Name: efficient and scalable directed differentiation of clinically compatible corneal limbal epithelial stem cells from human pluripotent stem cells
Uploaded: 2018-10-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

המחקר נתמך על ידי האקדמיה של פינלנד (מענק מס ' 297886), התוכנית חלקי חילוף של Tekes, הסוכנות קרנות פינית עבור טכנולוגיה וחדשנות, העין פינית, קרן בנק רקמות, קרן התרבות הפינית. המחברים תודה את טכנאי מעבדות ביו Outi Melin, חנה Pekkanen, אמה Vikstedt ו- Outi Heikkilä עבור תרומה תרבית תאים וסיוע טכני מעולה. פרופסור Katriina אלטו-Setälä הוא הודה למתן להשתמש hiPSC קו של BioMediTech הדמיה הליבה מתקן לאספקת ציוד הדמיה זריחה.

אוניברסיטת טמפרה יש האישור של הרשות הלאומית לענייני הנושאים הקשורים מאת נייט פינלנד (Dnro 1426/32/300/05) כדי לערוך מחקר על עוברי אדם. המכון מציע גם הצהרות תומכת הוועדה האתית של רובע ח Pirkanmaa כדי להפיק, תרבות, וההבחנה קווים hESC (Skottman/R05116) וכדי להשתמש hiPSC קווים במחקר אופטלמולוגי (Skottman/R14023). אין שורות תאים...

