Name: potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation at JoVE.com

Steun: Fondation de Projet de L 'Université de Nantes, les Bagouz' à Manon, La Ligue contre le Cancer comité de Loire-Atlantique, comité du Morbihan en comité de Vendée, une roos pour S.A.R.A.H, L'Etoile de Martin en la Société Française de Lutte contre les Kanker et les leucémies de L'Enfant et de L'adolescent (SFCE). M.B. en J.F. worden ondersteund door La Ligue Contre Le Cancer. De auteurs bedanken de UTE-faciliteit van de structuur Fédérative de Recherche François Bonamy. De auteurs worden Dr. S. Suzin (Inserm, Parijs) voor het verstrekken van de IMR5 cellen en mevrouw H. Estéphan ook bedanken voor haar technische bijstand.

Huisvesting van dieren en experimentele procedure werden goedgekeurd door de Franse regering (overeenkomsten #C44-278 en #APAFIS 03479.01). Verzorging van de dieren en de procedures werden uitgevoerd onder Richtlijn EU 2010/63/EG en Franse wet #2013-118 betreffende de bescherming van dieren die voor wetenschappelijke doeleinden worden gebruikt.
1. evaluatie van de interactie van de Drug tussen mAb 8B6 en Topotecan In Vitro
<ol><li>bereiding van de monsters van de 96-Wells</s...

<ol>
	<li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+basis,+experimental+design,+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies.">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li><li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+in+combating+cancer.">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li><li>Zahreddine, H., Borden, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+insights+into+drug+resistance+in+cancer.">Mechanisms and insights into drug resistance in cancer.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 28 (2013).</li><li>Martin, T. P., Baguley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re:+"Postoperative+validation+of+bone-anchored+implants+in+the+single-sided+deafness+population."+Snapp+et+al.+Otol+Neurotol+2012:+33;291-6.">Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).</li><li>Choi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+lung+cancer+cells+by+altered+dimerization+of+HSP27.">Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27.</a> Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).</li><li>Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies:+versatile+platforms+for+cancer+immunotherapy.">Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).</li><li>Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+review+of+the+role+of+Fc+gamma+receptor+polymorphisms+in+the+response+to+monoclonal+antibodies+in+cancer.">A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 6, 1 (2013).</li><li>Kowalczyk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GD2-specific+14G2a+monoclonal+antibody+induces+apoptosis+and+enhances+cytotoxicity+of+chemotherapeutic+drugs+in+IMR-32+human+neuroblastoma+cells.">The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells.</a> Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).</li><li>Retter, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+proapoptotic+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody+and+evaluation+of+its+therapeutic+effect+on+melanoma+and+small+cell+lung+carcinoma+xenografts.">Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts.</a> Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).</li><li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+induction+of+human+lung+cancer+cell+line+in+multicellular+heterospheroids+with+humanized+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody.">Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody.</a> Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).</li><li>Cochonneau, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+arrest+and+apoptosis+induced+by+O-acetyl-GD2-specific+monoclonal+antibody+8B6+inhibits+tumor+growth+in+vitro+and+in+vivo.">Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo.</a> Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).</li><li>Chou, T. C., Martin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CompuSyn for drug combinations: PC software and user&#8217;s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , (2005).</li><li>Alvarez-Rueda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+monoclonal+antibody+to+O-acetyl-GD2+ganglioside+and+not+to+GD2+shows+potent+anti-tumor+activity+without+peripheral+nervous+system+cross-reactivity.">A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity.</a> PLoS One. 6 (9), e25220 (2011).</li><li>Faraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma+chemotherapy+can+be+augmented+by+immunotargeting+O-acetyl-GD2+tumor-associated+ganglioside.">Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside.</a> Oncoimmunology. 7 (1), e1373232 (2017).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body+condition+scoring:+a+rapid+and+accurate+method+for+assessing+health+status+in+mice.">Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice.</a> Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).</li><li>Teicher, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+for+in+vitro+and+in+vivo+synergy.">Assays for in vitro and in vivo synergy.</a> Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).</li><li>White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+nonlinear+mixture+response+surface+paradigm+for+the+study+of+synergism:+a+three+drug+example.">A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example.</a> Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+XTT+cell+proliferation+assay+applied+to+cell+layers+embedded+in+three-dimensional+matrix.">The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix.</a> Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).</li><li>Thompson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy+of+topotecan+in+combination+with+vincristine+for+treatment+of+pediatric+solid+tumor+xenografts.">Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts.</a> Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).</li><li>Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+design+and+sample+size+determination+for+testing+synergism+in+drug+combination+studies+based+on+uniform+measures.">Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures.</a> Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).</li><li>Tang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+EPHB6,+EFNB2,+and+EFNB3+expressions+in+human+neuroblastoma.">Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma.</a> Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).</li><li>Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+metastasis+of+human+breast+carcinomas+with+Matrigel+in+athymic+mice.">Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).</li><li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines.">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).</li><li>Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topotecan+plus+cyclophosphamide+as+maintenance+chemotherapy+for+children+with+high-risk+neuroblastoma+in+complete+remission:+short-term+curative+effects+and+toxicity.">Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).</li><li>Cheung, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglioside+GD2+specific+monoclonal+antibody+3F8:+a+phase+I+study+in+patients+with+neuroblastoma+and+malignant+melanoma.">Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma.</a> Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human.">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Dayde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+burden+influences+exposure+and+response+to+rituximab:+pharmacokinetic-pharmacodynamic+modeling+using+a+syngeneic+bioluminescent+murine+model+expressing+human+CD20.">Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20.</a> Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).</li><li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgamma(null)+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection.">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li><li>Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Responses+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Muscle+Invasive+Bladder+Cancer.">Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer.</a> Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).</li></ol>

