Name: apparatus for harvesting tissue microcolumns
Uploaded: 2018-10-25T13:30:00
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Este trabajo fue apoyado en parte por el ejército, la Marina, NIH, fuerza aérea, VA y asuntos de salud para apoyar el esfuerzo de afirmar II, bajo el no. de concesión W81XWH-13-2-0054. Los Estados Unidos Ejército investigación adquisición de actividad médica, 820 Chandler Street, Fort Detrick, MD 21702-5014 es la oficina de adquisición adjudicación y administradora. Opiniones, interpretaciones, conclusiones y recomendaciones son las del autor y no necesariamente son endosadas por el Departamento de defensa.

Todo el trabajo con animales vivos y muestras de tejidos animales han sido aprobadas por el Massachusetts General Hospital institucional Animal Care y el Comité uso (IACUC).
1. producción de la cosecha de agujas
<ol><li>Configuración de la etapa de producción<ol>
<li>Asegure un conector luer hembra de cerradura en un poste y montar el post a un escenario de rotación para que la cerradura de luer está en el centro de la etapa (figura 1A).</...

<ol>
	<li>Sun, B. K., Siprashvili, Z., Khavari, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+skin+grafting+and+treatment+of+cutaneous+wounds.">Advances in skin grafting and treatment of cutaneous wounds.</a> Science. 346 (6212), 941-945 (2014).</li><li>Singh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenging+the+Conventional+Therapy:+Emerging+Skin+Graft+Techniques+for+Wound+Healing.">Challenging the Conventional Therapy: Emerging Skin Graft Techniques for Wound Healing.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 136 (4), 524-530 (2015).</li><li>Tam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fractional+Skin+Harvesting:+Autologous+Skin+Grafting+without+Donor-site+Morbidity.">Fractional Skin Harvesting: Autologous Skin Grafting without Donor-site Morbidity.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 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K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+epithelialization+and+improved+wound+healing+metrics+in+porcine+full-thickness+wounds+transplanted+with+full-thickness+skin+micrografts.">Accelerated epithelialization and improved wound healing metrics in porcine full-thickness wounds transplanted with full-thickness skin micrografts.</a> Wound Repair and Regeneration. 25 (5), 816-827 (2017).</li><li>Franco, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fractional+skin+harvesting:+device+operational+principles+and+deployment+evaluation.">Fractional skin harvesting: device operational principles and deployment evaluation.</a> Journal of Medical Devices. 8 (4), 041005 (2014).</li><li>Rasmussen, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+autologous/allogeneic+constructs+for+skin+regeneration.">Chimeric autologous/allogeneic constructs for skin regeneration.</a> Military Medicine. 179, 71-78 (2014).</li><li>Ter Horst, B., Chouhan, G., Moiemen, N. S., Grover, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+keratinocyte+delivery+in+burn+wound+care.">Advances in keratinocyte delivery in burn wound care.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 123, 18-32 (2018).</li><li>Wong, V. W., Levi, B., Rajadas, J., Longaker, M. T., Gurtner, G. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+treatment+of+traumatic+scars+with+an+emphasis+on+ablative+fractional+laser+resurfacing:+consensus+report.">Laser treatment of traumatic scars with an emphasis on ablative fractional laser resurfacing: consensus report.</a> Journal of the American Medical Association Dermatology. 150 (2), 187-193 (2014).</li><li>Hogan, S., Velez, M. W., Ibrahim, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microneedling:+a+new+approach+for+treating+textural+abnormalities+and+scars.">Microneedling: a new approach for treating textural abnormalities and scars.</a> Seminars in Cutaneous Medicine and Surgery. 36 (4), 155-163 (2017).</li><li>Manuskiatti, W., Fitzpatrick, R. E., Goldman, M. 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Los métodos aquí descritos están diseñados para permitir la colección de tejido microcolumns en cantidades suficientes para en vivo grandes estudios con animales, utilizando herramientas de suministros de laboratorio disponibles en el mercado. Este aparato ha sido utilizado previamente en la recolección del tejido de piel humana suprimido4,9 como cerdos en piel3. Los parámetros específicos descritos son aquellos que fueron...

