Name: potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00
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Unterstützung gewähren: Fondation de Projet de L 'Université de Nantes, Les Bagouz' À Manon, La Ligue Contre le Cancer Comité de Loire-Atlantique, Comité du Morbihan und Comité de Vendée, Une rose Gießen S.A.R.A.H, L'Etoile de Martin und la Société Française de Lutte Contre Les Krebsarten et Les Leucémies de l ' Enfant et de L'adolescent (SFCE). M.b. und j. F. werden von La Ligue Contre Le Cancer unterstützt. Die Autoren danken die UTE-Anlage von der Struktur Fédérative de Recherche François Bonamy. Die Autoren danken auch Dr. S. Suzin (Inserm, Paris) für die Bereitstellung der IMR5 Zellen und Frau H. Estéphan für ihre technische Unterstützung.

Tierhaltung und experimentelle Verfahren wurden von der französischen Regierung (Vereinbarungen #C44-278 und #APAFIS 03479.01) genehmigt. Tierbetreuung und Verfahren wurden unter Richtlinie EU 2010/63/EU und Französisch Gesetz #2013-118 zum Schutz der für wissenschaftliche Zwecke verwendeten Tiere durchgeführt.
1. Bewertung der Droge Interaktion zwischen mAb 8B6 und Topotecan In Vitro
<ol><li>96-Well-Probenvorbereitung Achtung: Wenden Sie sich an die Institut...

<ol>
	<li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+basis,+experimental+design,+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies.">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li><li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+in+combating+cancer.">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li><li>Zahreddine, H., Borden, K. 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Um die Auswirkungen von Wechselwirkungen mit anderen Medikamenten vorherzusagen, drei Methoden können verwendet werden: die Isobologram Methodik17, nichtlineare Mischung Modell18und die Kombination index1. Indexanalyse Kombination wird am häufigsten verwendet, da seine Anwendung durch die Verfügbarkeit eines benutzerfreundlichen Computerprogramms vereinfacht wird. Zu diesem Zweck gekennzeichnet wir zuerst die Dosis-Wirkungs-Antwort von jeder Agent...

