Name: antigenic liposomes for generation of disease-specific antibodies
Uploaded: 2018-10-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Antigenic Liposomes for Generation of Disease-specific Antibodies at JoVE.com

وأيد هذا البحث المنح المقدمة من وزارة الدفاع (W81XWH-16-1-0302 و W81XWH-16-1-0303).

الأسلوب العام من اقتران البروتين للدهن وإدماج في الدهنية يستند إلى حد كبير سابق عمل15. تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية الواردة أدناه بجامعة كارولاينا الشمالية في "تشابل هيل رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك). جميع الفئران المستخدمة في نموذج حساسية الف?...

<ol>
	<li>Gupta, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prevalence,+severity,+and+distribution+of+childhood+food+allergy+in+the+United+States.">The prevalence, severity, and distribution of childhood food allergy in the United States.</a> Pediatrics. 128 (1), e9-e17 (2011).</li><li>Sicherer, S. H., Munoz-Furlong, A., Godbold, J. H., Sampson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=US+prevalence+of+self-reported+peanut,+tree+nut,+and+sesame+allergy:+11-year+follow-up.">US prevalence of self-reported peanut, tree nut, and sesame allergy: 11-year follow-up.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 125 (6), 1322-1326 (2010).</li><li>Kim, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sublingual+immunotherapy+for+peanut+allergy:+clinical+and+immunologic+evidence+of+desensitization.">Sublingual immunotherapy for peanut allergy: clinical and immunologic evidence of desensitization.</a> Journal of Allergy Clinical Immunology. 127 (3), 640-646 (2011).</li><li>Vickery, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+unresponsiveness+to+peanut+in+subjects+who+have+completed+peanut+oral+immunotherapy.">Sustained unresponsiveness to peanut in subjects who have completed peanut oral immunotherapy.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 133 (2), 468 (2014).</li><li>Jones, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicutaneous+immunotherapy+for+the+treatment+of+peanut+allergy+in+children+and+young+adults.">Epicutaneous immunotherapy for the treatment of peanut allergy in children and young adults.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 139 (4), 1242 (2017).</li><li>Varshney, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized+controlled+study+of+peanut+oral+immunotherapy:+clinical+desensitization+and+modulation+of+the+allergic+response.">A randomized controlled study of peanut oral immunotherapy: clinical desensitization and modulation of the allergic response.</a> Journal of Allergy Clinical Immunology. 127 (3), 654-660 (2011).</li><li>Anagnostou, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+efficacy+of+oral+immunotherapy+for+the+desensitisation+of+peanut+allergy+in+children+(STOP+II):+a+phase+2+randomised+controlled+trial.">Assessing the efficacy of oral immunotherapy for the desensitisation of peanut allergy in children (STOP II): a phase 2 randomised controlled trial.</a> Lancet. 383 (9925), 1297-1304 (2014).</li><li>Sampson, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Varying+Doses+of+Epicutaneous+Immunotherapy+vs+Placebo+on+Reaction+to+Peanut+Protein+Exposure+Among+Patients+With+Peanut+Sensitivity:+A+Randomized+Clinical+Trial.">Effect of Varying Doses of Epicutaneous Immunotherapy vs Placebo on Reaction to Peanut Protein Exposure Among Patients With Peanut Sensitivity: A Randomized Clinical Trial.</a> The Journal of the American Medical Association. 318 (18), 1798-1809 (2017).</li><li>Bednar, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+CD22+Inhibits+Murine+B+Cell+Receptor+Activation+in+a+Human+CD22+Transgenic+Mouse+Model.">Human CD22 Inhibits Murine B Cell Receptor Activation in a Human CD22 Transgenic Mouse Model.</a> Journal Immunology. 199 (9), 3116-3128 (2017).</li><li>Macauley, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigenic+liposomes+displaying+CD22+ligands+induce+antigen-specific+B+cell+apoptosis.">Antigenic liposomes displaying CD22 ligands induce antigen-specific B cell apoptosis.</a> Journal Clinical Investigation. 123 (7), 3074-3083 (2013).</li><li>Orgel, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploiting+CD22+on+antigen-specific+B+cells+to+prevent+allergy+to+the+major+peanut+allergen+Ara+h+2.">Exploiting CD22 on antigen-specific B cells to prevent allergy to the major peanut allergen Ara h 2.</a> Journal Allergy Clinical Immunology. 139 (1), 366-369 (2017).</li><li>Smarr, C. B., Hsu, C. L., Byrne, A. J., Miller, S. D., Bryce, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-fixed+leukocytes+tolerize+Th2+responses+in+mouse+models+of+allergy.">Antigen-fixed leukocytes tolerize Th2 responses in mouse models of allergy.</a> Journal of Immunology. 187 (10), 5090-5098 (2011).