Injerto de piel autólogo es la base de la reparación de la herida, pero está limitado por la escasez de sitio donante y la morbilidad, llevando a los esfuerzos en las últimas décadas para desarrollar nuevas opciones terapéuticas para reemplazar convencionales injertos de piel1,2 . Recientemente hemos desarrollado un método alternativo de recolección piel para aprovechar las ventajas del injerto de piel de grosor total reduciendo al mínimo morbosidad del sitio donante. Recogida de piel de grosor total en forma de pequeño (~0.5 mm de diámetro) "microcolumns", sitios dispensadores de aceite son capaces de sanar rápidamente y sin dejar cicatrices en circunstancias normales (para posibles excepciones, véase la sección discusión)3. Microcolumns puede ser aplicado directamente en camas de la herida para acelerar el cierre de la herida, reducir la contracción3y restaurar una amplia gama de tipos de células epidérmicas y dérmicas y las estructuras adnexal funcional4, muchos de los cuales carecen de injerto de piel del partir-grueso convencional o actual Bioingeniería de sustitutos de piel,5. La capacidad de microcolumns para aumentar la curación y de sus sitios de donantes a curar sin dejar cicatrices tanto sido independientemente validados por otros grupos de investigación6,7.
Previamente hemos desarrollado un sistema de recolección de laboratorio para permitir la colección de microcolumns en escala de8; sin embargo, este sistema se compone de muchos componentes modificados para requisitos particulares que no están ampliamente disponibles. Aquí, describimos en detalle el proceso de recolección de agujas, así como sistemas de recolección simple, sobre todo componentes estándar, que puede utilizarse para lograr alto volumen cosecha produciendo. El aparato descrito en este manuscrito es conveniente para la vitro y el trabajo animal, pero no para el uso en seres humanos. Un dispositivo clínico con autorización de la FDA para la aplicación de esta técnica en seres humanos está disponible en el mercado pero no se discutirá en detalle aquí.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:688px;" width="687">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Diamond wheel</td>
			<td style="width:135px;">Dremel</td>
			<td style="width:119px;">545</td>
			<td style="width:219px;"></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:216px;">Hypodermic needle (19G)</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-840-98</td>
			<td style="width:219px;">Other needle sizes could be used, depending on experimental needs</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:216px;">Stome wheel</td>
			<td style="width:135px;">Dremel</td>
			<td style="width:119px;">540</td>
			<td style="width:219px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Syringe (20mL with luer lock)</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">22-124-967</td>
			<td style="width:219px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:216px;">Suction adapter</td>
			<td style="width:135px;">Tulip Medical</td>
			<td style="width:119px;">PA20BD</td>
			<td style="width:219px;">Optional, for high volume harvesting</td>
		</tr>
		<tr height="70">
			<td height="70" style="height:71px;width:216px;">Suction canister</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">19-898-212</td>
			<td style="width:219px;">Optional, for high volume harvesting. Sterilize before use.</td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:59px;width:216px;">Suction tubing</td>
			<td style="width:135px;">Medline</td>
			<td style="width:119px;">DYND50216H</td>
			<td style="width:219px;">Optional, for high volume harvesting</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

apparatus for harvesting tissue microcolumns

Este manuscrito describe el proceso de producción de un aparato de laboratorio, componentes estándar, que puede utilizarse para recoger microcolumns del tejido cutáneo de espesor total. El tamaño pequeño de la microcolumns permite que los donantes sitios curar rápidamente sin causar sitio dispensador de aceite marcar con una cicatriz, mientras cosecha tejido de grosor total permite la incorporación de todos los componentes celulares y extracelulares del tejido de la piel, los incluidos asociados con regiones dérmicas más profundas y las estructuras anexiales de la piel, que todavía tienen que ser reproducido con éxito utilizando la técnicas de ingeniería convencional. El microcolumns puede ser aplicado directamente en las heridas de la piel para aumentar la sanación, o pueden utilizarse como fuente de tejido autólogo de la célula de otros enfoques de ingeniería de tejidos. Las agujas de cosecha se hacen modificando agujas hipodérmicas estándar, y puede ser usados solo para cosechar pequeñas cantidades de tejido o combinados con un sistema de simple colección basada en succión (también hecho de suministros de laboratorio comúnmente disponibles) para alto volumen de la cosecha para facilitar los estudios en modelos animales grandes.

Las agujas de cosecha deben ser capaces de recoger microcolumns del tejido de piel de espesor total con aproximadamente un 80-90% de éxito, y debe contener cada microcolumna epidermis, dermis y algunas grasa subcutánea (figura 4). Si la tasa de éxito de la cosecha es baja, o si resulta difícil insertar una aguja en el tejido, luego una aguja nueva es probable que se necesita. Si la tasa de éxito para la cosecha es consistentemente baja, incluso con aguja...

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Apparatus for Harvesting Tissue Microcolumns

Aquí se describe un protocolo para la producción de la cosecha las agujas que pueden utilizarse para recoger tejidos de la piel de espesor total sin causar donantes sitio marcar con una cicatriz. Las agujas pueden combinarse con un sistema de recolección simple para lograr la recolección de gran volumen.

Aparato para la recolección de tejido Microcolumns

This manuscript describes the production process for a laboratory apparatus, made from off-the-shelf components, that can be used to collect microcolumns ...

