Name: efficient and scalable directed differentiation of clinically compatible corneal limbal epithelial stem cells from human pluripotent stem cells
Uploaded: 2018-10-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Çalışma Finlandiya (grant numarası 297886) Akademisi, insan yedek parça programı Tèkèsī, Fince finansman ajansı tarafından teknoloji ve yenilik, desteklenmiştir Fin göz ve doku Bankası Vakfı ve Fin Kültür Vakfı. Yazarlar Biyomedikal Laboratuar teknisyenleri bozuştuk Melin, Hanna Pekkanen, Emma Vikstedt ve sonunda Heikkilä mükemmel teknik yardım ve hücre kültürü katkısı için teşekkür ederiz. Profesör Katriina Aalto-Setälä kullanılan hiPSC hattı ve BioMediTech Imaging Core tesisi ekipman floresans görüntüleme için sağlamak için sağlamak için kabul edilmektedir.

Tampere Üniversitesi Ulusal insan embriyosu üzerinde araştırma yapmak için yetki Medicolegal işleri Finlandiya (Dnro 1426/32/300/05) onayı vardır. Enstitü aynı zamanda Etik Komitesi: Pirkanmaa hastane bölgesinin, kültür, türetme yapıp yapmayacağınızı ve hESC satırları (Skottman/R05116) ayırt etmek ve hiPSC satırları oftalmik araştırma (Skottman/R14023) kullanmak için destekleyici ifadeleri var. Yeni hücre satır bu çalışma için elde edilmiştir.
Not: açıklanan...