</li><li>Kulis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+2S+albumin+allergens+of+Arachis+hypogaea,+Ara+h+2+and+Ara+h+6,+are+the+major+elicitors+of+anaphylaxis+and+can+effectively+desensitize+peanut-allergic+mice.">The 2S albumin allergens of Arachis hypogaea, Ara h 2 and Ara h 6, are the major elicitors of anaphylaxis and can effectively desensitize peanut-allergic mice.</a> Clinical and Experimental Allergy. 42 (2), 326-336 (2012).</li><li>Dang, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+the+accuracy+of+peanut+allergy+diagnosis+by+using+Ara+h+2.">Increasing the accuracy of peanut allergy diagnosis by using Ara h 2.</a> Journal of Allergy Clinical Immunology. 129 (4), 1056-1063 (2012).</li><li>Loughrey, H. C., Choi, L. S., Cullis, P. R., Bally, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+procedures+for+the+coupling+of+proteins+to+liposomes.">Optimized procedures for the coupling of proteins to liposomes.</a> Journal Immunological Methods. 132 (1), 25-35 (1990).</li><li>Sen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+structure+plays+a+critical+role+in+peanut+allergen+stability+and+may+determine+immunodominant+IgE-binding+epitopes.">Protein structure plays a critical role in peanut allergen stability and may determine immunodominant IgE-binding epitopes.</a> Journal of Immunology. 169 (2), 882-887 (2002).</li><li>Krall, N., da Cruz, F. P., Boutureira, O., Bernardes, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site-selective+protein-modification+chemistry+for+basic+biology+and+drug+development.">Site-selective protein-modification chemistry for basic biology and drug development.</a> Nature Chemistry. 8 (2), 103-113 (2016).</li><li>Jimenez-Saiz, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifelong+memory+responses+perpetuate+humoral+TH2+immunity+and+anaphylaxis+in+food+allergy.">Lifelong memory responses perpetuate humoral TH2 immunity and anaphylaxis in food allergy.</a> Journal Allergy and Clinical Immunology. 140 (6), 1604-1615 (2017).</li><li>Moutsoglou, D. M., Dreskin, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+Treatment+of+Peanut-Allergic+Mice+with+Bortezomib+Significantly+Reduces+Serum+Anti-Peanut+IgE+but+Does+Not+Affect+Allergic+Symptoms.">Prolonged Treatment of Peanut-Allergic Mice with Bortezomib Significantly Reduces Serum Anti-Peanut IgE but Does Not Affect Allergic Symptoms.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 170 (4), 257-261 (2016).</li><li>LaMothe, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerogenic+Nanoparticles+Induce+Antigen-Specific+Regulatory+T+Cells+and+Provide+Therapeutic+Efficacy+and+Transferrable+Tolerance+against+Experimental+Autoimmune+Encephalomyelitis.">Tolerogenic Nanoparticles Induce Antigen-Specific Regulatory T Cells and Provide Therapeutic Efficacy and Transferrable Tolerance against Experimental Autoimmune Encephalomyelitis.</a> Frontiers in Immunology. 9, 281 (2018).</li><li>Srivastava, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+peanut+oral+immunotherapy+with+CpG/peanut+nanoparticles+in+a+murine+model+of+peanut+allergy.">Investigation of peanut oral immunotherapy with CpG/peanut nanoparticles in a murine model of peanut allergy.</a> J Allergy Clin Immunol. 138 (2), 536-543 (2016).</li><li>Bellinghausen, I., Saloga, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+allergic+immune+responses+in+humanized+mice.">Analysis of allergic immune responses in humanized mice.</a> Cellular Immunology. 308, 7-12 (2016).</li><li>Pillai, S., Mattoo, H., Cariappa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+cells+and+autoimmunity.">B cells and autoimmunity.</a> Curr Opin Immunol. 23 (6), 721-731 (2011).</li><li>Mantegazza, R., Cordiglieri, C., Consonni, A., Baggi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+myasthenia+gravis:+utility+and+limitations.">Animal models of myasthenia gravis: utility and limitations.</a> International Journal of General Medicine. 9, 53-64 (2016).</li><li>Berman, P. W., Patrick, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+myasthenia+gravis.+A+murine+system.">Experimental myasthenia gravis. A murine system.</a> J Exp Med. 151 (1), 204-223 (1980).</li><li>Berman, P. W., Patrick, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linkage+between+the+frequency+of+muscular+weakness+and+loci+that+regulate+immune+responsiveness+in+murine+experimental+myasthenia+gravis.">Linkage between the frequency of muscular weakness and loci that regulate immune responsiveness in murine experimental myasthenia gravis.</a> J Exp Med. 152 (3), 507-520 (1980).</li><li>Derksen, V., Huizinga, T. W. J., van der Woude, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+autoantibodies+in+the+pathophysiology+of+rheumatoid+arthritis.">The role of autoantibodies in the pathophysiology of rheumatoid arthritis.</a> Seminars in Immunopathology. 39 (4), 437-446 (2017).</li></ol>

