Name: potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation at JoVE.com

Bevilja stöd: Fondation de Projet de L 'Université de Nantes, les Bagouz' à Manon, La Ligue contre le Cancer comité de Loire-Atlantique, comité du Morbihan och comité de Vendée, une ros Häll S.A.R.A.H, L'Etoile de Martin och la Société Française de Lutte contre les Cancerformer et les leucémies de L'Enfant et de L'adolescent (SFCE). M.B. och J.F. stöds av La Ligue Contre Le Cancer. Författarna vill tacka UTE-anläggningen av den struktur Fédérative de Recherche François Bonamy. Författarna också tacka Dr S. Suzin (Inserm, Paris) för att tillhandahålla de IMR5 cellerna och Ms. H. Estéphan för hennes tekniskt bistånd.

Djurstallar och experimentell förfarande godkändes av den franska regeringen (avtal nr C44-278 och #APAFIS 03479.01). Djurvård och förfaranden genomfördes under direktiv EU 2010/63/EU och franska lag #2013-118 om skydd av djur som används för vetenskapliga ändamål.
1. utvärdering av läkemedlet interaktion mellan mAb 8B6 och Topotecan In Vitro
<ol><li>96-väl provberedning FÖRSIKTIGHET: Samråda med kommittén för institutionens arbetsmiljö och följ...

<ol>
	<li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+basis,+experimental+design,+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies.">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li><li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+in+combating+cancer.">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li><li>Zahreddine, H., Borden, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+insights+into+drug+resistance+in+cancer.">Mechanisms and insights into drug resistance in cancer.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 28 (2013).</li><li>Martin, T. P., Baguley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re:+"Postoperative+validation+of+bone-anchored+implants+in+the+single-sided+deafness+population."+Snapp+et+al.+Otol+Neurotol+2012:+33;291-6.">Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).</li><li>Choi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+lung+cancer+cells+by+altered+dimerization+of+HSP27.">Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27.</a> Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).</li><li>Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies:+versatile+platforms+for+cancer+immunotherapy.">Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).</li><li>Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+review+of+the+role+of+Fc+gamma+receptor+polymorphisms+in+the+response+to+monoclonal+antibodies+in+cancer.">A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 6, 1 (2013).</li><li>Kowalczyk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GD2-specific+14G2a+monoclonal+antibody+induces+apoptosis+and+enhances+cytotoxicity+of+chemotherapeutic+drugs+in+IMR-32+human+neuroblastoma+cells.">The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells.</a> Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).</li><li>Retter, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+proapoptotic+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody+and+evaluation+of+its+therapeutic+effect+on+melanoma+and+small+cell+lung+carcinoma+xenografts.">Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts.</a> Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).</li><li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+induction+of+human+lung+cancer+cell+line+in+multicellular+heterospheroids+with+humanized+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody.">Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody.</a> Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).</li><li>Cochonneau, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+arrest+and+apoptosis+induced+by+O-acetyl-GD2-specific+monoclonal+antibody+8B6+inhibits+tumor+growth+in+vitro+and+in+vivo.">Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo.</a> Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).</li><li>Chou, T. C., Martin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CompuSyn for drug combinations: PC software and user&#8217;s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , (2005).</li><li>Alvarez-Rueda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+monoclonal+antibody+to+O-acetyl-GD2+ganglioside+and+not+to+GD2+shows+potent+anti-tumor+activity+without+peripheral+nervous+system+cross-reactivity.">A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity.</a> PLoS One. 6 (9), e25220 (2011).</li><li>Faraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma+chemotherapy+can+be+augmented+by+immunotargeting+O-acetyl-GD2+tumor-associated+ganglioside.">Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside.</a> Oncoimmunology. 7 (1), e1373232 (2017).</li><li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD/SCID/IL2+receptor+{gamma}+chain(null)+mice.">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li><li>Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body+condition+scoring:+a+rapid+and+accurate+method+for+assessing+health+status+in+mice.">Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice.</a> Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).</li><li>Teicher, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+for+in+vitro+and+in+vivo+synergy.">Assays for in vitro and in vivo synergy.</a> Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).</li><li>White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+nonlinear+mixture+response+surface+paradigm+for+the+study+of+synergism:+a+three+drug+example.">A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example.</a> Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+XTT+cell+proliferation+assay+applied+to+cell+layers+embedded+in+three-dimensional+matrix.">The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix.</a> Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).</li><li>Thompson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy+of+topotecan+in+combination+with+vincristine+for+treatment+of+pediatric+solid+tumor+xenografts.">Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts.</a> Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).</li><li>Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+design+and+sample+size+determination+for+testing+synergism+in+drug+combination+studies+based+on+uniform+measures.">Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures.</a> Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).</li><li>Tang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+EPHB6,+EFNB2,+and+EFNB3+expressions+in+human+neuroblastoma.">Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma.</a> Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).</li><li>Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+metastasis+of+human+breast+carcinomas+with+Matrigel+in+athymic+mice.">Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).</li><li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines.">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).</li><li>Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topotecan+plus+cyclophosphamide+as+maintenance+chemotherapy+for+children+with+high-risk+neuroblastoma+in+complete+remission:+short-term+curative+effects+and+toxicity.">Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).</li><li>Cheung, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglioside+GD2+specific+monoclonal+antibody+3F8:+a+phase+I+study+in+patients+with+neuroblastoma+and+malignant+melanoma.">Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma.</a> Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human.">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Dayde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+burden+influences+exposure+and+response+to+rituximab:+pharmacokinetic-pharmacodynamic+modeling+using+a+syngeneic+bioluminescent+murine+model+expressing+human+CD20.">Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20.</a> Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).</li><li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgamma(null)+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection.">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li><li>Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Responses+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Muscle+Invasive+Bladder+Cancer.">Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer.</a> Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).</li></ol>