<ol>
	<li>Dua, H. S., Shanmuganathan, V. A., Powell-Richards, A. O., Tighe, P. J., Joseph, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+epithelial+crypts:+a+novel+anatomical+structure+and+a+putative+limbal+stem+cell+niche.">Limbal epithelial crypts: a novel anatomical structure and a putative limbal stem cell niche.</a> The British Journal of Ophthalmology. 89 (5), 529-532 (2005).</li><li>Yazdanpanah, G., Jabbehdari, S., Djalilian, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+and+corneal+epithelial+homeostasis.">Limbal and corneal epithelial homeostasis.</a> Current Opinion in Ophthalmology. 28 (4), 348-354 (2017).</li><li>Di Iorio, E., Barbaro, V., Ruzza, A., Ponzin, D., Pellegrini, G., De Luca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoforms+of+DeltaNp63+and+the+migration+of+ocular+limbal+cells+in+human+corneal+regeneration.">Isoforms of DeltaNp63 and the migration of ocular limbal cells in human corneal regeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9523-9528 (2005).</li><li>Rama, P., Matuska, S., Paganoni, G., Spinelli, A., De Luca, M., Pellegrini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+stem-cell+therapy+and+long-term+corneal+regeneration.">Limbal stem-cell therapy and long-term corneal regeneration.</a> The New England Journal of Medicine. 363 (2), 147-155 (2010).</li><li>Notara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+sickness+and+in+health:+Corneal+epithelial+stem+cell+biology,+pathology+and+therapy.">In sickness and in health: Corneal epithelial stem cell biology, pathology and therapy.</a> Experimental Eye Research. 90 (2), 188-195 (2010).</li><li>Osei-Bempong, C., Figueiredo, F. C., Lako, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+limbal+epithelium+of+the+eye--a+review+of+limbal+stem+cell+biology,+disease+and+treatment.">The limbal epithelium of the eye--a review of limbal stem cell biology, disease and treatment.</a> BioEssays: News and Reviews in Molecular, Cellular and Developmental Biology. 35 (3), 211-219 (2013).</li><li>Kolli, S., Ahmad, S., Lako, M., Figueiredo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+clinical+implementation+of+corneal+epithelial+stem+cell+therapy+for+treatment+of+unilateral+limbal+stem+cell+deficiency.">Successful clinical implementation of corneal epithelial stem cell therapy for treatment of unilateral limbal stem cell deficiency.</a> Stem Cells. 28 (3), 597-610 (2010).</li><li>Sangwan, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+outcomes+of+xeno-free+autologous+cultivated+limbal+epithelial+transplantation:+a+10-year+study.">Clinical outcomes of xeno-free autologous cultivated limbal epithelial transplantation: a 10-year study.</a> The British Journal of Ophthalmology. 95 (11), 1525-1529 (2011).</li><li>Basu, S., Mohan, S., Bhalekar, S., Singh, V., Sangwan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+limbal+epithelial+transplantation+(SLET)+in+failed+cultivated+limbal+epithelial+transplantation+(CLET)+for+unilateral+chronic+ocular+burns.">Simple limbal epithelial transplantation (SLET) in failed cultivated limbal epithelial transplantation (CLET) for unilateral chronic ocular burns.</a> The British Journal of Ophthalmology. , (2018).</li><li>Ahmad, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+corneal+epithelial-like+cells+by+in+vitro+replication+of+the+corneal+epithelial+stem+cell+niche.">Differentiation of human embryonic stem cells into corneal epithelial-like cells by in vitro replication of the corneal epithelial stem cell niche.</a> Stem Cells. 25 (5), 1145-1155 (2007).</li><li>Hanson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+human+embryonic+stem+cells+onto+a+partially+wounded+human+cornea+in+vitro.">Transplantation of human embryonic stem cells onto a partially wounded human cornea in vitro.</a> Acta Ophthalmologica. 91 (2), 127-130 (2013).</li><li>Hayashi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+corneal+epithelial+cells+from+induced+pluripotent+stem+cells+derived+from+human+dermal+fibroblast+and+corneal+limbal+epithelium.">Generation of corneal epithelial cells from induced pluripotent stem cells derived from human dermal fibroblast and corneal limbal epithelium.</a> PLoS ONE. 7 (9), e45435 (2012).</li><li>Hewitt, K. J., Shamis, Y., Carlson, M. W., Aberdam, E., Aberdam, D., Garlick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+epithelial+tissues+generated+from+human+embryonic+stem+cells.">Three-dimensional epithelial tissues generated from human embryonic stem cells.</a> Tissue Engineering. Part A. 15 (11), 3417-3426 (2009).</li><li>Shalom-Feuerstein, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+stem+cell+model+reveals+essential+roles+for+miR-450b-5p+and+miR-184+in+embryonic+corneal+lineage+specification.">Pluripotent stem cell model reveals essential roles for miR-450b-5p and miR-184 in embryonic corneal lineage specification.</a> Stem Cells. 30 (5), 898-909 (2012).</li><li>Cieslar-Pobuda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+induced+pluripotent+stem+cell+differentiation+and+direct+transdifferentiation+into+corneal+epithelial-like+cells.">Human induced pluripotent stem cell differentiation and direct transdifferentiation into corneal epithelial-like cells.</a> Oncotarget. 7 (27), 42314-42329 (2016).</li><li>Ludwig, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+human+embryonic+stem+cells+in+defined+conditions.">Derivation of human embryonic stem cells in defined conditions.</a> Nature Biotechnology. 24 (2), 185-187 (2006).</li><li>Chen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+conditions+for+human+iPSC+derivation+and+culture.">Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.</a> Nature Methods. 8 (5), 424-429 (2011).