Om te voorspellen het effect van de interactie van de drug, drie methoden kunnen worden gebruikt: de isobologram methodologie17, de niet-lineaire mengsel model18en de combinatie index1. Combinatie index analyse is de meest gebruikte omdat de toepassing ervan wordt vereenvoudigd door de beschikbaarheid van een gebruiksvriendelijke computerprogramma. Voor dit doel, we eerst de dosis / effect-reactie van elke agent gebruikt alleen of in combinatie, door...

De conventionele aanpak in de behandeling van een groot aantal verschillende soorten kanker was gebaseerd op monotherapie. Zelfs als het nog steeds in veel gevallen gebruikt wordt, ontmoette deze methode verscheidene obstakels leidt tot kiezen voor gecombineerde therapieën2. In het bijzonder zijn de kankercellen gevoeliger voor het ontwikkelen van weerstand bij het behandeld met een enkele drug door inducerende alternatieve overleving mechanismen3, wat resulteert in therapeutisch falen in patiënten4. Bovendien, in monotherapie, drugs zijn meestal bestuurd bij een hoge dosis. Deze situatie vaak resulteert in het vóórkomen van sterke dosis-afhankelijke bijwerkingen die kunnen worden ondraaglijk en kracht van de artsen om te stoppen met de behandeling2. Om deze redenen, de vereniging van antikanker moleculen is nu de voorkeur aan monotherapie.
Ideale drug combinaties zou die in synergie tegen tumorcellen, zonder verhoogde toxiciteit tegen normale cellen handelen. Synergie verwijst naar de interactie van twee of meer drugs die produceert een therapeutisch effect groter is dan de som van elke individuele drug afzonderlijk handelen. Dergelijke interactie kunnen resulteren in betere klinische therapeutische werkzaamheid2. Het beperkt behandeling weerstand verhoogt de werkzaamheid en toxiciteit2kan ook worden verminderd. In feite, kan de dosering van elk medicijn te verlagen hun bijwerkingen door te richten verschillende routes worden verminderd. Bovendien kan een van de moleculen ook dienen als een sensibiliserende agent tegen kankercellen. Het effect van de tweede drug kan worden versterkt op gesensibiliseerde cellen en minder doseringen kunnen gebruikte5.
Gecombineerde therapie kan bevatten twee of meer chemotherapeutische geneesmiddelen en/of biologics, zoals monoclonal antilichamen6. Deze mAbs speciaal te richten op cellen uitspreken van een cel oppervlakte-antigeen van belang en zijn in staat om te doden van tumorcellen via immunologische wegen, met inbegrip van antilichaam afhankelijk cel-gemedieerde cytotoxiciteit (ADCC), met de betrokkenheid van immuun effector cellen 7, en aanvulling-afhankelijke cytotoxiciteit (CDC)6. Ze kunnen ook handelen via een niet-immunologische mechanisme gemedieerd door apoptosis8,9,10,11. In dit geval kan de inductie van het proces van geprogrammeerde celdood sensibiliseren kankercellen verzwakken van hun functie en de bijbehorende chemotherapeutische drugs doeltreffender te maken in een lagere dosering. Als zodanig, proapoptotic mAb zijn goede kandidaten voor het ontwerpen van combinatie regimes met Antineoplastische drugs.
Verschillende wiskundige modellen zijn beschreven om te beoordelen van de drug synergie; een van hen is gebaseerd op de combinatie index methode1. Deze methode is gebaseerd op het beginsel van de mediaan-effect ontwikkeld door Chou1. De mediaan-effect vergelijking correleert de dosis van de drug en drug effecten als volgt.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
Hier, is D de dosis van het geneesmiddel; DM is de mediaan-effect dosis; FA is de breuk die beïnvloed door de dosis; m is de exponent die de vorm van de dosis / effect-perceel1betekent. De dosis van de mediaan-effect wordt gebruikt voor het berekenen van de dosis Dx van een medicament dat remt of "x" procent van cellen doodt. De CI-waarde wordt dan berekend om te beoordelen van het additieve effect van de combinatie van drugs, als volgt1.
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
CI de waarde 1 geeft aan een additief effect en CI de waarde < 1 geeft aan een synergie-effect, terwijl de waarde van een CI van > 1 geeft aan antagonisme1. De toepassing van deze methode wordt verder bevorderd door de beschikbaarheid van een computerprogramma, CompuSyn, die synergie en antagonisme op alle doses bepaalt of effect-niveaus gesimuleerd automatisch12.