الأساليب المذكورة هنا هي بروتوكول عام لتصريف البروتين إلى دهن الذي يتيح عرض البروتين على جسيمات نانوية الاسمافرون. للبروتينات فرعية متعددة كبير جداً، وقد يكون هذا البروتوكول محدودة الأداة المساعدة. وسيكون الأسلوب المثالي الأخذ بالعلامة الخاصة بالموقع التي تمكن استراتيجية ربط بيورثوجو?...

الحساسية الغذائية يؤثر على نسبة 8% أطفال في الولايات المتحدة، وقد زاد في الانتشار على مدى العقد1. يؤثر على 1 في المائة أطفال الحساسية للفول السوداني وليس المتضخمة عادة2. على الرغم من أن عدة تجارب سريرية واعدة تجري حاليا لعلاج الحساسية للأغذية، بما في ذلك العلاج المناعي عن طريق الفم (OIT) والعلاج المناعي تحت اللسان (الشق) ابيكوتانيوس المناعي (EPIT)، لا يوجد حاليا لا استراتيجيات العلاج التي وافقت عليها إدارة الأغذية والعقاقير الفلورايد الأفراد حساسية الفول السوداني3،4،5،6،،من78. ولذلك، يجب أن دقة تجنب حساسية الأفراد حساسية لتجنب الحساسية المفرطة. تبقى العديد من الأسئلة فيما يتعلق بطرق التوعية والكامنة وراء آليات لتنمية الحساسية الغذائية.
نماذج الفأرة أداة قيمة لدراسة آليات الحساسية، فضلا عن تطوير توليروجينيك جديدة والحساسية العلاجات9،10،،من1112. وهذا صحيح بصفة خاصة نظراً لحساسية الفول السوداني الرئيسية (ارا ح 2؛ Ah2) في البشر هو أيضا وصف الحساسية الغالبة في عدة الماوس نماذج13،14. في حين لا تقدر بثمن في دراسة آليات التوعية والتسامح نماذج الماوس من حساسية الفول السوداني، هو عيب أنهم يمكن أن يكون متغير وتتطلب استخدام المواد المساعدة. إيمونوجينس أقوى هو السبيل الوحيد للحد من تقلب الجوهرية لهذه النماذج. حيث يتم تنشيط الخلايا البائية بشدة من متعددي مولدات المضادات، مولده الدهنية عرض الحساسية خيار جيد بسبب قدرتها لتنشيط الخلايا البائية يحتمل أن تكون من خلال مستقبلات الخلية ب (المركز) بينما أيضا وجود ملك لكفاءة فتيلة حجرة تي خلية عن طريق يجري تناولها غير تحديداً بعرض مستضد الخلايا.
هنا، يمكننا وصف بروتوكول مفصل للتصريف المستضدات البروتين إلى جسيمات نانوية الاسمافرون استخدام استراتيجية سهلة ووحدات. استخدام مستضد مركب، ويفتت المضادة IgM القوات المسلحة البوروندية، نبدي قوية كيف يمكن أن تكون هذه الدهنية مولده في تحفيز ب-خلية التنشيط. واستخدمت الدهنية مستضدي عرض مستضد Ah2 تطوير نموذج ماوس جديدة الممنوحة للحساسية. في هذا النموذج، يتم نقل سبلينوسيتيس من التحقق من الفئران حساسية الفول السوداني، التي تحتوي على ذاكرة خاصة بالفول السوداني ب وخلايا تي، في الفئران كونجينيك ساذج. هي استجابات جسم الذاكرة الناجم عن حقن الدهنية مترافق مع Ah2 في الفئران المستفيدة، من أجل حمل الأجسام المضادة ضد Ah2. تليها دفعة واحدة فقط مع Ah2 القابلة للذوبان، الأجسام المضادة Ah2 محددة تؤدي إلى استجابة قوية تحسسي عند وتحدي هذه الفئران في وقت لاحق مع Ah2. كما الفئران تمر الارتكاس التحسسي الاستجابة بطريقة موحدة إلى حد كبير ولم نتلق adjuvant، هذا النهج نموذج مرغوب فيه حساسية الفول السوداني والنتائج تشير إلى أن التقرير قد يكون أداة في نماذج أخرى الماوس مدفوعا بمولدات المضادات التي تستهدف المواد المسببة للحساسية، وربما أوتوانتيجينس.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Model 2110 Fraction Collector</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>7318122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholestrol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8667</td>
			<td>Sigma grade 99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPDP</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21857</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSPC</td>
			<td>Avanti</td>
			<td>850365</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSPE-PEG 18:0</td>
			<td>Avanti</td>
			<td>880120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DSPE-PEG Maleimide</td>
			<td>Avanti</td>
			<td>880126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extruder</td>
			<td>Avanti</td>
			<td>610000</td>
			<td>1mL syringe with holder/heating block</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filters 0.1 &#181;m</td>
			<td>Avanti</td>
			<td>610005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filters 0.8 &#181;m</td>
			<td>Avanti</td>
			<td>610009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10mm Filter Supports</td>
			<td>Avanti</td>
			<td>6100014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Round Bottom Flask</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z100633</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turnover stoppers</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P-301398</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P-198194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leur Lock</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>k4201634503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sephadex G50 Beads</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>17004201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sephadex G100 Beads</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>17006001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Inactivated Fetal Calf Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E3889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x RBC lysis Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>00-4333-57</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indo-1</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I1203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD5-PE</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B220-PE-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>103222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14170112</td>