</li><li>Rodin, S., Antonsson, L., Hovatta, O., Tryggvason, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monolayer+culturing+and+cloning+of+human+pluripotent+stem+cells+on+laminin-521-based+matrices+under+xeno-free+and+chemically+defined+conditions.">Monolayer culturing and cloning of human pluripotent stem cells on laminin-521-based matrices under xeno-free and chemically defined conditions.</a> Nature Protocols. 9 (10), 2354-2368 (2014).</li><li>Mikhailova, A., Ilmarinen, T., Uusitalo, H., Skottman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+induction+promotes+corneal+epithelial+cell+differentiation+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Small-molecule induction promotes corneal epithelial cell differentiation from human induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Reports. 2 (2), 219-231 (2014).</li><li>Martinez Garcia de la Torre, R. A., Nieto-Nicolau, N., Morales-Pastor, A., Casaroli-Marano, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+the+Culture+Time+Point+to+Induce+Corneal+Epithelial+Differentiation+in+Induced+Pluripotent+Stem+Cells.">Determination of the Culture Time Point to Induce Corneal Epithelial Differentiation in Induced Pluripotent Stem Cells.</a> Transplantation Proceedings. 49 (10), 2292-2295 (2017).</li><li>Zhang, C., Du, L., Pang, K., Wu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+corneal+epithelial+progenitor+cells+under+defined+conditions.">Differentiation of human embryonic stem cells into corneal epithelial progenitor cells under defined conditions.</a> PLoS One. 12 (8), e0183303 (2017).</li><li>Aberdam, E., Petit, I., Sangari, L., Aberdam, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell-derived+limbal+epithelial+cells+(LiPSC)+as+a+cellular+alternative+for+in+vitro+ocular+toxicity+testing.">Induced pluripotent stem cell-derived limbal epithelial cells (LiPSC) as a cellular alternative for in vitro ocular toxicity testing.</a> PLoS One. 12 (6), e0179913 (2017).</li><li>Kamarudin, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+the+Activity+of+Endogenous+Bone+Morphogenetic+Protein+Signaling+Impact+on+the+Ability+of+Induced+Pluripotent+Stem+Cells+to+Differentiate+to+Corneal+Epithelial-Like+Cells.">Differences in the Activity of Endogenous Bone Morphogenetic Protein Signaling Impact on the Ability of Induced Pluripotent Stem Cells to Differentiate to Corneal Epithelial-Like Cells.</a> Stem Cells. 36 (3), 337-348 (2018).</li><li>Rodin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+culturing+of+human+embryonic+stem+cells+on+laminin-521/E-cadherin+matrix+in+defined+and+xeno-free+environment.">Clonal culturing of human embryonic stem cells on laminin-521/E-cadherin matrix in defined and xeno-free environment.</a> Nature Communications. 5, 3195 (2014).</li><li>Hongisto, H., Ilmarinen, T., Vattulainen, M., Mikhailova, A., Skottman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xeno-+and+feeder-free+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+two+distinct+ocular+epithelial+cell+types+using+simple+modifications+of+one+method.">Xeno- and feeder-free differentiation of human pluripotent stem cells to two distinct ocular epithelial cell types using simple modifications of one method.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 4 (2017).</li><li>Skottman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+and+characterization+of+three+new+human+embryonic+stem+cell+lines+in+Finland.">Derivation and characterization of three new human embryonic stem cell lines in Finland.</a> In vitro Cellular &amp; Developmental Biology. Animal. 46 (3-4), 206-209 (2010).</li><li>Ahola, A., Kiviaho, A. L., Larsson, K., Honkanen, M., Aalto-Set&#228;l&#228;, K., Hyttinen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Video+image-based+analysis+of+single+human+induced+pluripotent+stem+cell+derived+cardiomyocyte+beating+dynamics+using+digital+image+correlation.">Video image-based analysis of single human induced pluripotent stem cell derived cardiomyocyte beating dynamics using digital image correlation.</a> Biomedical Engineering Online. 13, 39 (2014).</li><li>Ojala, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutation-Specific+Phenotypes+in+hiPSC-Derived+Cardiomyocytes+Carrying+Either+Myosin-Binding+Protein+C+Or+&#945;-Tropomyosin+Mutation+for+Hypertrophic+Cardiomyopathy.">Mutation-Specific Phenotypes in hiPSC-Derived Cardiomyocytes Carrying Either Myosin-Binding Protein C Or &#945;-Tropomyosin Mutation for Hypertrophic Cardiomyopathy.</a> Stem Cells International. 2016, 1684792 (2016).</li><li>Ali, R. R., Sowden, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+medicine:+DIY+eye.">Regenerative medicine: DIY eye.</a> Nature. 472 (7341), 42-43 (2011).</li><li>International Stem Cell Initiative, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+ethnically+diverse+human+embryonic+stem+cells+identifies+a+chromosome+20+minimal+amplicon+conferring+growth+advantage.">Screening ethnically diverse human embryonic stem cells identifies a chromosome 20 minimal amplicon conferring growth advantage.</a> Nature Biotechnology. 29 (12), 1132-1144 (2011).</li><li>Foster, J. W., Wahlin, K., Adams, S. M., Birk, D. E., Zack, D. J., Chakravarti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cornea+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Cornea organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> Scientific Reports. 7, 41286 (2017).</li><li>Susaimanickam, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generating+minicorneal+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Generating minicorneal organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> Development. 144 (13), 2338-2351 (2017).</li></ol>

