Name: potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation at JoVE.com

להעניק תמיכה: Fondation דה Projet דה L 'אוניברסיטת דה נאנט, les Bagouz' א' מאנון, הליגה חדר מרווח וחדיש le סרטן comité דה לה לואר-מלון אטלנטיק, comité du Morbihan ולאחר comité דה Vendée, une רוז למזוג S.A.R.A.H, מרטין l ' etoile de la Société פרנסז דה Lutte חדר מרווח וחדיש לס סרטן et les leucémies de ל'אנפן et de L'adolescent (SFCE). מ ב וג'יי. אף נתמכים על ידי לה ליגה חדר מרווח וחדיש Le סרטן. המחברים תודה את למעבדות-המתקן Bonamy פרנסואה מבנה Fédérative דה רשרש. המחברים גם תודה ד ר ס סוזין (Inserm, פריז) למתן את התאים IMR5, גב' ח' Estéphan לסיוע טכני שלה.

דיור בעלי חיים, ניתוח ניסיוני אושרו על ידי הממשלה הצרפתית (הסכמי #C44-278, #APAFIS 03479.01). טיפול בבעלי חיים ונהלים נערכו תחת הוראת האיחוד האירופי 2010/63/האיחוד האירופי ומשפט צרפתית #2013-118 בנושא ההגנה על בעלי חיים משמשים למטרות מדעיות.
1. הערכה של סמים האינטראקציה בין mAb 8B6 ו Topotecan ב חוץ גו?...

<ol>
	<li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+basis,+experimental+design,+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies.">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li><li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+in+combating+cancer.">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li><li>Zahreddine, H., Borden, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+insights+into+drug+resistance+in+cancer.">Mechanisms and insights into drug resistance in cancer.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 28 (2013).</li><li>Martin, T. P., Baguley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re:+"Postoperative+validation+of+bone-anchored+implants+in+the+single-sided+deafness+population."+Snapp+et+al.+Otol+Neurotol+2012:+33;291-6.">Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).</li><li>Choi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+lung+cancer+cells+by+altered+dimerization+of+HSP27.">Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27.</a> Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).</li><li>Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies:+versatile+platforms+for+cancer+immunotherapy.">Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).</li><li>Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+review+of+the+role+of+Fc+gamma+receptor+polymorphisms+in+the+response+to+monoclonal+antibodies+in+cancer.">A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 6, 1 (2013).</li><li>Kowalczyk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GD2-specific+14G2a+monoclonal+antibody+induces+apoptosis+and+enhances+cytotoxicity+of+chemotherapeutic+drugs+in+IMR-32+human+neuroblastoma+cells.">The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells.</a> Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).</li><li>Retter, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+proapoptotic+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody+and+evaluation+of+its+therapeutic+effect+on+melanoma+and+small+cell+lung+carcinoma+xenografts.">Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts.</a> Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).</li><li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+induction+of+human+lung+cancer+cell+line+in+multicellular+heterospheroids+with+humanized+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody.">Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody.</a> Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).</li><li>Cochonneau, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+arrest+and+apoptosis+induced+by+O-acetyl-GD2-specific+monoclonal+antibody+8B6+inhibits+tumor+growth+in+vitro+and+in+vivo.">Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo.</a> Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).</li><li>Chou, T. C., Martin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CompuSyn for drug combinations: PC software and user&#8217;s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , (2005).</li><li>Alvarez-Rueda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+monoclonal+antibody+to+O-acetyl-GD2+ganglioside+and+not+to+GD2+shows+potent+anti-tumor+activity+without+peripheral+nervous+system+cross-reactivity.">A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity.</a> PLoS One. 6 (9), e25220 (2011).</li><li>Faraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma+chemotherapy+can+be+augmented+by+immunotargeting+O-acetyl-GD2+tumor-associated+ganglioside.">Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside.</a> Oncoimmunology. 7 (1), e1373232 (2017).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body+condition+scoring:+a+rapid+and+accurate+method+for+assessing+health+status+in+mice.">Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice.</a> Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).</li><li>Teicher, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+for+in+vitro+and+in+vivo+synergy.">Assays for in vitro and in vivo synergy.</a> Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).</li><li>White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+nonlinear+mixture+response+surface+paradigm+for+the+study+of+synergism:+a+three+drug+example.">A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example.</a> Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+XTT+cell+proliferation+assay+applied+to+cell+layers+embedded+in+three-dimensional+matrix.">The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix.</a> Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).</li><li>Thompson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy+of+topotecan+in+combination+with+vincristine+for+treatment+of+pediatric+solid+tumor+xenografts.">Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts.</a> Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).</li><li>Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+design+and+sample+size+determination+for+testing+synergism+in+drug+combination+studies+based+on+uniform+measures.">Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures.</a> Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).</li><li>Tang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+EPHB6,+EFNB2,+and+EFNB3+expressions+in+human+neuroblastoma.">Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma.</a> Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).</li><li>Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+metastasis+of+human+breast+carcinomas+with+Matrigel+in+athymic+mice.">Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).</li><li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines.">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).</li><li>Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topotecan+plus+cyclophosphamide+as+maintenance+chemotherapy+for+children+with+high-risk+neuroblastoma+in+complete+remission:+short-term+curative+effects+and+toxicity.">Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).</li><li>Cheung, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglioside+GD2+specific+monoclonal+antibody+3F8:+a+phase+I+study+in+patients+with+neuroblastoma+and+malignant+melanoma.">Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma.</a> Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human.">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Dayde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+burden+influences+exposure+and+response+to+rituximab:+pharmacokinetic-pharmacodynamic+modeling+using+a+syngeneic+bioluminescent+murine+model+expressing+human+CD20.">Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20.</a> Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).</li><li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgamma(null)+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection.">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li><li>Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Responses+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Muscle+Invasive+Bladder+Cancer.">Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer.</a> Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).</li></ol>