<ol>
	<li>Dua, H. S., Shanmuganathan, V. A., Powell-Richards, A. O., Tighe, P. J., Joseph, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+epithelial+crypts:+a+novel+anatomical+structure+and+a+putative+limbal+stem+cell+niche.">Limbal epithelial crypts: a novel anatomical structure and a putative limbal stem cell niche.</a> The British Journal of Ophthalmology. 89 (5), 529-532 (2005).</li><li>Yazdanpanah, G., Jabbehdari, S., Djalilian, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+and+corneal+epithelial+homeostasis.">Limbal and corneal epithelial homeostasis.</a> Current Opinion in Ophthalmology. 28 (4), 348-354 (2017).</li><li>Di Iorio, E., Barbaro, V., Ruzza, A., Ponzin, D., Pellegrini, G., De Luca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoforms+of+DeltaNp63+and+the+migration+of+ocular+limbal+cells+in+human+corneal+regeneration.">Isoforms of DeltaNp63 and the migration of ocular limbal cells in human corneal regeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9523-9528 (2005).</li><li>Rama, P., Matuska, S., Paganoni, G., Spinelli, A., De Luca, M., Pellegrini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+stem-cell+therapy+and+long-term+corneal+regeneration.">Limbal stem-cell therapy and long-term corneal regeneration.</a> The New England Journal of Medicine. 363 (2), 147-155 (2010).</li><li>Notara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+sickness+and+in+health:+Corneal+epithelial+stem+cell+biology,+pathology+and+therapy.">In sickness and in health: Corneal epithelial stem cell biology, pathology and therapy.</a> Experimental Eye Research. 90 (2), 188-195 (2010).</li><li>Osei-Bempong, C., Figueiredo, F. C., Lako, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+limbal+epithelium+of+the+eye--a+review+of+limbal+stem+cell+biology,+disease+and+treatment.">The limbal epithelium of the eye--a review of limbal stem cell biology, disease and treatment.</a> BioEssays: News and Reviews in Molecular, Cellular and Developmental Biology. 35 (3), 211-219 (2013).</li><li>Kolli, S., Ahmad, S., Lako, M., Figueiredo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+clinical+implementation+of+corneal+epithelial+stem+cell+therapy+for+treatment+of+unilateral+limbal+stem+cell+deficiency.">Successful clinical implementation of corneal epithelial stem cell therapy for treatment of unilateral limbal stem cell deficiency.</a> Stem Cells. 28 (3), 597-610 (2010).</li><li>Sangwan, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+outcomes+of+xeno-free+autologous+cultivated+limbal+epithelial+transplantation:+a+10-year+study.">Clinical outcomes of xeno-free autologous cultivated limbal epithelial transplantation: a 10-year study.</a> The British Journal of Ophthalmology. 95 (11), 1525-1529 (2011).</li><li>Basu, S., Mohan, S., Bhalekar, S., Singh, V., Sangwan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+limbal+epithelial+transplantation+(SLET)+in+failed+cultivated+limbal+epithelial+transplantation+(CLET)+for+unilateral+chronic+ocular+burns.">Simple limbal epithelial transplantation (SLET) in failed cultivated limbal epithelial transplantation (CLET) for unilateral chronic ocular burns.</a> The British Journal of Ophthalmology. , (2018).</li><li>Ahmad, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+corneal+epithelial-like+cells+by+in+vitro+replication+of+the+corneal+epithelial+stem+cell+niche.">Differentiation of human embryonic stem cells into corneal epithelial-like cells by in vitro replication of the corneal epithelial stem cell niche.</a> Stem Cells. 25 (5), 1145-1155 (2007).</li><li>Hanson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+human+embryonic+stem+cells+onto+a+partially+wounded+human+cornea+in+vitro.">Transplantation of human embryonic stem cells onto a partially wounded human cornea in vitro.</a> Acta Ophthalmologica. 91 (2), 127-130 (2013).</li><li>Hayashi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+corneal+epithelial+cells+from+induced+pluripotent+stem+cells+derived+from+human+dermal+fibroblast+and+corneal+limbal+epithelium.">Generation of corneal epithelial cells from induced pluripotent stem cells derived from human dermal fibroblast and corneal limbal epithelium.</a> PLoS ONE. 7 (9), e45435 (2012).</li><li>Hewitt, K. J., Shamis, Y., Carlson, M. W., Aberdam, E., Aberdam, D., Garlick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+epithelial+tissues+generated+from+human+embryonic+stem+cells.">Three-dimensional epithelial tissues generated from human embryonic stem cells.</a> Tissue Engineering. Part A. 15 (11), 3417-3426 (2009).</li><li>Shalom-Feuerstein, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+stem+cell+model+reveals+essential+roles+for+miR-450b-5p+and+miR-184+in+embryonic+corneal+lineage+specification.">Pluripotent stem cell model reveals essential roles for miR-450b-5p and miR-184 in embryonic corneal lineage specification.</a> Stem Cells. 30 (5), 898-909 (2012).</li><li>Cieslar-Pobuda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+induced+pluripotent+stem+cell+differentiation+and+direct+transdifferentiation+into+corneal+epithelial-like+cells.">Human induced pluripotent stem cell differentiation and direct transdifferentiation into corneal epithelial-like cells.</a> Oncotarget. 7 (27), 42314-42329 (2016).</li><li>Ludwig, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+human+embryonic+stem+cells+in+defined+conditions.">Derivation of human embryonic stem cells in defined conditions.</a> Nature Biotechnology. 24 (2), 185-187 (2006).</li><li>Chen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+conditions+for+human+iPSC+derivation+and+culture.">Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.</a> Nature Methods. 8 (5), 424-429 (2011).