Name: isolation and decellularization of a whole porcine pancreas
Uploaded: 2018-10-10T14:00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Decellularization of a Whole Porcine Pancreas at JoVE.com

ومولت هذه الدراسة بمنحه من "ألف لوا الحكومة السويدية" إلى S.S.H.

التشريح من بنكرياس الخنزير والإجراء ديسيلولاريزيشن الذي قدم هنا اتبع المبادئ التوجيهية الأخلاقية لجامعة غوتنبرغ.
1-التحضير لإنشاء ديسيلولاريزيشن
<ol><li>استخدام أنابيب سيليكون 3 x 5 مم، الاتصال في سلسلة مدخل المنظفات الحاوية بمضخة بيريستاليك وثم إلى البنكرياس في الجهاز الدائرة عبر ديجاسير (انظر الشكل 1). الاتصال نظام ذكور إلى نهاية الأنبوب في الدائرة الجهاز مجاناً.</li>
	<li>استخدام أنبوب السيليكون 3 x 5 مم آخر، تتصل الدائرة الجهاز منفذ المنظفات الحاوية عن طريق مضخة تمعجية لجمع مواد التنظيف بيرفوسيد.</li>
	<li>الاتصال ماصة غير مسمى 2 مل نهايات الأنابيب في مدخل المنظفات الحاوية والمنظفات كوينتينير منفذاً مجاناً.</li>
	<li>تبقى إقامة كاملة في 4 درجات مئوية.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58302/58302fig1v2.jpg" style="opacity: 0.9; font-size: 14px;"> رقم 1: التحضير لإنشاء التروية. استخدام أنبوب سيليكون 3 x 5 مم، كما هو مبين في التشكيل، الاتصال في سلسلة مدخل المنظفات الحاوية بمضخة تمعجية، في ديجاسير، وغرفة الجهاز. السهام السوداء إظهار اتجاه التدفق من مدخل المنظفات الحاوية على هيئة دائرة. لمنفذ المنظفات، استخدام أنبوب السيليكون 3 x 5 مم آخر والاتصال الجهاز الدائرة عن طريق مضخة تمعجية منفذ المنظفات الحاوية. الأسهم الحمراء تظهر اتجاه تدفق من الدائرة الجهاز بمنفذ المنظفات الحاوية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58302/58302fig1v2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
2-إعداد حلول ديسيلولاريزيشن
<ol><li>حل 1 (الفوسفات مخزنة المالحة [برنامج تلفزيوني]): إضافة 8 غرام كلوريد الصوديوم (137 مم)، 0.2 جم من كلوريد البوتاسيوم (2.7 مم) و 1.44 غ من فوسفات الصوديوم (10 ملم) و 0.24 غرام من فوسفات البوتاسيوم (1.8 ملم) إلى 1 لتر الماء عالي النقاوة ويحرك حتى يذوب. قم بضبط ال pH إلى 7.4 مع حمض الهيدروكلوريك (HCl). وفي المجموع، مطلوب ل 3.2 من هذا الحل.</li>
	<li>حل 2 (برنامج تلفزيوني + الهيبارين): إضافة إلى 1 لتر من حل 1، 3.4 مل الهيبارين (17 وحدة دولية [وحدة]/mL). إعداد هذا الحل الطازجة وإبقائه على الجليد حتى يصبح الباردة. وفي المجموع، مطلوب ل 1.2 من هذا الحل.</li>
	<li>الحل 3 (الماء عالي النقاوة + أزيد الصوديوم ثنائي الإيثيلين حمض [يدتا]): إضافة إلى 1 لتر من الماء عالي النقاوة، ز 1.86 يدتا (5 ملم) و 200 ملغ من أزيد الصوديوم (0.02 في المائة). يقلب حتى يتم حله الأملاح. بارد الحل إلى 4 درجة مئوية قبل الاستخدام. وفي المجموع، مطلوب ل 22 من هذا الحل.</li>
