Name: potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation at JoVE.com

Предоставить поддержку: Фондасьон де Projet де L 'Université de Nantes, les Bagouz» меню Манон, Кубка французской лиги против le рак comité de Loire-Atlantique, Комитет дю Morbihan и Комитет де Вандея, une Роза залить S.A.R.A.H, Мартин де л ' Этуаль и la Société Française de Lutte contre les Раки et les leucémies de L'Enfant et de просвещение (SFCE). М.б. и J.F. поддерживаются Ла Лига Contre Le рака. Авторы благодарят ют объекта структуры Fédérative де Recherche Bonamy Франсуа. Авторы также поблагодарить д-р S. Сузин (Inserm, Париж) для обеспечения IMR5 клеток и г-жа H. Estéphan за ее технической помощи.

Животных и экспериментальной процедуры были утверждены правительством Франции (соглашений #C44-278 и #APAFIS 03479.01). Уход за животными и процедуры были проведены согласно директиве ЕС 2010/63/ЕС и французский закон #2013-118 по защите животных, используемых для научных целей.
1. Оценка на...

<ol>
	<li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+basis,+experimental+design,+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies.">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li><li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+in+combating+cancer.">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li><li>Zahreddine, H., Borden, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+insights+into+drug+resistance+in+cancer.">Mechanisms and insights into drug resistance in cancer.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 28 (2013).</li><li>Martin, T. P., Baguley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re:+"Postoperative+validation+of+bone-anchored+implants+in+the+single-sided+deafness+population."+Snapp+et+al.+Otol+Neurotol+2012:+33;291-6.">Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).</li><li>Choi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+lung+cancer+cells+by+altered+dimerization+of+HSP27.">Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27.</a> Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).</li><li>Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies:+versatile+platforms+for+cancer+immunotherapy.">Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).</li><li>Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+review+of+the+role+of+Fc+gamma+receptor+polymorphisms+in+the+response+to+monoclonal+antibodies+in+cancer.">A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 6, 1 (2013).</li><li>Kowalczyk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GD2-specific+14G2a+monoclonal+antibody+induces+apoptosis+and+enhances+cytotoxicity+of+chemotherapeutic+drugs+in+IMR-32+human+neuroblastoma+cells.">The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells.</a> Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).</li><li>Retter, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+proapoptotic+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody+and+evaluation+of+its+therapeutic+effect+on+melanoma+and+small+cell+lung+carcinoma+xenografts.">Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts.</a> Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).</li><li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+induction+of+human+lung+cancer+cell+line+in+multicellular+heterospheroids+with+humanized+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody.">Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody.</a> Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).</li><li>Cochonneau, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+arrest+and+apoptosis+induced+by+O-acetyl-GD2-specific+monoclonal+antibody+8B6+inhibits+tumor+growth+in+vitro+and+in+vivo.">Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo.</a> Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).</li><li>Chou, T. C., Martin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CompuSyn for drug combinations: PC software and user&#8217;s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , (2005).</li><li>Alvarez-Rueda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+monoclonal+antibody+to+O-acetyl-GD2+ganglioside+and+not+to+GD2+shows+potent+anti-tumor+activity+without+peripheral+nervous+system+cross-reactivity.">A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity.</a> PLoS One. 6 (9), e25220 (2011).</li><li>Faraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma+chemotherapy+can+be+augmented+by+immunotargeting+O-acetyl-GD2+tumor-associated+ganglioside.">Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside.</a> Oncoimmunology. 7 (1), e1373232 (2017).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body+condition+scoring:+a+rapid+and+accurate+method+for+assessing+health+status+in+mice.">Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice.</a> Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).</li><li>Teicher, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+for+in+vitro+and+in+vivo+synergy.">Assays for in vitro and in vivo synergy.</a> Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).</li><li>White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+nonlinear+mixture+response+surface+paradigm+for+the+study+of+synergism:+a+three+drug+example.">A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example.</a> Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+XTT+cell+proliferation+assay+applied+to+cell+layers+embedded+in+three-dimensional+matrix.">The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix.</a> Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).</li><li>Thompson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy+of+topotecan+in+combination+with+vincristine+for+treatment+of+pediatric+solid+tumor+xenografts.">Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts.</a> Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).</li><li>Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+design+and+sample+size+determination+for+testing+synergism+in+drug+combination+studies+based+on+uniform+measures.">Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures.</a> Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).</li><li>Tang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+EPHB6,+EFNB2,+and+EFNB3+expressions+in+human+neuroblastoma.">Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma.</a> Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).</li><li>Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+metastasis+of+human+breast+carcinomas+with+Matrigel+in+athymic+mice.">Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).</li><li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines.">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).</li><li>Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topotecan+plus+cyclophosphamide+as+maintenance+chemotherapy+for+children+with+high-risk+neuroblastoma+in+complete+remission:+short-term+curative+effects+and+toxicity.">Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).</li><li>Cheung, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglioside+GD2+specific+monoclonal+antibody+3F8:+a+phase+I+study+in+patients+with+neuroblastoma+and+malignant+melanoma.">Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma.</a> Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human.">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Dayde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+burden+influences+exposure+and+response+to+rituximab:+pharmacokinetic-pharmacodynamic+modeling+using+a+syngeneic+bioluminescent+murine+model+expressing+human+CD20.">Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20.</a> Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).</li><li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgamma(null)+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection.">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li><li>Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Responses+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Muscle+Invasive+Bladder+Cancer.">Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer.</a> Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).</li></ol>