Este método puede ayudar a responder preguntas esenciales en el campo de regeneración de tejido de la piel que es cómo reemplazar los diversos tipos celulares y estructuras que están contenidos en la piel natural. La principal ventaja de esta técnica es que la piel autóloga de espesor completo se puede recoger con una morbilidad mínima en el sitio del donante. Demostrando el procedimiento estará Bill Farinelli, quien es un investigador asociado en nuestro laboratorio.Comience este procedimiento con la configuración de la etapa de producción como se describe en el protocolo de texto. Instale dos ruedas de corte concéntricamente en la herramienta giratoria. Utilice una rueda de corte de diamante de rejilla inferior más pequeña sobre una rueda de corte de piedra de rejilla más grande.Coloque una fuente de luz aérea con un brazo ajustable sobre la herramienta giratoria con la luz dirigida a las ruedas de corte. Para mejorar la visualización, coloque un microscopio de disección sobre la configuración de producción para que el ocular se centre en los discos de corte. Al remodelar la punta de la aguja, use gafas protectoras y una máscara quirúrgica para evitar que las partículas de metal fino entren en los ojos o las vías respiratorias.Elija agujas hipodérmicas del tamaño de calibre adecuado en función de los requisitos experimentales. Marque la longitud prevista en cada aguja de cosecha. Baje la aguja perpendicularmente a la herramienta giratoria con la potencia encendida utilizando el borde del disco de corte exterior para cortar la longitud excesiva de la aguja en el punto marcado.Conecte la aguja contundente acortada al conector de bloqueo Luer hembra en la etapa de producción. Ajuste la etapa de rotación horizontal de modo que la aguja esté en un ángulo de 12 grados paralelo a los discos de corte de la herramienta giratoria. Encienda la luz superior y ajuste su posición mientras observa la aguja bajo aumento hasta que la luz se refleje en la línea media de la aguja.Encienda la herramienta giratoria. A continuación, utilice la etapa de traducción para avanzar la aguja hacia el disco de corte interior. Siga avanzando lentamente la aguja contra el disco de corte hasta que el disco de corte alcance aproximadamente la línea media de la aguja.Mueva lentamente la superficie de la aguja de corte de la rueda interior del diamante a la rueda exterior de piedra para terminar la superficie de la aguja de corte con un pulido más fino. Retire la aguja del disco de corte. Usando la etapa de rotación vertical, gire la aguja 180 grados.Repita estos pasos para remodelar el otro lado de la aguja. Ahora retire la aguja de la etapa de producción. Limpie el orificio interior con un alambre metálico ligeramente más pequeño que el diámetro interior de la aguja.Con un palo de madera afilado, retire las rebabas que aún puedan estar unidas a los bordes de la aguja recién formada. Cuando se necesite un gran volumen de microcolumnas, retire el émbolo de una jeringa de 20 mililitros. A continuación, conecte la jeringa a un adaptador de aspiración.Complete el conjunto fijando una aguja de cosecha a la jeringa. Utilice una pieza de tubo de succión estéril para conectar el adaptador de succión a un recipiente de succión estéril. Asegúrese de que el aparato de cosecha esté conectado a una entrada de recipiente que permita que el fluido fluya hacia el recipiente sin obstáculos.Ahora conecte el aparato a una fuente de presión negativa. Cosecha las microcolumnas insertando la aguja de cosecha en la piel. Sumerja intermitentemente la aguja de cosecha en un recipiente de solución salina estéril durante el procedimiento de recolección para vaciar el sistema.Mantenga a mano un alambre metálico o una aguja ligeramente más pequeña que el diámetro interno de la aguja de cosecha. Si la aguja se obstruye, se puede limpiar insertando el alambre metálico en el orificio de la aguja. Cuando se haya acumulado la cantidad deseada de microcolumnas en el contenedor, desconecte el dispositivo de la succión.A continuación, vierta el contenido de la bombona de succión a través de un filtro para recoger las microcolumnas. Aquí se muestra una aguja de cosecha terminada vista desde el frente y desde el costado. Observe los dos puntos de corte en la punta.Las agujas de cosecha deben ser capaces de recoger microcolumnas de tejido cutáneo de espesor completo con una tasa de éxito aproximada de 80 a 90%. En esta figura, las marcas de verificación representan un milímetro. Cada microcolumna debe contener epidermis, dermis y algo de grasa subcutánea.Las microcolumnas se pueden aplicar directamente a la cicatrización de heridas o se pueden combinar con diferentes materiales de matriz para producir construcciones combinadas. Las microcolumnas también se pueden mantener en cultivo para estudios in vitro. Mientras se realiza una cosecha de gran volumen, es importante recordar incorporar un lavado salino intermitente.Aunque este método fue diseñado para la reparación de heridas en la piel, un principio similar podría aplicarse a otros sistemas de órganos como los músculos donde se necesita injerto de tejido autólogo.

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