Name: potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00
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Conceder apoio: Fondation de Projet de L 'Université de Nantes, les Bagouz' à Manon, Ligue La contre le Cancer Comitê de Loire-Atlantique, comité du Morbihan e Comitê de Vendée, une rosa pour S.A.R.A.H., L'Etoile de Martin e la Société Française de Lutte contre les Cânceres et les leucémies de L'enfant et de L'adolescent (SFCE). M.B. e J.F. são suportados pela La Liga Contre Le Cancer. Os autores graças a UTE-facilidade da estrutura Fédérative de Recherche François Bonamy. Os autores também agradecer o Dr. S. Suzin (Inserm, Paris) para fornecer as células IMR5 e a Sra. H. Estéphan para a assistência técnica.

Alojamento dos animais e procedimento experimental foram aprovados pelo governo francês (acordos #C44-278 e #APAFIS 03479.01). Procedimentos e cuidados com animais foram conduzidos sob a Directiva UE 2010/63/CE e Lei n ° 2013 #-118 relativa à protecção dos animais utilizados para fins científicos.
1. avaliação da interação de droga entre mAb 8B6 e Topotecano In Vitro
<ol><li>preparação da amostra de 96 poços Atenção: Consultar a Comissão de saúde...

<ol>
	<li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+basis,+experimental+design,+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies.">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li><li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+in+combating+cancer.">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li><li>Zahreddine, H., Borden, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+insights+into+drug+resistance+in+cancer.">Mechanisms and insights into drug resistance in cancer.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 28 (2013).</li><li>Martin, T. P., Baguley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re:+"Postoperative+validation+of+bone-anchored+implants+in+the+single-sided+deafness+population."+Snapp+et+al.+Otol+Neurotol+2012:+33;291-6.">Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).</li><li>Choi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+lung+cancer+cells+by+altered+dimerization+of+HSP27.">Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27.</a> Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).</li><li>Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies:+versatile+platforms+for+cancer+immunotherapy.">Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).</li><li>Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+review+of+the+role+of+Fc+gamma+receptor+polymorphisms+in+the+response+to+monoclonal+antibodies+in+cancer.">A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 6, 1 (2013).</li><li>Kowalczyk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GD2-specific+14G2a+monoclonal+antibody+induces+apoptosis+and+enhances+cytotoxicity+of+chemotherapeutic+drugs+in+IMR-32+human+neuroblastoma+cells.">The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells.</a> Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).</li><li>Retter, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+proapoptotic+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody+and+evaluation+of+its+therapeutic+effect+on+melanoma+and+small+cell+lung+carcinoma+xenografts.">Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts.</a> Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).</li><li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+induction+of+human+lung+cancer+cell+line+in+multicellular+heterospheroids+with+humanized+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody.">Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody.</a> Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).</li><li>Cochonneau, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+arrest+and+apoptosis+induced+by+O-acetyl-GD2-specific+monoclonal+antibody+8B6+inhibits+tumor+growth+in+vitro+and+in+vivo.">Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo.</a> Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).</li><li>Chou, T. C., Martin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CompuSyn for drug combinations: PC software and user&#8217;s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , (2005).</li><li>Alvarez-Rueda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+monoclonal+antibody+to+O-acetyl-GD2+ganglioside+and+not+to+GD2+shows+potent+anti-tumor+activity+without+peripheral+nervous+system+cross-reactivity.">A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity.</a> PLoS One. 6 (9), e25220 (2011).</li><li>Faraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma+chemotherapy+can+be+augmented+by+immunotargeting+O-acetyl-GD2+tumor-associated+ganglioside.">Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside.</a> Oncoimmunology. 7 (1), e1373232 (2017).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body+condition+scoring:+a+rapid+and+accurate+method+for+assessing+health+status+in+mice.">Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice.</a> Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).</li><li>Teicher, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+for+in+vitro+and+in+vivo+synergy.">Assays for in vitro and in vivo synergy.</a> Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).</li><li>White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+nonlinear+mixture+response+surface+paradigm+for+the+study+of+synergism:+a+three+drug+example.">A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example.</a> Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+XTT+cell+proliferation+assay+applied+to+cell+layers+embedded+in+three-dimensional+matrix.">The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix.</a> Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).</li><li>Thompson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy+of+topotecan+in+combination+with+vincristine+for+treatment+of+pediatric+solid+tumor+xenografts.">Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts.</a> Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).</li><li>Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+design+and+sample+size+determination+for+testing+synergism+in+drug+combination+studies+based+on+uniform+measures.">Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures.</a> Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).</li><li>Tang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+EPHB6,+EFNB2,+and+EFNB3+expressions+in+human+neuroblastoma.">Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma.</a> Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).</li><li>Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+metastasis+of+human+breast+carcinomas+with+Matrigel+in+athymic+mice.">Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).</li><li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines.">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).</li><li>Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topotecan+plus+cyclophosphamide+as+maintenance+chemotherapy+for+children+with+high-risk+neuroblastoma+in+complete+remission:+short-term+curative+effects+and+toxicity.">Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).</li><li>Cheung, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglioside+GD2+specific+monoclonal+antibody+3F8:+a+phase+I+study+in+patients+with+neuroblastoma+and+malignant+melanoma.">Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma.</a> Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human.">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Dayde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+burden+influences+exposure+and+response+to+rituximab:+pharmacokinetic-pharmacodynamic+modeling+using+a+syngeneic+bioluminescent+murine+model+expressing+human+CD20.">Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20.</a> Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).</li><li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgamma(null)+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection.">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li><li>Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Responses+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Muscle+Invasive+Bladder+Cancer.">Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer.</a> Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).</li></ol>

