية حيث أعرب > 65% ΔNp63α خلال 24 يوما. تم اختبار البروتوكول خالية كرة والتغذية مع عدة خطوط هبسك (هيسكس وهيبسكس)، دون أي اشتراط للخلية خط التحسين المحددة. تمكين بروتوكولات phenotyping الصيانة، باساجينج، كريوستورينج وهبسك خالية من عطلة نهاية الأسبوع هنا ووصف إنتاج دفعات كبيرة من عالية الجودة السريرية أو لأغراض البحث.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Material/Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x DPBS containing Ca2+ and Mg2+</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#14040-091</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x DPBS without Ca2+ and Mg2+</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>#17-512F/12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm cell culture dish</td>
			<td>Corning CellBIND</td>
			<td>#3296</td>
			<td>Culture vessel format for adherent hPSC-LESC differentiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plate</td>
			<td>Corning CellBIND</td>
			<td>#3336</td>
			<td>Culture vessel format for IF samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate</td>
			<td>Corning CellBIND</td>
			<td>#3337</td>
			<td>Culture vessel format for IF samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#31350-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate, Ultra-Low attachment</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>#3471</td>
			<td>Culture vessel format for induction in suspension culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-mouse Ig</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#A-21202</td>
			<td>Secondary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-rabbit Ig</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#A-21206</td>
			<td>Secondary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 anti-goat Ig</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#A-11057</td>
			<td>Secondary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 anti-mouse Ig</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#A-10037</td>
			<td>Secondary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic fibroblast growth factor (bFGF, human)</td>
			<td>PeproTech Inc.</td>
			<td>#AF-100-18B</td>
			<td>Animal-Free Recombinant Human FGF-basic (154 a.a.)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>#554722</td>
			<td>Fixation and permeabilization solution for flow cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Perm/Wash Buffer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>#554723</td>
			<td>Washing buffer for flow cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blebbistatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#B0560</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone morphogenetic protein 4 (BMP-4)</td>
			<td>PeproTech Inc.</td>
			<td>#120-05A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#A8022-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 12 antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>#SC-17099</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 14 antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>#MAB3164</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 15 antibody</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#MS-1068-P</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CnT-30</td>
			<td>CELLnTEC Advanced Cell Systems AG</td>
			<td>#Cnt-30</td>
			<td>Culture medium for adherent hPSC-LESC differentiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen type IV (human)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#C5533</td>
			<td>Human placental collagen type IV</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoolCell LX Freezing Container</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#BCS-405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CryoPure tubes</td>
			<td>Sarsted</td>
			<td>#72.380</td>
			<td>1.6 ml cryotube for hPSC-LESC cryopreservation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Defined Trypsin Inhibitor</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#R-007-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Essential 8 Flex Medium Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>#A2858501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin 521</td>
			<td>Biolamina</td>
			<td>#Ln521</td>
			<td>Human recombinant laminin 521</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#916;Np63&#945; antibody</td>
			<td>BioCare Medical</td>
			<td>#4892</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT3/4 antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>#AF1759</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p63&#945; antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>#ACI3066A</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p63-&#945; (D2K8X) XP Rabbit mAb (PE Conjugate)</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>#56687</td>
			<td>p63-&#945; PE-conjugated antibody for flow cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAX6 antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#HPA030775</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>#17-602E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#158127</td>
			<td>Cell fixative for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant with DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>#P36931</td>
			<td>DAPI mountant for hard mounting for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSC Cryopreservation Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>#A2644601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Select Enzyme</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#12563-011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#10829018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut SR XenoFree CTS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#10828028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM non-essential amino acids</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB-505124</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#S4696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#T8787</td>
			<td>Permeabilization agent for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>#H-1200</td>
			<td>DAPI mountant for liquid mounting for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytocentrifuge, e.g. CellSpin II</td>
			<td>Tharmac</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer, e.g. BD Accuri C6</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope, e.g.Olympus IX 51</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient and scalable directed differentiation of clinically compatible corneal limbal epithelial stem cells from human pluripotent stem cells