Onze fractie heeft ontwikkeld de mAb 8B6 specifiek voor O-acetyl-GD2 ganglioside (OAcGD2) neuroblastoom antigeen13 en verder aangetoond dat deze mAb staat voor het opwekken van de dood van de cel met kenmerken van apoptosis11is. Om te testen of mAb 8B6 kunnen cellen van het neuroblastoom aan de Antineoplastische agent topotecan sensibiliseren, aangepast we de bovengenoemde methode ontwikkeld door Chou1. Eerst bepalen we de effectieve dosis 50 (ED50) waarden van mAb 8B6 en topotecan. Vervolgens de cellen van het neuroblastoom met equipotent verhoudingen van de twee verbindingen op basis van ED50 waarden zijn blootgesteld aan de CI-waarden met behulp van de bovengenoemde simulatiesoftware bepalen. Met deze methode kunt ons om aan te tonen van de synergie tussen mAb 8B6 en topotecan in vitro. Vervolgens beschrijven we een protocol voor de beoordeling van de werkzaamheid en de veiligheid van deze combinatie regime in vivo. Dit protocol kan gemakkelijk worden toegepast om te selecteren van krachtige en veilige antikanker mAb en chemotherapeutische agent combinaties in preklinische studies. Een schematische weergave van deze studie wordt gegeven in Figuur 1.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1389px;" width="1390">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Cell Proliferation kit (MTT)</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">CompuSyn software</td>
			<td style="width:161px;">ComboSyn</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Combosyn can be downloaded for free at http://www.combosyn.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">BIO-1556</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:161px;">Eurobio</td>
			<td style="width:132px;">CVFSVFF00-01</td>
			<td style="width:852px;">10% heat-inactivated fetal calf serum in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Firefox&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Mozilla Corporation</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Firefox can be downloaded for free at http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Heat lamp</td>
			<td style="width:161px;">Verre&#38;Quartz</td>
			<td style="width:132px;">4003/1R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Human neuroblastoma IMR-5 cell line</td>
			<td style="width:161px;">Accegen Biotechnology</td>
			<td style="width:132px;">ABC-TC0450</td>
			<td style="width:852px;">IMR-5 is a clone of the human neuroblastoma cell line IMR32 5459762. IMR-5 cells were generously provided by Dr. Santos Susin (U.872, Paris, France)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">25030-024</td>
			<td style="width:852px;">2 mM in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Lysis solution&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">mAb 8B6</td>
			<td style="width:161px;">University of Nantes</td>
			<td style="width:132px;">N/A</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Matrigel</td>
			<td style="width:161px;">Corning</td>
			<td style="width:132px;">354248</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Multiskan FC</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific&#160;</td>
			<td style="width:132px;">N08625</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 21G 1 &#189;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">BD Microlance</td>
			<td style="width:132px;">304432</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 25G 1</td>
			<td style="width:161px;">Terumo</td>
			<td style="width:132px;">NN-2525R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">NSG mice</td>
			<td style="width:161px;">Charles River Laboratories</td>
			<td style="width:132px;">5557</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Nunc MicroWell 96-well microplates</td>
			<td style="width:161px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:132px;">167008</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS</td>
			<td style="width:161px;">VWR</td>
			<td style="width:132px;">L182-10</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS, 0,05% EDTA</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PC that runs windows 7</td>
			<td style="width:161px;">Microsoft</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Windows 7 can be purchased at http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">15140-122</td>
			<td style="width:852px;">100 units/mL penicillin and 100 mg/mL streptomycin in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Reagent reservoir</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific</td>
			<td style="width:132px;">8094</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Rodent restrainer</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">TV-150-SM</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">31870-025</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Syringe 1 mL</td>
			<td style="width:161px;">Henke Sass Wolf</td>
			<td style="width:132px;">5010.200V0</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Topotecan</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">T2705</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation

Potentiëring van vijandige monoclonal antilichamen (mAb) door chemotherapeutische agenten vormt een waardevolle strategie voor het ontwerpen van effectiever en veiliger therapie tegen kanker. Wij bieden hier een protocol ter identificatie van een rationele combinatie bij het preklinische stap. Eerst beschrijven we een cel-gebaseerde test om te beoordelen van de synergie tussen antikanker mAb en cytotoxische medicatie, die gebruikmaakt van de combinatie index vergelijking van Chou en Talalay1. Het gaat hierbij om de meting van tumor cel drugs - en antilichaam-gevoeligheid met behulp van een MTT assay, gevolgd door een analyse van de geautomatiseerde computer voor het berekenen van de waarden van de index (CI) combinatie. CI waarden van < 1 geven synergie tussen geteste mAbs en cytotoxische stoffen1. Om te bevestigen de in vitro bevindingen in vivo, beschrijven we verder een methode voor de beoordeling van de werkzaamheid regime combinatie in een xenograft tumor model. In dit model vertragingen de gecombineerde regime aanzienlijk tumorgroei, wat in een aanzienlijke langere overleving in vergelijking met single-agent besturingselementen resulteert. Nog belangrijker is, blijkt de in vivo experimenten dat de combinatie regime wordt goed verdragen. Dit protocol staat toe de doeltreffende evaluatie van antikanker drug combinaties in preklinische modellen en de identificatie van rationele combinatie in klinische proeven te evalueren.

De representatieve resultaten en cijfers zijn aangepast met toestemming van eerder gepubliceerde werk14.
Anti-OAcGD2 mAb 8B6 verbetert synergetisch de remmende effecten van Topotecan op neuroblastoom celgroei lijn:
Om de drug en de concentraties van het antilichaam moet worden gebruikt voor de beoordeling van de synergie tussen ...

Watch this Scientific Journal Video about Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation at JoVE.com

Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

Dit protocol wordt beschreven hoe synergie tussen een antikanker antilichaam en Antineoplastische drugs in preklinische modellen met behulp van de combinatie index vergelijking van Chou en Talalay beoordelen.

Potentiëring van antikanker antilichaam werkzaamheid door Antineoplastische Drugs: detectie van antilichaam-drug synergie met de combinatie Index vergelijking

