Name: potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation at JoVE.com

Accorder un soutien : Fondation de Projet de L 'Université de Nantes, les Bagouz » à Manon, La Ligue contre le Cancer comité de Loire-Atlantique, comité du Morbihan et comité de Vendée, une rose verser S.A.R.A.H, de L'Etoile de Martin et de la Société Française de Lutte contre les Les cancers et les leucémies de l’enfant et de l’adolescent (FSEA). M.B. et J.F. sont pris en charge par La Ligue Contre Le Cancer. Les auteurs remercient l’UTE-installation de la Structure Fédérative de Recherche Bonamy François. Les auteurs remercient également le Dr S. Suzin (Inserm, Paris) pour fournir les cellules IMR5 et Mme H. Estéphan pour son aide technique.

Logement des animaux et la procédure expérimentale ont été approuvées par le gouvernement Français (accords #C44-278 et #APAFIS 03479.01). Soins des animaux et des procédures ont été menées en vertu de la directive européenne 2010/63/UE et droit Français #2013-118 sur la protection des animaux utilisés à des fins scientifiques.
1. évaluation de l’Interaction médicamenteuse entre mAb 8B6 et le topotécan In Vitro
<ol><li>préparation des échantillons de 96 ...

<ol>
	<li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+basis,+experimental+design,+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies.">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li><li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+in+combating+cancer.">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li><li>Zahreddine, H., Borden, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+insights+into+drug+resistance+in+cancer.">Mechanisms and insights into drug resistance in cancer.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 28 (2013).</li><li>Martin, T. P., Baguley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re:+"Postoperative+validation+of+bone-anchored+implants+in+the+single-sided+deafness+population."+Snapp+et+al.+Otol+Neurotol+2012:+33;291-6.">Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).</li><li>Choi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+lung+cancer+cells+by+altered+dimerization+of+HSP27.">Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27.</a> Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).</li><li>Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies:+versatile+platforms+for+cancer+immunotherapy.">Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).</li><li>Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+review+of+the+role+of+Fc+gamma+receptor+polymorphisms+in+the+response+to+monoclonal+antibodies+in+cancer.">A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 6, 1 (2013).</li><li>Kowalczyk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GD2-specific+14G2a+monoclonal+antibody+induces+apoptosis+and+enhances+cytotoxicity+of+chemotherapeutic+drugs+in+IMR-32+human+neuroblastoma+cells.">The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells.</a> Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).</li><li>Retter, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+proapoptotic+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody+and+evaluation+of+its+therapeutic+effect+on+melanoma+and+small+cell+lung+carcinoma+xenografts.">Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts.</a> Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).</li><li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+induction+of+human+lung+cancer+cell+line+in+multicellular+heterospheroids+with+humanized+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody.">Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody.</a> Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).</li><li>Cochonneau, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+arrest+and+apoptosis+induced+by+O-acetyl-GD2-specific+monoclonal+antibody+8B6+inhibits+tumor+growth+in+vitro+and+in+vivo.">Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo.</a> Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).</li><li>Chou, T. C., Martin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CompuSyn for drug combinations: PC software and user&#8217;s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , (2005).</li><li>Alvarez-Rueda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+monoclonal+antibody+to+O-acetyl-GD2+ganglioside+and+not+to+GD2+shows+potent+anti-tumor+activity+without+peripheral+nervous+system+cross-reactivity.">A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity.</a> PLoS One. 6 (9), e25220 (2011).</li><li>Faraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma+chemotherapy+can+be+augmented+by+immunotargeting+O-acetyl-GD2+tumor-associated+ganglioside.">Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside.</a> Oncoimmunology. 7 (1), e1373232 (2017).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body+condition+scoring:+a+rapid+and+accurate+method+for+assessing+health+status+in+mice.">Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice.</a> Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).</li><li>Teicher, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+for+in+vitro+and+in+vivo+synergy.">Assays for in vitro and in vivo synergy.</a> Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).</li><li>White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+nonlinear+mixture+response+surface+paradigm+for+the+study+of+synergism:+a+three+drug+example.">A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example.</a> Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+XTT+cell+proliferation+assay+applied+to+cell+layers+embedded+in+three-dimensional+matrix.">The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix.</a> Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).</li><li>Thompson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy+of+topotecan+in+combination+with+vincristine+for+treatment+of+pediatric+solid+tumor+xenografts.">Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts.</a> Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).</li><li>Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+design+and+sample+size+determination+for+testing+synergism+in+drug+combination+studies+based+on+uniform+measures.">Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures.</a> Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).</li><li>Tang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+EPHB6,+EFNB2,+and+EFNB3+expressions+in+human+neuroblastoma.">Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma.</a> Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).</li><li>Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+metastasis+of+human+breast+carcinomas+with+Matrigel+in+athymic+mice.">Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).</li><li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines.">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).</li><li>Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topotecan+plus+cyclophosphamide+as+maintenance+chemotherapy+for+children+with+high-risk+neuroblastoma+in+complete+remission:+short-term+curative+effects+and+toxicity.">Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).</li><li>Cheung, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglioside+GD2+specific+monoclonal+antibody+3F8:+a+phase+I+study+in+patients+with+neuroblastoma+and+malignant+melanoma.">Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma.</a> Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human.">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Dayde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+burden+influences+exposure+and+response+to+rituximab:+pharmacokinetic-pharmacodynamic+modeling+using+a+syngeneic+bioluminescent+murine+model+expressing+human+CD20.">Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20.</a> Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).</li><li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgamma(null)+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection.">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li><li>Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Responses+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Muscle+Invasive+Bladder+Cancer.">Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer.</a> Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).</li></ol>