القرنية حوفي طلائي الخلايا الجذعية () المسؤولة عن تجديد ظهارة القرنية باستمرار، وثم المحافظة على التوازن القرنية والوضوح البصري. الخلية الجذعية pluripotent البشرية (هبسك)-المشتقة توفير مصدر خلية واعدة للعلاج باستبدال الخلايا القرنية. شروط الثقافة والتمايز غير معرف، إكسينوجينيك يؤدي التباين في نتائج البحث وتعوق ترجمة المستمدة من هبسك المداواة السريرية. يوفر هذا البروتوكول أسلوب قابل لإعادة الإنتاج والكفاءة للتمايز هبسك تحت ظروف خالية من خلية كرة-والتغذية. أولاً، ثقافة أحادي الطبقة هبسك غير متمايزة في المؤتلف laminin-521 (LN-521) والمتوسطة هبسك محددة بمثابة أساس لإنتاج قوية انطلاق المواد عالية الجودة للاختلاف. وثانيا، أسلوب المفاضلة هبسك سريعة وبسيطة غلة السكان ليسك في 24 يوما فقط. ويشمل هذا الأسلوب التعريفي الأدمة سطحية أربعة أيام في تعليق مع جزيئات صغيرة، تليها مرحلة الثقافة ملتصقة رابعا LN-521/الكولاجين تركيبة المصفوفة في متوسطة التمايز الظهارة القرنية محددة. كريوستورينج والتمايز الموسعة كذلك ينقي السكان الخلية وتمكن المصارف الخلايا بكميات كبيرة لخلية العلاج بمنتجات. هبسك-عالية الجودة الناتجة عن تقديم استراتيجية علاج رواية محتملة لإعادة بناء سطح القرنية لعلاج نقص الخلايا الجذعية حوفي (جلبتين).

من هبسكس إلى هبسك-
وتستغرق العملية برمتها من الذي يحفز تمايز هبسكس فرنك فرنسي إلى كريوستورينج هبسك-حوالي 3.5 أسابيع. نظرة عامة التخطيطي أسلوب المفاضلة تسليط الضوء على خطواتها الرئيسية ترد في الشكل 1A. ويبين الشكل 1B...

Watch this Scientific Journal Video about Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells

فعالة وقابلة للتمايز الموجهة متوافقة سريرياً القرنية حوفي طلائي الخلايا الجذعية من الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية

ويدخل هذا البروتوكول أسلوب خطوتين بسيطة لتمييز الخلايا الجذعية الظهارية حوفي القرنية من الخلايا الجذعية pluripotent البشرية تحت ظروف خالية من خلية ثقافة كرة-وتغذية. أساليب الثقافة الخلية المعروضة هنا تمكين إنتاج خلايا نوعية السريرية المنطبق على خلية القرنية العلاج باستخدام فعالة من حيث التكلفة، وعلى نطاق واسع.

Corneal limbal epithelial stem cells (LESCs) are responsible for continuously renewing the corneal epithelium, and thus maintaining corneal homeostasis ...