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

Immunotherapie in combinatie met chemotherapie is een innovatieve aanpak om efficiënte therapie bij kanker te ontwikkelen. De belangrijkste doelstellingen zijn het bereiken van synergetische, therapeutische effecten, dosis- en toxiciteitsreductie, en het minimaliseren of vertragen van de inductie van resistentie tegen geneesmiddelen. Echter, om praktische en ethische redenen, is het niet mogelijk om synergisme bij patiënten te bepalen. Voordat de combinatie in klinische proeven rechtstreeks wordt uitgevoerd, moeten dus prenicaptor-combinatiestudies, in vitro en/of bij dieren, worden uitgevoerd om de beweegredenen voor klinische studies te verkrijgen. Een eenvoudige robuuste methode voor de kwantificering van synergisme tussen geneesmiddelen is gebaseerd op combinatie-indexvergelijking ontwikkeld door Shouan Talale, zoals geïllustreerd in deze video. Met behulp van deze methode, en de geautomatiseerde simulatie, bewijzen we hier, het synergisme tussen Monoclonal Antibody 8B6, dat specifiek is voor de O-Acetyl-GD2 Ganglioside neuroblastoom antigeen en het chemotherapeutische medicijn Topotecan op neuroblastoomcellen. Kortom, na het bepalen van de effectieve dosis 50 waarden van elke verbinding in de menselijke IMO, 5 neuroblastoom cellijn, deze cellen werden geïntubeerd met billijke verhoudingen van de twee verbindingen, en de combinatie index waarden werden berekend met behulp van geautomatiseerde computersimulatie. Vervolgens bevestigden we deze resultaten in Vivo, in een IMO, 5 tumor xenografisch model. We kweekten IMR-5 cellen in een T75 fles, observeerden ze onder een microscoop, om celvloeiing te controleren. Asperate celmedium uit de kolf, wassen met 5 mL PBS. Voeg 3 mL van 0,05% EDTA/PBS-oplossing toe. Breng de kolf 3 minuten terug naar de couveuse. Bestudeer de celcultuur onder een microscoop voor celloslating. Voeg 10 mL volledig celmedium toe aan de kolf en breng de celsuspensie over in een steriele conische buis van 15 mL. Centrifuge gedurende vijf minuten bij 300 g.Count cellen met behulp van een hemocytometer. Verwijder en gooi de supernatant weg. Stel cellen opnieuw op in Complete Growth Medium.Pas het medium volume aan om de uiteindelijke concentratie van 100, 000 cellen/mL.Seed 84 putten, 96 goed kweekplaat met elk 10.000 cellen te verkrijgen, wat 100 microliter celsuspensie is. Incubeercellen gedurende 18 uur in de Cel Incubator.Verdun monoklonale antilichaam in 500 microliters van Complete Growth Medium om een antilichaam werkoplossing te verkrijgen met een monoklonale antilichaam concentratie 240 microgram per mL.Perform 5 tweevoudige seriële waanideeën zoals aangegeven in het protocol. Verdun het medicijn in 500 microliters van Complete Growth Medium om een medicijnwerkoplossing te verkrijgen met een uiteindelijke concentratie van 120 nanomolar. Voer 5, tweevoudige seriële wanen uit, zoals aangegeven in het protocol. Verdun op dezelfde manier het medicijn plus monoklonale anibodies oplossingen. Om tot de uiteindelijke concentratie te komen, breng je 50 microliter van elke medicijnoplossingen over in de overeenkomstige putten, zoals weergegeven in deze experimentele lay-out. Broed de cellen 72 uur in de couveuse. Voeg 10 microliter MTT reagens oplossing in elke put. Incubeer op 37 graden Celsius gedurende 4 uur. Voeg 100 microliter lycine-oplossing in elke put met behulp van een multichannel pipet en meng grondig door pipet. Incubeer op 37 graden Celsius gedurende 4 uur in een bevochtigde kamer. Bevrijd de absorberenden op 570 en 620 nanometer met behulp van een spectrofotometer. Bereken de cel levensvatbaarheid als volgt. Bereken de door de breuk aangetaste waarden met de volgende vergelijking. Voer de simulatiesoftware uit, klik op de nieuwe experimentknop om het hoofdvenster te verkrijgen. Typ de naam van het experiment. Klik op nieuwe single drug. Typ de naam. Typ de afkorting. Typ de concentratie-eenheid voor drugs. Voer gegevens 1 dosis en FA waarde in. Druk op Enter.Herhaal deze stap totdat alle gegevenspunten zijn ingevoerd. Klik op Finished.Volg dezelfde stappen om monoklonale antilichaamgegevenspunten in te voeren. Klik op New Drug Combo.Select drug en monoklonale antilichamen. Selecteer Constant Ratio.Klik op OK. Typ de naam. Typ de afkorting. Typ de verhouding monoklonale antilichaamverhouding. Voer gegevens in 1 dosis. Druk op Enter.The programma berekent automatisch de doses MonoclonAl Antibody 8B6 en combo. Voer gegevens 1 FA-waarde in.Druk op Enter.Herhaal deze stap totdat alle gegevenspunten zijn ingevoerd. Klik op Voltooid.Klik vervolgens op Rapport genereren.Selecteer geneesmiddel en monoklonale antilichaam en klik vervolgens op OK. Selecteer Combo en klik op OK. Selecteer Koptekst, CI-tabel en overzichtstabel en klik op OK. Typ de bestandsnaam en de analyse en klik op opslaan om het rapport te genereren. Het rapport wordt automatisch geopend in de standaard webbrowser. Het rapport bevat een overzichtstabelsectie met titel, datum, eindnaam, beschrijvingsnotitie, m, Dm en r-parameters, effectieve dosis 50 voor een agent die wordt gebruikt als monotherapie of in combinatie, en de combinatieindextabel voor elke combinatie bij de effectieve dosis 50, 75, 90 en 95.A combinatieindexwaarde minder dan 1 geeft synergisme aan. Een waarde gelijk aan een waarde geeft additiviteit aan. Een waarde groter dan 1 duidt op antagonisme. Dooi kelder membraan matrix 's nachts door het onderdompelen van de flacon in ijs in 4 graden C koelkast voor gebruik. Alle cultuur slijtage, of media in contact komen met de kelder membraan metrische moet worden gephilled. Oogst de cultuur IMR5. Breng de cellen 5 minuten naar een conische buis van 15 mL en centrifuge op 300 g. Gooi de supernatant weg. Was cellen met 15 mL ijskoude PBS twee keer. Bereid een celsuspensie voor 5 miljoen cellen per mL in ijskoude PBS. Breng de celsuspensie over in een microbuis van 1,5 mL. Draaibare kelder membraan matrix flacon. Voeg 1 volume van de kelder membraan matrix reagens, gemengd door pipetting te verkrijgen cel suspensie van 2,5 miljoen cellen per mL.Houd de cel suspensie op ijs. Scheer de flank van waar de injectie zal worden gedaan. Meng cellen en trek voorzichtig de celsuspensie in een 1 mL spuit gemonteerd met een 21 g naald. Controleer of er geen luchtbellen in de spuit zitten. Desintingsgebied van de muizen met een antiseptische oplossing. Knijp voorzichtig de muishuid op de flank tussen de vingers op de injectieplaats. Steek de naald precies in de huidplooi. Plaats de naald niet diep in het weefsel om onderhuidse injectie te verzekeren. Injecteer 100 microliter imr5-celopening onderhuids. Draai de spuit om vloeistofverspreiding te voorkomen en trek de naald terug. Monitor muizen op lichaamsgewicht en tumorgroei. Meet de lengte en breedte van de tumor met een kaliber. Bereken het tumorvolume met behulp van deze formule. Start therapie wanneer tumoren een gemiddeld volume van 50 tot 60 mm hebben bereikt