Для прогнозирования эффекта лекарственных взаимодействий, могут использоваться три метода: методология isobologram17, модель нелинейной смесь18и сочетание индекса1. Сочетание индекс анализ наиболее часто используется потому, что его применение являет?...

Обычный подход в лечении большого числа различных типов рака была основана на монотерапии. Даже если он по-прежнему используется во многих случаях, этот метод встретились несколько препятствий, ведущих к выбирают для комбинированной терапии-2. В частности раковые клетки более чувствительны к развивать устойчивость при обработке одного препарата, вызывая альтернативных выживания механизмы3, что приводит к терапевтической неудачи в больных4. Кроме того в монотерапии, препараты обычно управляются в высокой дозе. Эта ситуация часто приводит к возникновению сильного дозозависимый побочных эффектов, которые могут быть нетерпимым и силы врачей, чтобы остановить лечение2. По этим причинам, Ассоциация противораковые молекул является теперь предпочитают монотерапия.
Идеальные наркотики комбинации будут те, которые действуют в синергии против опухолевых клеток, без увеличения токсичности против нормальных клеток. Синергизм относится к взаимодействию двух или более препаратов, что терапевтический эффект больше, чем сумма каждого индивидуального наркотиков, действуя отдельно. Такое взаимодействие может привести к расширенной клинических терапевтическую эффективность2. Это ограничивает лечение сопротивления, увеличивает эффективность и может также уменьшить токсичность2. В самом деле дозировка каждого препарата может уменьшиться до снижения их побочные эффекты по ориентации различных путей. Кроме того один из молекул может также служить информирования агент против раковых клеток. Действие второго препарата может быть повышена на сенсибилизированных клеток и меньше дозах может быть использоваться5.
Комбинированная терапия может включать два или более химиотерапевтических препаратов и/или биопрепаратов, например моноклональные антитела6. Эти mAbs конкретно клетки, выражая клеток поверхностного антигена интереса и способны убить опухолевые клетки иммунологической путями, включая клеточный цитотоксичности антител зависимые (ADCC), с участием иммунных эффекторных клеток 7и дополнения зависимой цитотоксичности (CDC)6. Они также могут действовать через механизм-иммунологические, посредничестве апоптоз8,9,10,11. В этом случае индукции процесс запрограммированной смерти клетки могут информирования раковые клетки, ослабляют их функции и сделать более эффективным связанные химикотерапевтическое лекарство в нижней дозировке. Таким образом МАБ проапоптотических являются хорошими кандидатами для проектирования схемы комбинации с противоопухолевые препараты.
Были описаны различные математические модели для оценки синергизма наркотиков; один из них основан на комбинации индекс метод1. Этот метод основан на принципе медиана эффект, разработанная Чжоу1. Медиана эффект уравнение коррелирует дозу препарата и наркотический эффект следующим образом.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
D здесь, доза препарата; DM -медиана эффекта доза; Фа — часть пострадавших от дозы; m является экспонента, что означает форму доза эффект участок1. Медиана эффекта дозу используется для расчета дозы Dx препарат, который подавляет или убивает «x» % клеток. Значение CI затем вычисляется для оценки аддитивный эффект препарата комбинации, следующим1.
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
Значение CI 1 указывает аддитивный эффект и CI значение < 1 указывает синергетический эффект, в то время как значение CI > 1 указывает антагонизм1. Применение этого метода также способствует наличие компьютерной программы, CompuSyn, который определяет синергизм и антагонизм при всех дозах или уровни воздействия имитируемых автоматически12.
Наша группа разработала конкретные 8B6 МАБ для O-ацетил GD2 Ганглиозиды (OAcGD2) нейробластома антигена13 и далее показал, что этот МАБ способны вызвать смерть клетки с атрибутами апоптоз11. Чтобы проверить ли МАБ 8B6 может информировать нейробластома клетки Топотекан противоопухолевого агента, мы адаптировали вышеупомянутый метод, разработанный Чжоу1. Во-первых мы определить значения эффективной дозы 50 (50Эд) МАБ 8B6 и Топотекан. Далее нейробластома клетки с равномощного соотношением двух соединений, основанной на ценностях50 Эд подвергаются для определения CI значений с помощью вышеупомянутых моделирования программного обеспечения. Этот метод позволяет нам продемонстрировать синергизм между 8B6 и Топотекан МАБ в пробирке. Далее мы опишем протокол для дальнейшей оценки потенции и безопасность этой комбинации режим в естественных условиях. Этот протокол может легко применяться для выбора комбинации химиотерапевтического агента и мощным и безопасным противораковые МАБ в доклинических исследованиях. Схематическое представление этого исследования приводится на рисунке 1.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1389px;" width="1390">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Cell Proliferation kit (MTT)</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">CompuSyn software</td>
			<td style="width:161px;">ComboSyn</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Combosyn can be downloaded for free at http://www.combosyn.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">BIO-1556</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:161px;">Eurobio</td>
			<td style="width:132px;">CVFSVFF00-01</td>
			<td style="width:852px;">10% heat-inactivated fetal calf serum in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Firefox&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Mozilla Corporation</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Firefox can be downloaded for free at http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Heat lamp</td>
			<td style="width:161px;">Verre&#38;Quartz</td>
			<td style="width:132px;">4003/1R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Human neuroblastoma IMR-5 cell line</td>
			<td style="width:161px;">Accegen Biotechnology</td>
			<td style="width:132px;">ABC-TC0450</td>
			<td style="width:852px;">IMR-5 is a clone of the human neuroblastoma cell line IMR32 5459762. IMR-5 cells were generously provided by Dr. Santos Susin (U.872, Paris, France)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">25030-024</td>
			<td style="width:852px;">2 mM in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Lysis solution&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">mAb 8B6</td>
			<td style="width:161px;">University of Nantes</td>
			<td style="width:132px;">N/A</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Matrigel</td>
			<td style="width:161px;">Corning</td>
			<td style="width:132px;">354248</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Multiskan FC</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific&#160;</td>
			<td style="width:132px;">N08625</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 21G 1 &#189;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">BD Microlance</td>
			<td style="width:132px;">304432</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 25G 1</td>
			<td style="width:161px;">Terumo</td>
			<td style="width:132px;">NN-2525R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">NSG mice</td>
			<td style="width:161px;">Charles River Laboratories</td>
			<td style="width:132px;">5557</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Nunc MicroWell 96-well microplates</td>
			<td style="width:161px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:132px;">167008</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS</td>
			<td style="width:161px;">VWR</td>
			<td style="width:132px;">L182-10</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS, 0,05% EDTA</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PC that runs windows 7</td>
			<td style="width:161px;">Microsoft</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Windows 7 can be purchased at http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">15140-122</td>
			<td style="width:852px;">100 units/mL penicillin and 100 mg/mL streptomycin in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Reagent reservoir</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific</td>
			<td style="width:132px;">8094</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Rodent restrainer</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">TV-150-SM</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">31870-025</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Syringe 1 mL</td>
			<td style="width:161px;">Henke Sass Wolf</td>
			<td style="width:132px;">5010.200V0</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Topotecan</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">T2705</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation

Потенцирование враждебных моноклональных антител (МАБ), химиотерапевтические агенты представляет собой ценный стратегию для разработки эффективных и безопасных терапия против рака. Здесь мы предоставляем протокол для выявления рациональное сочетание на доклинических шаг. Во-первых мы расскажем на основе ячеек пробирного оценивать синергизм между противоопухолевой МАБ и цитостатическими препаратами, который использует сочетание индекс уравнение Чу и Талалай1. Это включает в себя измерение из опухолевых клеток наркотиков - и антитела чувствительность с помощью MTT assay, следуют анализ автоматизированной компьютерной для вычисления значения индекса (CI) сочетание. CI значений < 1 указывают синергизм между протестированных mAbs и цитотоксических агентов1. Для подтверждения в vitro выводы в естественных условиях, мы далее описания метода оценить эффективность режима комбинации в модели ксенотрансплантата опухоли. В этой модели комбинированные препараты значительно задерживает рост опухоли, что приводит к значительным расширенной выживания по сравнению с одного агента управления. Важно отметить, что эксперименты в естественных условиях показывает, что сочетание режим хорошо переносится. Этот протокол позволяет эффективной оценки комбинации противоопухолевых препаратов в доклинических моделях и выявление рациональное сочетание для оценки в клинических испытаниях.

Представитель результаты и показатели приспособлены с разрешения из ранее опубликованных работ14.
Анти-OAcGD2 МАБ 8B6 синергически повышает ингибирующее воздействие Топотекан на нейробластома рост клеток линии:
<p ...

Watch this Scientific Journal Video about Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation at JoVE.com

Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

Этот протокол описывает как оценивать синергизм между противоопухолевой антитела и противоопухолевые препараты в доклинических моделях, используя сочетание индекс уравнение Чжоу и Талалай.

Потенцирование эффективности противоопухолевой антитела, противоопухолевые препараты: обнаружение антител наркотиков синергизм с помощью комбинации индекс уравнения

