Name: potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation at JoVE.com

Gi støtte: Fondation de Projet de L 'Université de Nantes, les Bagouz' à Manon, La Ligue contre le kreft comité de Loire-Atlantique, comité du Morbihan, og comité de Vendée, une steg hell S.A.R.A.H, L'Etoile de Martin og la Société Française de Lutte contre les Kreft et les leucémies de L'Enfant et de L'adolescent (SFCE). MB og J.F. støttes av La Ligue Contre Le kreft. Forfatterne takker UTE-anlegget på struktur Fédérative de Recherche François Bonamy. Forfatterne også takke Dr. S. Suzin (Inserm, Paris) for å gi IMR5 cellene og Ms. H. Estéphan for hennes kundestøtte.

Dyr bolig og eksperimentelle prosedyren ble godkjent av den franske regjering (avtaler #C44-278 og #APAFIS 03479.01). Dyr omsorg og prosedyrer ble utført under direktivet EU 2010/63/EU og fransk lov #2013-118 om beskyttelse av dyr som brukes til vitenskaplige formål.
1. evaluering av narkotika interaksjon mellom mAb 8B6 og Topotecan I Vitro
<ol><li>96-brønns eksempel forberedelse FORSIKTIG: Se institusjonens helse og sikkerhet komiteen og følger lokale bestem...

<ol>
	<li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+basis,+experimental+design,+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies.">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li><li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+in+combating+cancer.">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li><li>Zahreddine, H., Borden, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+insights+into+drug+resistance+in+cancer.">Mechanisms and insights into drug resistance in cancer.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 28 (2013).</li><li>Martin, T. P., Baguley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re:+"Postoperative+validation+of+bone-anchored+implants+in+the+single-sided+deafness+population."+Snapp+et+al.+Otol+Neurotol+2012:+33;291-6.">Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).</li><li>Choi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+lung+cancer+cells+by+altered+dimerization+of+HSP27.">Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27.</a> Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).</li><li>Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies:+versatile+platforms+for+cancer+immunotherapy.">Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).</li><li>Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+review+of+the+role+of+Fc+gamma+receptor+polymorphisms+in+the+response+to+monoclonal+antibodies+in+cancer.">A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 6, 1 (2013).</li><li>Kowalczyk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GD2-specific+14G2a+monoclonal+antibody+induces+apoptosis+and+enhances+cytotoxicity+of+chemotherapeutic+drugs+in+IMR-32+human+neuroblastoma+cells.">The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells.</a> Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).</li><li>Retter, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+proapoptotic+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody+and+evaluation+of+its+therapeutic+effect+on+melanoma+and+small+cell+lung+carcinoma+xenografts.">Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts.</a> Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).</li><li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+induction+of+human+lung+cancer+cell+line+in+multicellular+heterospheroids+with+humanized+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody.">Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody.</a> Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).</li><li>Cochonneau, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+arrest+and+apoptosis+induced+by+O-acetyl-GD2-specific+monoclonal+antibody+8B6+inhibits+tumor+growth+in+vitro+and+in+vivo.">Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo.</a> Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).</li><li>Chou, T. C., Martin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CompuSyn for drug combinations: PC software and user&#8217;s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , (2005).</li><li>Alvarez-Rueda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+monoclonal+antibody+to+O-acetyl-GD2+ganglioside+and+not+to+GD2+shows+potent+anti-tumor+activity+without+peripheral+nervous+system+cross-reactivity.">A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity.</a> PLoS One. 6 (9), e25220 (2011).</li><li>Faraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma+chemotherapy+can+be+augmented+by+immunotargeting+O-acetyl-GD2+tumor-associated+ganglioside.">Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside.</a> Oncoimmunology. 7 (1), e1373232 (2017).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body+condition+scoring:+a+rapid+and+accurate+method+for+assessing+health+status+in+mice.">Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice.</a> Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).</li><li>Teicher, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+for+in+vitro+and+in+vivo+synergy.">Assays for in vitro and in vivo synergy.</a> Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).</li><li>White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+nonlinear+mixture+response+surface+paradigm+for+the+study+of+synergism:+a+three+drug+example.">A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example.</a> Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+XTT+cell+proliferation+assay+applied+to+cell+layers+embedded+in+three-dimensional+matrix.">The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix.</a> Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).</li><li>Thompson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy+of+topotecan+in+combination+with+vincristine+for+treatment+of+pediatric+solid+tumor+xenografts.">Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts.</a> Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).</li><li>Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+design+and+sample+size+determination+for+testing+synergism+in+drug+combination+studies+based+on+uniform+measures.">Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures.</a> Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).</li><li>Tang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+EPHB6,+EFNB2,+and+EFNB3+expressions+in+human+neuroblastoma.">Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma.</a> Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).</li><li>Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+metastasis+of+human+breast+carcinomas+with+Matrigel+in+athymic+mice.">Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).</li><li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines.">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).</li><li>Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topotecan+plus+cyclophosphamide+as+maintenance+chemotherapy+for+children+with+high-risk+neuroblastoma+in+complete+remission:+short-term+curative+effects+and+toxicity.">Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).</li><li>Cheung, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglioside+GD2+specific+monoclonal+antibody+3F8:+a+phase+I+study+in+patients+with+neuroblastoma+and+malignant+melanoma.">Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma.</a> Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human.">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Dayde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+burden+influences+exposure+and+response+to+rituximab:+pharmacokinetic-pharmacodynamic+modeling+using+a+syngeneic+bioluminescent+murine+model+expressing+human+CD20.">Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20.</a> Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).</li><li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgamma(null)+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection.">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li><li>Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Responses+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Muscle+Invasive+Bladder+Cancer.">Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer.</a> Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).</li></ol>