כדי לחזות את התוצאה של תגובות בין תרופתיות, ניתן להשתמש בשלוש שיטות: מתודולוגיה isobologram17, מודל לא-ליניאריות תערובת18ו השילוב מדד1. ניתוח מדד משולב הוא הנפוץ ביותר בשימוש כי היישום שלה היא פשוטה בשל הזמינות של תוכנית מחשב ידידותי למשתמש. למטרה זו, אנו קוד...

הגישה הקונבנציונלית בטיפול של מספר רב של סוגים שונים של סרטן היה מבוסס על יחידני. אפילו אם זה משמש עדיין במקרים רבים, שיטה זו נפגשו מספר מכשולים שמוביל בחירה של טיפולים משולבים2. במיוחד, תאים סרטניים פגיעים יותר לפתח עמידות כאשר מטופלים עם תרופה אחת על ידי גרימת הישרדות חלופי מנגנונים3, והתוצאה היא כישלון טיפולי בחולים4. יתר על כן, ביחידני, תרופות בדרך כלל הפארקים אחראית הרשות במינון גבוה. את המצב הזה לעיתים קרובות תוצאות המופע של תופעות לוואי למינון חזק זה יכול להיות בלתי נסבל, כוח רופאים להפסיק את הטיפול2. מסיבות אלו, האגודה של מולקולות נגד סרטן הוא עכשיו העדיפו יחידני.
שילובים תרופתיים האידיאלי יהיה אלה שפועלים בסינרגיה נגד תאים סרטניים, ללא רעילות מוגברת נגד תאים נורמליים. הסינרגטיות מתייחס האינטראקציה של שניים או יותר תרופות שמייצר השפעה תרפויטית עולה על הסכום של כל תרופה בודדים מתנהג בנפרד. אינטראקציות כזה עלול לגרום משופרת יעילות טיפולית קלינית2. זה מגביל את ההתנגדות הטיפול מגביר את היעילות, ניתן גם להפחית רעילות2. למעשה, ניתן להפחית את המינון של כל תרופה כדי להפחית את תופעות הלוואי שלהן על ידי מיקוד מסלולים שונים. בנוסף, אחד של המולקולות יכול לשמש גם סוכן sensitizing נגד תאים סרטניים. ההשפעה של התרופה השנייה שעשויים להיות מוגברת על תאים sensitized, המינונים פחות יכול להיות בשימוש5.
טיפול משולב יכול לכלול שניים או יותר תרופות כימותרפיות ו/או תרופות/מוצרים ביולוגיים, כגון נוגדנים חד-שבטיים6. אלה mAbs במיוחד היעד תאים המבטאים אנטיגן פני שטח התא של עניין מסוגלות להרוג תאים סרטניים באמצעות מסלולים אימונולוגי כולל נוגדנים תלויי תאית cytotoxicity (ADCC), עם המעורבות של תאים חיסוניים אפקטור 7, cytotoxicity תלויי-המשלים (CDC)6. הם גם משמשים דרך מנגנון חיסוניות מתווכת על ידי אפופטוזיס8,9,10,11. במקרה זה, אינדוקציה של התהליך של מוות תאים מתוכנת עלול לרגש תאים סרטניים, להחליש את תפקידם ולבצע את כימותרפית המשויך יעיל יותר במינון נמוך יותר. ככזה, proapoptotic mAb הם מועמדים טובים עבור עיצוב משטרי בשילוב עם תרופות antineoplastic.
מודלים מתמטיים שונים תוארו להעריך הסינרגטיות סמים; אחד מהם הוא מבוסס על שילוב מדד בשיטה1. שיטה זו מבוססת על העיקרון חציון-אפקט שפותחה על ידי צ'או1. המשוואה חציון-אפקט מופיע את מינון התרופה לבין האפקט כדלקמן.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
. הנה, D הוא מינון התרופה; Dm הוא המינון חציון-אפקט; הפא הוא השבר מושפע המנה; מ' הוא המעריך שמסמל את הצורה של מינון-אפקט מגרש1. המינון חציון-אפקט משמש כדי לחשב את המינון Dx של התרופה מעכב או הורג "x" אחוזים של תאים. הערך CI לאחר מכן מחושב כדי להעריך את השפעת השילוב סמים, כדלקמן1מוספים.
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
הערך CI 1 מציין אפקט תוסף וערך CI של < 1 מציין אפקט סינרגיסטי, בעוד ערך CI של > 1 מציין הטינה1. היישום של שיטה זו נוספת בהנחייתם של הזמינות של תוכנית מחשב, CompuSyn, הקובע הסינרגטיות של אנטגוניזם במינונים כל או רמות ההשפעה הדמיה אוטומטית12.
הקבוצה שלנו פיתח ייחודיים 8B6 mAb O-אצטיל-GD2 ganglioside (OAcGD2) נוירובלסטומה אנטיגן13 , נוספת הדגימו כי mAb הזה הוא מסוגל לגרום מוות של תאים עם תכונות של אפופטוזיס11. כדי לבדוק אם mAb 8B6 יכול לרגש לתאי נוירובלסטומה topotecan הסוכן antineoplastic, שינינו את השיטה הנ ל שפותחה על ידי צ'או1. ראשית, אנו לקבוע מנה אפקטיבית (אד50) 50 הערכים של mAb 8B6 ו- topotecan. בשלב הבא, התאים נוירובלסטומה עם יחס equipotent של שתי תרכובות בהתבסס על אד50 ערכים נחשפים לקבוע את הערכים CI שימוש בתוכנת סימולציה הנ. שיטה זו מאפשרת לנו להפגין הסינרגטיות בין mAb 8B6 ו- topotecan חוץ גופית בתוך. בשלב הבא, אנו מתארים את פרוטוקול להעריך עוד יותר את העוצמה והביטחון של שילוב משטר זה ויוו. פרוטוקול זה ניתן להחיל בקלות כדי לבחור mAb נגד סרטן חזק ובטוח ושילובים הסוכן כימותרפיות במחקרים פרה. ייצוג סכמטי של מחקר זה מסופק באיור1.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1389px;" width="1390">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Cell Proliferation kit (MTT)</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">CompuSyn software</td>