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

Иммунотерапия в сочетании с химиотерапией представляет собой инновационный подход к разработке эффективной терапии рака. Основными целями являются достижение синергетического, терапевтического эффекта, снижения дозы и токсичности, а также минимизация или задержка индукции лекарственной устойчивости. Однако, по практическим и этическим соображениям, невозможно определить синергизм у пациентов. Таким образом, до прямого сочетания в клинических испытаниях, Prenicaptor комбинированных исследований, in vitro, и / или у животных, должны быть проведены для получения обоснования для клинических исследований. Простой надежный метод количественной оценки синергизма между препаратами основан на уравнении комбинированного индекса, разработанном Шуаном Талале, как показано в этом видео. Используя этот метод, и его компьютеризированное моделирование, мы свидетельствуем здесь, синергизм между моноклональным антителом 8B6, который специфичен для O-Acetyl-GD2 Ganglioside нейробластомы антигена и химиотерапевтического препарата Топотекан на нейробластомных клетках. Короче говоря, после определения эффективной дозы 50 значений каждого соединения в человеке ИМО, 5 нейробластомы клеточной линии, эти клетки были интубированы с справедливыми соотношениями двух соединений, и значения комбинированного индекса были рассчитаны с помощью автоматизированного компьютерного моделирования. Затем мы подтвердили эти результаты в Vivo, в ИМО, 5 опухолевых ксенографных моделей. Мы выращивали клетки IMR-5 в колбе T75, наблюдали за ними под микроскопом, чтобы проверить слияние клеток. Асперат клеточной среды из колбы, мыть с 5 мл PBS. Добавьте 3 мл решения 0.05%EDTA/PBS. Верните колбу в инкубатор на 3 минуты. Изучите культуру клеток под микроскопом для клеточного отслоения. Добавьте 10 мл полной клеточной среды в колбу и перенесите подвесную клетку в стерильную коническую трубку 15 мл. Центрифуга в течение пяти минут при 300 g.Count клетки с помощью гемоцитометра. Удалите и отбросьте супернатант. Re приостановить клетки в в полный рост Medium.Adjust среднего объема, чтобы получить окончательную концентрацию 100000 клеток / mL.Seed 84 скважин, 96 хорошо культуры пластины с 10000 клеток каждый, что составляет 100 микролитров клеточной подвески. Инкубационные клетки в течение 18 часов в клеточном инкубаторе.Разбавить моноклональные антитела в 500 микролитров полного роста среднего для получения антител рабочего решения с моноклональной концентрации антител 240 микро-граммов на mL.Perform 5 двукратный серийный бред, как указано в протоколе. Разбавить препарат в 500 микролитров полного роста среднего для получения препарата рабочий раствор с окончательной концентрацией 120 наномоляров. Выполните 5, двукратных серийных заблуждений, как указано в протоколе. Разбавить так же, как препарат плюс растворы моноклональных анибоди. Чтобы прийти к окончательной концентрации, перенесите 50 микролитров каждого лекарственного раствора в соответствующие скважины, как показано на этой экспериментальной компоновке. Инкубировать клетки в течение 72 часов в инкубаторе. Добавьте в каждую колодец 10 микролитров раствора реагентов МТТ. Инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 4 часов. Добавьте 100 микролитров раствора лицина в каждую колодец с помощью многоканальной пипетки и тщательно перемешайте с помощью пипетки. Инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 4 часов в увлажненной