Tre metoder kan brukes for å forutsi effekten av interaksjoner,: de isobologram metodikk17og ikke-lineære blanding modell18kombinasjonen indeksere1. Kombinasjon indeks analyse er mest vanlig fordi programmet er forenklet av tilgjengeligheten av et brukervennlig program. For dette formålet preget vi først dose-effekt svar hver agent brukes alene eller i kombinasjon, ved å utføre en MTT analysen19. Denne metoden bruker på...

Konvensjonelle tilnærming i behandlingen av en rekke ulike typer kreft var basert på monoterapi. Selv om det er fortsatt brukt i mange tilfeller, møtte denne metoden flere hindringer fører til optisk for kombinert terapier2. Kreftceller er spesielt mer utsatt for å utvikle resistens når behandlet med et enkelt stoff av inducing alternativ overlevelse mekanismer3, som resulterer i terapeutisk feil i pasienter4. Videre i monoterapi, er narkotika vanligvis administreres på en høy dose. Denne situasjonen ofte resulterer i forekomsten av sterk doseavhengig bivirkninger som kan være utålelig og tvinge leger å stoppe behandling2. For disse grunner, association of anticancer molekyler er nå foretrukket å monoterapi.
Ideell rusmiddelkombinasjoner vil være de som fungere i synergi mot kreftceller, uten økt toksisitet mot normale celler. Synergism refererer til interaksjon av to eller flere stoffer som produserer en terapeutisk effekt som er større enn summen av enkelte rusmiddel handle separat. Slike interaksjoner kan føre til forbedret klinisk terapeutisk effekt2. Det begrenser behandling motstand øker effekten og kan også redusere toksisitet2. Faktisk reduseres dosen av hvert legemiddel for å redusere sine bivirkninger av målretting ulike veier. I tillegg kan en av molekyler også tjene som en sensibiliserende agent mot kreftceller. Effekten av stoffet på andreplass kan bli styrket på sensitivisert celler og færre doser kan være brukt5.
Kombinert behandling kan inneholde to eller flere cellegifter og/eller biologiske, for eksempel monoklonale antistoffer6. Disse mAbs spesifikt mål celler som uttrykker en celle-overflate antigen av interesse og er kjøpedyktig drepe kreftceller gjennom immunologiske trasé inkludert antistoff-avhengig celle-mediert cytotoksisitet (ADCC), med involvering av immun Effektor celler 7og komplement-avhengige cytotoksisitet (CDC)6. De kan også fungere via en ikke-immunologiske mekanisme formidlet av apoptose8,9,10,11. I dette tilfellet kan induksjon av prosessen med programmert celledød sensitize kreftceller, svekke deres funksjon og gjøre tilknyttede chemotherapeutic stoffet mer effektiv med en lavere dose. Slik proapoptotic mAb er gode kandidater for utforming kombinasjon regimer med antineoplastic stoffer.
Ulike matematiske modeller har blitt beskrevet for å vurdere narkotika synergism; en av dem er basert på kombinasjonen indeks metode1. Denne metoden er basert på median-effekt prinsippet utviklet av Chou1. Median-effekt ligningen korrelerer narkotika dose og narkotika effekt som følger.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
Her er D narkotika dosen; DM er median-effekt dosen; FA er en brøkdel av dosen; m er en eksponent som angir formen av dose-effekten plot1. Median-effekt dosen brukes til å beregne dosen Dx av et stoff som hemmer eller dreper "x" prosent av cellene. CI verdien beregnes for å vurdere den additiv effekten av legemidlet kombinasjonen, slik1.
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
CI verdien 1 indikerer en additiv effekt og CI verdien < 1 indikerer en synergistisk effekt, mens CI verdien > 1 angir antagonisme1. Anvendelsen av denne metoden er mer tilrettelagt av tilgjengeligheten av et dataprogram, CompuSyn, som bestemmer synergism og antagonisme på alle doser eller effekt nivåer simulert automatisk12.
Vår gruppe har utviklet den mAb 8B6 spesifikt for O-acetyl-GD2 ganglioside (OAcGD2) neuroblastom antigen13 og videre demonstrerte at denne mAb er kjøpedyktig indusere celledød med attributter av apoptose11. For å teste om mAb 8B6 kan sensitize neuroblastom celler antineoplastic agent topotecan, tilpasset vi de ovenfor nevnte metoden utviklet av Chou1. Først fastslår vi effektive dose 50 (ED50) verdiene i mAb 8B6 og topotecan. Neste, neuroblastom cellene med equipotent prosenter av to forbindelser basert på ED50 verdier er utsatt for å bestemme CI verdiene med ovennevnte simuleringsprogram. Denne metoden tillater oss å demonstrere synergism mellom mAb 8B6 og topotecan i vitro. Deretter beskriver vi en protokoll for å vurdere videre styrken og sikkerheten til denne kombinasjonen diett i vivo. Denne protokollen kan lett brukes for å velge potent og trygt anticancer mAb og chemotherapeutic agent kombinasjoner i preklinisk studier. En skjematisk fremstilling av denne studien finnes i figur 1.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1389px;" width="1390">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Cell Proliferation kit (MTT)</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">CompuSyn software</td>
			<td style="width:161px;">ComboSyn</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Combosyn can be downloaded for free at http://www.combosyn.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">BIO-1556</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:161px;">Eurobio</td>
			<td style="width:132px;">CVFSVFF00-01</td>
			<td style="width:852px;">10% heat-inactivated fetal calf serum in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Firefox&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Mozilla Corporation</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Firefox can be downloaded for free at http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Heat lamp</td>
			<td style="width:161px;">Verre&#38;Quartz</td>
			<td style="width:132px;">4003/1R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Human neuroblastoma IMR-5 cell line</td>
			<td style="width:161px;">Accegen Biotechnology</td>
			<td style="width:132px;">ABC-TC0450</td>
			<td style="width:852px;">IMR-5 is a clone of the human neuroblastoma cell line IMR32 5459762. IMR-5 cells were generously provided by Dr. Santos Susin (U.872, Paris, France)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">25030-024</td>
			<td style="width:852px;">2 mM in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Lysis solution&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">mAb 8B6</td>
			<td style="width:161px;">University of Nantes</td>
			<td style="width:132px;">N/A</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Matrigel</td>
			<td style="width:161px;">Corning</td>
			<td style="width:132px;">354248</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Multiskan FC</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific&#160;</td>
			<td style="width:132px;">N08625</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 21G 1 &#189;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">BD Microlance</td>
			<td style="width:132px;">304432</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 25G 1</td>
			<td style="width:161px;">Terumo</td>
			<td style="width:132px;">NN-2525R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">NSG mice</td>
			<td style="width:161px;">Charles River Laboratories</td>
			<td style="width:132px;">5557</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Nunc MicroWell 96-well microplates</td>
			<td style="width:161px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:132px;">167008</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS</td>
			<td style="width:161px;">VWR</td>
			<td style="width:132px;">L182-10</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS, 0,05% EDTA</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PC that runs windows 7</td>
			<td style="width:161px;">Microsoft</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Windows 7 can be purchased at http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">15140-122</td>
			<td style="width:852px;">100 units/mL penicillin and 100 mg/mL streptomycin in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Reagent reservoir</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific</td>
			<td style="width:132px;">8094</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Rodent restrainer</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">TV-150-SM</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">31870-025</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Syringe 1 mL</td>
			<td style="width:161px;">Henke Sass Wolf</td>
			<td style="width:132px;">5010.200V0</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Topotecan</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">T2705</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation

Potensiering av fiendtlige monoklonale antistoffer (mAb) av chemotherapeutic agenter utgjør en verdifull strategi for å utforme effektive og tryggere behandling mot kreft. Her gir vi en protokoll for å identifisere en rasjonell kombinasjon ved prekliniske trinn. Først beskrive vi et cellebasert analysen for å vurdere synergism mellom anticancer mAb og cytotoksiske medikamenter, som bruker kombinasjon indeks ligningen Chou og Talalay1. Dette inkluderer måling av svulst celle narkotika og antistoff-følsomhet ved hjelp av en MTT-analysen, etterfulgt av en automatisert datamaskinen analyse til å beregne de kombinasjon-indeksverdiene (CI). CI verdier for < 1 indikerer synergism mellom testet mAbs og cytotoksiske agenter1. For å bekrefte den i vitro funn i vivo, beskriver vi videre en metode for å vurdere kombinasjon diett effekten i en xenograft svulst modell. I denne modellen forsinker den kombinerte diett vesentlig tumor vekst, som resulterer i en betydelig utvidet overlevelse i forhold til single-agent kontroller. Viktigere, avslører i vivo eksperimentering at kombinasjonen diett er godt tolerert. Denne protokollen gir effektiv evalueringen av anticancer rusmiddelkombinasjoner i preklinisk modeller og identifikasjon av rasjonell kombinasjon å vurdere i kliniske forsøk.

Representant resultater og tall er tilpasset med tillatelse fra tidligere utgitte verk14.
Anti-OAcGD2 mAb 8B6 forbedrer synergi hemmende effekten av Topotecan på neuroblastom cellevekst linje:
Å etablere stoffet og antistoff konsentrasjonen skal brukes for å vurdere synergism mellom topotecan og mAb 8B6, stoffet og antistoff ...

Watch this Scientific Journal Video about Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation at JoVE.com

Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

Denne protokollen beskriver hvordan å vurdere synergism mellom et anticancer antistoff og antineoplastic legemidler i preklinisk modeller ved hjelp av kombinasjon indeks ligning Chou og Talalay.

Potensiering av Anticancer antistoff effekten av Antineoplastic legemidler: påvisning av antistoff-stoff Synergism ved hjelp av kombinasjon Index formelen

