Name: potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00
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Concedere il sostegno: Fondation de Projet de L 'Université de Nantes, les Bagouz' à Manon, La Ligue contre le Cancer comité de Loire-Atlantique, comité du Morbihan e comité de Vendée, une rosa versare S.A.R.A.H, L'Etoile de Martin e la Société Française de Lutte contre les I cancri et les leucémies de l'enfant et de L'adolescent (SFCE). M.B. e J.F. sono supportati da La Ligue Contre Le Cancer. Gli autori ringraziano l'UTE-impianto della struttura Fédérative de Recherche François Bonamy. Gli autori ringraziano anche Dr. S. Suzin (Inserm, Parigi) per fornire le cellule IMR5 e Sig. ra H. Estéphan per la sua assistenza tecnica.

Stabulazione e procedura sperimentale sono stati approvati dal governo francese (accordi #C44-278 e #APAFIS 03479.01). Procedure e cura degli animali sono state condotte sotto la direttiva UE 2010/63/UE e legge francese #2013-118 sulla protezione degli animali utilizzati a fini scientifici.
1. valutazione dell'interazione tra il farmaco mAb 8B6 e Topotecan In Vitro
<ol><li>preparazione del campione di 96 pozzetti Attenzione: Consultare il Comitato di salute e sic...

<ol>
	<li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+basis,+experimental+design,+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies.">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li><li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+in+combating+cancer.">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li><li>Zahreddine, H., Borden, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+insights+into+drug+resistance+in+cancer.">Mechanisms and insights into drug resistance in cancer.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 28 (2013).</li><li>Martin, T. P., Baguley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re:+"Postoperative+validation+of+bone-anchored+implants+in+the+single-sided+deafness+population."+Snapp+et+al.+Otol+Neurotol+2012:+33;291-6.">Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).</li><li>Choi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+lung+cancer+cells+by+altered+dimerization+of+HSP27.">Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27.</a> Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).</li><li>Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies:+versatile+platforms+for+cancer+immunotherapy.">Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).</li><li>Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+review+of+the+role+of+Fc+gamma+receptor+polymorphisms+in+the+response+to+monoclonal+antibodies+in+cancer.">A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 6, 1 (2013).</li><li>Kowalczyk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GD2-specific+14G2a+monoclonal+antibody+induces+apoptosis+and+enhances+cytotoxicity+of+chemotherapeutic+drugs+in+IMR-32+human+neuroblastoma+cells.">The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells.</a> Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).</li><li>Retter, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+proapoptotic+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody+and+evaluation+of+its+therapeutic+effect+on+melanoma+and+small+cell+lung+carcinoma+xenografts.">Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts.</a> Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).</li><li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+induction+of+human+lung+cancer+cell+line+in+multicellular+heterospheroids+with+humanized+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody.">Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody.</a> Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).</li><li>Cochonneau, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+arrest+and+apoptosis+induced+by+O-acetyl-GD2-specific+monoclonal+antibody+8B6+inhibits+tumor+growth+in+vitro+and+in+vivo.">Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo.</a> Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).</li><li>Chou, T. C., Martin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CompuSyn for drug combinations: PC software and user&#8217;s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , (2005).</li><li>Alvarez-Rueda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+monoclonal+antibody+to+O-acetyl-GD2+ganglioside+and+not+to+GD2+shows+potent+anti-tumor+activity+without+peripheral+nervous+system+cross-reactivity.">A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity.</a> PLoS One. 6 (9), e25220 (2011).</li><li>Faraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma+chemotherapy+can+be+augmented+by+immunotargeting+O-acetyl-GD2+tumor-associated+ganglioside.">Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside.</a> Oncoimmunology. 7 (1), e1373232 (2017).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ullman-Cullere, M. 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B., Tian, G. L., Houghton, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+design+and+sample+size+determination+for+testing+synergism+in+drug+combination+studies+based+on+uniform+measures.">Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures.</a> Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).</li><li>Tang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+EPHB6,+EFNB2,+and+EFNB3+expressions+in+human+neuroblastoma.">Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma.</a> Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).</li><li>Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+metastasis+of+human+breast+carcinomas+with+Matrigel+in+athymic+mice.">Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).</li><li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines.">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).</li><li>Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topotecan+plus+cyclophosphamide+as+maintenance+chemotherapy+for+children+with+high-risk+neuroblastoma+in+complete+remission:+short-term+curative+effects+and+toxicity.">Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).</li><li>Cheung, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglioside+GD2+specific+monoclonal+antibody+3F8:+a+phase+I+study+in+patients+with+neuroblastoma+and+malignant+melanoma.">Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma.</a> Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human.">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Dayde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+burden+influences+exposure+and+response+to+rituximab:+pharmacokinetic-pharmacodynamic+modeling+using+a+syngeneic+bioluminescent+murine+model+expressing+human+CD20.">Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20.</a> Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).</li><li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgamma(null)+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection.">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li><li>Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Responses+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Muscle+Invasive+Bladder+Cancer.">Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer.</a> Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).</li></ol>