أدخل هذا البروتوكول طريقة محددة لخلية التغذية الحرة للتمييز بين الخلايا الجذعية الظهارية القرنية الطرفية من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات. الخلايا الجذعية الظهارية الطرفية هي المسؤولة عن تجديد الظهارية القرنية في العين السليمة. تلف هذه الخلايا يؤدي إلى حالة تعرف باسم نقص الخلايا الجذعية الطرفية، وإلى فقدان وضوح القرنية.تمكن طرق زراعة الخلايا الموضحة هنا من إنتاج فعال للخلايا الجذعية الظهارية الطرفية لعلاجات استبدال خلايا القرنية المستقبلية. للبدء، مرور والحفاظ على تغذية وحدة تغذية خالية من ثقافة الخلايا الجذعية متعددة القدرات البشرية كما هو مبين في بروتوكول النص. تأكد من استخدام الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات ذات الجودة العالية فقط كمواد البداية للتمايزات.عندما تكون على استعداد للحث على تكوين الجسم الجنينية، الدافئة جميع المواد اللازمة والكواشف إلى درجة حرارة الغرفة في غطاء محرك تدفق لارينار. فصل الخلايا الجذعية البشرية المتعددة القدرات المجانية إلى التعليق عن طريق إضافة 500 ميكرولترات من xeno free trypsin EDTA إلى كل بئر. احتضان في 37 درجة مئوية، مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون.بعد ثلاث دقائق، قم بإزالة الخلايا من الحاضنة وتحقق من مورفولوجيا الخلية لتحديد المرحلة المثلى لإزالة التربسين. مراقبة الخلايا بعناية لتحديد الوقت الأمثل لإزالة tryspin EDTA الحرة xeno، عندما تم تجميع الخلايا، ولكن لم يتم فصل تماما. في الوقت الأمثل، إزالة تبسين الحرة EDTA xeno من الخلايا.إضافة مثبطات التربسين المعرفة وماصات بلطف لفصل الخلايا. جمع تعليق خلية واحدة في أنبوب جهاز طرد مركزي 50 ملليلتر. جهاز طرد مركزي في 300g لمدة خمس دقائق.ثم، إزالة نابيرانت، وإعادة تعليق الخلايا في ملليلتر واحد من المتوسطة الثقافة. بعد عد الخلايا، وتوزيع اثنين إلى ثلاثة ملايين خلية في ثلاثة ملليلتر من المتوسط التعريفي القاعدية تستكمل مع خمسة blebbistatin ميكرومولار إلى كل بئر من مرفق منخفض ستة لوحة جيدا. احتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون.في اليوم التالي، تحقق من جودة الأجسام الجنينية تحت المجهر. إزالة المتوسطة، واستبدالها مع ثلاثة ملليلتر من المتوسط التعريفي القاعدية تستكمل مع 10 micromolar SB-505124 و 50 نانوغرام لكل ملليلتر من عامل نمو الألياف الزجاجية الأساسية البشرية. مواصلة احتضان في 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون.في اليومين التاليين، وإزالة المتوسطة، واستبدالها مع ثلاثة ملليلتر من المتوسط التعريفي القاعدية، تستكمل مع 25 نانوغرام لكل ملليلتر من البروتين مورفوجينيك العظام أربعة. ثم، مواصلة الحضانة باستخدام الشروط السابقة. في اليوم الرابع، أعد خليطًا من 0.5 ميكروغرام لكل سنتيمتر مربع من اللامينين-521، وخمس ميكروغرام لكل سنتيمتر مربع من الكولاجين المشيمي البشري من النوع الرابع، المخفف في DPBS الذي يحتوي على الكالسيوم اثنين والمغنيسيوم أيونين.باستخدام هذا الخليط، معطف 100 ملليمتر أطباق ثقافة الأنسجة لأتباع التمايز في حجم الطلاء الكلي من خمسة ملليلتر لكل طبق. ختم لوحات، وتخزينها في أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها. في اليوم الخامس، تدفئ جميع المواد اللازمة والكواشف إلى درجة حرارة الغرفة في غطاء محرك تدفق لامينر.بعد ذلك، إزالة حل الطلاء وإضافة 10 ملليلتر من التمايز قبل الدافئة المتوسطة لكل طبق. باستخدام ماصة، نقل الهيئات الجنينية من لوحة واحدة جيدا عبر اثنين إلى ثلاثة أطباق ثقافة الأنسجة. ثم، يهز بلطف كل طبق الثقافة لتوزيع بالتساوي الهيئات الجنينية.الحفاظ على الخلايا في ثقافة التمسك في 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة أسبوعين ونصف إلى ثلاثة أسابيع المقبلة، مع التأكد من استبدال المتوسطة مع 10 ملليلتر من التمايز الطازج المتوسط ثلاث مرات في الأسبوع. استخدام المجهر النقيض مرحلة للتحقق بانتظام الخلايا لظهور مورفولوجيا الظهارية الصحيحة. للبدء، قبل الدافئة جميع المواد اللازمة والكواشف إلى درجة حرارة الغرفة في غطاء محرك تدفق المفارق، باستثناء وسط الحفظ التبريد، والتي ينبغي أن تكون مبردة مسبقا.