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

Immunterapi kombinert med kjemoterapi representerer en innovativ tilnærming for å utvikle effektiv terapi i kreft. Hovedmålet er å oppnå synergistisk, terapeutiske effekter, dose- og toksisitetsreduksjon, og å minimere eller forsinke induksjon av legemiddelresistens. Men av praktiske og etiske årsaker er det ikke mulig å fastslå synergisme hos pasienter. Før direkte kombinasjon i kliniske studier bør prenicaptorkombinasjonsstudier, in vitro og/eller hos dyr utføres for å oppnå begrunnelsen for kliniske studier. En enkel robust metode for kvantifisering av synergisme mellom legemidler er basert på kombinasjonsindeksligningen utviklet av Shouan Talale, som illustrert i denne videoen. Ved hjelp av denne metoden, og den datastyrte simuleringen, beviser vi her, synergismen mellom monoklonalt antistoff 8B6, som er spesifikk for O-Acetyl-GD2 Ganglioside neuroblastomantigen og det kjemoterapeutiske stoffet Topotecan på neuroblastomceller. Kort sagt, etter å ha bestemt den effektive dosen 50 verdier av hver forbindelse i menneskelig IMO, 5 neuroblastom cellelinje, disse cellene ble intubert med rettferdige forhold mellom de to forbindelsene, og kombinasjonen indeksverdiene ble beregnet ved hjelp av automatisert datasimulering. Vi bekreftet deretter disse resultatene i Vivo, i en IMO, 5 tumor xenographed modell. Vi vokste IMR-5 celler i en T75 kolbe, observerte dem under et mikroskop, for å sjekke celle samløpet. Asperate celle medium fra kolben, vask med 5 ml PBS. Legg til 3 ml 0,05 %EDTA/PBS-løsning. Sett kolben tilbake til inkubatoren i 3 minutter. Undersøk cellekulturen under et mikroskop for celleavløsning. Tilsett 10 ml komplett cellemedium til kolben, og overfør cellefjæringen til et sterilt konisk rør på 15 ml. Sentrifuge i fem minutter ved 300 g.Count celler ved hjelp av et hemocytometer. Fjern og kast overnatanten. Re suspendere celler i Complete Growth Medium.Juster middels volum for å oppnå endelig konsentrasjon på 100,000 celler / ml.Seed 84 brønner, 96 brønnkulturplate med 10.000 celler hver, som er 100 mikroliter cellesuspensjon. Inkuber celler i 18 timer i Cell Incubator.Dilute monoklonalt antistoff i 500 mikroliter av Complete Growth Medium for å oppnå en antistoffarbeidsløsning med en monoklonal antistoffkonsentrasjon 240 mikro-gram per ml.Utfør 5 to ganger seriell vrangforestillinger som angitt i protokollen. Fortynn stoffet i 500 mikroliter av Complete Growth Medium for å oppnå en legemiddelarbeidsløsning med en endelig konsentrasjon 120 nanomolar. Utfør 5, to ganger seriell vrangforestillinger som angitt i protokollen. Fortynn på samme måte som stoffet pluss monoklonale anibodies løsninger. For å komme frem til den endelige konsentrasjonen, overfør 50 mikroliter av hver legemiddelløsning i de tilsvarende brønnene som vist på denne eksperimentelle layouten. Inkuber cellene i 72 timer i inkubatoren. Tilsett 10 mikroliter MTT-reagensoppløsning i hver brønn. Inkuber ved 37 grader Celsius i 4 timer. Tilsett 100 mikroliter lycine løsning i hver brønn ved hjelp av en flerkanals pipette og bland godt ved pipettering. Inkuber ved 37 grader Celsius i 4 timer i et fuktet kammer. Kvitt absorberene ved 570 og 620 nanometer