Name: potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00
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サポートを付与: 財団・ デ ・挙デ L 'ユニヴェルシテ ・ ド ・ ナント、レ Bagouz' à La Ligue contre le がん comité マノン ・ ド ・ ロワール = アトランティック県、comité デュ モルビアンと comité ・ ド ・ ヴァンデの宇根バラを注ぐ S.A.R.A.H、エトワール ・ ド ・ マーティンとソシエテ ・ フランセーズ ・ デ ・ ルッテ contre レ ラ癌エ レ leucémies デ ランファン et ・ デ ・ L'adolescent (SFCE)。および j. f. は、La Ligue Contre Le がんによってサポートされます。著者は、構造 Fédérative ・ フランスのフランソワ ・ Bonamy の UTE 施設をありがとうございます。著者は、IMR5 セルを提供するための博士 s. Suzin (Inserm、パリ) とさん h. Estéphan を彼女のテクニカル サポートにもありがとうございます。

動物飼育・実験の手順は、(契約 #C44 278 ・ #APAFIS 03479.01) は、フランス政府によって承認されました。動物のケアと手順が #2013-118 科学的目的に使用される動物の保護に関する指令 EU 2010/63/EU とフランス法の下で実施されました。
1. mAb 8B6 薬物相互作用間とトポテカンの併用体外の評価
<ol><li>96 ウェル サンプル準備 注意: 機関の健康と安全委員会に?...

<ol>
	<li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+basis,+experimental+design,+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies.">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li><li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+in+combating+cancer.">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li><li>Zahreddine, H., Borden, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+insights+into+drug+resistance+in+cancer.">Mechanisms and insights into drug resistance in cancer.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 28 (2013).</li><li>Martin, T. P., Baguley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re:+"Postoperative+validation+of+bone-anchored+implants+in+the+single-sided+deafness+population."+Snapp+et+al.+Otol+Neurotol+2012:+33;291-6.">Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).</li><li>Choi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+lung+cancer+cells+by+altered+dimerization+of+HSP27.">Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27.</a> Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).</li><li>Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies:+versatile+platforms+for+cancer+immunotherapy.">Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).</li><li>Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+review+of+the+role+of+Fc+gamma+receptor+polymorphisms+in+the+response+to+monoclonal+antibodies+in+cancer.">A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 6, 1 (2013).</li><li>Kowalczyk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GD2-specific+14G2a+monoclonal+antibody+induces+apoptosis+and+enhances+cytotoxicity+of+chemotherapeutic+drugs+in+IMR-32+human+neuroblastoma+cells.">The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells.</a> Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).</li><li>Retter, M. 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C., Martin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CompuSyn for drug combinations: PC software and user&#8217;s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , (2005).</li><li>Alvarez-Rueda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+monoclonal+antibody+to+O-acetyl-GD2+ganglioside+and+not+to+GD2+shows+potent+anti-tumor+activity+without+peripheral+nervous+system+cross-reactivity.">A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity.</a> PLoS One. 6 (9), e25220 (2011).</li><li>Faraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma+chemotherapy+can+be+augmented+by+immunotargeting+O-acetyl-GD2+tumor-associated+ganglioside.">Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside.</a> Oncoimmunology. 7 (1), e1373232 (2017).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ullman-Cullere, M. 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K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+metastasis+of+human+breast+carcinomas+with+Matrigel+in+athymic+mice.">Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).</li><li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines.">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).</li><li>Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topotecan+plus+cyclophosphamide+as+maintenance+chemotherapy+for+children+with+high-risk+neuroblastoma+in+complete+remission:+short-term+curative+effects+and+toxicity.">Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).</li><li>Cheung, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglioside+GD2+specific+monoclonal+antibody+3F8:+a+phase+I+study+in+patients+with+neuroblastoma+and+malignant+melanoma.">Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma.</a> Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human.">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Dayde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+burden+influences+exposure+and+response+to+rituximab:+pharmacokinetic-pharmacodynamic+modeling+using+a+syngeneic+bioluminescent+murine+model+expressing+human+CD20.">Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20.</a> Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).</li><li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgamma(null)+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection.">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li><li>Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Responses+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Muscle+Invasive+Bladder+Cancer.">Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer.</a> Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).</li></ol>

薬物相互作用の効果を予測する 3 つの方法を使用できます: isobologram 方法論17、非線形混合モデル18、および組み合わせインデックス1。インデックス分析の組み合わせは、ユーザーフレンドリーなコンピューター プログラムの可用性でそのアプリケーションを簡略化するために最もよく使用されます。この目的のため我々 は最初 MTT の試?...