بعد ذلك، قم بفصل الخلايا الجذعية البشرية المتعددة القدرات المشتقة من الخلايا الجذعية الظهارية الطرفية إلى تعليق الخلايا المفردة عن طريق إضافة التبسين الحر xeno EDTA والاحتضان عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون. بعد خمس دقائق، قم بإزالة الخلايا من الحاضنة وتحقق من مورفولوجيا الخلية لتحديد المرحلة المثلى لإزالة التربسين. مراقبة الخلايا بعناية لتحديد الوقت الأمثل لإزالة EDTA تريبسين xeno الحرة، عندما تم تجميع الخلايا، ولكن لم يتم فصل تماما.في الوقت الأمثل، قم بإزالة EDTA EDTA xeno الحرة، ثم قم بفصل الخلايا كما هو موضح سابقاً. بعد عد الخلايا، الطرد المركزي لهم في 300g لمدة خمس دقائق. التعرق المتوسطة، وإعادة تعليق الخلايا في ما قبل مبردة xeno الحرة التبريد المتوسطة.باستخدام ماصة، نقل تعليق خلية واحدة في أنابيب التبريد بحيث يحتوي كل أنبوب التبريد بين 500،000 إلى مليون خلية في ملليلتر واحد من وسط الحفظ التبريد. ضع الأنابيب في وعاء متجمد. في غضون خمس دقائق، ونقلها إلى ثلاجة في درجة حرارة سالبة 80 درجة مئوية للتخزين ليلا.في اليوم التالي، نقل الأنابيب إلى النيتروجين السائل لتخزين على المدى الطويل. قبل ذوبان الخلايا، معطف جميع الأطباق اللازمة وآبار الصفائح مع خليط من خمسة ميكروغرام لكل سنتيمتر مربع الكولاجين المشيمة الإنسان من النوع الرابع، و0.5 ميكروغرام لكل سنتيمتر مربع من LM-521، وقبل الدافئة جميع المواد اللازمة والكواشف إلى درجة حرارة الغرفة في غطاء محرك الرأس تدفق الفات. بعد ذلك، إزالة حل طلاء من الأطباق وآبار لوحة وإضافة حجم مناسب من التمايز قبل الدافئة المتوسطة.إضافة ما قبل الدافئة التمايز المتوسطة إلى أنبوب مخروطي 15 ملليلتر. ذوبان الخلايا بسرعة إلى درجة حرارة الغرفة. بمجرد إذابة، نقل على الفور تعليق الخلية إلى أنبوب الطرد المركزي المخروطي.جهاز طرد مركزي في 300g لمدة خمس دقائق. التعرق المتوسطة، وإعادة تعليق بيليه الخلية في التمايز المتوسطة لإزالة أي وسيط التبريد. لوحة الخلايا على أطباق مُنَطَّتة في وسط التمايز بكثافة 40، 000 إلى 50،000 خلية لكل سنتيمتر مربع.الحفاظ على الخلايا في 37 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون، والاستعاضة عن متوسط التمايز ثلاث مرات في الأسبوع. في Laminin-521، فإن الخلايا الجذعية البشرية غير المتمايزة ذات الجودة العالية الخالية من الخلايا الجذعية متعددة القدرات تشكل أولاً مستعمرات متميزة ذات حواف حادة، تندمج في طبقات أحادية متجانسة عند الالتقاء. زراعة في المتوسطة التعريفي القاعدية، وتستكمل مع خمسة blebbistatin micromolar لمدة 24 ساعة تنتج عادة تعليق من ضيق، الهيئات الجنينية العادية من مختلف الأحجام، في حين أن مورفولوجيا الجسم الجنينية لا ينبغي أن تتغير بشكل كبير خلال الحث السطحي في التعليق، وينظر إلى النمو الاستعماري لتظهر بعد وقت قصير من مطلية الهيئات الجنينية على نوع الكولاجين أربعة ومصفوفة لامينين-521 في التمايز المتوسط.في غضون 21 إلى 25 يوما من التمايز، تشكل الخلايا طبقات متجانسة اخلطية، مع مورفولوجيا مضلعة، وهذا هو نموذجي للخلايا الظهارية. قد تكون الخلايا ثم كرية تخزينها لاستخدامها في وقت لاحق، كما يتم الحفاظ على قابلية البقاء ومورفولوجيا جيدا بعد ذوبان. في اليوم 24 من التمايز، والغالبية العظمى من الخلايا أعرب عن البروتين مربع الاقتران، PAX6، المنظم الرئيسي لتطوير العين، فضلا عن p63 ألفا، علامة LESC المعترف بها على نطاق واسع.دلتا Np63 هو coexpressed في معظم الخلايا الإيجابية p63 ألفا, مؤكدا على أكثر القرنية المحددة Np63 ألفا خلية النمط الظاهري. يتم التعبير عن علامات أخرى في جزء منه ، في حين أن علامات أخرى لا يمكن اكتشافها في هذه المرحلة ، مما يشير إلى أن التمايز قد تقدم نحو النسل الظهاري الطرفي غير القادر ، ولكن التمايز النهائي في الخلايا الظهارية القرنية الناضجة لم يحدث بعد. في المتوسط، كل تغذية غير متمايزة الخلايا الجذعية متعددة القدرات البشرية متعددة القدرات يولد 0.7 الخلايا بحلول اليوم 25.يمكن توقع 65٪ على الأقل دلتا Np63 ألفا السكان خلية إيجابية من قبل يوم 24. الحفظ بالتبريد يُنقي المزيد من عدد الخلايا. وعموما، فإن الأساليب المعروضة هنا بسيطة نسبيا، ولكن هناك بعض النقاط الحاسمة للنجاح.جودة عالية من المواد بدءا أمر ضروري، فضلا عن لطيف، وتقنيات ثقافة الخلية بطلاقة بشكل عام. يوفر هذا البروتوكول وسائل قوية لإنتاج الخلايا الجذعية الظهارية الطرفية للتطبيقات السريرية، وكذلك لأغراض بحثية مختلفة. وعلاوة على ذلك، يمكن تعديل طريقة بسهولة للتمايز من خلايا الشبكية الظهارية الصباغ.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