Der konventionelle Ansatz bei der Behandlung einer großen Anzahl von verschiedenen Arten von Krebs beruhte auf Monotherapie. Auch wenn es noch in vielen Fällen verwendet wird, erfüllt diese Methode mehrere Hindernisse zu entscheiden sich für kombinierte Therapien2. Insbesondere sind Krebszellen anfälliger für Widerstand, wenn ein einzelnes Medikament behandelt, durch Induktion alternative überleben Mechanismen3, was zu therapeutischen Scheitern in Patienten4zu entwickeln. Darüber hinaus werden in Monotherapie, Medikamente in der Regel in einer hohen Dosis verwaltet. Diese Situation oft führt das Auftreten von starken dosisabhängige Nebenwirkungen, die Ärzte die Behandlung2stoppen erzwingen und unerträglich werden können. Aus diesen Gründen ist der Verband der Anti-Krebs-Moleküle nun lieber Monotherapie.
Ideale Wirkstoffkombinationen wäre diejenigen, die in Synergie gegen Tumorzellen, ohne erhöhte Toxizität gegen normale Zellen handeln. Synergismus bezieht sich auf die Interaktion von zwei oder mehr Medikamenten, die eine therapeutische Wirkung mehr als die Summe jedes einzelne Medikament handeln separat produziert. Solche Interaktionen können erweiterte klinische therapeutische Wirksamkeit2führen. Es begrenzt Therapieresistenz, erhöht die Wirksamkeit und Toxizität2auch verringern kann. In der Tat kann die Dosierung der einzelnen Drogen reduziert werden, um ihre Nebenwirkungen zu senken, indem Sie auf verschiedenen Wegen. Darüber hinaus kann eines der Moleküle auch als eine sensibilisierende Mittel gegen Krebszellen dienen. Die Wirkung des zweiten Medikaments kann auf sensibilisierte Zellen verstärkt werden und weniger Dosierungen können gebrauchte5.
Kombinierte Therapie kann zwei oder mehrere Chemotherapeutika und/oder Biologics wie monoklonale Antikörper6enthalten. Diese mAbs gezielt Zellen mit dem Ausdruck einer Zelle Oberflächenantigen von Interesse und sind in der Lage, Tumorzellen durch immunologische Wege einschließlich Antikörper-abhängige zellvermittelte Zytotoxizität (ADCC), töten unter Einbeziehung der immun Effektorzellen 7und Komplement-abhängige Zytotoxizität (CDC)6. Sie können auch über einen nicht-immunologischen Mechanismus vermittelt durch Apoptose8,9,10,11agieren. In diesem Fall kann die Induktion des Prozesses des programmierten Zelltods Krebszellen zu sensibilisieren, Schwächen ihre Funktion und der damit verbundenen Chemotherapeutikum mit einer niedrigeren Dosierung effektiver zu gestalten. Als solche Proapoptotic mAb sind gute Kandidaten für die Gestaltung von Kombination Therapien mit Zytostatika.
Verschiedene mathematische Modelle sind beschrieben worden, um Droge Synergismus zu beurteilen; eine davon basiert auf der Kombination Index Methode1. Diese Methode basiert auf dem Median-Wirkung-Prinzip von Chou1entwickelt. Die Median-Effekt-Gleichung korreliert die Medikamentendosis und Drogenwirkung wie folgt.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
Dabei ist D die Medikamentendosis; DM ist die Median-Effekt-Dosis; FA ist der Bruchteil der Dosis davon betroffen; m ist ein Exponent, die die Form der Dosis-Wirkungs-Plot-1bedeutet. Die Median-Effekt-Dosis wird verwendet, um die Dosis Dx eines Medikaments zu berechnen, die hemmt oder tötet "X" Prozent der Zellen. Der CI-Wert errechnet dann um die additive Wirkung der Droge Kombination,1folgendermaßen zu bewerten.
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
CI der Wert 1 gibt an, eine additive Wirkung und einem CI-Wert von < 1 zeigt einen synergistischen Effekt, während ein CI-Wert von > 1 zeigt Antagonismus1. Die Anwendung dieser Methode wird weiter durch die Verfügbarkeit eines Computerprogramms, CompuSyn, die bestimmt Synergismus und Antagonismus bei allen Dosen erleichtert oder Effektstufen simulierte automatisch12.
Unsere Gruppe entwickelt die mAb 8B6 speziell für O-Acetyl-GD2 Gangliosid (OAcGD2) Neuroblastom Antigen13 und weiter gezeigt, dass diese mAb Zelltod mit Attributen der Apoptose11induzieren kann. Um zu testen ob mAb 8B6 Neuroblastom-Zellen, die antineoplastische Agenten Topotecan sensibilisieren können, haben wir die oben genannten Methode, entwickelt von Chou1angepasst. Zunächst bestimmen wir die wirksame Dosis 50 (ED50) Werte der mAb 8B6 und Topotecan. Als nächstes sind die Neuroblastom-Zellen mit zwar Verhältnisse der beiden Wirkstoffe basierend auf ED50 Werte ausgesetzt, um die CI-Werte mit den oben genannten Simulations-Software zu ermitteln. Diese Methode ermöglicht uns, Synergien zwischen mAb 8B6 und Topotecan in Vitrozu demonstrieren. Wir beschreiben Sie anschließend ein Protokoll, um weiter die Wirksamkeit und die Sicherheit dieser Kombination Therapie in Vivozu beurteilen. Dieses Protokoll kann leicht angewendet werden, um starke und sichere Anti-Krebs-mAb und Chemotherapeutikum Kombinationen in präklinischen Studien auszuwählen. Eine schematische Darstellung dieser Studie ist in Abbildung 1zur Verfügung gestellt.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1389px;" width="1390">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Cell Proliferation kit (MTT)</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">CompuSyn software</td>
			<td style="width:161px;">ComboSyn</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Combosyn can be downloaded for free at http://www.combosyn.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">BIO-1556</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:161px;">Eurobio</td>
			<td style="width:132px;">CVFSVFF00-01</td>
			<td style="width:852px;">10% heat-inactivated fetal calf serum in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Firefox&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Mozilla Corporation</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Firefox can be downloaded for free at http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Heat lamp</td>
			<td style="width:161px;">Verre&#38;Quartz</td>
			<td style="width:132px;">4003/1R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Human neuroblastoma IMR-5 cell line</td>
			<td style="width:161px;">Accegen Biotechnology</td>
			<td style="width:132px;">ABC-TC0450</td>
			<td style="width:852px;">IMR-5 is a clone of the human neuroblastoma cell line IMR32 5459762. IMR-5 cells were generously provided by Dr. Santos Susin (U.872, Paris, France)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">25030-024</td>
			<td style="width:852px;">2 mM in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Lysis solution&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">mAb 8B6</td>
			<td style="width:161px;">University of Nantes</td>
			<td style="width:132px;">N/A</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Matrigel</td>
			<td style="width:161px;">Corning</td>
			<td style="width:132px;">354248</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Multiskan FC</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific&#160;</td>
			<td style="width:132px;">N08625</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 21G 1 &#189;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">BD Microlance</td>
			<td style="width:132px;">304432</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 25G 1</td>
			<td style="width:161px;">Terumo</td>
			<td style="width:132px;">NN-2525R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">NSG mice</td>
			<td style="width:161px;">Charles River Laboratories</td>
			<td style="width:132px;">5557</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Nunc MicroWell 96-well microplates</td>
			<td style="width:161px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:132px;">167008</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS</td>
			<td style="width:161px;">VWR</td>
			<td style="width:132px;">L182-10</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS, 0,05% EDTA</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PC that runs windows 7</td>
			<td style="width:161px;">Microsoft</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Windows 7 can be purchased at http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">15140-122</td>
			<td style="width:852px;">100 units/mL penicillin and 100 mg/mL streptomycin in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Reagent reservoir</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific</td>
			<td style="width:132px;">8094</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Rodent restrainer</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">TV-150-SM</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">31870-025</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Syringe 1 mL</td>
			<td style="width:161px;">Henke Sass Wolf</td>
			<td style="width:132px;">5010.200V0</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Topotecan</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">T2705</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation

Potenzierung der feindlichen monoklonaler Antikörper (mAb) durch Chemotherapeutika stellt eine sinnvolle Strategie für die Gestaltung effektiver und sicherer Therapie gegen Krebs. Hier bieten wir ein Protokoll, um eine vernünftige Kombination in der präklinischen Phase zu identifizieren. Zunächst beschreiben wir eine zellbasierte Assays um den Synergismus zwischen Anti-Krebs-mAb und Zytostatika, zu beurteilen, der die Kombination Index Gleichsetzung von Chou und Talalay1verwendet. Dazu gehören die Messung des Tumor Zelle Droge - und Antikörper-Empfindlichkeit mit einem MTT-Assay, gefolgt von einer automatisierten Computeranalyse die Kombination Index (CI) Werte berechnen. CI-Werte der < 1 Synergismus zwischen getesteten mAbs und Zytostatika1anzugeben. Um die in-vitro- Ergebnisse in Vivobestätigen, beschreiben wir weiter eine Methode zur Bestimmung der Kombination Therapie Wirksamkeit in einem Xenograft-Tumor-Modell. In diesem Modell verzögert die kombinierte Therapie deutlich Tumorwachstum, führt zu einer erweiterten signifikanten Überlebensvorteil im Vergleich zu Single-Agent-Steuerelemente. Wichtig ist, zeigt der in-Vivo -Experimente, dass die Kombinationstherapie gut vertragen wird. Dieses Protokoll ermöglicht die effektive Bewertung der Anti-Krebs-Medikamenten-Kombinationen in präklinischen Modellen und die Identifizierung von rationalen Kombination, in klinischen Studien zu bewerten.

Die repräsentative Ergebnisse und Zahlen werden mit freundlicher Genehmigung von früher veröffentlichten Arbeit14angepasst.
Anti-OAcGD2 mAb 8B6 fördert synergistisch hemmende Effekte von Topotecan auf Neuroblastom Zellwachstum Linie:
Herstellen der Droge und die Antikörper-Konzentrationen verwendet werden, für die Beurteil...