			<td>without calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fab anti-mouse IgM</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>115-007-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F(ab&#39;)2 anti-mouse IgM</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>115-006-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peanut flour</td>
			<td>Golden Peanut Co.</td>
			<td>521271</td>
			<td>12% fat light roast, 50% protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal feeding needles</td>
			<td>Cadence Science</td>
			<td>7920</td>
			<td>22g x 1.5&#34;, 1.25 mm - straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microprobe thermometer</td>
			<td>Physitemp</td>
			<td>BAT-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal probe for mice</td>
			<td>Physitemp</td>
			<td>Ret-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera toxin, from vibrio cholera</td>
			<td>List Biological Laboratories, Inc.</td>
			<td>100B</td>
			<td>Azide free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA Protein Assay Kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonate-bicarbonate buffer</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C3041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMB Stop Solution</td>
			<td>KPL</td>
			<td>50-85-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SureBlue TMB Microwell Peroxidase Substrate</td>
			<td>KPL</td>
			<td>5120-0077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well Immulon 4HBX plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified soluble Ara h 2</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>purified as in: Sen, et al., 2002, Journal of Immunology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HSA-DNP</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-6661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgE anti-DNP</td>
			<td>Accurate Chemical</td>
			<td>BYA60251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sheep anti-Mouse IgE</td>
			<td>The Binding Site</td>
			<td>PC284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated Donkey anti-Sheep IgG</td>
			<td>Accurate Chemical</td>
			<td>JNS065003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NeutrAvidin Protein, HRP</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>31001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 anti-DNP</td>
			<td>Accurate Chemical</td>
			<td>MADNP105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP Goat anti-mouse IgG1</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>1070-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329412</td>
			<td>U-100 Insulin, 0.40 mm(27G) x 16.0 mm (5/8&#34;)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-14</td>
			<td>25 x 75 x 1.0 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysing Buffer</td>
			<td>gibco by Life Technologies</td>
			<td>A10492-01</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875093</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352350</td>
			<td>70 &#956;m Nylon, White, Sterile, Individually packaged</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE 4-12% Bis-Tris Protein Gels</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>NP0322BOX</td>
			<td>10 gels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE LDS buffer, 4X</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>NP0008</td>
			<td>250 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SeeBlue Plus2 Pre-stained standard</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC5925</td>
			<td>500 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE MES/SDS running buffer, 20X</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>NP0002</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GelCode Blue Stain</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>24590</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