癌のさまざまな種類の多数の治療に従来のアプローチは、単独療法に基づいていた。場合でも、それは多くの場合使用このメソッドは複合療法2を選ぶことにつながるいくつかの障害に会った。特に、がん細胞が耐性を代替生存メカニズム3患者4の治療の失敗の結果を誘導することによって単一の薬剤と扱われたときになりやすい。また、単独療法、薬、高用量で投与は通常。多くの場合このような状況は我慢でき治療2を停止するために医師を強制的に強力な用量依存性副作用の発生の結果します。これらの理由から、抗癌剤分子の協会は今単独投与することが好ましい。
理想的な薬の組み合わせは、正常細胞に対して毒性を増加することがなく、腫瘍細胞に対する相乗効果で作用するでしょう。相乗効果は、それぞれ個々 の薬剤別に演技の合計よりも大きい治療効果を生成する 2 つ以上の薬剤の相互作用を指します。このような相互作用が臨床治療効果2にあります。治療抵抗性を制限、効果をアップ、また毒性2を減らすことができます。実際には、その副作用を下げる様々 な経路をターゲットに各薬剤の投与量を削減できます。さらに、分子の 1 つはまた癌細胞に対する増感剤として使用できます。感作細胞に関する 2 番目の薬の効果を高めることができるし、少ない用量で使用される5をすることができます。
併用療法は、2 つ以上の化学療法薬および/または6モノクローナル抗体などの生物製剤を含めることができます。これらの Mab の関心とは抗体依存性細胞媒介性細胞傷害 (ADCC) を含む免疫学的経路を介して腫瘍細胞を殺すことができる細胞の表面抗原を発現する細胞を標的免疫エフェクター細胞の関与7、および補体依存性細胞傷害 (CDC)6。彼らは、を介してアポトーシス8,9,10,11を介した非免疫機構も機能できます。この場合、プログラム細胞死のプロセスの誘導が癌細胞に感光性、彼らの機能を弱める、関連付けられている化学療法薬を低用量でより効果的に。そのため、アポトーシスの mAb が抗がん剤のレジメンを設計するため適しています。
別の数学的モデルは、薬剤の相乗効果の評価に記載されています。それらの 1 つは、組み合わせのインデックス方法1に基づいています。シュー クリーム1によって開発された中央効果原理に基づくです。中央効果方程式は、次のとおり薬剤の投与量と薬の効果を関連付けます。
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
ここで、 Dは薬物投与です。Dmは中央効果線量;Fa ; 線量によって影響を受ける割合は、します。mは、線量効果プロット1の形状を示す指数です。中央効果用量を使用して、 Dxを阻害するあるいはセルの"x"% を殺す薬剤の投与量を計算します。CI 値が1を次のように、薬の組み合わせの添加剤の効果を評価するために計算されます。
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
1 の低 CI 値を示し、添加剤の効果の低 CI 値 < 1 の低 CI 値間の相乗効果を示します > 1 拮抗作用1を示します。このメソッドのアプリケーションはさらに相乗効果と全ての用量で対立を決定する CompuSyn、コンピューター プログラムの可用性によって促進されるまたは効果のレベルは自動的にシミュレートされた12。
当社グループ O アセチル GD2 ガングリオシド (OAcGD2) 神経芽細胞腫抗原13 mAb 8B6 特定を開発し、さらにこの mAb がアポトーシス11の属性と細胞死を誘導することができることを示した。MAb 8B6 神経芽細胞腫細胞抗悪性腫瘍剤トポテカン感光性を与えることができるかどうかをテストするため、我々 は周1によって開発された上記の方法を適応しました。まず、mAb 8B6 とトポテカンの実効線量 50 (ED50) 値を決定します。次に、ED50値に基づいて 2 つの化合物の等効力比を持つ神経芽細胞腫細胞は、上記のシミュレーション ソフトを用いた CI 値を決定する公開されます。このメソッドは mAb 8B6 とトポテカンの併用体外間の相乗作用を実証することができます。次に、さらに効力とこの組み合わせ療法生体内での安全性を評価するためのプロトコルについて述べる。このプロトコルは、前臨床試験において強力かつ安全な抗がん剤 mAb との化学療法のエージェントの組み合わせを選択する簡単に適用できます。本研究の概略は、図 1で提供しています。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1389px;" width="1390">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Cell Proliferation kit (MTT)</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">CompuSyn software</td>
			<td style="width:161px;">ComboSyn</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Combosyn can be downloaded for free at http://www.combosyn.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">BIO-1556</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:161px;">Eurobio</td>
			<td style="width:132px;">CVFSVFF00-01</td>
			<td style="width:852px;">10% heat-inactivated fetal calf serum in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Firefox&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Mozilla Corporation</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Firefox can be downloaded for free at http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Heat lamp</td>
			<td style="width:161px;">Verre&#38;Quartz</td>
			<td style="width:132px;">4003/1R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Human neuroblastoma IMR-5 cell line</td>
			<td style="width:161px;">Accegen Biotechnology</td>
			<td style="width:132px;">ABC-TC0450</td>
			<td style="width:852px;">IMR-5 is a clone of the human neuroblastoma cell line IMR32 5459762. IMR-5 cells were generously provided by Dr. Santos Susin (U.872, Paris, France)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">25030-024</td>
			<td style="width:852px;">2 mM in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Lysis solution&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">mAb 8B6</td>
			<td style="width:161px;">University of Nantes</td>
			<td style="width:132px;">N/A</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Matrigel</td>
			<td style="width:161px;">Corning</td>
			<td style="width:132px;">354248</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Multiskan FC</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific&#160;</td>
			<td style="width:132px;">N08625</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 21G 1 &#189;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">BD Microlance</td>
			<td style="width:132px;">304432</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 25G 1</td>
			<td style="width:161px;">Terumo</td>
			<td style="width:132px;">NN-2525R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">NSG mice</td>
			<td style="width:161px;">Charles River Laboratories</td>
			<td style="width:132px;">5557</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Nunc MicroWell 96-well microplates</td>
			<td style="width:161px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:132px;">167008</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS</td>
			<td style="width:161px;">VWR</td>
			<td style="width:132px;">L182-10</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS, 0,05% EDTA</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PC that runs windows 7</td>
			<td style="width:161px;">Microsoft</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Windows 7 can be purchased at http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">15140-122</td>
			<td style="width:852px;">100 units/mL penicillin and 100 mg/mL streptomycin in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Reagent reservoir</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific</td>
			<td style="width:132px;">8094</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Rodent restrainer</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">TV-150-SM</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">31870-025</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Syringe 1 mL</td>
			<td style="width:161px;">Henke Sass Wolf</td>
			<td style="width:132px;">5010.200V0</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Topotecan</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">T2705</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation

敵対的なモノクローナル抗体 (mAb) による化学療法剤の増強効果は、がんに対して効果的で安全な治療を設計するための重要な戦略を構成します。ここでは、前臨床段階で合理的な組み合わせを識別するプロトコルを提供します。まず、Talalay ・周1の組み合わせのインデックス式を使用する抗癌剤 mAb と細胞毒性薬物の相乗効果を評価するために細胞に基づく試金を記述します。これは測定の腫瘍細胞と抗体-感受性インデックス (CI) 値の組み合わせを計算するコンピューターが自動的に分析に続いて、MTT アッセイを使用して含まれています。CI の値 < 1 テスト Mab と細胞毒性薬1間の相乗作用を示します。体外の調査結果、体内を裏付ける、さらに異種移植腫瘍モデルの組み合わせ療法の有効性を評価する方法を説明します。このモデルでは、併用療法が腫瘍の成長は、単剤コントロールと比較して有意な拡張生存の結果大幅に遅れます。重要なは、生体内で実験は併用療法は忍容性を明らかにします。このプロトコルには、前臨床モデルで抗癌性の薬剤の組み合わせの有効性評価と臨床試験を評価する合理的な組み合わせの同定ができます。

代表的な結果や数字14以前出版された仕事からの許可と適応されます。
抗 OAcGD2 モノクローナル抗体 8B6 相乗的神経芽細胞腫細胞ライン増殖に対するトポテカンの抑制効果を高めます。
薬とトポテカンと mAb 8B6 ・薬・ MTT アッセイを用いた神経芽?...