</li><li>Rodin, S., Antonsson, L., Hovatta, O., Tryggvason, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monolayer+culturing+and+cloning+of+human+pluripotent+stem+cells+on+laminin-521-based+matrices+under+xeno-free+and+chemically+defined+conditions.">Monolayer culturing and cloning of human pluripotent stem cells on laminin-521-based matrices under xeno-free and chemically defined conditions.</a> Nature Protocols. 9 (10), 2354-2368 (2014).</li><li>Mikhailova, A., Ilmarinen, T., Uusitalo, H., Skottman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+induction+promotes+corneal+epithelial+cell+differentiation+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Small-molecule induction promotes corneal epithelial cell differentiation from human induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Reports. 2 (2), 219-231 (2014).</li><li>Martinez Garcia de la Torre, R. A., Nieto-Nicolau, N., Morales-Pastor, A., Casaroli-Marano, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+the+Culture+Time+Point+to+Induce+Corneal+Epithelial+Differentiation+in+Induced+Pluripotent+Stem+Cells.">Determination of the Culture Time Point to Induce Corneal Epithelial Differentiation in Induced Pluripotent Stem Cells.</a> Transplantation Proceedings. 49 (10), 2292-2295 (2017).</li><li>Zhang, C., Du, L., Pang, K., Wu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+corneal+epithelial+progenitor+cells+under+defined+conditions.">Differentiation of human embryonic stem cells into corneal epithelial progenitor cells under defined conditions.</a> PLoS One. 12 (8), e0183303 (2017).</li><li>Aberdam, E., Petit, I., Sangari, L., Aberdam, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell-derived+limbal+epithelial+cells+(LiPSC)+as+a+cellular+alternative+for+in+vitro+ocular+toxicity+testing.">Induced pluripotent stem cell-derived limbal epithelial cells (LiPSC) as a cellular alternative for in vitro ocular toxicity testing.</a> PLoS One. 12 (6), e0179913 (2017).</li><li>Kamarudin, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+the+Activity+of+Endogenous+Bone+Morphogenetic+Protein+Signaling+Impact+on+the+Ability+of+Induced+Pluripotent+Stem+Cells+to+Differentiate+to+Corneal+Epithelial-Like+Cells.">Differences in the Activity of Endogenous Bone Morphogenetic Protein Signaling Impact on the Ability of Induced Pluripotent Stem Cells to Differentiate to Corneal Epithelial-Like Cells.</a> Stem Cells. 36 (3), 337-348 (2018).</li><li>Rodin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+culturing+of+human+embryonic+stem+cells+on+laminin-521/E-cadherin+matrix+in+defined+and+xeno-free+environment.">Clonal culturing of human embryonic stem cells on laminin-521/E-cadherin matrix in defined and xeno-free environment.</a> Nature Communications. 5, 3195 (2014).</li><li>Hongisto, H., Ilmarinen, T., Vattulainen, M., Mikhailova, A., Skottman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xeno-+and+feeder-free+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+two+distinct+ocular+epithelial+cell+types+using+simple+modifications+of+one+method.">Xeno- and feeder-free differentiation of human pluripotent stem cells to two distinct ocular epithelial cell types using simple modifications of one method.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 4 (2017).</li><li>Skottman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+and+characterization+of+three+new+human+embryonic+stem+cell+lines+in+Finland.">Derivation and characterization of three new human embryonic stem cell lines in Finland.</a> In vitro Cellular &amp; Developmental Biology. Animal. 46 (3-4), 206-209 (2010).</li><li>Ahola, A., Kiviaho, A. L., Larsson, K., Honkanen, M., Aalto-Set&#228;l&#228;, K., Hyttinen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Video+image-based+analysis+of+single+human+induced+pluripotent+stem+cell+derived+cardiomyocyte+beating+dynamics+using+digital+image+correlation.">Video image-based analysis of single human induced pluripotent stem cell derived cardiomyocyte beating dynamics using digital image correlation.</a> Biomedical Engineering Online. 13, 39 (2014).</li><li>Ojala, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutation-Specific+Phenotypes+in+hiPSC-Derived+Cardiomyocytes+Carrying+Either+Myosin-Binding+Protein+C+Or+&#945;-Tropomyosin+Mutation+for+Hypertrophic+Cardiomyopathy.">Mutation-Specific Phenotypes in hiPSC-Derived Cardiomyocytes Carrying Either Myosin-Binding Protein C Or &#945;-Tropomyosin Mutation for Hypertrophic Cardiomyopathy.</a> Stem Cells International. 2016, 1684792 (2016).</li><li>Ali, R. R., Sowden, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+medicine:+DIY+eye.">Regenerative medicine: DIY eye.</a> Nature. 472 (7341), 42-43 (2011).</li><li>International Stem Cell Initiative, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+ethnically+diverse+human+embryonic+stem+cells+identifies+a+chromosome+20+minimal+amplicon+conferring+growth+advantage.">Screening ethnically diverse human embryonic stem cells identifies a chromosome 20 minimal amplicon conferring growth advantage.</a> Nature Biotechnology. 29 (12), 1132-1144 (2011).</li><li>Foster, J. W., Wahlin, K., Adams, S. M., Birk, D. E., Zack, D. J., Chakravarti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cornea+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Cornea organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> Scientific Reports. 7, 41286 (2017).</li><li>Susaimanickam, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generating+minicorneal+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Generating minicorneal organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> Development. 144 (13), 2338-2351 (2017).</li></ol>