камере. Избавьте абсорбенты на 570 и 620 нанометров с помощью спектрофотометра. Рассчитайте жизнеспособность ячейки следующим образом. Рассчитайте значения, затронутые фракцией, используя следующее уравнение. Запустите программное обеспечение моделирования, нажмите на новую кнопку эксперимента, чтобы получить главное окно. Ввемите название эксперимента. Нажмите на новый один препарат. Ввемите имя. Ввейте аббревиатуру. Введи единицу концентрации наркотиков. Введите данные 1 доза и значение FA. Нажмите Enter.Repeat этот шаг до тех пор, пока не будут введены все точки данных. Нажмите Finished.Follow те же шаги, чтобы войти Моноклональные точки данных антител. Нажмите Новый препарат Combo.Select наркотиков и моноклональных антител. Выберите Постоянный Ratio.Click OK. Ввемите имя. Ввейте аббревиатуру. Введи препарат моноклональный коэффициент антител. Введите данные 1 доза. Нажмите Enter.The программа будет автоматически рассчитывать дозы моноклональных антител 8B6 и комбо. Введите данные 1 значение FA.Нажмите Enter.Repeat этот шаг до тех пор, пока не будут введены все точки данных. Нажмите Finished.Then, нажмите Создать Report.Select наркотиков и моноклональных антител, а затем нажмите OK. Выберите Combo, а затем нажмите OK. Выберите заголовок, таблицу CI и сводную таблицу, а затем нажмите OK. Ввените имя файла и анализ и нажмите сохранить для создания отчета. Отчет автоматически открывается в веб-браузере по умолчанию. Отчет содержит сводный раздел таблицы, который включает в себя название, дату, окончательное название, описание записки, м, Dm, и r параметров, эффективная доза 50 для любого агента, используемого в качестве монотерапии или в комбинации, и комбинация индексная таблица для каждой комбинации в эффективной дозе 50, 75, 90, и 95.A значение комбинированного индекса меньше, чем 1 указывает синергизм. Значение, равное одному, указывает на дополнительную способность. Значение, большее 1, указывает на антагонизм. Оттепель подвал мембраны матрицы на ночь, погружая флакон во льду в 4 градуса C холодильник перед использованием. Вся культура износа, или средств массовой информации в контакте с цокольной мембраны метрики должны быть prechilled. Урожай культуры IMR5. Перенесите клетки в коническую трубку и центрифугу 15 мл при 300 г в течение 5 минут. Откажитесь от супернатанта. Вымойте клетки с 15 мл ледяной PBS в два раза. Подготовка клеточной подвески для 5 миллионов клеток на мл в ледяной PBS. Перенесите подвеску ячейки в микротрубки 1,5 мл. Swivel подвале мембраны матричный флакон. Добавьте 1 том матричного реагента мембраны подвала, смешанного трубоустановки для получения клеточной подвески 2,5 миллиона клеток на mL.Keep подвеска клетки на льду. Бритье фланг, где инъекция будет сделано. Смешайте клетки и тщательно нарисуйте подвесную клетку в шприц 1 мл, установленный с иглой 21 г. Убедитесь, что в шприце нет пузырьков воздуха. Дезинфицировать область прививки мышей антисептическим раствором. Аккуратно сожмите кожу мыши на фланге между пальцами в месте инъекции. Вставьте иглу точно в кожу. Не поместите иглу глубоко в ткань, чтобы застраховать подкожные инъекции. Впрыснуть 100 микролитров подкожной подвески ячейки IMR5. Поверните шприц, чтобы предотвратить распространение жидкости и снять иглу. Мониторинг мышей для массы тела и роста опухоли. Измерьте длину и ширину опухоли калибром. Рассчитайте объем опухоли с помощью этой формулы. Начало терапии, когда опухоли достигли среднего объема от 50 до 60 мм