Para prever o efeito de interações medicamentosas, podem ser usados três métodos: a metodologia de isobologram17, a mistura não-linear modelo18e a combinação do índice1. Análise do índice de combinação é o mais comumente usado porque sua aplicação é simplificada pela disponibilidade de um programa de computador user-friendly. Para esta finalidade, nós primeiro caracteriza a resposta de dose-efeito de cada agente usado sozinho ou em c...

A abordagem convencional no tratamento de um grande número de diferentes tipos de câncer foi baseada em monoterapia. Mesmo que ainda é usado em muitos casos, este método encontrou vários obstáculos levando a optar por terapias combinadas2. Particularmente, as células cancerosas são mais suscetíveis a desenvolver resistência quando tratados com uma única droga através da indução de sobrevivência alternativa mecanismos3, resultando em falha terapêutica em pacientes4. Além disso, em monoterapia, drogas são administradas geralmente em uma dose alta. Essa situação geralmente resulta da ocorrência de fortes efeitos colaterais de dose-dependente que pode ser intolerável e forçar os médicos a parar o tratamento2. Por estas razões, a associação de moléculas anticâncer é agora preferiu em monoterapia.
Combinações de drogas ideal seriam aqueles que agem em sinergia contra células tumorais, sem maior toxicidade contra células normais. Sinergismo refere-se a interação de duas ou mais drogas que produz um efeito terapêutico maior que a soma de cada fármaco individual agindo separadamente. Tais interações podem resultar em maior eficácia terapêutica clínica2. Isso limita a resistência de tratamento aumenta a eficácia e também pode reduzir a toxicidade2. Na verdade, a dose de cada fármaco pode ser reduzida para diminuir seus efeitos colaterais, orientando caminhos diferentes. Além disso, uma das moléculas também pode servir como um agente de sensibilização contra células cancerosas. O efeito da segunda droga pode ser melhorado em células sensibilizadas e menos dosagens podem ser usado5.
Terapia combinada pode incluir dois ou mais quimioterápicos e/ou produtos biológicos, tais como anticorpos monoclonais6. Esses mAbs voltados especificamente para as células expressando um antígeno de superfície celular de interesse e são capazes de matar células tumorais através de vias imunológicas, incluindo a citotoxicidade mediada por células do anticorpo-dependente (ADCC), com a participação de células imunes efetoras 7e citotoxicidade complemento-dependente (CDC)6. Eles também podem atuar através de um mecanismo não-imunológica mediado por apoptose8,9,10,11. Neste caso, a indução do processo de morte celular programada pode sensibilizar as células cancerosas, enfraquecer sua função e que a droga associada quimioterápico mais eficazes em uma dosagem mais baixa. Como tal, proapoptotic mAb são bons candidatos para a concepção de regimes de combinação com fármacos antineoplásicos.
Diferentes modelos matemáticos têm sido descritos para avaliar sinergismo de drogas; um deles é baseado na combinação índice método1. Este método baseia-se no princípio da mediana-efeito desenvolvido por Chou1. A equação da mediana-efeito correlaciona a dose da droga e o efeito de drogas como segue.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
Aqui, D é a dose de drogas; DM é a dose mediana-efeito; FA é a fração que afetaram a dose; m é um expoente que significa a forma do dose-efeito trama1. A dose de mediana-efeito é usada para calcular a dose Dx de uma droga que inibe ou mata "x" por cento das células. O valor de CI é então calculado para avaliar o efeito aditivo da combinação de drogas, da seguinte forma1.
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
CI o valor 1 indica um efeito aditivo e um valor de CI de < 1 indica um efeito sinérgico, enquanto um valor de CI de > 1 indica o antagonismo1. A aplicação deste método é facilitada pela disponibilidade de um programa de computador, CompuSyn, que determina o sinergismo e antagonismo em todas as doses ou níveis de efeito automaticamente simularam12.