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescerende orthotope Muis Model van pancreaskanker

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Antikanker werkzaamheid van Photo Dynamische Therapie met longkanker-Gerichte Nanodeeltjes

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

Twee-dimensionale gelelektroforese gekoppeld aan massaspectrometrie methoden voor een analyse van menselijke hypofyse adenoom weefsel Proteoom

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping van Orthotopic Homograft (Syngeneic) van de alvleesklier ductaal adenocarcinoom lymfkliertest primaire KPC door Stroom Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Preklinische beoordeling van het topicale van de antikanker cumarine-OT48 door spheroïden, kolonie vorming Assays en Zebrafish Xenografts

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

Beoordeling van weerstand tegen Tyrosine Kinase remmers door een ondervraging van signaaltransductie trajecten door antilichaam Arrays

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Detection of Protease Activity by Fluorescent Peptide Zymography

Opsporen van Protease-activiteit door fluorescerende Peptide Zymography

The purpose of this method is to measure the proteolytic activity of complex biological samples. The samples are separated by molecular weight using ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

Karakteriseren ziekte-gerelateerde mutanten van RAF familie kinasen met behulp van een set van praktische en haalbare methoden

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Detection of Retrotransposition Activity of Hot LINE-1s by Long-Distance Inverse PCR

Detectie van de Retrotransponerings activiteit van Hot LINE-1S door de lange afstand inverse PCR

Long interspersed nuclear elements 1 (LINE-1s) are the only family of mobile genetic elements in the human genome that can move autonomously. They do so ...

Oncogenic Gene Fusion Detection Using Anchored Multiplex Polymerase Chain Reaction Followed by Next Generation Sequencing

Oncogene Genfusie detectie met behulp van verankerde multiplex polymerase kettingreactie gevolgd door sequenties van de volgende generatie

Gene fusions frequently contribute to the oncogenic phenotype of many different types of cancer. Additionally, the presence of certain fusions in samples ...