Beklenen bu iletişim kuralı başarılı ve sağlam nesil LESCs FF hPSC bir tek hücre süspansiyon üzerinden yaklaşık 3,5 hafta içinde sonucudur. Kornea epitel yüzey ektoderm29geliştirir Protokolü'nün ilk adım hPSCs bu soy doğru direksiyon amaçlamaktadır. Dönüştürme büyüme faktörü beta (TGF-β) antagonisti SB-505124 ve bFGF ile bir kısa 24 h indüksiyon ektodermal farklılaşma, 48 h Mezodermal BMP-4 isteka yüzey ektoderm karşı hücreleri itmek için ardından ikna etmek ...

Oküler yüzeyde saydam kornea retina girmek ışık ve gözün refraktif güç çoğunluğu sağlar. En dış katmanı, tabakalı kornea epitel sürekli limbal epitel kök hücreleri (LESCs) tarafından yeniden oluşturulur. LESCs corneoscleral kavşak1,2limbal nişler bazal tabaka yer alır. Kendi kimlik bir dizi sözde işaretleri daha kapsamlı bir analiz gerektirir böylece LESCs özel ve benzersiz işaretleri, eksikliği. Epitel transkripsiyon faktörü p63 ve özellikle N-ölümcül kesilmiş transkript p63 Alfa izoformu (ΔNp63α), bir ilgili olumlu LESC işaret3,4önerdi. Asimetrik Anabilim Dalı LESCs onları kendi kendini yenilemek, ama aynı zamanda centripetally ve anteriorly geçirmek Döl üretmek izin verir. Hücreleri ilerleme olarak kornea yüzeyine doğru onlar yavaş yavaş onların stemness kaybetmek ve son olarak da sürekli olarak kornea yüzeyinden kaybolur yüzeysel Skuamöz Hücre ölümcül ayırt etmek.
Kornea katmanlardan herhangi birini Damage için ciddi görme bozukluğu açabilir ve kornea kusurları böylece görme kaybı dünya çapında önde gelen nedenlerinden biridir. Limbal kök hücre eksikliği (LSCD), limbus hastalık ya da conjunctivalization ve opaklaşmasına kornea yüzey ve vizyon5,6sonraki kaybı yol açan travma tarafından yok edilir. Hücre replasman tedavisi otolog veya allojenik limbal Greftler kullanarak LSCD4,7,8,9olan hastalar için bir tedavi stratejisi sunmaktadır. Ancak, otolog greft hasat sağlıklı göz komplikasyon riski taşımaktadır ve donör doku kısa kaynağı olduğunu. İnsan pluripotent kök hücreler (hPSCs), özellikle insan embriyonik kök hücreleri (hESCs) ve insan indüklenmiş pluripotent kök hücreler (hiPSCs), klinik hücre tipleri kornea epitel hücreleri de dahil olmak üzere, sınırsız bir kaynağı olarak hizmet verebilir. Bu nedenle, hPSC elde edilen LESCs (hPSC-LESCs) oküler hücre replasman tedavisi için çekici bir yeni hücre kaynağı temsil eder.
Geleneksel olarak, farklılaşmamış hPSC kültür yöntemleri ve farklılaşma protokolleri LESCs için tanımsız besleyici hücreler, hayvan sera, klimalı ortam veya amniyotik membran10,11, kullanımı yararlanmıştır 12 , 13 , 14 , 15. son zamanlarda, daha fazla standart ve xeno-Alerjik kültür ve farklılaşma protokolleri için arama çabaları daha güvenli hücre terapi ürünleri doğru isteniyor. Sonuç olarak, çeşitli tanımlı ve xeno-Alerjik farklılaşmamış hPSCs uzun vadeli kültürü için şimdi piyasada bulunan16,17,18yöntemlerdir. 19,20,21,22bir süreklilik, yönlendirilmiş farklılaşma kornea epitel kadere hPSCs Kılavuzu için moleküler ipuçları üzerinde güvenerek protokolleri son zamanlarda tanıttı gibi 23. Henüz bu protokollerin çoğunu ya da tanımsız, besleyici dayalı hPSCs malzeme veya karmaşık, xenogeneic büyüme faktörü kokteyl farklılaşma için başlangıç olarak kullanılır.
Bu iletişim kuralının amacını sağlam, en iyi duruma getirilmiş, xeno sağlamaktır- ve besleyici-Alerjik hPSC kültür yöntemi ve kornea LESCs için sonraki farklılaşma. Pluripotent hPSCs laminin-521 (LN-521) matris içinde tanımlanan, albümin-Alerjik hPSC Orta (özellikle temel 8 Flex) kültürünün monolayer homojen Başlangıç materyali saptamaları için hızlı üretim sağlar. Bundan sonra basit bir, iki adım farklılaşma stratejisi hPSCs yapisan farklılaşma tarafından LESCs için takip süspansiyon, yüzey ektodermal kadere doğru size yol gösterir. Nerede > %65 ΔNp63α hızlı bir hücre nüfus 24 gün içinde elde edilir. Xeno ve besleyici ücretsiz iletişim kuralı birkaç hPSC hattı (her ikisi hESCs ve hiPSCs), hücre satır belirli optimizasyonu için herhangi bir zorunluluğu olmadan test edilmiştir. Yüksek kaliteli LESCs için büyük gruplar halinde üretimi için burada açıklanan hafta sonu ücretsiz bakım, passaging, cryostoring ve hPSC-LESC fenotipleme iletişim kurallarını etkinleştirme klinik veya araştırma amaçlı.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Material/Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x DPBS containing Ca2+ and Mg2+</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#14040-091</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x DPBS without Ca2+ and Mg2+</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>#17-512F/12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm cell culture dish</td>
			<td>Corning CellBIND</td>
			<td>#3296</td>
			<td>Culture vessel format for adherent hPSC-LESC differentiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plate</td>
			<td>Corning CellBIND</td>
			<td>#3336</td>
			<td>Culture vessel format for IF samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate</td>
			<td>Corning CellBIND</td>
			<td>#3337</td>
			<td>Culture vessel format for IF samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#31350-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate, Ultra-Low attachment</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>#3471</td>
			<td>Culture vessel format for induction in suspension culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-mouse Ig</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#A-21202</td>
			<td>Secondary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-rabbit Ig</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#A-21206</td>
			<td>Secondary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 anti-goat Ig</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#A-11057</td>
			<td>Secondary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 anti-mouse Ig</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#A-10037</td>
			<td>Secondary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic fibroblast growth factor (bFGF, human)</td>
			<td>PeproTech Inc.</td>
			<td>#AF-100-18B</td>
			<td>Animal-Free Recombinant Human FGF-basic (154 a.a.)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>#554722</td>
			<td>Fixation and permeabilization solution for flow cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Perm/Wash Buffer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>#554723</td>
			<td>Washing buffer for flow cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blebbistatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#B0560</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone morphogenetic protein 4 (BMP-4)</td>
			<td>PeproTech Inc.</td>
			<td>#120-05A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#A8022-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 12 antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>#SC-17099</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 14 antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>#MAB3164</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 15 antibody</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#MS-1068-P</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CnT-30</td>
			<td>CELLnTEC Advanced Cell Systems AG</td>
			<td>#Cnt-30</td>
			<td>Culture medium for adherent hPSC-LESC differentiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen type IV (human)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#C5533</td>
			<td>Human placental collagen type IV</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoolCell LX Freezing Container</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#BCS-405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CryoPure tubes</td>
			<td>Sarsted</td>
			<td>#72.380</td>
			<td>1.6 ml cryotube for hPSC-LESC cryopreservation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Defined Trypsin Inhibitor</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#R-007-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Essential 8 Flex Medium Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>#A2858501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin 521</td>
			<td>Biolamina</td>
			<td>#Ln521</td>
			<td>Human recombinant laminin 521</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#916;Np63&#945; antibody</td>
			<td>BioCare Medical</td>
			<td>#4892</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT3/4 antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>#AF1759</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p63&#945; antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>#ACI3066A</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p63-&#945; (D2K8X) XP Rabbit mAb (PE Conjugate)</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>#56687</td>
			<td>p63-&#945; PE-conjugated antibody for flow cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAX6 antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#HPA030775</td>
			<td>Primary antibody for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>#17-602E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#158127</td>
			<td>Cell fixative for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant with DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>#P36931</td>
			<td>DAPI mountant for hard mounting for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSC Cryopreservation Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>#A2644601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Select Enzyme</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#12563-011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#10829018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut SR XenoFree CTS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#10828028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM non-essential amino acids</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB-505124</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#S4696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#T8787</td>
			<td>Permeabilization agent for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>#H-1200</td>
			<td>DAPI mountant for liquid mounting for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytocentrifuge, e.g. CellSpin II</td>
			<td>Tharmac</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer, e.g. BD Accuri C6</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope, e.g.Olympus IX 51</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient and scalable directed differentiation of clinically compatible corneal limbal epithelial stem cells from human pluripotent stem cells