Per prevedere l'effetto di interazione farmacologica, tre metodi possono essere utilizzati: la metodologia di isobologram17, la miscela non lineare modello18e la combinazione di indice1. Analisi dell'indice di combinazione sono il più comunemente usato perché la sua applicazione è semplificata dalla disponibilità di un programma per computer facile da usare. Per questo scopo, abbiamo caratterizzato in primo luogo la risposta dose-effetto di ogni ...

L'approccio convenzionale nel trattamento di un gran numero di diversi tipi di cancro si basava sul monotherapy. Anche se è ancora usato in molti casi, questo metodo ha incontrato diversi ostacoli che conduce a optare per terapie combinate2. In particolare, le cellule tumorali sono più suscettibili a sviluppare resistenza quando trattati con un farmaco singolo inducendo sopravvivenza alternativo meccanismi3, con conseguente fallimento terapeutico in pazienti4. Inoltre, in monoterapia, farmaci sono solitamente somministrati a dosi elevate. Questa situazione spesso provoca il verificarsi di forti effetti collaterali dose-dipendente che può essere intollerabile e imporre ai medici di interrompere il trattamento2. Per questi motivi, l'associazione di molecole antitumorali è ora preferito alla monoterapia.
Combinazioni di farmaci ideale sarebbero quelli che agiscono in sinergia contro le cellule del tumore, senza tossicità aumentata contro le cellule normali. Sinergismo si riferisce all'interazione di due o più farmaci che produce un effetto terapeutico maggiore della somma di ogni singola sostanza operano separatamente. Tali interazioni possono provocare una maggiore efficacia terapeutica clinica2. Limita la resistenza al trattamento, aumenta l'efficacia e può anche ridurre la tossicità2. Infatti, il dosaggio di ogni farmaco può essere ridotto per abbassare i loro effetti collaterali mirando alle vie differenti. Inoltre, una delle molecole può anche servire come un agente di sensibilizzazione contro le cellule tumorali. L'effetto del farmaco secondo può essere migliorata sulle cellule sensibilizzate e dosaggi meno possono essere usato5.
Terapia combinata può includere due o più farmaci chemioterapici e/o prodotti biologici, come gli anticorpi monoclonali6. Questi anticorpi monoclonali specificamente le cellule che esprimono un antigene di superficie delle cellule di interesse e sono in grado di uccidere le cellule tumorali attraverso vie immunologiche compreso citotossicità cellulo-mediata anticorpo-dipendente (ADCC), con il coinvolgimento di cellule immunitarie effettrici 7e citotossicità complemento-dipendente (CDC)6. Essi possono anche agire tramite un meccanismo non immunologico mediato da apoptosi8,9,10,11. In questo caso, l'induzione del processo di morte programmata delle cellule può sensibilizzare le cellule tumorali, indebolire la loro funzione e rendere più efficace il farmaco chemioterapico associato ad un dosaggio più basso. Come tale, proapoptotic mAb sono buoni candidati per la progettazione di regimi di combinazione con farmaci antineoplastici.
Sono stati descritti diversi modelli matematici per valutare il sinergismo della droga; uno di loro si basa sulla combinazione indice metodo1. Questo metodo si basa sul principio di effetto mediano sviluppato da Chou1. L'effetto mediano equazione correla la dose di farmaco e l'effetto della droga come segue.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
Qui, D è la dose di droga; DM è la dose mediana-effetto; Fa è la frazione influenzata dalla dose; m è un esponente che indica la forma della dose-effetto trama1. La dose mediana-effetto viene utilizzata per calcolare la dose Dx di un farmaco che inibisce o uccide "x" per cento delle cellule. Il valore CI viene quindi calcolato per valutare l'effetto additivo della combinazione del farmaco, come segue1.
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
CI il valore 1 indica un effetto additivo e un valore di CI di < 1 indica un effetto sinergico, mentre un valore di CI di > 1 indica antagonismo1. L'applicazione di questo metodo è ulteriormente facilitato dalla disponibilità di un programma per computer, CompuSyn, che determina sinergismo ed antagonismo a tutte le dosi o livelli di effetto simulato automaticamente12.
Il nostro gruppo ha sviluppato la specifica di 8B6 mAb per O-acetile-GD2 ganglioside (OAcGD2) di neuroblastoma antigene13 e ulteriormente dimostrato che questa mAb è in grado di indurre la morte delle cellule con gli attributi di apoptosi11. Per verificare se mAb 8B6 può sensibilizzare le cellule di neuroblastoma per il topotecan agente antineoplastico, abbiamo adattato il suddetto metodo sviluppato da Chou1. In primo luogo, determiniamo i valori (ED50) 50 di dose efficace di mAb 8B6 e topotecan. Successivamente, le cellule di neuroblastoma con rapporti di uguale potenza dei due composti in base ai valori di50 ED esposte per determinare i valori di CI utilizzando il software di simulazione di cui sopra. Questo metodo permette di dimostrare il sinergismo fra mAb 8B6 e topotecan in vitro. Successivamente, descriviamo un protocollo per valutare ulteriormente la potenza e la sicurezza di questa combinazione regime in vivo. Questo protocollo può essere facilmente applicato per selezionare mAb anticancro potente e sicuro e combinazioni dell'agente chemioterapeutico negli studi preclinici. Una rappresentazione schematica di questo studio è fornita nella Figura 1.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1389px;" width="1390">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Cell Proliferation kit (MTT)</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">CompuSyn software</td>
			<td style="width:161px;">ComboSyn</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Combosyn can be downloaded for free at http://www.combosyn.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">BIO-1556</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:161px;">Eurobio</td>
			<td style="width:132px;">CVFSVFF00-01</td>
			<td style="width:852px;">10% heat-inactivated fetal calf serum in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Firefox&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Mozilla Corporation</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Firefox can be downloaded for free at http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Heat lamp</td>
			<td style="width:161px;">Verre&#38;Quartz</td>
			<td style="width:132px;">4003/1R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Human neuroblastoma IMR-5 cell line</td>
			<td style="width:161px;">Accegen Biotechnology</td>
			<td style="width:132px;">ABC-TC0450</td>
			<td style="width:852px;">IMR-5 is a clone of the human neuroblastoma cell line IMR32 5459762. IMR-5 cells were generously provided by Dr. Santos Susin (U.872, Paris, France)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">25030-024</td>
			<td style="width:852px;">2 mM in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Lysis solution&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">mAb 8B6</td>
			<td style="width:161px;">University of Nantes</td>
			<td style="width:132px;">N/A</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Matrigel</td>
			<td style="width:161px;">Corning</td>
			<td style="width:132px;">354248</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Multiskan FC</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific&#160;</td>
			<td style="width:132px;">N08625</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 21G 1 &#189;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">BD Microlance</td>
			<td style="width:132px;">304432</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 25G 1</td>
			<td style="width:161px;">Terumo</td>
			<td style="width:132px;">NN-2525R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">NSG mice</td>
			<td style="width:161px;">Charles River Laboratories</td>
			<td style="width:132px;">5557</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Nunc MicroWell 96-well microplates</td>
			<td style="width:161px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:132px;">167008</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS</td>
			<td style="width:161px;">VWR</td>
			<td style="width:132px;">L182-10</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS, 0,05% EDTA</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PC that runs windows 7</td>
			<td style="width:161px;">Microsoft</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Windows 7 can be purchased at http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">15140-122</td>
			<td style="width:852px;">100 units/mL penicillin and 100 mg/mL streptomycin in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Reagent reservoir</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific</td>
			<td style="width:132px;">8094</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Rodent restrainer</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">TV-150-SM</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">31870-025</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Syringe 1 mL</td>
			<td style="width:161px;">Henke Sass Wolf</td>
			<td style="width:132px;">5010.200V0</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Topotecan</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">T2705</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation

Potenziamento di ostili gli anticorpi monoclonali (mAb) dagli agenti chemioterapeutici costituisce una strategia importante per la progettazione di una terapia efficace e più sicura contro il cancro. Qui forniamo un protocollo per identificare una combinazione razionale nella fase preclinica. In primo luogo, descriviamo un test per valutare il sinergismo tra mAb anticancro e farmaci citotossici, che utilizza l'equazione di indice di combinazione di Chou e Talalay1cella. Questo include la misurazione della sensibilità del tumore delle cellule farmaco - e anticorpo-usando un'analisi MTT, seguita da un'analisi di computer automatici per calcolare i valori di indice (CI) di combinazione. CI valori di < 1 indicare sinergismo tra testata mAbs e agenti citotossici1. Per corroborare l'in vitro risultati in vivo, ulteriormente Descriviamo un metodo per valutare l'efficacia del regime di combinazione in un modello di xenotrapianto del tumore. In questo modello, il regime combinato ritarda significativamente la crescita del tumore, che si traduce in un significativo di sopravvivenza esteso rispetto ai comandi del singolo-agente. D'importanza, la sperimentazione in vivo rivela che il regime di combinazione è ben tollerato. Questo protocollo permette la valutazione efficace di combinazioni di farmaci anticancro in modelli preclinici e l'identificazione della combinazione razionale per valutare in studi clinici.

I risultati rappresentativi e le figure sono adattati con il permesso dal precedente lavoro pubblicato14.
Anti-OAcGD2 mAb 8B6 migliora sinergico effetti inibitori di Topotecan, sulla crescita linea cellulare di Neuroblastoma:
Per stabilire la droga e le concentrazioni di anticorpi da utilizzare per la valutazione del sinergismo ...

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Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

Questo protocollo descrive come valutare il sinergismo fra un anticorpo antitumorale e farmaci antineoplastici in modelli preclinici utilizzando l'equazione di indice di combinazione di Chou e Talalay.

Potenziamento dell'efficacia dell'anticorpo antitumorale di farmaci antineoplastici: rilevazione dell'anticorpo-farmaco sinergismo usando l'equazione di indice di combinazione