För att förutsäga effekten av läkemedelsinteraktioner, tre metoder kan användas: den isobologram metod17, ickelinjära blandning modell18och kombinationen index1. Kombination index analys används ofta eftersom dess tillämpning är förenklad av tillgången till ett användarvänligt datorprogram. För detta ändamål kännetecknas vi första dos-effekt svar varje agent används ensamt eller i kombination, genom att utföra en MTT assay<sup cla...

Den konventionella metoden för behandling av ett stort antal olika typer av cancer var baserad på monoterapi. Även om det används fortfarande i många fall, träffade denna metod flera hinder som leder till valet av kombinerade behandlingar2. Särskilt, är cancerceller mer mottagliga att utveckla motstånd när de behandlades med en enda drog genom att inducera alternativa överlevnad mekanismer3, vilket resulterar i terapeutiska misslyckande i patienter4. Dessutom i monoterapi administreras läkemedel vanligtvis vid höga doser. Denna situation ofta resulterar i förekomsten av starka dosberoende biverkningar som kan vara outhärdlig och tvinga läkarna att stoppa den behandling2. Av dessa skäl föreningen anticancer molekyler är nu föredrog att monoterapi.
Perfekt läkemedelskombinationer skulle vara de som agerar i samverkan mot tumörceller, utan ökad toxicitet mot normala celler. Synergism avser samverkan mellan två eller flera läkemedel som ger en terapeutisk effekt som är större än summan av varje enskilt läkemedel som agerar separat. Sådana interaktioner kan resultera i förbättrad klinisk terapeutiska effekt2. Den begränsar behandlingsresistens, ökar effekten och kan också minska toxicitet2. I själva verket kan doseringen av varje läkemedel sänkas för att sänka deras biverkningar genom att rikta olika vägar. Dessutom kan en av molekylerna också fungera som en sensibiliserande agent mot cancerceller. Effekten av andra läkemedel kan förstärkas på sensibiliserade celler och färre doser kan vara används5.
Kombinerad terapi kan innehålla två eller fler cytostatika och/eller biologiska läkemedel, såsom monoklonala antikroppar6. Dessa mAbs specifikt inrikta celler som uttrycker en cell ytantigen av intresse och kan döda tumörceller via immunologiska vägar, inklusive antikroppsberoende cellmedierad cytotoxicitet (ADCC), med deltagande av immun effektor celler 7och komplementberoende cytotoxicitet (CDC)6. De kan också agera via en icke-immunologiska mekanism medierad av apoptos8,9,10,11. I detta fall kan induktionen av processen för programmerad celldöd medvetandegöra cancerceller försvaga deras funktion och effektivisera det associerade kemoterapeutiska läkemedlet vid en lägre dos. Som sådan, proapoptotiska mAb är bra kandidater för att utforma kombinationsregimer med antineoplastiska läkemedel.
Olika matematiska modeller har beskrivits för att bedöma drog synergier; en av dem är baserad på kombinationen index metod1. Denna metod är baserad på principen om median-effekt utvecklats av Chou1. Median-effekt ekvationen korrelerar till läkemedelsdos och drogen effekt enligt följande.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
Här, är D läkemedelsdos; DM är den median-effekt dosnivåer; FA är det bråk som påverkas av dosen; m är en exponent som betecknar formen av dos-effekt tomt1. Den median-effekt dosnivåer används för att beräkna dosen Dx av ett läkemedel som hämmar eller dödar ”x” procent av cellerna. CI värdet beräknas sedan för att bedöma de additiv effekten av kombinationen drog, enligt följande1.
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
CI värdet 1 anger en additiv effekt och CI värdet < 1 indikerar en synergistisk effekt, medan ett CI värde av > 1 indikerar antagonism1. Tillämpningen av denna metod underlättas ytterligare av tillgången till ett datorprogram, CompuSyn, som bestämmer synergier och antagonism vid alla doser eller effekt nivåer simulerade automatiskt12.
Vår grupp har utvecklat den mAb 8B6 specifikt för O-acetyl-GD2 ganglioside (OAcGD2) neuroblastom antigen13 och ytterligare visat att denna mAb skall kunna inducera celldöd med attribut av apoptos11. För att testa om mAb 8B6 kan medvetandegöra neuroblastomceller till den antineoplastiska agent topotekan, anpassade vi den ovannämnda metoden som utvecklats av Chou1. Först, vi fastställa effektiva dosen 50 (ED50) värdena för mAb 8B6 och topotecan. Därefter utsätts neuroblastomceller med ekvipotenta nyckeltal av de två substanserna baserat på ED50 värden för att bestämma CI värdena med de ovannämnda simuleringsprogram. Denna metod tillåter oss att Visa synergier mellan mAb 8B6 och topotecan in vitro. Därefter beskriver vi ett protokoll för att ytterligare bedöma styrkan och säkerheten i denna kombination regim i vivo. Detta protokoll kan appliceras enkelt markera potent och säker mot cancer mAb och kemoterapeutiska agent kombinationer i prekliniska studier. En schematisk representation av denna studie ges i figur 1.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1389px;" width="1390">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Cell Proliferation kit (MTT)</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">CompuSyn software</td>