Pour prévoir l’effet des interactions médicamenteuses, trois méthodes peuvent être utilisées : la méthodologie d’isobologram17, le mélange non linéaire modèle18et la combinaison de l’index1. L’analyse d’index combinaison est le plus couramment utilisé parce que son application est simplifiée par l’existence d’un programme informatique facile à utiliser. À cette fin, nous avons d’abord caractérisé la réponse dose-effet...

L’approche conventionnelle dans le traitement d’un grand nombre de différents types de cancer reposait en monothérapie. Même si elle est encore utilisée dans de nombreux cas, cette méthode rencontre plusieurs obstacles menant à opter pour des thérapies combinées2. En particulier, les cellules cancéreuses sont plus susceptibles de développer une résistance lorsque traités avec un médicament unique en induisant la survie alternative mécanismes3, entraînant un échec thérapeutique dans les patients4. En outre, en monothérapie, médicaments sont généralement administrés à fortes doses. Souvent, cette situation se traduit par l’apparition de forts effets secondaires de dose-dépendante pouvant être intolérable et forcer les médecins à arrêter le traitement2. Pour ces raisons, l’association de molécules anticancéreuses est désormais préféré à une monothérapie.
Combinaisons de médicaments idéal serait ceux qui agissent en synergie contre les cellules tumorales, sans toxicité accrue contre les cellules normales. Synergie se réfère à l’interaction de deux ou plusieurs médicaments qui produit un effet thérapeutique supérieur à la somme de chaque médicament agissant séparément. Ces interactions peuvent entraîner de meilleure efficacité thérapeutique clinique2. Il limite la résistance au traitement, augmente l’efficacité et permet également de réduire la toxicité2. En fait, la dose de chaque médicament peut être réduite pour diminuer leurs effets secondaires en ciblant les différentes voies. En outre, une des molécules peut servir aussi comme un agent sensibilisant contre les cellules cancéreuses. L’effet de la deuxième drogue peut encore être amélioré sur les cellules sensibilisées et dosages moins peuvent être utilisé5.
Thérapie combinée peut inclure deux ou plusieurs médicaments chimiothérapeutiques et/ou des produits biologiques, tels que les anticorps monoclonaux6. Ces mAbs ciblent spécifiquement les cellules exprimant un antigène de surface de cellules d’intérêt et sont capables de tuer les cellules tumorales par des voies immunologiques, y compris la cytotoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps (ADCC), avec la participation de cellules effectrices immunitaire 7et6de la cytotoxicité dépendante du complément (CDC). Ils peuvent également agir par un mécanisme non immunologiques médié par apoptose8,9,10,11. Dans ce cas, l’induction du processus de mort cellulaire programmée peut sensibiliser les cellules cancéreuses, affaiblir leur fonction et accroître l’efficacité du médicament chimiothérapeutique associé à une posologie plus faible. Par conséquent, pro-apoptotique mAb sont de bons candidats pour la conception de schémas de combinaison avec des médicaments antinéoplasiques.
Différents modèles mathématiques ont été décrites pour évaluer la synergie de la drogue ; l’un d’eux repose sur la combinaison indice méthode1. Cette méthode repose sur le principe de la médiane-effet développé par Chou1. L’équation de la médiane-effet met en corrélation la dose de médicament et l’effet de la drogue comme suit.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
Ici, D est la dose de médicament ; DM est la dose médiane-effet ; Fa est la fraction affectée par la dose ; m est un exposant qui signifie la forme de la relation dose-effet tracé1. La dose médiane-effet est utilisée pour calculer la dose Dx d’un médicament qui inhibe ou tue «x» pour cent des cellules. La CI est ensuite calculée pour évaluer l’effet additif de la combinaison de médicaments, comme suit :1.
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
CI la valeur 1 indique un effet additif et la valeur CI < 1 indique un effet synergique, tandis qu’une valeur de CI de > 1 indique l’antagonisme1. L’application de cette méthode est facilitée par la disponibilité d’un programme d’ordinateur, CompuSyn, qui détermine la synergie et l’antagonisme à toutes les doses ou concentrations simulant automatiquement12.
Notre groupe a développé le mAb 8B6 spécifique pour O-acétyl-GD2 ganglioside (OAcGD2) neuroblastome antigène13 et encore démontré que cette mAb est capable d’induire la mort cellulaire avec les attributs de l’apoptose,11. Pour tester si mAb 8B6 peut sensibiliser les cellules de neuroblastome au topotécan agent antinéoplasique, nous avons adapté la méthode susmentionnée, développée par Chou1. Tout d’abord, nous déterminons les dose efficace 50 (ED50) valeurs mAb 8B6 et topotécan. Ensuite, les cellules de neuroblastome équipotentes ratios des deux composés selon ED50 valeurs sont exposées pour déterminer les valeurs de CI à l’aide du logiciel de simulation mentionnés ci-dessus. Cette méthode nous permet de démontrer la synergie entre mAb 8B6 et topotécan in vitro. Ensuite, les auteurs décrivent un protocole pour évaluer plus précisément la puissance et la sécurité de cette combinaison régime in vivo. Ce protocole peut être facilement appliqué pour sélectionner le mAb anticancéreux puissant et sûr et combinaisons agent chimiothérapeutique dans les études précliniques. Une représentation schématique de la présente étude est fournie à la Figure 1.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1389px;" width="1390">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Cell Proliferation kit (MTT)</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">CompuSyn software</td>
			<td style="width:161px;">ComboSyn</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Combosyn can be downloaded for free at http://www.combosyn.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">BIO-1556</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:161px;">Eurobio</td>
			<td style="width:132px;">CVFSVFF00-01</td>
			<td style="width:852px;">10% heat-inactivated fetal calf serum in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Firefox&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Mozilla Corporation</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Firefox can be downloaded for free at http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Heat lamp</td>
			<td style="width:161px;">Verre&#38;Quartz</td>
			<td style="width:132px;">4003/1R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Human neuroblastoma IMR-5 cell line</td>
			<td style="width:161px;">Accegen Biotechnology</td>
			<td style="width:132px;">ABC-TC0450</td>
			<td style="width:852px;">IMR-5 is a clone of the human neuroblastoma cell line IMR32 5459762. IMR-5 cells were generously provided by Dr. Santos Susin (U.872, Paris, France)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">25030-024</td>
			<td style="width:852px;">2 mM in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Lysis solution&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">mAb 8B6</td>
			<td style="width:161px;">University of Nantes</td>
			<td style="width:132px;">N/A</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Matrigel</td>
			<td style="width:161px;">Corning</td>
			<td style="width:132px;">354248</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Multiskan FC</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific&#160;</td>
			<td style="width:132px;">N08625</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 21G 1 &#189;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">BD Microlance</td>
			<td style="width:132px;">304432</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 25G 1</td>
			<td style="width:161px;">Terumo</td>
			<td style="width:132px;">NN-2525R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">NSG mice</td>
			<td style="width:161px;">Charles River Laboratories</td>
			<td style="width:132px;">5557</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Nunc MicroWell 96-well microplates</td>
			<td style="width:161px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:132px;">167008</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS</td>
			<td style="width:161px;">VWR</td>
			<td style="width:132px;">L182-10</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS, 0,05% EDTA</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PC that runs windows 7</td>
			<td style="width:161px;">Microsoft</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Windows 7 can be purchased at http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">15140-122</td>
			<td style="width:852px;">100 units/mL penicillin and 100 mg/mL streptomycin in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Reagent reservoir</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific</td>
			<td style="width:132px;">8094</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Rodent restrainer</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">TV-150-SM</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">31870-025</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Syringe 1 mL</td>
			<td style="width:161px;">Henke Sass Wolf</td>
			<td style="width:132px;">5010.200V0</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Topotecan</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">T2705</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation

Potentialisation de l’hostile des anticorps monoclonaux (ACM) par des agents chimiothérapeutiques constitue une stratégie utile pour concevoir un traitement efficace et sûr contre le cancer. Ici, nous fournissons un protocole pour identifier une combinaison rationnelle à l’étape préclinique. Tout d’abord, nous décrivons un essai afin d’évaluer la synergie entre mAb anticancéreux et médicaments cytotoxiques, qui utilise l’équation d’indice de combinaison de Chou et Talalay1cellule. Cela inclut la mesure de tumeur médicament et anticorps-sensibilité cellulaire à l’aide d’un test MTT, suivi d’une analyse informatique automatisé pour calculer les valeurs d’index (CI) de combinaison. Les valeurs de CI de < 1 indiquent la synergie entre mAbs testés et agents cytotoxiques1. Pour corroborer l’in vitro résultats in vivo, nous décrivons plus loin une méthode pour évaluer l’efficacité de traitement de combinaison dans un modèle de xénogreffe de tumeur. Dans ce modèle, le schéma thérapeutique combiné retarde significativement la croissance tumorale, qui se traduit par une survie prolongée significative par comparaison monothérapie témoins. Ce qui est important, l’expérimentation in vivo révèle que le régime de la combinaison est bien toléré. Ce protocole permet l’évaluation efficace des combinaisons de médicaments anticancéreux dans les modèles précliniques et l’identification d’une combinaison rationnelle d’évaluer dans les essais cliniques.

Les résultats représentatifs et les chiffres sont adaptées avec la permission du plus tôt de le œuvre publiée14.
Anti-OAcGD2 mAb 8B6 synergétique les effets inhibiteurs de topotécan sur la croissance de ligne cellulaire neuroblastome :
Pour établir la drogue et les concentrations d’anticorps à utiliser pour évaluer...

Watch this Scientific Journal Video about Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation at JoVE.com

Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

Ce protocole décrit comment évaluer les synergies entre un anticorps anticancéreux et médicaments anticancéreux dans les modèles précliniques en utilisant l’équation d’indice de combinaison de Chou et Talalay.

Potentialisation des anticorps anticancéreux efficacité par les médicaments anticancéreux : détection des anticorps-médicament synergie à l’aide de l’équation d’indice de combinaison