התוצאה הצפויה של פרוטוקול זה הוא מוצלח וחזק הדור של LESCs של השעיה תא בודד של FF hPSC בתוך כ- 3.5 שבועות. ככל אפיתל הקרנית מתפתח מן השטח האאקטודרם29, השלב הראשון של הפרוטוקול שמטרתה היגוי hPSCs לכיוון הזה השושלת. אינדוקציה קצר 24 שעות ביממה עם הפיכת גורם הגדילה בטא (TGF-β) אנטגוניסט SB-505124, bFGF מ...

הקרנית שקופה בפני השטח עינית מאפשר לאור להיכנס הרשתית ומספק את רוב כוח השבירה של העין. השכבה החיצונית ביותר, האפיתל הקרנית מרובדת, נוצר מחדש ללא הרף על ידי תאי גזע אפיתל limbal (LESCs). LESCs שוכנים לשכבת הבסיס של גומחות limbal ב corneoscleral צומת1,2. LESCs אין סמנים ייחודיים, אז את הזיהוי שלהם מחייב ניתוח מקיף יותר של ערכת סמנים בשם. P63 פקטור שעתוק אפיתל, במיוחד N-סופני קטום תעתיק איזופורם אלפא p63 (ΔNp63α), הוצע כפי רלוונטי חיובי LESC סמן3,4. חלוקה סימטרית של LESCs מאפשר להם לחדש את עצמי, אבל גם לייצר רומא זה להעביר את centripetally ואת anteriorly. כמו התאים התקדמות לעבר פני הקרנית הם בהדרגה לאבד את stemness שלהם, סוף סוף סופני להבדיל לתאים קשקשיים שטחית אובדות ברציפות ממשטח הקרנית.
נזק לאף אחד הרבדים קרניות יכולה להוביל לקות ראייה חמור, פגמים הקרנית ולפיכך הם אחד הגורמים המובילים של אובדן ראייה ברחבי העולם. במחסור בתאי גזע limbal (LSCD), לימבוס מושמד על ידי מחלה או טראומה מה שמוביל conjunctivalization ו- opacification של פני הקרנית ואובדן עוקבות של חזון5,6. תא החלפת טיפול באמצעות שתלים limbal עצמיים או allogeneic מציע אסטרטגיה לטיפול בחולים עם LSCD4,7,8,9. עם זאת, קצירת שתלים עצמיים נושא סיכון לסיבוכים בעין בריא, רקמה היא מחסור. האדם גזע pluripotent (hPSCs), במיוחד תאי גזע עובריים (hESCs) ואת האדם המושרה גזע pluripotent (hiPSCs), יכול לשמש כמקור בלתי מוגבל של סוגי תאים הרלוונטית קלינית, כולל תאים אפיתל הקרנית. לכן, נגזר hPSC LESCs (hPSC-LESCs) מייצגות מקור תא חדש אטרקטיבי לטיפול החלפת עינית התא.
באופן מסורתי, השיטות תרבות hPSC מובחן והן לפרוטוקולים שלהם בידול LESCs צריכים לסמוך על השימוש של תאים מזין לא מוגדר, סרה בעלי חיים, מדיה ממוזגים או קרום מי השפיר10,11, 12 , 13 , 14 , 15. לאחרונה, מאמצים לכיוון בטוח יותר מוצרי טיפול תא עוררו החיפוש אחר מספר מתוקנן ונטולת קסנו תרבות ובידול פרוטוקולים. כתוצאה מכך, מספר שיטות התרבות ארוכת טווח של hPSCs מובחן מוגדר ונטולת קסנו נמצאים כעת זמינים מסחרית16,17,18. כמו רצף, התמיינות מכוונת פרוטוקולים להסתמך על רמזים מולקולרית להנחות hPSCs הגורל אפיתל הקרנית היה לאחרונה הציג19,20,21,22, 23. עדיין רבים של פרוטוקולים אלה משמש גם hPSCs מזין המבוסס לא מוגדר, החל חומר, או מורכבים, xenogeneic פקטורי גדילה קוקטיילים על בידול.
המטרה של פרוטוקול זה נועד לספק חזקות, אופטימיזציה, קסנו-שיטת תרבות נטולת מזין hPSC ואת בידול עוקבות LESCs הקרנית. טפט תרבות של pluripotent hPSCs-laminin-521 מטריקס (LN-521) במדיום מוגדר, אלבומין ללא hPSC (במיוחד חיוני 8 Flex) מאפשר ייצור מהיר של חומר המוצא הומוגנית differentiations. לאחר מכן פשוט, אסטרטגיית בידול שני שלבים מנחה hPSCs לכיוון פני השטח ectodermal הגורל ההשעיה, ואחריו חסיד בידול כדי LESCs. אוכלוסיה התא שבו > 65% לבטא ΔNp63α מתקבל בתוך 24 ימים. פרוטוקול קסנו-מזין נטול נבדקו עם מספר קווי hPSC (hESCs וגם hiPSCs), ללא מקפידים על תא קו מסוים אופטימיזציה. הפרוטוקולים עבור סוף השבוע ללא תחזוקה, passaging, cryostoring, hPSC-LESC phenotyping המתוארים כאן לאפשר ייצור של קבוצות גדולות של LESCs באיכות גבוהה עבור קליני או למטרות מחקר.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Material/Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x DPBS containing Ca2+ and Mg2+</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#14040-091</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x DPBS without Ca2+ and Mg2+</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>#17-512F/12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm cell culture dish</td>
			<td>Corning CellBIND</td>
			<td>#3296</td>
			<td>Culture vessel format for adherent hPSC-LESC differentiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plate</td>
			<td>Corning CellBIND</td>
			<td>#3336</td>
			<td>Culture vessel format for IF samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate</td>
			<td>Corning CellBIND</td>
			<td>#3337</td>
			<td>Culture vessel format for IF samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#31350-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate, Ultra-Low attachment</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>#3471</td>
			<td>Culture vessel format for induction in suspension culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-mouse Ig</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#A-21202</td>
			<td>Secondary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-rabbit Ig</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#A-21206</td>
			<td>Secondary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 anti-goat Ig</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#A-11057</td>
			<td>Secondary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 anti-mouse Ig</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#A-10037</td>
			<td>Secondary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic fibroblast growth factor (bFGF, human)</td>
			<td>PeproTech Inc.</td>
			<td>#AF-100-18B</td>
			<td>Animal-Free Recombinant Human FGF-basic (154 a.a.)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>#554722</td>
			<td>Fixation and permeabilization solution for flow cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Perm/Wash Buffer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>#554723</td>
			<td>Washing buffer for flow cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blebbistatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#B0560</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone morphogenetic protein 4 (BMP-4)</td>
			<td>PeproTech Inc.</td>
			<td>#120-05A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#A8022-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 12 antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>#SC-17099</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 14 antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>#MAB3164</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 15 antibody</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#MS-1068-P</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CnT-30</td>
			<td>CELLnTEC Advanced Cell Systems AG</td>
			<td>#Cnt-30</td>
			<td>Culture medium for adherent hPSC-LESC differentiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen type IV (human)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#C5533</td>
			<td>Human placental collagen type IV</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoolCell LX Freezing Container</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#BCS-405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CryoPure tubes</td>
			<td>Sarsted</td>
			<td>#72.380</td>
			<td>1.6 ml cryotube for hPSC-LESC cryopreservation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Defined Trypsin Inhibitor</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#R-007-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Essential 8 Flex Medium Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>#A2858501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin 521</td>
			<td>Biolamina</td>
			<td>#Ln521</td>
			<td>Human recombinant laminin 521</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#916;Np63&#945; antibody</td>
			<td>BioCare Medical</td>
			<td>#4892</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT3/4 antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>#AF1759</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p63&#945; antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>#ACI3066A</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p63-&#945; (D2K8X) XP Rabbit mAb (PE Conjugate)</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>#56687</td>
			<td>p63-&#945; PE-conjugated antibody for flow cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAX6 antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#HPA030775</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>#17-602E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#158127</td>
			<td>Cell fixative for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant with DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>#P36931</td>
			<td>DAPI mountant for hard mounting for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSC Cryopreservation Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>#A2644601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Select Enzyme</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#12563-011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#10829018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut SR XenoFree CTS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#10828028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM non-essential amino acids</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB-505124</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#S4696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#T8787</td>
			<td>Permeabilization agent for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>#H-1200</td>
			<td>DAPI mountant for liquid mounting for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytocentrifuge, e.g. CellSpin II</td>
			<td>Tharmac</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer, e.g. BD Accuri C6</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope, e.g.Olympus IX 51</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient and scalable directed differentiation of clinically compatible corneal limbal epithelial stem cells from human pluripotent stem cells