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

L'immunoterapia combinata con la chemioterapia rappresenta un approccio innovativo per sviluppare una terapia efficiente nel cancro. Gli obiettivi principali sono raggiungere effetti sinergici e terapeutici, riduzione della dose e della tossicità e ridurre al minimo o ritardare l'induzione della resistenza ai farmaci. Tuttavia, per motivi pratici ed etici, non è possibile determinare la sinergia nei pazienti. Pertanto, prima della combinazione diretta negli studi clinici, devono essere effettuati studi di combinazione prenicaptor, in vitro e/o negli animali, per ottenere la logica per gli studi clinici. Un semplice metodo robusto per la quantificazione della sinergia tra farmaci si basa sull'equazione dell'indice combinato sviluppata da Shouan Talale, come illustrato in questo video. Usando questo metodo, e la sua simulazione computerizzata, evidenzeamo qui, il sinergismo tra l'anticorpo monoclonale 8B6, che è specifico per l'antigene del neuroblastoma Ganglioside O-Acetyl-GD2 e il farmaco chemioterapico Topotecan sulle cellule del neuroblastoma. In breve, dopo aver determinato la dose efficace 50 valori di ciascun composto nell'IMO umano, 5 linee cellulari di neuroblastoma, queste cellule sono state intubate con rapporti equi dei due composti e i valori dell'indice combinato sono stati calcolati utilizzando la simulazione automatica al computer. Abbiamo poi confermato questi risultati in Vivo, in un modello imo, 5 tumore xenofobo. Abbiamo coltivato cellule IMR-5 in un pallone T75, le abbiamo osservate al microscopio, per controllare la confluenza cellulare. Mezzo cellulare asperato dal pallone, lavare con 5 ml di PBS. Aggiungere 3 mL di soluzione EDTA/PBS 0,05%.. Riportare il pallone nell'incubatrice per 3 minuti. Esaminare la coltura cellulare al microscopio per il distacco cellulare. Aggiungere 10 ml di mezzo cellulare completo al pallone e trasferire la sospensione cellulare in un tubo conico sterile da 15 ml. Centrifugare per cinque minuti a 300 g.Contare le cellule usando un emocitometro. Rimuovere e scartare il supernatante. Sospendere le celle in in Complete Growth Medium.Regolare il volume medio per ottenere la concentrazione finale di 100.000 celle/mL.Semi 84 pozzi, 96 piastre di coltura del pozzo con 10.000 celle ciascuna, otteniamo 100 microlitri di sospensione cellulare. Incubare le cellule per 18 ore nell'incubatore di cellule.Diluire l'anticorpo monoclonale in 500 microlitri di Complete Growth Medium per ottenere una soluzione di lavoro anticorpale con una concentrazione di anticorpi monoclonali 240 micro-grammi per mL.Eseguire 5 delusioni seriali due volte come indicato nel protocollo. Diluire il farmaco in 500 microlitri di Complete Growth Medium per ottenere una soluzione di lavoro farmacologica con una concentrazione finale di 120 nanomolari. Eseguire 5, due volte delusioni seriali come indicato nel protocollo. Diluire allo stesso modo il farmaco più soluzioni di anibodies monoclonali. Per arrivare alla concentrazione finale, trasferire 50 microlitri di ciascuna soluzione farmacologica nei pozzi corrispondenti, come mostrato in questo layout sperimentale. Incubare le cellule per 72 ore nell'incubatrice. Aggiungere 10 microlitri di soluzione di reagente MTT in ogni pozzo. Incubare a 37 gradi Celsius per 4 ore. Aggiungere 100 microlitri di soluzione di licina in ogni pozzo utilizzando una pipetta multicanale e mescolare accuratamente mediante pipettazione. Incubare a 37 gradi Celsius per 4 ore in una camera umidificata. Liberare gli assorbenti a 570 e 620 nanometri usando uno spettrofotometro. Calcolare la vitalità della cella come segue. Calcolare i valori interessati dalla frazione utilizzando