Kornea limbal epitel kök hücreler (LESCs) sürekli yenileyerek kornea epitel ve böylece kornea homeostazı ve görsel netlik sağlamak için sorumludur. İnsan pluripotent kök hücre (hPSC)-türetilmiş LESCs kornea hücre replasman tedavisi için umut verici bir hücre kaynağı sağlamak. Tanımsız, xenogeneic kültür ve farklılaşma koşulları araştırma sonuçlarında değişim neden ve hPSC elde edilen tedavi klinik tercümesi engel. Bu iletişim kuralı için hPSC-LESC farklılaşma xeno - ve besleyici boş hücre koşullar altında tekrarlanabilir ve verimli bir yöntem sağlar. İlk olarak, rekombinant laminin-521 (LN-521) ve tanımlanmış hPSC orta farklılaşmamış hPSC kültürünün monolayer saptamaları için yüksek kaliteli başlangıç malzemesi sağlam üretimi için bir temel olarak hizmet vermektedir. İkinci olarak, hızlı ve basit hPSC LESC ayırt etme yöntemi sadece 24 gün içinde LESC örneğin alınma olasılığını verir. Bu yöntem bir dört gün yüzey ektodermal indüksiyon LN-521/kollajen IV kombinasyonu matris tanımlanmış kornea epitel farklılaşma orta yapisan kültür aşaması gelir küçük molekülleri ile süspansiyon dahil eder. Cryostoring ve genişletilmiş farklılaşma daha fazla hücre nüfus arındırır ve bankacılık hücre hücre terapi ürünleri için büyük miktarlarda sağlar. Elde edilen yüksek kalite hPSC-LESCs limbal kök hücre eksikliği (LSCD) tedavisinde kornea yüzey yeniden inşası için potansiyel bir roman tedavi stratejisi sağlayabilir.