			<td style="width:161px;">ComboSyn</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Combosyn can be downloaded for free at http://www.combosyn.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">BIO-1556</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:161px;">Eurobio</td>
			<td style="width:132px;">CVFSVFF00-01</td>
			<td style="width:852px;">10% heat-inactivated fetal calf serum in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Firefox&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Mozilla Corporation</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Firefox can be downloaded for free at http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Heat lamp</td>
			<td style="width:161px;">Verre&#38;Quartz</td>
			<td style="width:132px;">4003/1R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Human neuroblastoma IMR-5 cell line</td>
			<td style="width:161px;">Accegen Biotechnology</td>
			<td style="width:132px;">ABC-TC0450</td>
			<td style="width:852px;">IMR-5 is a clone of the human neuroblastoma cell line IMR32 5459762. IMR-5 cells were generously provided by Dr. Santos Susin (U.872, Paris, France)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">25030-024</td>
			<td style="width:852px;">2 mM in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Lysis solution&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">mAb 8B6</td>
			<td style="width:161px;">University of Nantes</td>
			<td style="width:132px;">N/A</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Matrigel</td>
			<td style="width:161px;">Corning</td>
			<td style="width:132px;">354248</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Multiskan FC</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific&#160;</td>
			<td style="width:132px;">N08625</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 21G 1 &#189;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">BD Microlance</td>
			<td style="width:132px;">304432</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 25G 1</td>
			<td style="width:161px;">Terumo</td>
			<td style="width:132px;">NN-2525R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">NSG mice</td>
			<td style="width:161px;">Charles River Laboratories</td>
			<td style="width:132px;">5557</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Nunc MicroWell 96-well microplates</td>
			<td style="width:161px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:132px;">167008</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS</td>
			<td style="width:161px;">VWR</td>
			<td style="width:132px;">L182-10</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS, 0,05% EDTA</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PC that runs windows 7</td>
			<td style="width:161px;">Microsoft</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Windows 7 can be purchased at http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">15140-122</td>
			<td style="width:852px;">100 units/mL penicillin and 100 mg/mL streptomycin in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Reagent reservoir</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific</td>
			<td style="width:132px;">8094</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Rodent restrainer</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">TV-150-SM</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">31870-025</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Syringe 1 mL</td>
			<td style="width:161px;">Henke Sass Wolf</td>
			<td style="width:132px;">5010.200V0</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Topotecan</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">T2705</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation

Potentiation נוגדנים חד-שבטיים עוינת (mAb) על ידי סוכנים כימותרפיות מהווה אסטרטגיה רב ערך עבור תכנון טיפול יעיל ובטוח מפני סרטן. כאן אנו מספקים פרוטוקול כדי לזהות שילוב רציונלי בשלב פרה. ראשית, אנו מתארים הנועד מבוססת תא להעריך את הסינרגטיות בין mAb נגד סרטן תרופות ציטוטוקסיות, המשתמשת המשוואה אינדקס שילוב של צ'או, Talalay1. זה כולל את המדידה של גידול התא סמים, נוגדן-רגישות שימוש assay MTT, ואחריו ניתוח המחשב אוטומטית כדי לחשב את ערכי אינדקס (CI) שילוב. CI ערכים של < 1 לציין הסינרגטיות בין mAbs נבדק סוכנים ציטוטוקסיות1. כדי לאמת את במבחנה ממצאים ויוו, נתאר בהמשך שיטה כדי להעריך את היעילות של משטר השילוב במודל גידול xenograft. במודל זה, הטיפול המשולב מעכבת באופן משמעותי הגידול, כשהתוצאה הישרדות המורחבת משמעותית בהשוואה פקדים סוכן יחיד. חשוב, הניסויים ויוו חושף משטר השילוב הוא נסבל היטב. פרוטוקול זה מאפשר הערכת יעילות תרופה נגד סרטן צירופי במודלים פרה וזיהוי של שילוב רציונלי כדי להעריך בניסויים קליניים.