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Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

Dieses Protokoll beschreibt die Synergien zwischen einem Anti-Krebs-Antikörper und Zytostatika in präklinischen Modellen zu bewerten, indem Sie unter Verwendung der Kombination Index Gleichung von Chou und Talalay.

Potenzierung der Anti-Krebs-Antikörper-Wirksamkeit von Zytostatika: Nachweis von Antikörper-Wirkstoff-Synergismus mit der Kombination-Index-Gleichung

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

Immuntherapie in Kombination mit Chemotherapie stellt einen innovativen Ansatz zur Entwicklung einer effizienten Therapie bei Krebs dar. Die Hauptziele sind, synergistische, therapeutische Effekte, Dosis- und Toxizitätsreduktion zu erreichen und die Induktion von Arzneimittelresistenzen zu minimieren oder zu verzögern. Aus praktischen und ethischen Gründen ist es jedoch nicht möglich, Synergismus bei Patienten zu bestimmen. Daher sollten vor der direkten Kombination in klinischen Studien Prenicaptor-Kombinationsstudien in vitro und/oder bei Tieren durchgeführt werden, um die Gründe für klinische Studien zu erhalten. Eine einfache robuste Methode zur Quantifizierung des Synergismus zwischen Medikamenten basiert auf einer von Shouan Talale entwickelten Kombinationsindexgleichung, wie in diesem Video dargestellt. Mit dieser Methode und ihrer computergestützten Simulation belegen wir hier den Synergismus zwischen monoklonalem Antikörper 8B6, der spezifisch für das O-Acetyl-GD2 Gangliosid-Neuroblastom-Antigen und das Chemotherapeutikum Topotecan auf Neuroblastomzellen ist. Kurz, nach der Bestimmung der effektiven Dosis 50 Werte jeder Verbindung in der menschlichen IMO, 5 Neuroblastom-Zelllinie, wurden diese Zellen mit gerechten Verhältnissen der beiden Verbindungen intubiert, und die Kombinationsindexwerte wurden mit hilfe einer automatisierten Computersimulation berechnet. Als nächstes bestätigten wir diese Ergebnisse in Vivo, in einem IMO, 5 Tumor xenographed Modell. Wir bauten IMR-5-Zellen in einem T75-Kolben an, beobachteten sie unter dem Mikroskop, um die Zellkonfluenknz zu überprüfen. Asperate Zellmedium aus dem Kolben, mit 5 ml PBS waschen. Fügen Sie 3 ml 0,05%EDTA/PBS-Lösung hinzu. Geben Sie den Kolben für 3 Minuten zum Inkubator zurück. Untersuchen Sie die Zellkultur unter dem Mikroskop auf Zellablösung. Fügen Sie dem Kolben 10 ml komplettes Zellmedium hinzu und übertragen Sie die Zellsuspension in ein steriles, 15 ml konisches Rohr. Zentrifugieren Sie fünf Minuten lang bei 300 g.Count-Zellen mit einem Hämozytometer. Entfernen und entsorgen Sie den Überstand. Re suspend Zellen in Complete Growth Medium.Anpassen des mittleren Volumens, um eine endgültige Konzentration von 100, 000 Zellen/ml.Seed 84 Brunnen, 96 Brunnenkulturplatte mit je 10.000 Zellen zu erhalten, was 100 Mikroliter Zellsuspension ist. Inkubieren Sie Zellen für 18 Stunden im Cell Incubator.Dilute monoklonalen Antikörper in 500 Mikroliter Complete Growth Medium, um eine Antikörper-Arbeitslösung mit einer monoklonalen Antikörperkonzentration von 240 Mikrogramm pro ml zu erhalten. Führen Sie 5 zweifache serielle Wahnvorstellungen durch, wie im Protokoll angegeben. Verdünnen Sie das Medikament in 500 Mikroliter Complete Growth Medium, um eine medikamentöse Arbeitslösung mit einer Endkonzentration von 120 Nanomolar zu erhalten. Führen Sie 5, zweifache serielle Wahnvorstellungen durch, wie im Protokoll angegeben. Verdünnen Sie auf die gleiche Weise das Medikament plus monoklonale Anikörper Lösungen. Um zur endgültigen Konzentration zu gelangen, übertragen Sie 50 Mikroliter jeder Wirkstofflösung in die entsprechenden Brunnen, wie auf diesem experimentellen Layout gezeigt. Inkubieren Sie die Zellen 72 Stunden lang im Inkubator. Fügen Sie 10 Mikroliter MTT-Reagenzlösung in jeden Brunnen ein. Inkubieren Bei 37 Grad Celsius für 4 Stunden. Fügen Sie 100 Mikroliter Lycine-Lösung in jeden Brunnen mit einer Mehrkanal-Pipette und mischen Sie gründlich durch Pipettieren. Inkubieren Bei 37 Grad Celsius