קרנית limbal אפיתל תאי גזע (LESCs) אחראים באופן רציף חידוש האפיתל הקרנית, ובכך שמירה על הומאוסטזיס הקרנית ואת בהירות חזותית. תא גזע pluripotent אנושי (hPSC)-נגזר LESCs מספקים מקור תא מבטיח עבור טיפול בתחליפי תא הקרנית. לא מוגדר, xenogeneic תרבות ובידול תנאים לגרום וריאציה של תוצאות המחקר, לעכב את התרגום קליני של הרפוי נגזר hPSC. פרוטוקול זה מספק שיטה יעילה הדירים בידול hPSC-LESC בתנאים קסנו - ולא מזין נטול תאים. ראשית, טפט התרבות של hPSC מובחן laminin רקומביננטי-521 (LN-521) ו hPSC מוגדר בינוני משמש בסיס לייצור חומר המוצא באיכות גבוהה differentiations חזקים. שנית, שיטה בידול hPSC-LESC מהירה ופשוטה התשואות אוכלוסיות LESC ב- 24 יום בלבד. שיטה זו כוללת ארבעה ימים אינדוקציה ectodermal משטח ההשעיה עם מולקולות קטנות, ואחריו שלב חסיד התרבות על הרביעי LN-521/קולגן מטריקס שילוב במדיום מוגדר בידול אפיתל הקרנית. Cryostoring ובידול מורחב נוסף מטהרת את האוכלוסייה תא ומאפשר הבנקאות של התאים בכמויות גדולות עבור מוצרי טיפול תא. באיכות גבוהה וכתוצאה מכך hPSC-LESCs מספקים פוטנציאל טיפול חדשניים אסטרטגיה שיקום פני הקרנית לטפל מחסור בתאי גזע limbal (LSCD).