התוצאות נציג ודמויות מותאמים באישור מוקדם יותר לאור העבודה14.
8B6 mAb anti-OAcGD2 משפר בסינרגיה אפקטים המעכבת של Topotecan על צמיחת שורת תאים נוירובלסטומה:
כדי ליצור את התרופה ריכוז נוגדן כדי לשמ...

Watch this Scientific Journal Video about Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation at JoVE.com

Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

פרוטוקול זה מתאר כיצד להעריך הסינרגטיות בין נוגדן נגד סרטן תרופות antineoplastic במודלים פרה באמצעות המשוואה אינדקס שילוב של צ'או, Talalay.

Potentiation של נוגדנים נגד סרטן יעילות על-ידי סמים Antineoplastic: זיהוי של נוגדן תרופתיים הסינרגטיות באמצעות המשוואה אינדקס שילוב

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

אימונותרפיה בשילוב עם כימותרפיה מייצגת גישה חדשנית לפיתוח טיפול יעיל בסרטן. המטרות העיקריות הן להשיג סינרגטי, השפעות טיפוליות, הפחתת מינון ורעילות, כדי למזער או לעכב את אינדוקציה של עמידות לתרופות. עם זאת, מסיבות מעשיות ואתיות, לא ניתן לקבוע סינרגיה בחולים. לכן, לפני שילוב ישיר בניסויים קליניים, מחקרי שילוב Prenicaptor, במבחנה, ו / או בבעלי חיים, צריך להתבצע כדי לקבל את הרציונל למחקרים קליניים. שיטה פשוטה וחזקה לכמות סינרגיה בין תרופות מבוססת על משוואת מדד שילוב שפותחה על ידי Shouan Talale, כפי שמודגם בסרטון זה. באמצעות שיטה זו, וסימולציה ממוחשבת שלה, אנו ראיות כאן, הסינרגיה בין נוגדן חד שבטי 8B6, אשר ספציפי עבור O-אצטיל-GD2 נוירובלסטומה Ganglioside אנטיגן ואת התרופה הכימותרפית Topotecan על תאי נוירובלסטומה. בקצרה, לאחר קביעת המינון האפקטיבי 50 ערכים של כל תרכובת IMO אנושי, 5 קו תאים נוירובלסטומה, תאים אלה היו צנררים עם יחס הוגן של שתי תרכובות, ואת ערכי מדד שילוב חושבו באמצעות סימולציה ממוחשבת אוטומטית. לאחר מכן אישרנו את התוצאות האלה ב Vivo, ב IMO, 5 גידול קסנוגרף מודל. גידלנו תאי IMR-5 בבקבוק T75, ראינו אותם תחת מיקרוסקופ, כדי לבדוק את תכולת התאים. בינוני תא אספרט מן הבקבוק, לשטוף עם 5 מ"ל של PBS. הוסף 3 מ"ל של פתרון 0.05%EDTA/PBS. מחזירים את הבקבוק לאנקובטור למשך 3 דקות. בדוק את תרבות התאים תחת מיקרוסקופ עבור ניתוק תאים. מוסיפים 10 מ"ל של תא שלם בינוני לבקבוק, ומעבירים את מתלי התא לצינור חרוט סטרילי של 15 מ"ל. צנטריפוגה במשך חמש דקות ב 300 g.Count תאים באמצעות המוציטמטר. הסר והשליך את העל-טבעי. להשעות מחדש תאים ב בינוני צמיחה מלאה.להתאים את הנפח הבינוני כדי לקבל ריכוז סופי של 100, 000 תאים / mL.Seed 84 בארות, 96 צלחת תרבות היטב עם 10, 000 תאים כל אחד, שהוא 100 microliters של השעיית תא. תאי אינקובט במשך 18 שעות ב- Cell Incubator.Dilute נוגדן חד שבטי ב 500 microliters של מדיום צמיחה מלאה כדי לקבל פתרון עבודה נוגדן עם ריכוז נוגדנים חד שבטי 240 מיקרו גרם לכל mL.Perform 5 אשליות סדרתיות כפולות כפי שצוין בפרוטוקול. לדלל את התרופה ב 500 microliters של מדיום צמיחה מלאה כדי להשיג פתרון עבודה תרופה עם ריכוז סופי 120 nanomolar. בצע 5, פעמיים אשליות סדרתיות כפי שצוין בפרוטוקול. לדלל באותו אופן את התרופה בתוספת פתרונות anibodies חד אופן. כדי להגיע לריכוז הסופי, להעביר 50 microliters של כל פתרונות תרופה בארות המתאימות כפי שמוצג בפריסה ניסיונית זו. להטף את התאים במשך 72 שעות באינקובטור. הוסף 10 מיקרוליטרים של פתרון MTT reagent לתוך כל באר. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות. מוסיפים 100 מיקרוליטרים של תותב lycine לתוך כל באר באמצעות פיפטה רב ערוצית ומערבבים ביסודיות על ידי צינורות. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות בתא לח. תפטר את הספיגים ב-570 ו-620 ננומטר בעזרת ספקטרופוטומטר. חשב את הכדאיות התאית באופן הבא. חשב את הערכים המושפעים של השבר באמצעות המשוואה הבאה. הפעל את תוכנת הסימולציה, לחץ על כפתור הניסוי החדש כדי להשיג את החלון הראשי. הקלד את שם הניסוי. לחץ על תרופה אחת חדשה. הקלד את השם. הקלד את הקיצור. הקלד את יחידת ריכוז הסמים. הזן מינון נתונים 1 וערך FA. הקש Enter.Repeat על שלב זה עד להזנת כל נקודות הנתונים. לחץ על סיום.בצע את אותם שלבים כדי להזין נקודות נתונים נוגדן חד שבטי. לחץ על תרופה חדשה Combo.Select תרופות ונוגדנים חד שבטיים. בחר יחס קבוע.לחץ על אישור. הקלד את השם. הקלד את הקיצור. הקלד את יחס הנוגדנים המונוקלוני של התרופה. הזן מינון נתונים 1. הקש Enter.The התוכנית תחשב באופן אוטומטי את המינונים של נוגדן חד שבטי 8B6 ו משולבת. הזן ערך FA של נתונים 1.הקש Enter.Repeat על שלב זה עד להזנת כל נקודות הנתונים. לחץ על סיום.לאחר מכן, לחץ על צור דוח.בחר נוגדן תרופה ונוגדן חד שבטי ולאחר מכן לחץ על אישור. בחר משולב ולאחר מכן לחץ על אישור. בחר כותרת עליונה, טבלת CI וטבלת סיכום ולאחר מכן לחץ על אישור. הקלד את שם הקובץ ואת הניתוח ולחץ על שמור כדי להפיק את הדוח. הדוח נפתח באופן אוטומטי בדפדפן האינטרנט המוגדר כברירת מחדל. הדוח מכיל מקטע טבלת סיכום הכולל פרמטרים כותרת, תאריך, שם סופי, הערה תיאור, m, Dm ו- r, מינון אפקטיבי 50 עבור כל סוכן המשמש כמונותרפיה או בשילוב, וטבלת האינדקס המשולבת עבור כל שילוב במינון האפקטיבי 50, 75, 90 ו- 95.A ערך אינדקס משולב פחות מ- 1 מציין סינרגיה. ערך השווה לערך אחד מציין תוספה. ערך הגדול מ- 1 מציין אנטגוניזם. להפשיר מטריצת קרום מרתף לילה על ידי טביעה את הבקבוקון בקרח במקרר 4 מעלות צלזיוס לפני השימוש. כל בגדי התרבות, או התקשורת שבאה במגע עם מדד קרום המרתף, צריכים להיות לפני כן. לקצור את התרבות IMR5. מעבירים את התאים לצינור חרוט 15 מ"ל וצנטריפוגה ב 300 גרם במשך 5 דקות. השלך את העל-טבעי. לשטוף תאים עם 15 מ"ל קרח קר PBS פעמיים. הכן מתלה תא עבור 5 מיליון תאים לכל mL ב PBS קר כקרח. העבר את ההשעיה התא לתוך microtube 1.5 מ"ל. בקבוקון מטריצת קרום מרתף מסתובב. הוסף 1 נפח של reagent מטריצת מטריצת קרום המרתף, מעורבב על ידי צינורות כדי להשיג השעיית תא של 2.5 מיליון תאים לכל mL.Keep המתלה התא על קרח. לגלח את האגף שבו הזריקה ת ייעשה. מערבבים תאים ולצייר בזהירות את ההשעיה התא לתוך מזרק 1 מ"ל רכוב עם מחט 21 גרם. בדוק כדי לוודא שאין בועות אוויר במזרק. לחטא את אזור החיסון של העכברים עם פתרון חיטוי. לסחוט בעדינות את עור העכבר על האגף בין האצבעות באתר ההזרקה. הכנס את המחט בדיוק לתוך כיסוי העור. אין למקם את המחט עמוק לתוך הרקמה כדי לבטח הזרקה תת עורית. להזריק 100 microliters של מתלים תא IMR5 תת עורית. לסובב את המזרק כדי למנוע התפשטות נוזל ולמשוך את המחט. לפקח על עכברים עבור משקל הגוף וצמיחה הגידול. למדוד את האורך והרוחב של הגידול עם קליבר. חשב את נפח הגידול באמצעות נוסחה זו. התחל טיפול כאשר גידולים הגיעו לנפח ממוצע של 50 עד 60 מ"מ