			<td style="width:161px;">ComboSyn</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Combosyn can be downloaded for free at http://www.combosyn.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">BIO-1556</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:161px;">Eurobio</td>
			<td style="width:132px;">CVFSVFF00-01</td>
			<td style="width:852px;">10% heat-inactivated fetal calf serum in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Firefox&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Mozilla Corporation</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Firefox can be downloaded for free at http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Heat lamp</td>
			<td style="width:161px;">Verre&#38;Quartz</td>
			<td style="width:132px;">4003/1R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Human neuroblastoma IMR-5 cell line</td>
			<td style="width:161px;">Accegen Biotechnology</td>
			<td style="width:132px;">ABC-TC0450</td>
			<td style="width:852px;">IMR-5 is a clone of the human neuroblastoma cell line IMR32 5459762. IMR-5 cells were generously provided by Dr. Santos Susin (U.872, Paris, France)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">25030-024</td>
			<td style="width:852px;">2 mM in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Lysis solution&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Roche&#160;</td>
			<td style="width:132px;">11-465-007-001</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">mAb 8B6</td>
			<td style="width:161px;">University of Nantes</td>
			<td style="width:132px;">N/A</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Matrigel</td>
			<td style="width:161px;">Corning</td>
			<td style="width:132px;">354248</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Multiskan FC</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific&#160;</td>
			<td style="width:132px;">N08625</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 21G 1 &#189;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">BD Microlance</td>
			<td style="width:132px;">304432</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Needle 25G 1</td>
			<td style="width:161px;">Terumo</td>
			<td style="width:132px;">NN-2525R</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">NSG mice</td>
			<td style="width:161px;">Charles River Laboratories</td>
			<td style="width:132px;">5557</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Nunc MicroWell 96-well microplates</td>
			<td style="width:161px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:132px;">167008</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS</td>
			<td style="width:161px;">VWR</td>
			<td style="width:132px;">L182-10</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PBS, 0,05% EDTA</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">PC that runs windows 7</td>
			<td style="width:161px;">Microsoft</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:852px;">Windows 7 can be purchased at http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">15140-122</td>
			<td style="width:852px;">100 units/mL penicillin and 100 mg/mL streptomycin in RPMI 1640</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Reagent reservoir</td>
			<td style="width:161px;">Thermofischer Scientific</td>
			<td style="width:132px;">8094</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Rodent restrainer</td>
			<td style="width:161px;">Bioseb</td>
			<td style="width:132px;">TV-150-SM</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:161px;">Gibco</td>
			<td style="width:132px;">31870-025</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Syringe 1 mL</td>
			<td style="width:161px;">Henke Sass Wolf</td>
			<td style="width:132px;">5010.200V0</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Topotecan</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">T2705</td>
			<td style="width:852px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