מ hPSCs ל hPSC-LESCs
התהליך כולו של גרימת הבידול של FF hPSCs כדי cryostoring hPSC-LESCs לוקח בסביבות 3.5 שבועות. סקירה סכמטי של השיטה בידול המדגיש את השלבים החשובים שלה מוצג איור 1A. איור 1B מראה אופייני מורפולוגיות של אוכלוסיות תאים...

Watch this Scientific Journal Video about Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells

יעיל ומדרגי הבידול בבימויו של קלינית הקרנית Limbal אפיתל תאי גזע מתאימים מתאי גזע Pluripotent אנושי

פרוטוקול זה מציג שיטה פשוטה שני שלבים המבדילים הקרנית תאי גזע limbal אפיתל מתאי גזע pluripotent האנושי בתנאים ללא תא תרבות קסנו - ולא מזין. השיטות התרבות התא המוצג כאן מאפשרים חסכוניים, בקנה מידה גדול ייצור תאי איכות קליניים, החלים על שימוש טיפול תאי הקרנית.

Corneal limbal epithelial stem cells (LESCs) are responsible for continuously renewing the corneal epithelium, and thus maintaining corneal homeostasis ...

פרוטוקול זה הציג שיטה מוגדרת ללא תאי הזנה להפנמת תאי גזע אפיתל לימביים בקרנית מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים. תאי גזע אפיתל לימבי אחראים לחידוש אפיתל הקרנית בעין בריאה. נזק לתאים אלה מוביל למצב המכונה מחסור בתאי גזע גפיים, ולאובדן בהירות הקרנית.שיטות תרבות התא המוצגות כאן מאפשרות ייצור יעיל של תאי גזע אפיתל גפיאליים לטיפולים עתידיים בהחלפת תאי הקרנית. כדי להתחיל, מעבר ולשמור על תרבות תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים חופשיים כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט. הקפד להשתמש רק בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים באיכות גבוהה כחומר התחלתי להתבוללות.כאשר מוכן לגרום היווצרות הגוף העוברי, לחמם את כל החומרים הדרושים reagents לטמפרטורת החדר ברדס זרימה למינארית. נתק את תאי הגזע הפלוריפוטנטיים האנושיים החופשיים להשעיה על ידי הוספת 500 מיקרוליטרים של EDTA טריפסין ללא קסנו לכל באר. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס, עם 5% CO2.לאחר שלוש דקות, להסיר את התאים מהאינקובטור ולבדוק את מורפולוגיה התא כדי לקבוע את השלב האופטימלי להסרת טריפסין. בזהירות לבחון את התאים כדי לקבוע את הזמן האופטימלי כדי להסיר את EDTA tryspin חינם קסנו, כאשר התאים מעוגלים, אבל לא התנתקו לחלוטין. בזמן האופטימלי, להסיר את EDTA טריפסין חינם קסנו מהתאים.הוסף מעכב טריפסין מוגדר בעדינות פיפטה כדי לנתק את התאים. לאסוף את ההשעיה תא יחיד בצינור צנטריפוגה 50 מיליליטר. צנטריפוגה ב-300 גרם לחמש דקות.לאחר מכן, להסיר את supernatant, ולתלות מחדש את התאים במיליליטר אחד של מדיום תרבות. לאחר ספירת התאים, להפיץ שניים עד שלושה מיליון תאים בשלושה מיליליטר של מדיום אינדוקציה בזלית בתוספת חמישה blebbistatin micromolar לכל באר של מצורף נמוך שש צלחת גם. דגירה לילה ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO2.למחרת, לבדוק את האיכות של הגופים העובריים תחת מיקרוסקופ. הסר את המדיום, ולהחליף אותו עם שלושה מיליליטר של מדיום אינדוקציה בסיסית בתוספת 10 micromolar SB-505124 ו 50 ננוגרם למיליליטר של גורם גדילה פיברגלס בסיסי אנושי. המשך הדגירה ב 37 מעלות צלזיוס עם 5%CO2.ביומיים הבאים, להסיר את המדיום, ולהחליף אותו עם שלושה מיליליטר של מדיום אינדוקציה בסיסית, בתוספת 25 ננוגרם למיליליטר של חלבון מורפגנטי עצם ארבע. לאחר מכן, להמשיך דגירה באמצעות התנאים הקודמים. ביום הרביעי, להכין תערובת של 0.5 מיקרוגרם לסנטימטר מרובע של Laminin-521, וחמישה מיקרוגרם לסנטימטר מרובע של קולגן שליה אנושי מסוג ארבע, מדולל DPBS המכיל סידן 2 ומגנזיום שני יונים.באמצעות תערובת זו, מצפים את 100 מילימטר רקמת תרבות מנות עבור התברואה חסיד בנפח ציפוי הכולל של חמישה מיליליטר למנה. לאטום את הצלחות, ולאחסן אותם בארבע מעלות צלזיוס לילה. ביום החמישי, לחמם את כל החומרים הדרושים ואת reagents לטמפרטורת החדר במכסה המנוע לזרימה למינארית.לאחר מכן, להסיר את פתרון הציפוי ולהוסיף 10 מיליליטר של מדיום התברמות מחומם מראש לכל מנה. באמצעות פיפטה, להעביר את הגופים העובריים מצלחת אחת גם על פני שתיים עד שלוש מנות תרבות רקמות. לאחר מכן, לנער בעדינות כל צלחת תרבות כדי להפיץ באופן שווה את הגופים העובריים.