HPSC-LESCs için hPSCs
FF hPSCs cryostoring hPSC-LESCs için farklılaşma inducing üzerinden tüm süreç yaklaşık 3,5 hafta sürer. Şekil 1A' onun anahtar adımlar vurgulayarak farklılaşma yönteminin şematik genel bakış sunulur. Şekil 1B hücre nüfusun tipik türleri morfoloji protokol farklı aşamalarında gösterir. Sunulan veri Regea08/017 hESC çizgi ile...

Watch this Scientific Journal Video about Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Verimli ve ölçeklenebilir yönlendirilmiş farklılaşma klinik olarak uyumlu kornea Limbal epitel kök hücrelerden insan Pluripotent kök hücreler

Bu iletişim kuralı kornea limbal epitel kök hücre xeno - ve besleyici boş hücre kültür koşullar altında insan pluripotent kök hücrelerden ayırt için basit iki adımlı bir yöntem sağlar. Burada sunulan hücre kültür yöntemleri klinik kalite hücre kornea hücre terapisi kullanmak için uygun maliyet-etkin, büyük ölçekli üretim sağlar.

Corneal limbal epithelial stem cells (LESCs) are responsible for continuously renewing the corneal epithelium, and thus maintaining corneal homeostasis ...

Bu protokol, insan pluripotent kök hücrelerinden kornea limbal epitel kök hücrelerini ayırt etmek için tanımlanmış bir besleyici hücre siz yöntem tanıttı. Limbal epitel kök hücreleri sağlıklı gözde kornea epitel yenilenmesi nden sorumludur. Bu hücrelere zarar limbal kök hücre eksikliği olarak bilinen bir duruma yol açar, ve kornea berraklığı kaybına.Burada gösterilen hücre kültürü yöntemleri gelecekteki kornea hücre replasman tedavileri için limbal epitel kök hücrelerin verimli üretimini sağlar. Başlamak için, geçiş ve metin protokolünde belirtildiği gibi besleyici ücretsiz insan pluripotent kök hücre kültürü korumak. Farklılaştırmalar için başlangıç malzemesi olarak sadece yüksek kaliteli insan pluripotent kök hücreleri kullandığınızdan emin olun.Embriyoid vücut oluşumunu teşvik etmeye hazır olduğunuzda, gerekli tüm malzemeleri ve reaktifleri bir laminar akış kaputunda oda sıcaklığına ısıtın. Besleyici ücretsiz insan pluripotent kök hücreleri süspansiyon için her kuyuya 500 mikrolitre xeno ücretsiz tripsin EDTA ekleyerek ayırın. %5 CO2 ile 37 santigrat derecede kuluçka.Üç dakika sonra, inkübatör hücreleri çıkarın ve tripsin çıkarılması için en uygun fazbelirlemek için hücre morfolojisi kontrol edin. Hücreler toplandığında, ancak tamamen ayrılmadığında, xeno free tryspin EDTA'yı kaldırmak için en uygun zamanı belirlemek için hücreleri dikkatle gözlemleyin. En uygun zamanda, hücrelerden xeno serbest tripsin EDTA çıkarın.Hücreleri ayırmak için tanımlanmış tripsin inhibitörü ve hafifçe pipet ekleyin. 50 mililitrelik bir santrifüj tüp tek hücreli süspansiyon toplamak. Santrifüj 300g beş dakika için.Sonra, supernatant kaldırmak ve kültür ortamının bir mililitre hücreleri yeniden askıya. Hücreleri sayarak sonra, bazal indüksiyon orta üç mililitre de düşük bir eki altı iyi plaka her kuyuya beş mikromolar blebbistatin ile takviye iki ila üç milyon hücre dağıtmak. Bir gecede %5 CO2 ile 37 santigrat derecede kuluçkaya yat.Ertesi gün, mikroskop altında embriyoid cisimlerin kalitesini kontrol edin. Orta çıkarın ve bazal indüksiyon orta üç mililitre ile değiştirin 10 mikromolar SB-505124 ve 50 insan temel fiberglas büyüme faktörü mililitre başına nanogram ile desteklenmiştir. %5 CO2 ile 37 santigrat derecede kuluçkaya yatın.Aşağıdaki iki gün, orta kaldırmak ve bazal indüksiyon orta üç mililitre ile değiştirin, kemik morfogenetik protein dört mililitre başına 25 nanogram ile takviye. Daha sonra, önceki koşulları kullanarak kuluçkaya devam edin. Dördüncü gün, Laminin-521 santimetre kare başına 0.5 mikrogram ve insan plasental kollajen tip dört santimetre kare başına beş mikrogram, kalsiyum iki ve magnezyum iki iyon içeren DPBS seyreltilmiş bir karışım hazırlamak.Bu karışımı kullanarak, çanak başına beş mililitre toplam kaplama hacmi nde yapışık farklılaşma için 100 milimetre doku kültürü yemekleri katlayın. Plakaları kapatın ve bir gecede dört derece santigrat derecede saklayın. Beşinci gün, gerekli tüm malzemeleri ve reaktifleri bir laminar akış kaputunda oda sıcaklığına ısıtın.Bundan sonra, kaplama çözeltisini çıkarın ve her çanağa önceden ısıtılmış diferansiyasyon ortamı 10 mililitre ekleyin. Bir pipet kullanarak, embriyoid bedenleri tek bir tabaktan iki ila üç doku kültürü yemeğine aktarın. Sonra, yavaşça eşit embriyoid organları dağıtmak için her kültür çanak sallamak.Sonraki iki buçuk ila üç hafta boyunca %5 CO2 ile 37 santigrat derecede yapışık kültürdeki hücreleri koruyun ve ortamı haftada üç kez 10 mililitre taze farklılaşma ortamıyla değiştirmeyi unutmayın. Doğru