antigenic liposomes for generation of disease-specific antibodies

توفير استجابات جسم حرجة حصانة الحماية لمجموعة واسعة من العوامل الممرضة. لا يزال هناك مصلحة كبيرة في توليد أجسام مضادة قوية للتلقيح، فضلا عن فهم كيف الممرضة جسم تطوير الاستجابات في الحساسية وأمراض المناعة الذاتية. توليد استجابات قوية محددة مستضد الضد ليس دائماً تافهة. في نماذج الماوس، فإنه غالباً ما يتطلب جولات متعددة من التحصينات مع adjuvant الذي يؤدي إلى قدر كبير من التباين في مستويات الأجسام المضادة المستحث. مثال ذلك في نماذج الماوس من الحساسية الفول السوداني حيث سيكون من المفيد أكثر نماذج قوية واستنساخه أن تقليل إعداد الماوس واستخدام adjuvant. قدم هنا نموذج ماوس استنساخه بدرجة عالية من الحساسية المفرطة الحساسية الفول السوداني. هذا النموذج الجديد يعتمد على عاملين أساسيين: سبلينوسيتيس (1) على حدة مستضد أدوبتيفيلي نقل من ماوس توعية الفول السوداني إلى ماوس المتلقي ساذج، تطبيع عدد الذاكرة محددة مستضد خلايا ب وتي عبر عدد كبير من الفئران؛ ويتم بعد ذلك عزز الفئران المستفيدة (2) مع إيمونوجين متعددي قوية في شكل جسيمات نانوية الاسمافرون عرض حساسية الفول السوداني الرئيسية (ح ارا 2). والميزة الرئيسية لهذا النموذج هو في إمكانية تكرار نتائج، مما يقلل عدد الحيوانات المستخدمة في كل دراسة، مع التقليل من عدد الحيوانات تلقي حقنات متعددة من adjuvant في نهاية المطاف. وتوفر الجمعية وحدات من هذه الدهنية مكسبه التكيف سهلة نسبيا لنماذج أخرى الحساسية أو المناعة الذاتية التي تنطوي على الأجسام المسببة للأمراض.

يمكن إثبات تصريف بروتين الاهتمام مع DSPE-PEG(2000) التي تعمل تقليل تظهر زيادة في الوزن الجزيئي بالمقارنة مع البروتين أونكونجوجاتيد. يظهر الشكل 1A هلام ممثل للماوس المضادة IgM F(ab) يفتت الاقتران على شماعة-دسب، مما يدل باندشيفت 2 – 3 كاتشين للبروتين التشويه والتحريف....

Watch this Scientific Journal Video about Antigenic Liposomes for Generation of Disease-specific Antibodies at JoVE.com

Antigenic Liposomes for Generation of Disease-specific Antibodies

ووصف هو إعداد جسيمات نانوية الاسمافرون مستضدي واستخدامها في تحفيز ب-خلية التنشيط في المختبر و في فيفو. استجابات جسم متسقة وقوية أدت إلى تطوير نموذج جديد لحساسية الفول السوداني. ويمكن تمديد البروتوكول من أجل توليد الدهنية مستضدي المستضدات المختلفة ونماذج التحصين.

الدهنية مولده لتوليد الأجسام المضادة الخاصة بالمرض

Antibody responses provide critical protective immunity to a wide array of pathogens. There remains a high interest in generating robust antibodies for ...