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

L’immunothérapie combinée à la chimiothérapie représente une approche novatrice pour développer un traitement efficace contre le cancer. Les principaux objectifs sont d’obtenir des effets synergiques, thérapeutiques, la dose et la réduction de la toxicité, et de minimiser ou de retarder l’induction de la résistance aux médicaments. Cependant, pour des raisons pratiques et éthiques, il n’est pas possible de déterminer le synergisme chez les patients. Ainsi, avant la combinaison directe dans les essais cliniques, des études de combinaison prenicaptor, in vitro, et/ou chez des animaux, devraient être réalisées pour obtenir la justification des études cliniques. Une méthode robuste simple pour la quantification du synergisme entre les médicaments est basée sur l’équation d’index de combinaison développée par Shouan Talale, comme illustré dans cette vidéo. En utilisant cette méthode, et sa simulation informatisée, nous prouvons ici, le synergisme entre monoclonal Anticorps 8B6, qui est spécifique pour l’antigène neuroblastome O-Acetyl-GD2 Ganglioside et le médicament chimiothérapeutique Topotecan sur les cellules neuroblastome. Brièvement, après avoir déterminé la dose effective 50 valeurs de chaque composé dans l’OMI humaine, 5 lignée cellulaire de neuroblastome, ces cellules ont été intubées avec des rapports équitables des deux composés, et les valeurs d’index de combinaison ont été calculées utilisant la simulation automatisée d’ordinateur. Nous avons ensuite confirmé ces résultats dans Vivo, dans un OMI, 5 tumeur xénographe modèle. Nous avons cultivé des cellules IMR-5 dans un flacon T75, nous les avons observées au microscope, pour vérifier la confluence cellulaire. Asperate milieu cellulaire de la fiole, laver avec 5 mL de PBS. Ajouter 3 mL de solution 0,05%EDTA/PBS. Remettre le flacon à l’incubateur pendant 3 minutes. Examiner la culture cellulaire au microscope pour le détachement cellulaire. Ajouter 10 mL de milieu cellulaire complet au flacon et transférer la suspension cellulaire dans un tube conique stérile de 15 mL. Centrifugeuse pendant cinq minutes à 300 g.Count cellules à l’aide d’un hémocytomètre. Retirer et jeter le surnatant. Suspendre à nouveau les cellules dans les puits à croissance complète Medium.Adjust le volume moyen pour obtenir la concentration finale de 100 000 cellules/mL.Seed 84 puits, 96 plaques de culture de puits avec 10 000 cellules chacune, soit 100 microlitres de suspension cellulaire. Incuber les cellules pendant 18 heures dans l’anticorps monoclonal Cell Incubator.Dilute dans 500 microlitres de Complete Growth Medium pour obtenir une solution de travail anticorps avec une concentration monoclonale d’anticorps 240 microgrammes par mL.Effectuer 5 illusions en série double comme indiqué dans le protocole. Diluer le médicament en 500 microlitres de milieu de croissance complet pour obtenir une solution de travail médicamenteuse avec une concentration finale de 120 nanomolaires. Effectuez 5, deux fois les illusions en série comme indiqué dans le protocole. Diluer de la même façon le médicament ainsi que des solutions anibodies monocones. Pour arriver à la concentration finale, transférez 50 microlitres de chaque solution médicamenteuses dans les puits correspondants, comme le montre cette disposition expérimentale. Incuber les cellules pendant 72 heures dans l’incubateur. Ajouter 10 microlitres de solution de reagent MTT dans chaque puits. Incuber à 37 degrés Celsius pendant 4 heures. Ajouter 100 microlitres de solution de lycine dans chaque puits à l’aide d’une pipette multicanal et bien mélanger au pipetage. Incuber à 37 degrés Celsius pendant 4 heures dans une chambre humidifiée. Débarrasser les absorbants à 570 et 620 nanomètres à l’aide d’un spectrophotomètre. Calculez