ved hjelp av et spektrofotometer. Beregn celle levedyktigheten som følger. Beregn de berørte brøkene ved hjelp av følgende formel. Kjør simuleringsprogramvaren, klikk på den nye eksperimentknappen for å få hovedvinduet. Skriv inn navnet på eksperimentet. Klikk på nytt enkelt stoff. Skriv inn navnet. Skriv inn forkortelsen. Skriv inn konsentrasjonsenheten for stoffet. Angi data 1 dose og aktivaverdi. Trykk Enter.Repeat dette trinnet til alle datapunktene er angitt. Klikk Ferdig.Følg de samme trinnene for å angi monoklonale antistoffdatapunkter. Klikk New Drug Combo.Select narkotika og monoklonale antistoffer. Velg Konstant forhold.Klikk OK. Skriv inn navnet. Skriv inn forkortelsen. Skriv stoffet monoklonalt antistoffforhold. Angi data 1 dose. Trykk Enter.Programmet vil automatisk beregne dosene av Monoclonal Antistoff 8B6 og combo. Angi data 1 aktivaverdi.Trykk Enter.Repeat dette trinnet til alle datapunktene er angitt. Klikk Ferdig.Deretter klikker du Generer rapport.Velg legemiddel og monoklonalt antistoff, og klikk deretter OK. Velg Kombinasjon, og klikk deretter OK. Velg Topptekst, KI-tabell og Sammendragstabell, og klikk deretter OK. Skriv inn filnavnet og analysen, og klikk lagre for å generere rapporten. Rapporten åpnes automatisk i ens standard nettleser. Rapporten inneholder en sammendragstabellseksjon som inneholder tittel, dato, endelig navn, beskrivelsesnotat, m, Dm og r-parametere, effektiv dose 50 for enten agent som brukes som monoterapi eller kombinasjon, og kombinasjonsindekstabellen for hver kombinasjon ved effektiv dose 50, 75, 90 og 95.A kombinasjonsindeksverdi mindre enn 1 indikerer synergisme. En verdi er lik en indikerer additivity. En verdi som er større enn 1 indikerer antagonisme. Tin kjellermembranmatrisen over natten ved å senke hetteglasset i is i 4 grader C kjøleskap før bruk. All kultur slitasje, eller media som kommer i kontakt med kjelleren membran beregning bør være prechilled. Høst kulturen IMR5. Overfør cellene til et konisk 15 ml konisk rør og sentrifuge ved 300 g i 5 minutter. Kast det overnaturlige. Vask celler med 15 ml iskald PBS to ganger. Forbered en cellesuspensjon for 5 millioner celler per ml i iskald PBS. Overfør cellefjæringen til 1,5 ml mikrorør. Drei kjeller membran matrise hetteglass. Tilsett 1 volum av kjelleren membran matrise reagens, blandet ved pipettering for å få celle suspensjon av 2,5 millioner celler per ml.Hold celle suspensjon på is. Barber flanken av hvor injeksjonen vil bli gjort. Bland celler og trekk forsiktig celleopphenget i en 1 ml sprøyte montert med en 21 g kanyle. Kontroller at det ikke er luftbobler i sprøyten. Desinfiser inokulasjonsområdet til musene med en antiseptisk løsning. Klem forsiktig musehuden på flanken mellom fingrene på injeksjonsstedet. Sett nålen nøyaktig inn i hudfolden. Ikke plasser nålen dypt inn i vevet for å sikre subkutan injeksjon. Injiser 100 mikroliter imr5 celle suspensjon subkutant. Roter sprøyten for å hindre væskespredning og trekk kanylen tilbake. Overvåk mus for kroppsvekt og tumorvekst. Mål lengden og bredden på svulsten med et kaliber. Beregn tumorvolumet ved hjelp av denne formelen. Start behandlingen når svulster har nådd et gjennomsnittlig volum på 50 til 60 mm