la seguente equazione. Eseguire il software di simulazione, fare clic sul nuovo pulsante esperimento per ottenere la finestra principale. Digitare il nome dell'esperimento. Fare clic su nuovo singolo farmaco. Digitare il nome. Digitare l'abbreviazione. Digitare l'unità di concentrazione del farmaco. Immettere i dati 1 dose e valore fa. Premere INVIO.Ripetere questo passaggio finché non vengono immessi tutti i punti dati. Fate clic su Finito (Finished).Seguire gli stessi passaggi per immettere i punti dati degli anticorpi monoclonali. Fare clic su Nuova combinazione di farmaci.Selezionare anticorpi farmacologici e monoclonali. Selezionate Rapporto costante (Constant Ratio).Fate clic su OK. Digitare il nome. Digitare l'abbreviazione. Digitare il rapporto anticorpo monoclonale del farmaco. Immettere i dati 1 dose. Premere INVIO.Il programma calcolerà automaticamente le dosi di Anticorpo Monoclonale 8B6 e combo. Immettere i dati 1 valore dell'a.ti.Premere INVIO.Ripetere questo passaggio finché non vengono immessi tutti i punti dati. Fare clic su Finito.Quindi, fare clic su Genera report.Selezionare il farmaco e l'anticorpo monoclonale, quindi fare clic su OK. Selezionare Combo e quindi FARE CLIC SU OK. Selezionare Intestazione, Tabella CI e Tabella riepilogativo e quindi fare clic su OK. Digitare il nome del file e l'analisi e fare clic su Salva per generare il report. Il report si apre automaticamente nel browser Web predefinito. Il report contiene una sezione della tabella di riepilogo che include i parametri titolo, data, nome finale, nota di descrizione, m, Dm e r, dose efficace 50 per l'agente utilizzato come monoterapia o in combinazione e la tabella dell'indice combinato per ogni combinazione alla dose effettiva 50, 75, 90 e 95.Un valore dell'indice combinato minore di 1 indica sinergismo. Un valore uguale a uno indica additività. Un valore maggiore di 1 indica antagonismo. Scongelare la matrice della membrana basale durante la notte immergendo il flaconcino nel ghiaccio in frigorifero a 4 gradi C prima dell'uso. Tutta l'usura della coltura o i supporti che vengono a contatto con la metrica della membrana basale devono essere prechilliti. Raccogli la cultura IMR5. Trasferire le celle in un tubo conico da 15 ml e centrifugare a 300 g per 5 minuti. Scartare il supernatante. Lavare le celle con PBS ghiacciato da 15 mL due volte. Preparare una sospensione cellulare per 5 milioni di cellule per mL in PBS ghiacciato. Trasferire la sospensione cellulare in un microtubo da 1,5 mL. Flaconcino a matrice di membrana basale girevole. Aggiungere 1 volume del reagente a matrice di membrana basale, miscelato mediante pipettazione per ottenere la sospensione cellulare di 2,5 milioni di celle per mL.Mantenere la sospensione cellulare sul ghiaccio. Radere il fianco di dove verrà eseguita l'iniezione. Mescolare le cellule e disegnare con cura la sospensione cellulare in una siringa da 1 ml montata con un ago da 21 g. Verificare che non vi siano bolle d'aria nella siringa. Disinfettare l'area di inoculazione dei topi con una soluzione antisettica. Spremere delicatamente la pelle del mouse sul fianco tra le dita nel sito di iniezione. Inserire l'ago esattamente nella piega della pelle. Non posizionare l'ago in profondità nel tessuto per assicurare l'iniezione sottocutanea. Iniettare sottocutaneamente 100 microlitri di sospensione cellulare IMR5. Ruotare la siringa per evitare la diffusione del liquido e ritirare l'ago. Monitorare i topi per il peso corporeo e la crescita del tumore. Misurare la lunghezza e la larghezza del tumore con un calibro. Calcola il volume tumorale usando questa formula. Inizia la terapia quando i tumori hanno raggiunto un volume medio da 50 a 60 mm