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Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

このプロトコルでは、シュー クリームと Talalay 組み合わせインデックス式を使用して抗がん剤抗体と前臨床モデルで抗悪性腫瘍薬の間の相乗作用を評価する方法について説明します。

抗がん剤抗体抗悪性腫瘍薬による効果の増強: 組み合わせインデックス式を用いた抗体医薬の相乗作用の検出

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

免疫療法と化学療法を組み合わせることは、がんにおける効率的な治療法を開発するための革新的なアプローチを表しています。主な目的は、相乗的な治療効果、用量および毒性の低減を達成し、薬剤耐性の誘導を最小限に抑えるか遅らせることである。しかし、実用的かつ倫理的な理由から、患者の相乗効果を決定することはできません。したがって、臨床試験で直接組み合わせする前に、プレニカプター併用試験、インビトロ、および/または動物において、臨床試験の根拠を得るために実施されるべきである。このビデオに示すように、薬物間の相乗効果の定量化のための単純な堅牢な方法は、Shouan Talaleが開発した組み合わせインデックス方程式に基づいています。この方法とコンピュータ化されたシミュレーションを用いて、O-アセチルGD2神経芽細胞抗原に特異的なモノクローナル抗体8B6と、神経芽細胞細胞上の化学療法薬トポテカンとの相乗作用をここで証明する。簡単に言えば、ヒトIMOにおける各化合物の有効用量50値を決定した後、5つの神経芽細胞腫細胞株、これらの細胞を2つの化合物の公平な比率で挿管し、そして組み合わせ指数値を自動計算機シミュレーションを用いて計算した。次に、IMOの5腫瘍異種モデルで、Vivoでこれらの結果を確認した。私たちは、T75フラスコでIMR-5細胞を増殖させ、顕微鏡で観察し、細胞の合流をチェックしました。フラスコから細胞培地をアスペレートし、5mLのPBSで洗浄する。0.05%EDTA/PBS溶液の3 mLを加えます。フラスコをインキュベーターに3分間戻します。細胞分離のための顕微鏡下で細胞培養を調べる。フラスコに完全な細胞媒体の10 mLを加え、生殖不能、15 mL円錐形の管に細胞懸濁液を移す。遠心分離機は300gで5分間、ヘモサイトメーターを用いた細胞をカウントする。上清を取り除き、捨てます。完全増殖培地中の細胞を再中断する.培地容量を調整して、100,000個の細胞/mL.Seed 84ウェルの最終濃度を得るために、それぞれ10,000個の細胞を持つ96ウェル培養プレート、すなわち細胞懸濁液の100マイクロリットルである。完全成長培地の500マイクロリットルの細胞インキュベーター.希薄モノクローナル抗体で細胞を18時間インキュベートし、モノクローナル抗体濃度240マイクログラム/mLで抗体作業溶液を得る。完全成長培地の500マイクロリットルで薬物を希釈し、最終濃度120ナノモルで薬物作動溶液を得る。プロトコルに示されているように、5、2倍のシリアル妄想を実行します。薬物とモノクローナルアニボディ溶液と同じ方法で希釈します。最終的な濃度に到達するには、この実験レイアウトに示すように、対応するウェル内の各薬剤溶液の50マイクロリットルを移す。培養器で細胞を72時間インキュベートします。各ウェルに10マイクロリットルのMTT試薬溶液を加えます。摂氏37度で4時間インキュベートします。マルチチャンネルピペットを使用して各ウェルに100マイクロリットルのリシン溶液を加え、ピペットで十分に混ぜます。加湿チャンバーで4時間摂氏37度でインキュベート。分光光度計を使用して570および620ナノメートルで吸収剤を取り除きます。セルの生存率を次のように計算します。次の式を使用して、影響を受ける小数の値を計算します。シミュレーションソフトウェアを実行し、新しい実験ボタンをクリックしてメインウィンドウを取得します。実験の名前を入力します。新しい単一の薬をクリックします。名前を入力します。省略形を入力します。薬物濃度単位を入力します。データ1線量およびFA値を入力する。Enter キーを押して、すべてのデータ ポイントが入力されるまでこの手順を繰り返します。[Finished]をクリックします。同じ手順に従って、モノクローナル抗体データポイントを入力します。[新薬コンボ]をクリックします。[定数比率]を選択します。名前を入力します。省略形を入力します。薬物モノクローナル抗体比を入力します。データを1回入力します。プログラムは自動的にモノクローナル抗体8B6とコンボの用量を計算します。データ 1 FA 値を入力します。Enter キーを押して、すべてのデータ ポイントが入力されるまでこの手順を繰り返します。[完了] をクリックし、[レポートの生成] をクリックします。コンボを選択し、[OK] をクリックします。[ヘッダー]、[CI テーブル]、[集計テーブル] を選択し、[OK] をクリックします。ファイル名と分析を入力し、[保存] をクリックしてレポートを生成します。レポートは自動的にデフォルトの Web ブラウザーで開きます。このレポートには、タイトル、日付、最終名、記述ノート、m、Dm、およびrパラメータ、単剤または組み合わせで使用される薬剤の有効用量50、および有効用量50、75、90、および95.Aの組み合わせ指数値が1より小さい組み合わせインデックス表を含む要約表セクションが含まれています。値が 1 に等しい場合は、加算性を示します。1 より大きい値は、拮抗を示します。使用前に4°Cの冷蔵庫でバイアルを氷に浸すことによって、基質膜マトリックスを一晩解凍する。すべての培養摩耗、または地下膜メトリックに接触する培地は、プレチルする必要があります。培養IMR5を収穫する。細胞を15 mLの円錐形チューブに移し、遠心分離機を300gで5分間移動させます。上清を捨てます。15 mLの氷冷PBSで細胞を2回洗浄します。氷冷PBSでmL当たり500万細胞の細胞懸濁液を調製する。細胞懸濁液を1.5 mLマイクロチューブに移します。旋回基膜マトリックスバイアル。1体積の基部膜マトリックス試薬を加え、ピペット処理により混合し、mL当たり250万個の細胞懸濁液を得る。注射が行われる場所の側面を剃ります。細胞を混ぜ合わせ、21g針を取り付けた1mLシリンジに細胞懸濁液を慎重に引き出します。シリンジに気泡がないことを確認してください。マウスの接種領域を消毒液で消毒する。注射部位で指の間の側面のマウスの皮膚を静かに絞ります。針をスキンフォールドに正確に挿入します。皮下注射を保証するために、針を組織の奥深くに入れないでください。皮下に100マイクロリットルのIMR5細胞懸濁液を注入する。液体の拡散を防ぐために注射器を回し、針を引き出します。体重と腫瘍の成長のためにマウスを監視します。口径で腫瘍の長さと幅を測定します。この式を使用して腫瘍体積を計算します。腫瘍が50〜60ミリメートルの平均体積に達したときに治療を開始