يمكن لهذه الطريقة المساعدة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم المناعة ، مثل كيفية تنشيط خلايا الدم البيضاء ، وكيف تتطور الحساسية لحساسية المواد المسببة للحساسية الفردية؟ الميزة الرئيسية لهذا النموذج الماوس الحساسية قوية وقابلة للاستنساخ هو أنه يمكن استخدام عدد أقل من الفئران لتحقيق تباين أقل مع السكان التجريبية. تتطلب العلاجات المناعية الجديدة للتحكم في الاستجابات المناعية نماذج ماوس قوية كوسيلة أولية للاختبار في فعالية الجسم الحي.وهكذا، تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو العلاج المناعي الحساسية. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في الحساسية، ويمكن أيضا أن تطبق على أنظمة أخرى، مثل autoimmunity التي الاستجابات الأجسام المضادة غير المرغوب فيها تلعب دورا رئيسيا في المرض. عموما، سوف الأفراد الجدد لهذا الأسلوب النضال بسبب نقص الخبرة في العمل مع الجسيمات النانوية الدهنية أو عدم الخبرة مع التقنيات المطلوبة في عمل الماوس.تبدأ بإضافة 2.5 ما يعادل الضرس من الصلصال غيري وظيفية إلى البروتين ووضع رد فعل على شاكر متذبذب في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة تقريبا. بعد حضانة لمدة ساعة واحدة مع SPDP ، تم إزالة البروتين على عمود مُعد في خلات الصوديوم 100 ملليمولار ، وجمع الكسور. تحديد امتصاص 280 نانومتر، وتجمع الكسور العليا.غسل العمود في برنامج تلفزيوني، وإضافة 25 ملليمولار dithiothreitol، أو DTT، إلى كسور البروتين المجمعة لمدة خمس إلى 10 دقائق الحضانة. ثم، قياس امتصاص 280 و 343 نانومتر من البروتين للسماح بحساب نسبة الربط على أساس الضرس من البروتين و linker. بعد ذلك، قم بتشغيل الكسور المجمعة من العمود المغسول بـ PBS، وقم بجمع الكسور لقياس تجمع الكسر 280-nanometer والكسر العلوي كما هو موضح.أضف الحجم المناسب من 100x DSPE-PEG2000-Maleimide إلى البروتين لتحقيق 1x، 10 أضعاف التركيز النهائي المولر الزائد مع دوامة لطيف. ثم، تشغيل رد فعل بين عشية وضحاها تحت النيتروجين في قارورة مستديرة القاع مختومة. في اليوم التالي، قم بتشغيل البروتين فوق عمود حبة هلام ديكستران المترابطة، وتخزين الكسور النهائية المجمعة من البروتين المرتبط بالدهون عند أربع درجات مئوية حتى استخدامها.مرة واحدة وقد تم حساب المبلغ الصحيح من كل الدهون، والجمع بين كل من الدهون في أنبوب اختبار الزجاج بوروسيليكات 12 ملليلتر، واستخدام حقنة ثلاثة ملليلتر وأنابيب لتفجير بعناية الكلوروفورم قبالة مع النيتروجين. ثم، lyophilize الحل مع 100 ميكرولترات من DMSO بين عشية وضحاها. في صباح اليوم التالي، إضافة ملليلتر واحد من البروتين المرتبط بالدهون إلى أنبوب الدهون 12 ملليلتر، و sonicate الحل ثلاث إلى أربع مرات لمدة 30 إلى 60 ثانية لكل صوتنة في حمام الماء سونيكيشن مع ما لا يقل عن خمس دقائق تقع بين sonications.بعد صوتنة الماضي، تحميل العينة في واحدة من الحقن البثق وضعت في الطارد، ووضع حقنة الطارد في الطرف الآخر من الطارد. سوف تملأ الحقنة الفارغة كما هو مقذوف الدهون من خلال غشاء البولي 0.8 ميكرومتر. وضع الطارد تجميعها بالكامل في كتلة التدفئة، والاكتئاب بلطف المكبس لإفراغ الحقنة.بعد البثق الأخير، نقل liposomes في قارورة نظيفة، وبثق الدهون من خلال البولي 0.2 و 0.1 ميكرومتر الأغشية كما أظهرت للتو. ثم، تخزين liposomes في أربع درجات مئوية. لرصد استجابة الخلية ب لتنشيط ليبوسومات الهلوسة المضادة، resuspend 1.5 مرات 10 إلى الطحال السابع في تدفق الكالسيوم تحميل العازلة، وإضافة 1.5-ميكرومولار الهندو-1 إلى الخلايا، عكس الحل في الأنبوب عدة مرات لخلط.بعد حضانة حمام مائي لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، محمية من الضوء، أضف خمسة أضعاف حجم احتياطي تحميل تدفق الكالسيوم، وطاردة مركزية الخلايا المسماة من الهند إلى 1. بالنسبة لخلية B، تصبغ الخلايا مع الأجسام المضادة CD5 و B220 المضادة في 0.5 ملليلتر من العازلة التحميل في أربع درجات مئوية لمدة 20 دقيقة، وحمايتها من الضوء. في نهاية الحضانة، وغسل الخلايا في تدفق الكالسيوم الطازجة تحميل العازلة، وإعادة تعليق بيليه في واحد إلى مرتين 10 مرات إلى الخلايا السابعة لكل ملليلتر من تدفق الكالسيوم الطازجة تشغيل العازلة للتخزين على الجليد، وحمايتها من الضوء حتى التحليل.