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

דגם פלורסנט Orthotopic עכבר של סרטן הלבלב

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

יעילות אנטי סרטנית של טיפול פוטודינמי עם ריאות חלקיקים סרטן ממוקד

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

אלקטרופורזה דו-ממדית בג'ל בשילוב עם שיטות ספקטרומטר מסה על ניתוח של רקמת גידול בבלוטת יותרת המוח האנושי פרוטאום

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping של Orthotopic מאותו מין (Syngeneic) של KPC העיקרי מאתר אדנוקרצינומה Ductal הלבלב על ידי Cytometry זרימה

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

הערכת פרה Bioactivity של OT48 נגד סרטן קומרין Spheroids, מבחני היווצרות המושבה ועל דג זברה Xenografts

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

הערכה של התנגדות מעכבי טירוזין קינאז על ידי חקירה של האות התמרה חושית מסלולים על-ידי מערכים נוגדן

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Detection of Protease Activity by Fluorescent Peptide Zymography

זיהוי של פרוטאז פעילות על-ידי ניאון פפטידים Zymography

The purpose of this method is to measure the proteolytic activity of complex biological samples. The samples are separated by molecular weight using ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

אפיון מוטציות הקשורות למחלות של חיל המשפחה באמצעות קבוצה של שיטות מעשיות ושימושיות

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Detection of Retrotransposition Activity of Hot LINE-1s by Long-Distance Inverse PCR

זיהוי הפעילות הרטרוטרנספוזיציה של קו חם-1s באמצעות PCR הופכי למרחקים ארוכים

Long interspersed nuclear elements 1 (LINE-1s) are the only family of mobile genetic elements in the human genome that can move autonomously. They do so ...

Oncogenic Gene Fusion Detection Using Anchored Multiplex Polymerase Chain Reaction Followed by Next Generation Sequencing

היתוך גנים אונגניים באמצעות שרשרת מעוגנת התגובה השרשרת מעוגן ואחריו רצף הדור הבא

Gene fusions frequently contribute to the oncogenic phenotype of many different types of cancer. Additionally, the presence of certain fusions in samples ...