für 4 Stunden in einer befeuchteten Kammer. Befreien Sie die Absorber mit einem Spektralphotometer auf 570 und 620 Nanometern. Berechnen Sie die Zelllebensfähigkeit wie folgt. Berechnen Sie die beeinflussten Werte des Bruchs mit der folgenden Gleichung. Führen Sie die Simulationssoftware aus, klicken Sie auf die neue Experimentschaltfläche, um das Hauptfenster zu erhalten. Geben Sie den Namen des Experiments ein. Klicken Sie auf neue einzelne Droge. Geben Sie den Namen ein. Geben Sie die Abkürzung ein. Geben Sie die Arzneimittelkonzentrationseinheit ein. Geben Sie Daten 1 Dosis und FA-Wert ein. Drücken Sie Enter.Repeat diesen Schritt, bis alle Datenpunkte eingegeben sind. Klicken Sie auf Fertig.Folgen Sie den gleichen Schritten, um monoklonale Antikörperdatenpunkte einzugeben. Klicken Sie auf Neue Droge Combo.Select Medikament und monoklonale Antikörper. Wählen Sie Konstantes Verhältnis.Klicken Sie auf OK. Geben Sie den Namen ein. Geben Sie die Abkürzung ein. Geben Sie das monoklonale Antikörperverhältnis des Arzneimittels ein. Geben Sie Daten 1 Dosis ein. Drücken Sie Enter.Das Programm berechnet automatisch die Dosen von Monoklonal Antikörper 8B6 und Combo. Geben Sie daten 1 ANLAGENwert ein.Drücken Sie Enter.Repeat diesen Schritt, bis alle Datenpunkte eingegeben sind. Klicken Sie auf Fertig.Dann klicken Sie auf Bericht generieren.Wählen Sie Das Medikament und den monoklonalen Antikörper aus und klicken Sie dann auf OK. Wählen Sie Combo und klicken Sie dann auf OK. Wählen Sie Kopf-, CI-Tabelle und Zusammenfassungstabelle aus, und klicken Sie dann auf OK. Geben Sie den Dateinamen und die Analyse ein, und klicken Sie auf Speichern, um den Bericht zu generieren. Der Bericht wird automatisch im Standard-Webbrowser geöffnet. Der Bericht enthält einen zusammenfassenden Tabellenabschnitt, der Titel, Datum, endgültigen Namen, Beschreibungshinweis, m- und r-Parameter, effektive Dosis 50 für entweder als Monotherapie oder in Kombination verwendete Wirkstoff enthält, und die Kombinationsindextabelle für jede Kombination mit der effektiven Dosis 50, 75, 90 und 95.A-Kombinationsindexwert kleiner als 1 gibt Synergismus an. Ein Wert, der gleich eins ist, gibt die Additivität an. Ein Wert größer als 1 gibt an den Antagonismus an. Kellermembranmatrix über Nacht auftauen, indem Sie die Durchstechflasche vor Gebrauch in einen 4-Grad-C-Kühlschrank tauchen. Alle Kulturverschleiß oder Medien, die mit der Kellermembran-Metrik in Berührung kommen, sollten vorgechillt werden. Ernte die Kultur IMR5. Übertragen Sie die Zellen 5 Minuten lang in ein 15 ml konisches Rohr und eine Zentrifuge bei 300 g. Entsorgen Sie den Überstand. Waschen Sie Zellen mit 15 ml eiskaltem PBS zweimal. Bereiten Sie eine Zellsuspension für 5 Millionen Zellen pro ml in eiskaltem PBS vor. Übertragen Sie die Zellsuspension in 1,5 ml Mikrorohr. Schwenkbare Kellermembran Matrix durchfläge. Fügen Sie 1 Volumen des Kellermembran-Matrix-Reagenzes hinzu, das durch Pipettieren gemischt wird, um eine Zellsuspension von 2,5 Millionen Zellen pro ml zu erhalten. Rasieren Sie die Flanke, wo die Injektion durchgeführt wird. Mischen Sie Zellen und ziehen Sie die Zellsuspension vorsichtig in eine 1 ml Spritze, die mit einer 21 g Nadel montiert ist. Stellen Sie sicher, dass sich keine Luftblasen in der Spritze befinden. Desinfizieren Sie den Impfbereich der Mäuse mit einer antiseptischen Lösung. Drücken Sie die Maushaut vorsichtig auf die Flanke zwischen den Fingern an der Injektionsstelle. Setzen Sie die Nadel genau in die Hautfalte ein. Legen Sie die Nadel nicht tief in das Gewebe, um eine subkutane Injektion zu versichern. 100 Mikroliter IMR5-Zellsuspension subkutan injizieren. Drehen Sie die Spritze, um eine Flüssigkeitsausbreitung zu verhindern, und ziehen Sie die Nadel ab. Überwachen Sie Mäuse auf Körpergewicht und Tumorwachstum. Messen Sie die Länge und Breite des Tumors mit einem Kaliber. Berechnen Sie das Tumorvolumen mit dieser Formel. Beginnen Sie mit der Therapie, wenn Tumore ein durchschnittsvolumen von 50 bis 60 mm erreicht haben