epitel morfolojisinin ortaya çıkması için hücreleri düzenli olarak kontrol etmek için bir faz kontrast mikroskobu kullanın. Başlamak için, önceden soğutulması gereken kriyopreservation ortam dışında, bir laminar akış kaputunda oda sıcaklığına gerekli tüm malzeme ve reaktifler önceden ısıtın.Daha sonra, insan pluripotent kök hücre tek hücre süspansiyon xeno serbest trippsin EDTA ekleyerek ve% 5 CO2 ile 37 derece santigrat de kuluçka limbal epitel kök hücreleri elde ayırın. Beş dakika sonra, inkübatör hücreleri çıkarın ve tripsin çıkarılması için en uygun fazbelirlemek için hücre morfolojisi kontrol edin. Hücreler toplandığında, ancak tamamen ayrılmadığında, xeno serbest tripsin EDTA'yı çıkarmak için en uygun zamanı belirlemek için hücreleri dikkatle gözlemleyin.En uygun zamanda, hücrelerden xeno serbest tripsin EDTA'yı çıkarın ve daha önce açıklandığı gibi hücreleri ayırın. Hücreleri sayarak sonra, beş dakika için 300g onları santrifüj. Orta aspire ve önceden soğutulmuş xeno serbest kriyopreservation orta hücreleri resuspend.Bir pipet kullanarak, tek hücreli süspansiyonu kriyo-tüplere aktarın, böylece her kriyo-tüp bir mililitre kriyopreservation ortamda 500,000 ila bir milyon hücre içerir. Tüpleri dondurucu bir kapta yerleştirin. Beş dakika içinde, bir gecede depolama için negatif 80 santigrat derecede bir dondurucuya aktarın.Ertesi gün, uzun süreli depolama için sıvı nitrojen tüpleri aktarın. Hücreleri eritmeden önce, santimetre kare insan plasenta kollajen tip dört başına beş mikrogram karışımı ile tüm gerekli tabak ve plaka kuyuları kat ve LM-521 santimetre kare başına 0,5 mikrogram, ve önceden gerekli tüm malzeme ve reaktifler laminar akış kaputunda oda sıcaklığına ısıtın. Daha sonra, kaplama çözeltisini tabaklardan ve tabak kuyularından çıkarın ve önceden ısıtılmış farklılaşma ortamının uygun hacmini ekleyin.Önceden ısıtılmış farklılaşma ortamını 15 mililitrelik konik bir tüpe ekleyin. Hücreleri oda sıcaklığına kadar hızlı bir şekilde eritin. Çözüldükten sonra, hemen konik santrifüj tüpü ne hücre süspansiyon aktarın.Santrifüj 300g beş dakika için. Aspirasyon orta, ve herhangi bir kriyopreservation orta kaldırmak için farklılaşma orta hücre pelet resuspend. Hücreleri 40, 000 ila 50, 000 hücre kare santimetre kare lik bir yoğunlukta, farklılaşma ortamında önceden kaplanmış tabaklara yerleştirin.Hücreleri haftada üç kez farklılaşma ortamının yerine %5 CO2'de 37 derecede koruyun. Laminin-521'de, farklılaşmamış yüksek kaliteli besleyici siz insan pluripotent kök hücreleri ilk olarak keskin kenarlı farklı koloniler oluştururlar ve bu koloniler birleştiğinde homojen tek katmanlara bağlanır. Bazal indüksiyon ortamda Culturing, 24 saat boyunca beş mikromolar blebbistatin ile takviye genellikle çeşitli boyutlarda sıkı, düzenli embriyoid organların bir süspansiyon üretir, embriyoid vücut morfolojisi süspansiyon yüzey ektodermal indüksiyon sırasında önemli ölçüde değişmemelidir ise, kolonyal büyüme kısa bir süre sonra embriyoid organları kollajen tip dört ve Laminin-521 farklı matris kombinasyonu üzerine plakalı görünür.Farklılaşmadan sonraki 21 ila 25 gün içinde hücreler, epitel hücrelerine özgü poligonal morfolojisi ile birlikte, eşzamanlı homojen tabakalar oluştururlar. Canlılık ve morfoloji iyi çözülme sonra korunur gibi hücreler daha sonra kullanmak için kriyo saklanabilir. Gün 24 farklılaşma, hücrelerin büyük çoğunluğu eşleştirilmiş kutu protein ifade, PAX6, göz gelişiminin temel düzenleyici, yanı sıra p63 alfa, yaygın olarak tanınan LESC marker.Delta Np63 p63 alfa pozitif hücrelerin çoğunda coexpressed, en kornea spesifik delta Np63 alfa pozitif hücre fenotip doğrulayan. Diğer belirteçler kısmen ifade edilirken, diğerleri bu noktada saptanamaz, farklılaşma nın tek yönlü limbal epitel atalarına doğru ilerlediğini gösterir, ancak olgun kornea epitel hücrelerine terminal farklılaşma henüz gerçekleşmemiştir. Ortalama olarak, her farklılaşmamış besleyici ücretsiz insan pluripotent kök hücre gün 25 tarafından 0.7 hücre üretir.En az%65 delta Np63 alfa pozitif hücre popülasyonu 24. Kriyoprezervasyon hücre popülasyonunu daha da arındırır. Genel olarak, burada sunulan yöntemler nispeten basittir, ancak başarı için birkaç kritik nokta vardır.Başlangıç malzemesinin yüksek kalitesi, genel olarak nazik, akıcı hücre kültürü tekniklerinin yanı sıra esastır. Bu protokol, klinik uygulamalar için limbal epitel kök hücrelerinin yanı sıra çeşitli araştırma amaçları için de güçlü araçlar sağlar. Ayrıca, yöntem kolayca retinal pigment epitel hücrelerinin farklılaşması için değiştirilebilir.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