O nosso grupo desenvolveu o mAb 8B6 específico para O-acetil-GD2 gangliosídeos (OAcGD2) neuroblastoma antígeno13 e ainda mais demonstrado que este mAb é capaz de induzir a morte celular com atributos de apoptosis11. Para testar se o mAb 8B6 pode sensibilizar as células de neuroblastoma de Topotecano o agente antineoplásicos, adaptamos o método acima mencionado, desenvolvido por Chou1. Primeiro, vemos a dose efetiva 50 (ED50) valores de mAb 8B6 e Topotecam. Em seguida, as células de neuroblastoma com equipotent rácios dos dois compostos com base nos valores de50 ED são expostas para determinar os valores de CI usando o software de simulação acima mencionados. Este método nos permite demonstrar sinergismo entre mAb 8B6 e Topotecano em vitro. Em seguida, descreveremos um protocolo para avaliar a potência e a segurança desta combinação regime na vivo. Este protocolo pode ser facilmente aplicado para selecionar mAb anticâncer potente e seguro e agente quimioterapêutico combinações em estudos pré-clínicos. Uma representação esquemática deste estudo é fornecida na Figura 1.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1389px;" width="1390">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Cell Proliferation kit (MTT)</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">CompuSyn software</td>
			<td style="width:161px;">ComboSyn</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Combosyn can be downloaded for free at http://www.combosyn.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">BIO-1556</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:161px;">Eurobio</td>
			<td style="width:132px;">CVFSVFF00-01</td>
			<td style="width:852px;">10% heat-inactivated fetal calf serum in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Firefox&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Mozilla Corporation</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Firefox can be downloaded for free at http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Heat lamp</td>
			<td style="width:161px;">Verre&#38;Quartz</td>
			<td style="width:132px;">4003/1R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Human neuroblastoma IMR-5 cell line</td>
			<td style="width:161px;">Accegen Biotechnology</td>
			<td style="width:132px;">ABC-TC0450</td>
			<td style="width:852px;">IMR-5 is a clone of the human neuroblastoma cell line IMR32 5459762. IMR-5 cells were generously provided by Dr. Santos Susin (U.872, Paris, France)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">25030-024</td>
			<td style="width:852px;">2 mM in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Lysis solution&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">mAb 8B6</td>
			<td style="width:161px;">University of Nantes</td>
			<td style="width:132px;">N/A</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Matrigel</td>
			<td style="width:161px;">Corning</td>
			<td style="width:132px;">354248</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Multiskan FC</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific&#160;</td>
			<td style="width:132px;">N08625</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 21G 1 &#189;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">BD Microlance</td>
			<td style="width:132px;">304432</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 25G 1</td>
			<td style="width:161px;">Terumo</td>
			<td style="width:132px;">NN-2525R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">NSG mice</td>
			<td style="width:161px;">Charles River Laboratories</td>
			<td style="width:132px;">5557</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Nunc MicroWell 96-well microplates</td>
			<td style="width:161px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:132px;">167008</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS</td>
			<td style="width:161px;">VWR</td>
			<td style="width:132px;">L182-10</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS, 0,05% EDTA</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PC that runs windows 7</td>
			<td style="width:161px;">Microsoft</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Windows 7 can be purchased at http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">15140-122</td>
			<td style="width:852px;">100 units/mL penicillin and 100 mg/mL streptomycin in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Reagent reservoir</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific</td>
			<td style="width:132px;">8094</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Rodent restrainer</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">TV-150-SM</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">31870-025</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Syringe 1 mL</td>
			<td style="width:161px;">Henke Sass Wolf</td>
			<td style="width:132px;">5010.200V0</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Topotecan</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">T2705</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation

Potencialização dos hostis antibodies monoclonal (mAb) por agentes quimioterápicos constitui uma estratégia valiosa para a concepção de terapia eficaz e segura contra o câncer. Aqui nós fornecemos um protocolo para identificar uma combinação racional na etapa pré-clínica. Primeiro, nós descrevemos um baseada em célula de ensaio para avaliar o sinergismo entre mAb anticâncer e drogas citotóxicas, que utiliza a equação de índice de combinação de Chou e Talalay1. Isso inclui a medição de tumor celular droga-anticorpo-sensibilidade e usando um ensaio de MTT, seguido por uma análise automatizada de computador para calcular os valores de índice (CI) de combinação. Valores de CI de < 1 indicar sinergismo entre mAbs testado e agentes citotóxicos1. Para corroborar o em vitro achados na vivo, descrevemos mais um método para avaliar a eficácia do regime de combinação em um modelo de tumor de enxerto. Neste modelo, o regime combinado significativamente atrasa o crescimento do tumor, o que resulta em uma significativa sobrevivência prolongada em comparação com controles de único agente. Importante, a experimentação na vivo revela que o regime de combinação é bem tolerado. Este protocolo permite a avaliação eficaz das combinações de drogas anticâncer em modelos pré-clínicos e a identificação de uma combinação racional de avaliar em ensaios clínicos.

Os resultados representativos e figuras são adaptadas com a permissão de trabalho anteriormente publicado14.
Anti-OAcGD2 mAb 8B6 sinergicamente aumenta os efeitos inibitórios de Topotecano no crescimento de linha de células de Neuroblastoma:
Para estabelecer a droga e as concentrações de anticorpos deve ser usado para aval...

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Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

Este protocolo descreve como avaliar o sinergismo entre um anticorpo anticâncer e medicamentos antineoplásicos em modelos pré-clínicos, usando a equação de índice de combinação de Chou e Talalay.

Potenciação da eficácia de anticorpos anticâncer por fármacos antineoplásicos: deteção de sinergismo de anticorpo-droga usando a equação de índice de combinação