la viabilité cellulaire comme suit. Calculez la fraction des valeurs affectées à l’aide de l’équation suivante. Exécutez le logiciel de simulation, cliquez sur le nouveau bouton d’expérience pour obtenir la fenêtre principale. Tapez le nom de l’expérience. Cliquez sur nouveau médicament unique. Tapez le nom. Tapez l’abréviation. Tapez l’unité de concentration de drogue. Entrez les données 1 dose et la valeur FA. Appuyez sur Enter.Repeat cette étape jusqu’à ce que tous les points de données sont entrés. Cliquez sur Finished.Follow les mêmes étapes pour entrer les points de données monoclonal anticorps. Cliquez sur New Drug Combo.Select médicament et anticorps monoclonaux. Sélectionnez Constant Ratio.Click OK. Tapez le nom. Tapez l’abréviation. Tapez le rapport monoclonal d’anticorps de drogue. Entrez les données 1 dose. Appuyez sur Enter.The programme calculera automatiquement les doses d’anticorps monoclonal 8B6 et combo. Entrez les données 1 valeur FA.Appuyez sur Enter.Repeat cette étape jusqu’à ce que tous les points de données sont entrés. Cliquez sur Finished.Then, cliquez sur Générer Report.Select médicament et anticorps monocoque, puis cliquez sur OK. Sélectionnez Combo, puis cliquez sur OK. Sélectionnez Header, CI Table et Summary Table, puis cliquez sur OK. Tapez le nom du fichier et l’analyse et cliquez sur enregistrer pour générer le rapport. Le rapport s’ouvre automatiquement dans son navigateur Web par défaut. Le rapport contient une section de tableau sommaire qui comprend le titre, la date, le nom final, la note de description, les paramètres m, Dm et r, la dose effective 50 pour l’agent utilisé comme monothérapie ou en combinaison, et le tableau d’index combiné pour chaque combinaison à la dose effective 50, 75, 90 et 95.A valeur de l’indice combiné inférieur à 1 indique le synergisme. Une valeur égale à une indique l’additivité. Une valeur supérieure à 1 indique l’antagonisme. Décongeler la matrice membranaire du sous-sol pendant la nuit en utilisant le flacon dans la glace dans un réfrigérateur de 4 degrés C avant utilisation. Tous les vêtements de culture, ou les médias en contact avec la métrique membranaire du sous-sol doivent être préchilled. Récoltez la culture IMR5. Transférer les cellules dans un tube conique de 15 mL et une centrifugeuse à 300 g pendant 5 minutes. Jeter le surnatant. Laver les cellules avec 15 mL de glace froide PBS deux fois. Préparer une suspension cellulaire pour 5 millions de cellules par mL dans le PBS glacé. Transférer la suspension cellulaire dans un microtube de 1,5 mL. Flacon de matrice de membrane de sous-sol pivotant. Ajouter 1 volume du réageni de matrice membranaire du sous-sol, mélangé par pipetting pour obtenir la suspension cellulaire de 2,5 millions de cellules par mL.Gardez la suspension cellulaire sur la glace. Raser le flanc de l’endroit où l’injection sera effectuée. Mélanger les cellules et dessiner soigneusement la suspension cellulaire dans une seringue de 1 mL montée avec une aiguille de 21 g. Vérifiez qu’il n’y a pas de bulles d’air dans la seringue. Désinfecter la zone d’inoculation des souris avec une solution antiseptique. Presser doucement la peau de la souris sur le flanc entre les doigts au site d’injection. Insérez l’aiguille exactement dans le dépliant. Ne placez pas l’aiguille profondément dans le tissu pour assurer l’injection sous-cutanée. Injecter 100 microlitres de suspension cellulaire IMR5 sous-cutanée. Faire pivoter la seringue pour éviter la propagation du liquide et retirer l’aiguille. Surveillez les souris pour le poids corporel et la croissance tumorale. Mesurer la longueur et la largeur de la tumeur avec un calibre. Calculer le volume tumoral à l’aide de cette formule. Commencez la thérapie lorsque les tumeurs ont atteint un volume moyen de 50 à 60 mm