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Флуоресцентные Ортотопическая Мышь Модель панкреатического рака

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Антираковая Эффективность фотодинамической терапии рака легких с таргетингом наночастицами

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

В сочетании с методами масс-спектрометрии для анализа тканей протеома человека Аденома гипофиза двумерного гель-электрофорез

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Иммунофенотипирование ортотопическая Homograft (сингенных) из мышиных первичной КЗК аденокарциномы поджелудочной железы протоковой подачей Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Доклинические оценки отпорности противораковые кумарина OT48 сфероидов, колонии формирования анализов и ксенотрасплантатов данио рерио

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

Оценка сопротивления ингибитора киназы тирозина путем допроса сигнальных путей, антитела массивы

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Detection of Protease Activity by Fluorescent Peptide Zymography

Обнаружение активности протеаз, флуоресцентный пептид Зимография

The purpose of this method is to measure the proteolytic activity of complex biological samples. The samples are separated by molecular weight using ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

Характеризуй связанных с болезнями мутантов семейки RAF Kinases с помощью набора практических и осуществимых методов

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Detection of Retrotransposition Activity of Hot LINE-1s by Long-Distance Inverse PCR

Обнаружение ретротранспозиционной активности горячих линий-1 с помощью дальнего обратного ПЦР

Long interspersed nuclear elements 1 (LINE-1s) are the only family of mobile genetic elements in the human genome that can move autonomously. They do so ...

Oncogenic Gene Fusion Detection Using Anchored Multiplex Polymerase Chain Reaction Followed by Next Generation Sequencing

Онкогенный ген Fusion Обнаружение Использование якорный мультиплекс полимеразы Цепная реакция после следующего поколения секвенирования

Gene fusions frequently contribute to the oncogenic phenotype of many different types of cancer. Additionally, the presence of certain fusions in samples ...