לשמור על התאים בתרבות חסידית ב 37 מעלות צלזיוס עם 5%CO2 במשך השבועיים וחצי הבאים עד שלושה שבועות, הקפד להחליף את המדיום עם 10 מיליליטר של בידול טרי בינוני שלוש פעמים בשבוע. השתמש במיקרוסקופ ניגודיות פאזה כדי לבדוק באופן קבוע את התאים להופעת מורפולוגיה אפיתל נכונה. ראשית, מחממים מראש את כל החומרים הדרושים ואת הריגנטים לטמפרטורת החדר במכסה המנוע של זרימה למינארית, למעט מדיום ההקפאה, שאמור להיות מקורר מראש.לאחר מכן, לנתק את תא גזע פלוריפוטנטי אנושי נגזר תאי גזע אפיתל גפיים להשעיית תא יחיד על ידי הוספת EDTA טריפסין חינם קסנו ודגירה ב 37 מעלות צלזיוס עם 5%CO2. לאחר חמש דקות, להסיר את התאים מהאינקובטור ולבדוק את מורפולוגיה התא כדי לקבוע את השלב האופטימלי להסרת טריפסין. בזהירות לבחון את התאים כדי לקבוע את הזמן האופטימלי כדי להסיר את EDTA טריפסין חינם קסנו, כאשר התאים מעוגלים, אבל לא התנתקו לחלוטין.בזמן האופטימלי, להסיר את EDTA טריפסין חינם קסנו מהתאים, ולנתק את התאים כמתואר קודם לכן. לאחר ספירת התאים, צנטריפוגה אותם ב 300g במשך חמש דקות. שאפו את המדיום, והשקיעו מחדש את התאים במדיום קריו-שימור נטול קסנו מקורר מראש.באמצעות פיפטה, להעביר את ההשעיה תא יחיד לתוך cryo-צינורות כך שכל קריו צינור מכיל בין 500, 000 למיליון תאים במיליליטר אחד של מדיום cryopreservation. מניחים את הצינורות במיכל הקפאה. תוך חמש דקות, מעבירים אותם למקפיא ב-80 מעלות צלזיוס לאחסון לילה.למחרת, להעביר את הצינורות לחנקן נוזלי לאחסון לטווח ארוך. לפני הפשרת התאים, מעיל כל הכלים הדרושים בארות צלחת עם תערובת של חמישה מיקרוגרם לכל סנטימטר מרובע קולגן שליה אנושי סוג ארבע, ו 0.5 מיקרוגרם לסנטימטר מרובע של LM-521, ו מראש לחמם את כל החומרים הדרושים reagents לטמפרטורת החדר במכסה המנוע לזרימת למינאר. לאחר מכן, להסיר את פתרון הציפוי מן הכלים ואת בארות צלחת ולהוסיף את הנפח המתאים של מדיום התברואה מראש מחומם.מוסיפים מדיום הבחנה מחומם מראש לצינור חרוט 15 מיליליטר. להפשיר את התאים במהירות לטמפרטורת החדר. לאחר הפשרה, מיד להעביר את ההשעיה התא לצינור צנטריפוגה חרוט.צנטריפוגה ב-300 גרם לחמש דקות. שאפו את המדיום, והשקיעו מחדש את גלולת התא במדיום ההידול כדי להסיר כל מדיום קריו-שימור. צלחת התאים על מנות precoated בינוני ההידול בצפיפות של 40, 000 כדי 50, 000 תאים לסנטימטר מרובע.לשמור על התאים ב 37 מעלות צלזיוס ב 5%CO2, החלפת מדיום בידול שלוש פעמים בשבוע. ב-Laminin-521, תאי הגזע הפלוריפוטנטיים נטולי המאכילים באיכות גבוהה ללא מאכילים אנושיים יוצרים תחילה מושבות נפרדות עם קצוות חדים, המתמזגים למונוליירים הומוגניים בעת המפגש. פולחן במדיום אינדוקציה בזלית, בתוספת חמישה blebbistatin micromolar במשך 24 שעות בדרך כלל מייצרת השעיה של גופים עובריים הדוקים, רגילים בגדלים שונים, בעוד מורפולוגיה הגוף העוברי לא צריך להשתנות באופן דרמטי במהלך אינדוקציה אקטודרמלית פני השטח בהשעיה, יציבה קולוניאלית נראה להופיע זמן קצר לאחר הגופים העובריים מצופים על סוג קולגן ארבע ומטריצה שילוב Laminin-521 בינוני בידול.בתוך 21 עד 25 ימים של התברואה, התאים יוצרים שכבות הומוגניות קונפלנטיות, עם מורפולוגיה מצולע, האופייני לתאי אפיתל. התאים עשויים להיות מאוחסנים אז קריו לשימוש מאוחר יותר, כמו הכדאיות ומורפולוגיה נשמרים היטב לאחר הפשרה. ביום 24 של בידול, הרוב המכריע של התאים הביעו חלבון תיבת מזווג, PAX6, הרגולטור העיקרי של התפתחות העין, כמו גם p63 אלפא, סמן LESC מוכר נרחב.דלתא Np63 הוא דו-דחוס ברוב התאים החיוביים אלפא p63, המאשר את הדלתא הספציפית ביותר קרנית Np63 אלפא חיובי תא פנוטיפ. סמנים אחרים באים לידי ביטוי בחלקו, בעוד שאחרים אינם ניתנים לגילוי בשלב זה, מה שמצביע על בידול התקדם לכיוון האתיטורים האפיתל הלימביים הבלתי צפויים, אך ההידול המסוף לתאי אפיתל בקרנית בוגרת עדיין לא התרחש. בממוצע, כל תא גזע פלוריפוטנטי אנושי ללא מאכיל מויש מייצר 0.7 תאים ביום 25.לפחות 65%דלתא Np63 אלפא אוכלוסיית תאים חיוביים צפויה עד היום 24. ההקפאה מטהרת עוד יותר את אוכלוסיית התאים. בסך הכל, השיטות המוצגות כאן הן פשוטות יחסית, אבל יש כמה נקודות קריטיות להצלחה.איכות גבוהה של החומר ההתחלתי היא חיונית, כמו גם עדין, טכניקות תרבות תאים שוטפת בכלל. פרוטוקול זה מספק אמצעים חזקים לייצור תאי גזע אפיתל גפיאלי עבור יישומים קליניים, כמו גם למטרות מחקר שונות. יתר על כן, השיטה ניתן לשנות בקלות עבור ההידור של תאי אפיתל פיגמנט רשתית.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