Oldukça Tekrarlanabilir Küçük Molekül Tabanlı Farklılaşma Protokolü kullanarak insan pluripotent kök hücreleri gelen kardiyomiyositlerde Büyük Ölçekli Üretim

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

The Production of Pluripotent Stem Cells from Mouse Amniotic Fluid Cells Using a Transposon System

Bir Transpozon Sistemi Kullanılarak Fare Amniyotik Sıvı Hücreleri pluripotent kök hücrelerin üretimi

Induced pluripotent stem (iPS) cells are generated from mouse and human somatic cells by forced expression of defined transcription factors using ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

İlkel ve kesin hematopoetik ataları insan Pluripotent kök hücrelerden farklılaşma yönetmen

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Pluripotent Verimli Farklılaşma NKX6-1 için Kök Hücreler<sup&gt; +</sup&gt; Pankreas Progenitörler

Pluripotent stem cells have the ability to self renew and differentiate to multiple lineages, making them an attractive source for the generation of ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

Insan pluripotent İn Vitro Farklılaşma Trofoblastik Hücreleri içine Kök Hücreler

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

Defined and Scalable Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Tanımlı ve hepatosit benzeri Hücrelerinin Ölçeklenebilir Nesil insan pluripotent kök hücreleri gelen

Human pluripotent stem cells (hPSCs) possess great value for biomedical research. hPSCs can be scaled and differentiated to all cell types found in the ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Hızlı, yönlendirilmiş farklılaşma insan embriyonik veya İndüklenmiş Pluripotent kök hücrelerinden retina Pigment epitel hücrelerinin

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

Insan pluripotent kök hücrelerinin karaciğer hücrelerine verimli farklılaşma

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Somite türevleri indüklenen insan nesil Vitro Pluripotent kök hücreler

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Transient Treatment of Human Pluripotent Stem Cells with DMSO to Promote Differentiation

Insan pluripotent kök hücrelerinin DMSO ile geçici tedavisi farklılaşma teşvik etmek

Despite the growing use of pluripotent stem cells (PSCs), challenges in efficiently differentiating embryonic and induced pluripotent stem cells (ESCs and ...