بعد ذلك، أضف 0.5 ملليلتر من الخلايا إلى أنبوب متوج، خمسة ملليلتر، مستدير القاع، البوليسترين، وتدفئة الخلايا إلى 37 درجة مئوية في حمام مائي. بعد ثلاث إلى خمس دقائق، قم بنقل الأنبوب إلى غرفة مُكلّفة بالماء بـ37 درجة مئوية متصلة بحمام مائي يعاد تدويره، ثم قم بتشغيل الأنبوب في سترة الماء على مقياس التدفق. بعد جمع 5، 000 إلى 10، 000 الأحداث في الثانية الواحدة، والسماح للخلايا لاستقرار لمدة 15 إلى 30 ثانية، وإعادة التهيئة الحصول على البيانات، وجمع البيانات لمدة 10 ثانية على الأقل لإنشاء قراءة خلفية.عند علامة 10 ثوانٍ، قم بإزالة الأنبوب بسرعة من مقياس التدفق، وأضف التركيز التجريبي المناسب للليبوسومات الخافتة. ثم، نبض دوامة الخلايا، وقراءة الأنبوب على مقياس الخلايا لمدة ثلاث إلى خمس دقائق إضافية. لتوعية الحيوانات، وتقديم 200 ميكرولتر من مستخلص الفول السوداني التي تحتوي على سم الكوليرا عن طريق الزلاجة عن طريق الفم إلى كل أربعة إلى خمسة أسابيع من العمر BALB / c الإناث المتلقي الماوس مرة واحدة في الأسبوع لمدة ثلاثة أسابيع و 300 ميكرولترات من مستخلص الفول السوداني المخفف في الأسبوع الرابع.في اليوم 28 ، قم بإعداد مستخلص الفول السوداني إلى تركيز نهائي قدره ملليغرام واحد لكل ملليلتر في PBS ، واستخدم ميزان حرارة المستقيم لقياس درجة حرارة الجسم الأساسية لكل تم تحسسه. عندما تم قياس جميع درجات الحرارة ، وإدارة 200 ميكرولترات من استخراج الفول السوداني لكل المتلقي عن طريق الحقن داخل الصفتون ، وقياس درجة حرارة الجسم مع ميزان الحرارة المستقيم كل 15 دقيقة لمدة ساعة واحدة بعد الحقن. انخفاض في درجة حرارة الجسم يشير إلى حساسية من الفول السوداني.بعد عزل الطحال من الفئران ذات حساسية الفول السوداني ، استخدم حقنة الأنسولين ذات المليلتر الواحدة المجهزة بإبرة قياس 27 ، 5/8 بوصة لحقن عن طريق الوريد 1.5 مرة 10 إلى السابعة من الطحال التحسسية المستخرجة في عروق الذيل للحيوانات الساذجة وغير المُشعة. بعد يوم واحد من نقل بالتبني، حقن عن طريق الوريد 200 ميكرولترات من ليبوسومات مضادة للحساسية 2 آرا h في الوريد الذيل لكل فأر بالب / ج التي تلقت الطحال الحساسية. بعد أسبوعين من حقن الليبوسومات، قم بتعزيز الفئران بـ i.p.حقن آرا القابل للذوبان ح 2، تليها 200 ميكرولتر آرا ح 2 التحدي في اليوم 61. ثم، قياس درجات حرارة الجسم مع مسبار المستقيم كل 15 دقيقة كما هو موضح. يمكن إثبات الاقتران البروتين من خلال تشغيل هلام تقليل تظهر زيادة في الوزن الجزيئي مقارنة مع البروتين غير المُعَد.لتقييم تدفق الكالسيوم الدهني المُضاد على الدهون ب-الخلية B- محفز، قم بباب الخلايا المفردة الحية للسماح باختيار خلايا B-CD5-سالبة B الإيجابية B220. ويمكن بعد ذلك تحليل نسبة البنفسجي الهندي-1 مقابل الفلور الأزرق الهندو-1 مع مرور الوقت لتقييم كمية تنشيط الخلايا ب الناجمة عن الليبوسومات. يشير القياس الكمي لـ Ara h 2-specific IgE و IgG1 في مصل الفئران التي تتحسس استخراج الفول السوداني من قبل ELISA إلى أن الفئران ذات الحساسية الممنوحة التي يتم تعزيزها مع Ara h 2 Exhibit قابل للقياس Ara h 2-specific IgE و IgG1 في مصلهم.درجات حرارة الجسم المسجلة خلال التحدي آرا ح 2 تكشف عن أن الفئران حساسية تظهر انخفاض درجات حرارة الجسم في أعقاب التحدي، في حين أن درجات حرارة الجسم في الفئران الساذجة لا تزال متسقة. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر أن تتتبع بعناية كمية البروتين المرتبط بالدهون التي يتم دمجها في الدهون، حيث أن الكثير من البروتين يمكن أن يجعل البثق صعبًا. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل تتبع وفرز الخلايا B و T الخاصة بالحساسية للإجابة على أسئلة إضافية حول كيفية استجابة هذه الخلايا المسببة للحساسية للعلاجات.هذه التقنية سوف تمهد الطريق للباحثين في مجال الحساسية لاستكشاف العلاجات المناعية الجديدة التي تكافح مرض الحساسية باستخدام هذا النموذج الماوس. لا تنس أن العمل مع سموم الكوليرا يمكن أن يكون خطيراً وأن المبادئ التوجيهية لاستخدامه يجب أن تتبع وفقاً لمعايير السلامة البيولوجية المؤسسية المحلية.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