ייצור בקנה מידה גדולה של cardiomyocytes מתאי גזע פלוריפוטנטיים אדם באמצעות פרוטוקול בידול מולקולה קטן המבוססת לשחזור ביותר

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

The Production of Pluripotent Stem Cells from Mouse Amniotic Fluid Cells Using a Transposon System

את ייצור תאי גזע פלוריפוטנטיים מתאי מי שפירים עכבר באמצעות מערכת transposon

Induced pluripotent stem (iPS) cells are generated from mouse and human somatic cells by forced expression of defined transcription factors using ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

ביים הבידול של אבות Hematopoietic פרימיטיבי, מהווים הסופית מתאי גזע Pluripotent אנושי

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

בידול יעיל של pluripotent בתאי גזע כדי NKX6-1<sup&gt; +</sup&gt; אבות הלבלב

Pluripotent stem cells have the ability to self renew and differentiate to multiple lineages, making them an attractive source for the generation of ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

במבחנה בידול של האדם pluripotent בתאי גזע לתאי Trophoblastic

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

Defined and Scalable Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Pluripotent Stem Cells

מוגדרי דור Scalable של תאי Hepatocyte דמוי מתאי גזע פלוריפוטנטיים האנוש

Human pluripotent stem cells (hPSCs) possess great value for biomedical research. hPSCs can be scaled and differentiated to all cell types found in the ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

הבידול מהירה, מכוונת של תאים אפיתל הפיגמנט ברשתית מתאי גזע Pluripotent האנושי עובריים או מושרה

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

יעיל הבידול של תאים האדם Pluriפוטנטי לתוך תאי הכבד

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

בדור חוץ גופית של Somite נגזרים מן האדם המושרה בתאי גזע Pluripotent

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Transient Treatment of Human Pluripotent Stem Cells with DMSO to Promote Differentiation

הטיפול הארעי של תאי גזע בעלי עוצמה אנושית עם DMSO כדי לקדם בידול

Despite the growing use of pluripotent stem cells (PSCs), challenges in efficiently differentiating embryonic and induced pluripotent stem cells (ESCs and ...