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

A imunoterapia combinada com a quimioterapia representa uma abordagem inovadora para desenvolver uma terapia eficiente no câncer. Os principais objetivos são alcançar efeitos sinérgicos, terapêuticos, redução de dose e toxicidade, e minimizar ou retardar a indução da resistência medicamentosa. No entanto, por razões práticas e éticas, não é possível determinar o sinergismo nos pacientes. Assim, antes da combinação direta em ensaios clínicos, estudos de combinação de prenicaptores, in vitro e/ou em animais, devem ser realizados para obter a lógica para estudos clínicos. Um método simples e robusto para a quantificação do sinergismo entre as drogas baseia-se na equação de índice de combinação desenvolvida por Shouan Talale, como ilustrado neste vídeo. Usando este método, e sua simulação computadorizada, evidenciamos aqui o sinergismo entre o Anticorpo Monoclonal 8B6, que é específico para o antígeno de neuroblastoma O-Acetyl-GD2 Ganglioside e a droga quimioterápica Topotecan em células neuroblastoma. Resumidamente, após determinar a dose efetiva de 50 valores de cada composto em IMO humana, 5 linha celular neuroblastoma, essas células foram entubadas com razões equitagens dos dois compostos, e os valores do índice de combinação foram calculados por meio de simulação computador automatizada. Em seguida, confirmamos esses resultados na Vivo, em um modelo IMO, 5 tumores xenografados. Nós cultivamos células IMR-5 em um frasco T75, observamos-nas sob um microscópio, para verificar a confluência celular. Asperate meio celular do frasco, lave com 5 mL de PBS. Adicione 3 mL de solução 0,05%EDTA/PBS. Devolva o frasco à incubadora por 3 minutos. Examine a cultura celular sob um microscópio para desprendimento celular. Adicione 10 mL de meio celular completo ao frasco e transfira a suspensão da célula para um tubo cônico estéril de 15 mL. Centrífuga por cinco minutos a 300 g.Conte células usando um hemócito. Remova e descarte o supernaspe. Re suspender células em Meio de Crescimento Completo.Ajuste o volume médio para obter concentração final de 100.000 células/mL.Semente 84 poços, 96 placas de cultura bem com 10.000 células cada, que é 100 microliters de suspensão celular. Incubar células por 18 horas na Incubadora celular.Diluir anticorpo monoclonal em 500 microliters de Meio de Crescimento Completo para obter uma solução de trabalho de anticorpos com uma concentração de anticorpos monoclonais 240 micro-gramas por mL.Execute 5 delírios serial duas vezes, conforme indicado no protocolo. Diluir a droga em 500 microliters de Complete Growth Medium para obter uma solução de trabalho medicamentosa com uma concentração final de 120 nanomolar. Realize 5, duas vezes delírios seriais, como indicado no protocolo. Diluir da mesma forma que a droga mais soluções de anibodies monoclonais. Para chegar à concentração final, transfira 50 microliters de cada solução de medicamentos nos poços correspondentes, como mostrado neste layout experimental. Incubar as células por 72 horas na incubadora. Adicione 10 microliters de solução de reagente MTT em cada poço. Incubar a 37 graus Celsius por 4 horas. Adicione 100 microliters de solução lycine em cada poço usando uma pipeta multicanal e misture bem por pipetação. Incubar a 37 graus Celsius por 4 horas em uma câmara umidificada. Livre os absorventes a 570 e 620 nanômetros usando um espectrômetro. Calcule a viabilidade celular da seguinte forma. Calcule os valores afetados pela fração usando a seguinte equação. Execute o software de simulação, clique no novo botão de experimento para obter a janela principal. Digite o nome do experimento. Clique em nova droga única. Digite o nome. Digite a abreviação. Digite a unidade de concentração de drogas. Digite dados 1 dose e valor fa. Pressione Enter.Repita esta etapa até que todos os pontos de dados sejam inseridos. Clique em Concluído.Siga os mesmos passos para inserir os pontos de dados de anticorpos monoclonais. Clique em New Drug Combo.Select droga e anticorpos monoclonais. Selecione Relação constante.clique em OK. Digite o nome. Digite a abreviação. Digite a relação de anticorpos monoclonais da droga. Digite a dose 1 dos dados. Pressione Enter.O programa calculará automaticamente as doses de Anticorpo Monoclonal 8B6 e combo. Digite o valor de FA dos dados 1.Pressione Enter.Repita esta etapa até que todos os pontos de dados sejam inseridos. Clique em Concluído.Em seguida, clique em Gerar Relatório.Selecione a droga e o anticorpo monoclonal e, em seguida, clique em OK. Selecione Combo e clique em OK. Selecione Cabeçalho, Tabela CI e Tabela de Resumo e clique em OK. Digite o nome do arquivo e a análise e clique em salvar para gerar o relatório. O relatório é aberto automaticamente no navegador padrão da Web. O relatório contém uma seção de tabela de resumo que inclui título, data, nome final, nota de descrição, m, Dm e r parâmetros, dose efetiva 50 para qualquer agente usado como monoterapia ou em combinação, e a tabela de índice de combinação para cada combinação na dose efetiva 50, 75, 90 e 95.Um valor de índice de combinação menor que 1 indica sinergismo. Um valor igual a um indica aditividade. Um valor maior que 1 indica antagonismo. Descongele a matriz da membrana do porão durante a noite submergindo o frasco no gelo em 4 graus C geladeira antes do uso. Todo o desgaste da cultura, ou mídia que entra em contato com a métrica da membrana do porão deve ser prechilled. Colher a cultura IMR5. Transfira as células para um tubo cônico de 15 mL e centrífuga a 300 g por 5 minutos. Descarte o supernaspeso. Lave as células com 15 mL de pbs gelado duas vezes. Prepare uma suspensão celular para 5 milhões de células por mL em PBS gelado. Transfira a suspensão do celular para um microtubo de 1,5 mL. Frasco de matriz de membrana do porão giratório. Adicione 1 volume do reagente da matriz da membrana do porão, misturado por pipetação para obter suspensão celular de 2,5 milhões de células por mL.Mantenha a suspensão celular no gelo. Raspe o flanco de onde a injeção será feita. Misture as células e desenhe cuidadosamente a suspensão celular em uma seringa de 1 mL montada com uma agulha de 21 g. Verifique se não há bolhas de ar na seringa. Desinfetar a área de inoculação dos camundongos com uma solução antisséptica. Aperte suavemente a pele do rato no flanco entre os dedos no local da injeção. Insira a agulha exatamente na dobra cutânea. Não coloque a agulha profundamente no tecido para assegurar a injeção subcutânea. Injete 100 microliters de suspensão celular IMR5 subcutânea. Gire a seringa para evitar a propagação líquida e retire a agulha. Monitore os camundongos para o peso corporal e o crescimento do tumor. Meça o comprimento e largura do tumor com um calibre. Calcule o volume do tumor usando esta fórmula. Terapia inicial quando os tumores atingiram um volume médio de 50 a 60 mm