potentiation of anticancer antibody efficacy by antineoplastic drugs: detection of antibody-drug synergism using the combination index equation

Potentiering av fientliga monoklonala antikroppar (mAb) av kemoterapeutiska medel utgör en värdefull strategi för att utforma effektivare och säkrare behandling mot cancer. Här tillhandahåller vi ett protokoll för att identifiera en rationell kombination vid prekliniska steg. Först beskriver vi en cell-baserad analys för att bedöma den synergism mellan anticancer mAb och cytostatika, som använder kombination index ekvationen av Chou och Talalay1. Detta inkluderar mätning av tumör cell drog - och antikropp-känslighet med en MTT-analys, följt av en automatiserad dator analys att beräkna kombination index (CI) värdena. CI värden av < 1 indikerar synergier mellan testade mAbs och cytotoxiska medel1. För att bekräfta den in vitro- fynd i vivo, beskriver vi ytterligare en metod för att bedöma kombination regim effekten i en xenograft tumör modell. I denna modell fördröjer den kombinera behandlingen avsevärt tumörtillväxt, vilket resulterar i en signifikant förlängd överlevnad jämfört med monoterapi kontroller. Allt avslöjar i vivo experimenterandet att kombinationsbehandlingen tolereras väl. Detta protokoll tillåter effektiv utvärdering av anticancer läkemedelskombinationer i prekliniska modeller och identifiering av rationella kombination att utvärdera i kliniska prövningar.

Den representativa resultat och siffror är anpassad med tillstånd från tidigare publicerade arbete14.
Anti-OAcGD2 mAb 8B6 förbättrar synergistiskt de hämmande effekterna av Topotecan på neuroblastom celltillväxt linje:
Att etablera drogen och antikropp koncentrationerna användas för bedömning av synergier mellan topot...

Watch this Scientific Journal Video about Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation at JoVE.com

Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

Det här protokollet beskriver hur man skall bedöma synergier mellan en anticancer antikropp och antineoplastiska läkemedel i prekliniska modeller med hjälp av kombination index ekvation av Chou och Talalay.

Potentiering av Anticancer antikropp effekt av antineoplastiska läkemedel: Påvisande av antikropp-drogen Synergism med kombination Index formel