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescente ortotopico modello murino di cancro al pancreas

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Anticancro Efficacia della terapia fotodinamica con cancro del polmone con targeting nanoparticelle

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

Elettroforesi bidimensionale accoppiata con spettrometria di massa per un'analisi del proteoma di tessuto umano Adenoma pituitario

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping di Orthotopic omotrapianto (Syngeneic) dell'Adenocarcinoma Ductal pancreatico murino primario KPC tramite flusso Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

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Valutazione preclinica della bioattività dell'OT48 di cumarina anticancro di sferoidi, Colony Assays formazione e xenotrapianti di Zebrafish

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

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Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

Caratterizzare i mutanti correlati alla malattia di RAF Family Kinases utilizzando una serie di metodi pratici e fattibili

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Rilevamento dell'attività di retrotraposizione di HOT LINE-1s da PCR inverso a lunga distanza

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Oncogenic Gene Fusion Detection Using Anchored Multiplex Polymerase Chain Reaction Followed by Next Generation Sequencing

Rilevamento oncogenico della fusione genica utilizzando la reazione della catena di polimerasi multiplex ancorata seguita dal sequenziamento di nuova generazione

Gene fusions frequently contribute to the oncogenic phenotype of many different types of cancer. Additionally, the presence of certain fusions in samples ...