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescent modèle de souris orthotopique de cancer du pancréas

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Recherche

Recherche en cancérologie

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Anticancer efficacité de la thérapie photodynamique avec Lung Cancer-ciblée Nanoparticules

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

Électrophorèse bidimensionnelle, couplée avec des méthodes de spectrométrie de masse pour l’analyse du protéome de tissus Adénome hypophysaire humaine

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophénotypage de homogreffe orthotopique (syngéniques) d’adénocarcinome Ductal pancréatique KPC primaires murines par cytométrie en flux

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Évaluation préclinique de la bioactivité de la OT48 de coumarine anticancéreux par sphéroïdes, colonie Formation essais et xénogreffes de poisson-zèbre

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

Évaluation de la résistance aux inhibiteurs de Tyrosine Kinase par un interrogatoire des voies de Transduction de Signal par les alignements d’anticorps

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Detection of Protease Activity by Fluorescent Peptide Zymography

Détection d’activité de la protéase par Zymographie peptides fluorescents

The purpose of this method is to measure the proteolytic activity of complex biological samples. The samples are separated by molecular weight using ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

Caractériser les mutants liés à la maladie des kinases familiales de la RAF en utilisant un ensemble de méthodes pratiques et réalisables

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Detection of Retrotransposition Activity of Hot LINE-1s by Long-Distance Inverse PCR

Détection de l'activité de rétrotransposition des lignes-1 chaudes par PCR inverse à longue distance

Long interspersed nuclear elements 1 (LINE-1s) are the only family of mobile genetic elements in the human genome that can move autonomously. They do so ...

Oncogenic Gene Fusion Detection Using Anchored Multiplex Polymerase Chain Reaction Followed by Next Generation Sequencing

Détection de fusion génique oncogène utilisant la réaction ancrée de chaîne de polymérase de multiplex suivie du séquençage de prochaine génération

Gene fusions frequently contribute to the oncogenic phenotype of many different types of cancer. Additionally, the presence of certain fusions in samples ...