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

Immunterapi i kombination med kemoterapi representerar ett innovativt tillvägagångssätt för att utveckla effektiv terapi vid cancer. Huvudsyftet är att uppnå synergistiska, terapeutiska effekter, dos och toxicitet minskning, och att minimera eller fördröja induktion av läkemedelsresistens. Men av praktiska och etiska skäl är det inte möjligt att fastställa synergism hos patienter. Före direkt kombination i kliniska prövningar bör således Prenicaptor-kombinationsstudier, in vitro, och/eller på djur, utföras för att erhålla motivet för kliniska studier. En enkel robust metod för kvantifiering av synergism mellan läkemedel är baserad på kombinationsindexekvation som utvecklats av Shouan Talale, vilket illustreras i denna video. Med hjälp av denna metod, och dess datoriserade simulering, vi bevis här, synergismet mellan Monoklonala Antikropp 8B6, som är specifik för O-Acetyl-GD2 Ganglioside neuroblastom antigen och den kemoterapeutiska drogen Topotecan på neuroblastom celler. Kortfattat, efter att ha fastställt den effektiva dosen 50 värden för varje förening i humanA IMO, 5 neuroblastom cellinje, var dessa celler intubated med skäliga förhållanden av de två föreningarna, och kombinationen indexvärden beräknades med hjälp av automatiserad datorsimulering. Vi bekräftade nästa dessa resultat i Vivo, i en IMO, 5 tumör xenographed modell. Vi växte IMR-5 celler i en T75 kolv, observerade dem under ett mikroskop, för att kontrollera cellkonfluensan. Asperatcellmedium från kolven, tvätta med 5 mL PBS. Lägg till 3 mL av 0,05%EDTA/PBS lösning. Återför kolven till inkubatorn i 3 minuter. Undersök cellodlingen under ett mikroskop för cellavlossning. Tillsätt 10 mL komplett cellmedium till kolven, och överför cellupphängningen till ett sterilt, 15 mL koniskt rör. Centrifugera i fem minuter vid 300 g.Count celler med hjälp av en hemocytometer. Ta bort och kasta supernatanten. Re suspend celler i i Komplett tillväxt Medium.Justera medelvolymen för att få slutlig koncentration av 100, 000 celler/mL.Seed 84 brunnar, 96 väl odlingsplatta med 10, 000 celler vardera, vilket är 100 mikroliter cell suspension. Inkubera celler i 18 timmar i Cell Inkubatorn.Späd monoklonal antikropp i 500 mikroliter av Complete Growth Medium för att erhålla en antikroppsarbetslösning med en monoklonal antikroppskoncentration 240 mikrogram per mL.Utför 5 tvåfaldiga serieförvillelser som indikeras i protokollet. Späd läkemedlet i 500 mikroliter av Complete Growth Medium för att få en läkemedelslösning med en slutlig koncentration 120 nanomolar. Utför 5, tvåfaldiga seriebevillningar som anges i protokollet. Späda ut på samma sätt läkemedlet plus monoklonala anibodies lösningar. För att komma fram till den slutliga koncentrationen, överför 50 mikroliter av varje läkemedelslösningar i motsvarande brunnar som visas på denna experimentella layout. Inkubera cellerna i 72 timmar i inkubatorn. Tillsätt 10 mikroliter MTT-reagenslösning i varje brunn. Inkubera vid 37 grader Celsius i 4 timmar. Tillsätt 100 mikroliter lycine-lösning i varje brunn med hjälp av en flerkanalig pipett och blanda noggrant genom pipettering. Inkubera vid 37 grader Celsius i 4 timmar i en befuktad kammare. Rid upp absorberande vid 570 och 620 nanometer med hjälp av en spektrofotometer. Beräkna cellens livskraft enligt följande. Beräkna fraktionen påverkade värden med hjälp av följande ekvation. Kör simuleringsprogramvaran, klicka på den nya experimentknappen för att erhålla huvudfönstret. Skriv in namnet på experimentet. Klicka på ny enda drog. Skriv namnet. Skriv förkortningen. Skriv läkemedelskoncentrationsenheten. Ange data 1 dos och FA-värde. Tryck på Retur.Upprepa det här steget tills alla datapunkter har angetts. Klicka på Färdig.Följ samma steg för att ange Monoklonala antikroppsdatapunkter. Klicka på New Drug Combo.Select drog och monoklonala antikroppar. Välj Konstant ratio.Klicka på OK. Skriv namnet. Skriv förkortningen. Skriv drogen monoklonal antikropp förhållandet. Ange data 1 dos. Tryck Enter.Programmet kommer automatiskt att beräkna doserna av Monoclonal Antibody 8B6 och combo. Ange data 1 TLvärde.Tryck på Retur.Upprepa det här steget tills alla datapunkter har angetts. Klicka på Färdig.Klicka sedan på Generera report.Välj läkemedel och monoklonal antikropp och klicka sedan på OK. Välj Combo, klicka sedan på OK. Välj Sidhuvud, CI-tabell och Sammanfattningstabell, klicka sedan på OK. Skriv filnamnet och analysen och klicka på spara för att generera rapporten. Rapporten öppnas automatiskt i ens standardwebbläsare. Rapporten innehåller ett sammanfattande tabellavsnitt som innehåller titel, datum, slutligt namn, beskrivningsanteckning, m, Dm och r parametrar, effektiv dos 50 för antingen medel som används som monoterapi eller i kombination, och kombinationsindextabellen för varje kombination vid effektiv dos 50, 75, 90 och 95.A kombinationsindexvärde som är mindre än 1 anger synergism. Ett värde är lika med ett indikerar additivitet. Ett värde som är större än 1 indikerar antagonism. Tina källaren membran matris över natten genom att dränka injektionsflaskan i is i 4 grader C kylskåp före användning. Alla kultur slitage, eller media kommer i kontakt med källaren membran metriska bör prechilled. Skörda kulturen IMR5. Överför cellerna till ett koniskt rör på 15 mL och centrifug vid 300 g i 5 minuter. Kassera supernatanten. Tvätta celler med 15 mL iskall PBS två gånger. Förbered en cellupphängning för 5 miljoner celler per mL i iskall PBS. Överför cellupphängningen till 1,5 mL mikrorör. Vridbar källare membran matris injektionsflaska. Tillsätt 1 volym av källaren membran matrix reagens, blandas genom pipettering för att få cell suspension av 2,5 miljoner celler per mL.Håll cellen suspension på is. Raka flanken av var injektionen kommer att göras. Blanda celler och dra försiktigt cellupphängningen till en 1 mL spruta monterad med en 21 g nål. Kontrollera att det inte finns några luftbubblor i sprutan. Desinficera mössens inokuleringsområde med en antiseptisk lösning. Krama försiktigt på mushuden på flanken mellan fingrarna vid injektionsstället. Stick in nålen exakt i hudvecket. Placera inte nålen djupt in i vävnaden för att försäkra subkutan injektion. Injicera 100 mikroliter av IMR5 cellupphängning subkutant. Rotera sprutan för att förhindra att vätska sprids och dra tillbaka nålen. Övervaka möss för kroppsvikt och tumörtillväxt. Mät längden och bredden på tumören med en kaliber. Beräkna tumörvolymen med hjälp av denna formel. Starta terapi när tumörer har nått en genomsnittlig volym på 50 till 60 mm