IgY Technology: Extraction of Chicken Antibodies from Egg Yolk by Polyethylene Glycol (PEG) Precipitation

IgY Technology: Extraction of Chicken Antibodies from Egg Yolk by Polyethylene Glycol PEG Precipitation

IGY التكنولوجيا : استخراج الأجسام المضادة من صفار البيض الدجاج بواسطة البولي ايثيلين جلايكول (PEG) الأمطار

Hens can be immunized by means of  i.m. vaccination (Musculus pectoralis, left and right, injection volume  0.5-1.0 ml) or by means of Gene-Gun ...

Generation of Recombinant Arenavirus for Vaccine Development in FDA-Approved Vero Cells

جيل من الفيروسة الرملية المؤتلف استحداث اللقاحات وافقت عليها الهيئة في خلايا فيرو

The development and implementation of arenavirus reverse genetics represents a significant breakthrough in the arenavirus field  4. The use of cell-based ...

Methodology for the Efficient Generation of Fluorescently Tagged Vaccinia Virus Proteins

منهجية لتوليد كفاءة من البروتينات فيروس Vaccinia الموسومة الفلورية

Tagging of viral proteins with fluorescent  proteins has proven an indispensable approach to furthering our understanding  of virus-host interactions. ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

الجيل المؤتلف الإنسان مفتش حيدة النسيلة من مخلد خلايا التصنيف B

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology

جيل من الفئران وحيدة النسيلة الأجسام المضادة بواسطة تقنية هجين

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding ...

Flow Virometry to Analyze Antigenic Spectra of Virions and Extracellular Vesicles

تدفق Virometry لتحليل الأنتيجين أطياف Virions وخارج الخلية الحويصلات

Cells release small extracellular vesicles (EVs) into the surrounding media. Upon virus infection cells also release virions that have the same size of ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

جيل متغيرات الهروب من تحييد الأجسام المضادة فيروس الإنفلونزا

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

جيل من التمييزية مونوكلونل البشرية من خلايا نادرة محددة مستضد ب المتداولة في الدم

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

جيل من الأجسام المضادة ضد المنتجات الطبيعية

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...

Targeted Antibody Blocking by a Dual-Functional Conjugate of Antigenic Peptide and Fc-III Mimetics (DCAF)

Targeted Antibody Blocking by a Dual-Functional Conjugate of Antigenic Peptide and Fc-III Mimetics DCAF

حجب الأجسام المضادة المستهدفة بواسطة متقارن مزدوج الوظائف من الببتيد المضاد للجينات وFc-III Mimetics (DCAF)

Elimination of harmful antibodies from organisms is a valuable approach for the intervention of antibody-associated diseases, such as Dengue hemorrhagic ...