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescente modelo de camundongo ortotópico de câncer de pâncreas

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Pesquisa do câncer

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Anticancer eficácia da terapia fotodinâmica com Nanopartículas Lung Cancer segmentadas

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

Eletroforese em Gel bidimensional juntamente com métodos de espectrometria de massa para uma análise do proteoma de tecido humano Adenoma de hipófise

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping de ortotópico Homograft (Syngeneic) de murino KPC primário de Adenocarcinoma Ductal do pâncreas por citometria de fluxo

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Avaliação pré-clínica da Bioatividade da OT48 de cumarina Anticancer esferoides, ensaios de formação de colônia e Xenografts Zebrafish

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

Avaliação da resistência aos inibidores de tirosina quinase por um interrogatório das vias de transdução de sinal por matrizes de anticorpo

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Detection of Protease Activity by Fluorescent Peptide Zymography

Deteção da atividade de Protease por zimografia peptídeo fluorescente

The purpose of this method is to measure the proteolytic activity of complex biological samples. The samples are separated by molecular weight using ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

Caracterizar Mutants relacionados à doença da família da RAF kinases usando um conjunto de métodos práticos e viáveis

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Detection of Retrotransposition Activity of Hot LINE-1s by Long-Distance Inverse PCR

Detecção de atividade de retrotransposição de Hot LINE-1s por PCR inverso de longa distância

Long interspersed nuclear elements 1 (LINE-1s) are the only family of mobile genetic elements in the human genome that can move autonomously. They do so ...

Oncogenic Gene Fusion Detection Using Anchored Multiplex Polymerase Chain Reaction Followed by Next Generation Sequencing

Detecção de fusão gênica oncogênica usando a reação em cadeia de polimerase multiplex ancorada seguida por sequenciamento da próxima geração

Gene fusions frequently contribute to the oncogenic phenotype of many different types of cancer. Additionally, the presence of certain fusions in samples ...