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescerande Orthotopic musmodell för cancer i bukspottskörteln

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Anticancer Effekten av fotodynamisk terapi med lungcancer-Targeted Nanopartiklar

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

Tvådimensionell gelelektrofores tillsammans med masspektrometri metoder för en analys av mänskliga hypofysen adenom vävnad proteomet

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping av ortotop Homograft (syngena) av murina primära KPC pankreas duktal adenokarcinom av flödescytometri

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Preklinisk utvärdering av bioaktiviteten av den mot cancer kumarin OT48 av Spheroids, koloni bildandet analyser och zebrafiskar xenograft

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

Bedömning av resistens mot tyrosinkinashämmare av ett förhör av cellsmedierade reaktioner av antikropp matriser

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Detection of Protease Activity by Fluorescent Peptide Zymography

Påvisande av proteas aktivitet av fluorescerande peptid Zymography

The purpose of this method is to measure the proteolytic activity of complex biological samples. The samples are separated by molecular weight using ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

Karakterisera sjukdomsrelaterade mutanter av RAF-Familjekinaser genom att använda en uppsättning praktiska och genomförbara metoder

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Detection of Retrotransposition Activity of Hot LINE-1s by Long-Distance Inverse PCR

Detektering av Retrotransponering aktivitet av hot LINE-1s med långdistans omvänd PCR

Long interspersed nuclear elements 1 (LINE-1s) are the only family of mobile genetic elements in the human genome that can move autonomously. They do so ...

Oncogenic Gene Fusion Detection Using Anchored Multiplex Polymerase Chain Reaction Followed by Next Generation Sequencing

Onkogen Gene fusion detektion med förankrade multiplex Polymerase kedjereaktion följt av nästa generations sekvensering

Gene fusions frequently contribute to the oncogenic phenotype of many different types of cancer. Additionally, the presence of certain fusions in samples ...