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluoreszierende orthotopen Mausmodell des Bauchspeicheldrüsenkrebs

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Forschung

Krebsforschung

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Anti-Krebs-Wirksamkeit der Photodynamischen Therapie mit Lungenkrebs-Targeted-Nanopartikel

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

Zweidimensionaler Gelelektrophorese gekoppelt mit Massenspektrometrie Methoden für eine Analyse der menschlichen Hypophyse Adenom Gewebe Proteom

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Die Immunphänotypisierung der Orthotopen Homograft (Phänomen) der murinen primäre KPC duktales Pankreaskarzinom durch Durchflusszytometrie

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Präklinische Bewertung der Bioaktivität der Anti-Krebs Cumarin OT48 Sphäroide, Kolonie Bildung Assays und Zebrafisch Xenotransplantate

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

Beurteilung der Widerstandsfähigkeit gegen Tyrosin-Kinase-Inhibitoren durch eine Befragung von Signal Transduction Bahnen durch Antikörper-Arrays

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Detection of Protease Activity by Fluorescent Peptide Zymography

Erkennung von Protease-Aktivität durch fluoreszierende Peptid Zymography

The purpose of this method is to measure the proteolytic activity of complex biological samples. The samples are separated by molecular weight using ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

Charakterisieren Sie krankheitsbedingte Mutanten der Kinases der RAF-Familie durch die Verwendung einer Reihe praktischer und machbarer Methoden

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Detection of Retrotransposition Activity of Hot LINE-1s by Long-Distance Inverse PCR

Erkennung der Retrotranspositionsaktivität von Hot LINE-1s durch inverse Langstrecken-PCR

Long interspersed nuclear elements 1 (LINE-1s) are the only family of mobile genetic elements in the human genome that can move autonomously. They do so ...

Oncogenic Gene Fusion Detection Using Anchored Multiplex Polymerase Chain Reaction Followed by Next Generation Sequencing

Onkogene Genfusionsdetektion mit verankerter Multiplex-Polymerase-Kettenreaktion gefolgt von Sequenzierung der nächsten Generation

Gene fusions frequently contribute to the oncogenic phenotype of many different types of cancer. Additionally, the presence of certain fusions in samples ...