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescent ortotopiske musemodell for kreft i bukspyttkjertelen

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Anticancer Effekten av fotodynamisk behandling med Lung Cancer-Målrettet Nanopartikler

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

Todimensjonal Gel geleelektroforese kombinert med massespektrometri metoder for en analyse av menneskelige hypofysen adenom vev proteom

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping av Orthotopic Homograft (Syngeneic) av Murine primære KPC bukspyttkjertelen Ductal Adenocarcinoma av flowcytometri

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Prekliniske vurdering av Bioactivity av Anticancer kumarin OT48 ved Spheroids, koloni formasjon analyser og sebrafisk Xenografts

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

Vurdering av motstand mot Tyrosine Kinase hemmere av en avhør av signaltransduksjon trasé av antistoff matriser

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Detection of Protease Activity by Fluorescent Peptide Zymography

Påvisning av Protease aktivitet av fluorescerende peptid Zymography

The purpose of this method is to measure the proteolytic activity of complex biological samples. The samples are separated by molecular weight using ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

Karakterisere sykdom-relaterte mutanter av RAF familie kinaser ved hjelp av et sett av praktiske og gjennomførbare metoder

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Detection of Retrotransposition Activity of Hot LINE-1s by Long-Distance Inverse PCR

Påvisning av Retrotransposition aktivitet av Hot LINE-1s ved langdistanse inverse PCR

Long interspersed nuclear elements 1 (LINE-1s) are the only family of mobile genetic elements in the human genome that can move autonomously. They do so ...

Oncogenic Gene Fusion Detection Using Anchored Multiplex Polymerase Chain Reaction Followed by Next Generation Sequencing

Kreftfremkallende Gene Fusion Detection bruke forankret multiplex polymerase Kjedere reaksjon etterfulgt av neste generasjon sekvensering

Gene fusions frequently contribute to the oncogenic phenotype of many different types of cancer. Additionally, the presence of certain fusions in samples ...