إنتاج واسع النطاق العضلية من الخلايا الجذعية متعددة القدرات البشرية باستخدام تكرار للغاية الصغيرة وبناء جزيء بروتوكول التمايز

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

The Production of Pluripotent Stem Cells from Mouse Amniotic Fluid Cells Using a Transposon System

إنتاج الخلايا الجذعية المحفزة من الفأر الأمنيوسي الخلايا السوائل عن طريق نظام ينقول

Induced pluripotent stem (iPS) cells are generated from mouse and human somatic cells by forced expression of defined transcription factors using ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

وجه التفريق بين فروعه المكونة للدم البدائي والنهائي من الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

التمايز كفاءة الخلايا الجذعية المحفزة لNKX6-1<sup&gt; +</sup&gt; البنكرياس أسلاف

Pluripotent stem cells have the ability to self renew and differentiate to multiple lineages, making them an attractive source for the generation of ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

في المختبر تمايز متعددة القدرات البشرية الخلايا الجذعية إلى خلايا الأرومة الغاذية

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

Defined and Scalable Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Pluripotent Stem Cells

محددة وقابلة للتطوير الجيل من الخلايا تشبه الكبدية من الخلايا الجذعية متعددة القدرات البشرية

Human pluripotent stem cells (hPSCs) possess great value for biomedical research. hPSCs can be scaled and differentiated to all cell types found in the ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

التفريق بين الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية من الخلايا الجذعية Pluripotent المستحث أو الجنينية البشرية سريعة وموجهة

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

التمايز الفعال للخلايا الجذعية البشرية متعددة القوى في خلايا الكبد

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

في المختبر توليد المشتقات سميط من البشرية التي يسببها الخلايا الجذعية Pluripotent

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Transient Treatment of Human Pluripotent Stem Cells with DMSO to Promote Differentiation

العلاج العابر للخلايا الجذعية البشرية متعددة القوى مع DMSO لتعزيز التمايز

Despite the growing use of pluripotent stem cells (PSCs), challenges in efficiently differentiating embryonic and induced pluripotent stem cells (ESCs and ...