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

膵臓がんの蛍光同所性マウスモデル

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

肺癌標的化ナノ粒子と光線力学療法の抗がん効能

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

ひと下垂体腺腫の組織のプロテオームの分析のための質量分析法と相まって二次元ゲル電気泳動

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

同所性同種 (同系) マウスのプライマリ KPC 膵管腺癌のフローサイトメトリーによる診療

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

回転楕円体、コロニー形成アッセイとゼブラフィッシュ異種移植片による抗癌性クマリン OT48 の生物活性の臨床評価

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

抗体のアレイによるシグナル伝達経路の尋問でチロシンキナーゼ阻害剤に対する抵抗性の評価

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Detection of Protease Activity by Fluorescent Peptide Zymography

蛍光ペプチド ザイモグラフィーによってプロテアーゼ活性の検出

The purpose of this method is to measure the proteolytic activity of complex biological samples. The samples are separated by molecular weight using ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

実用的で実現可能な方法のセットを使用してRAFファミリーキナーゼの疾患関連変異体を特徴付けます

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Detection of Retrotransposition Activity of Hot LINE-1s by Long-Distance Inverse PCR

長距離逆PCRによるホットLINE-1のレトロトランスポジション活性の検出

Long interspersed nuclear elements 1 (LINE-1s) are the only family of mobile genetic elements in the human genome that can move autonomously. They do so ...

Oncogenic Gene Fusion Detection Using Anchored Multiplex Polymerase Chain Reaction Followed by Next Generation Sequencing

アンカー多重ポリメラーゼ連鎖反応を用いた腫瘍性遺伝子融合検出、次世代シーケンシング

Gene fusions frequently contribute to the oncogenic phenotype of many different types of cancer. Additionally, the presence of certain fusions in samples ...