	<li>حل 4 (برنامج تلفزيوني + أزيد الصوديوم يدتا): إضافة إلى 1 لتر من حل 1، 200 مغ من أزيد الصوديوم (0.02 في المائة) و 1.86 ز (5 مم) يدتا. يقلب حتى يتم حله الأملاح. بارد الحل إلى 4 درجة مئوية قبل الاستخدام. وفي المجموع، مطلوب 1 لتر من هذا الحل.</li>
	<li>الحل 5 (ماء عالي النقاوة + أزيد الصوديوم): إضافة إلى 1 لتر من الماء عالي النقاوة، 200 مغ أزيد الصوديوم (0.02 في المائة). يقلب حتى يتم حله الأملاح. بارد الحل إلى 4 درجة مئوية قبل الاستخدام. وفي المجموع، مطلوب ل 260 من هذا الحل. ملاحظة: يدتا أشكال من ترسبات مع الوكالة السويسرية واستبعدت من 5 الحل حيث سيتم استخدامه للغسيل الفوري قبل وبعد العلاج المركز.</li>
	<li>الحل 6 (الوكالة السويسرية + Triton X-100): إضافة إلى 940 مل من الماء عالي النقاوة، ز 40 (4%) دار الإنماء الاجتماعي، 60 مل من (6%) X-100 تريتون، 200 مغ من أزيد الصوديوم (0.02 في المائة)، وملغ 69.6 من فلوريد فينيلميثيلسولفونيل (0.4 ملم) (بمسف). يقلب حتى يذوب. بارد الحل إلى 4 درجة مئوية قبل الاستخدام. إضافة بمسف قبل الاستخدام. وفي المجموع، مطلوب 9.6 لتر من هذا الحل.</li>
	<li>حل 7 (الدناز): إضافة 10,000 [كونيتز] وحدات من الدناز--أنا في 250 مل من برنامج تلفزيوني ([كونيتز] 40 وحدة/مل) دولبيكو المحتوية على كاكل2 ومجكل2. إعداد جديدة واستخدامها على الفور. الحارة الحل إلى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام.</li>
	<li>الحل 8 (برنامج تلفزيوني + الصوديوم أزيد): إضافة إلى 1 لتر من حل 1، 200 مغ أزيد الصوديوم (0.02 في المائة). يقلب حتى يتم حله الأملاح. بارد الحل إلى 4 درجة مئوية قبل الاستخدام. وفي المجموع، مطلوب 1 لتر من هذا الحل.</li>
</ol>3-تشريح البنكرياس الخنزير
ملاحظة: في هذه الدراسة، البنكرياس الخنزير تم تشريح من euthanized، هيبارينيزيد (400 وحدة دولية/كغ) الخنازير الإناث تزن 45 كجم من مزرعة.
<ol><li>وضع الخنزير على طاولة التشريح في موقف ضعيف.</li>
	<li>جعل خط الوسط شق من عملية إكسيفويدال لعظم العانة (حوالي 40 سم) باستخدام مشرط، تعريض جميع أجهزة البطن.</li>
	<li>حدد موقع في الطحال، الإثناعشرية، واتصال الفصوص.</li>
	<li>تحديد مستوى الحليمة الإثناعشرية الرئيسية وسد العفج شفويا من هذا الموقع باستخدام خيوط منفصلة اثنين.</li>
	<li>اضطر المريء السفلي مع خيوط منفصلة اثنين وقطع بين الحروف مع مقص لإخراج المعدة.</li>
	<li>فصل النسيج الضام من النقطتين تصل إلى الأمعاء.</li>
	<li>فصل النسيج الضام القولون التي تعلق على الفص الطحال البنكرياس.</li>
	<li>إزالة القولون من الأمعاء بعد ligating الشرايين.</li>
	<li>البحث عن شجرة أدنى الشريان المساريقي العلوي والوريد المساريقي العلوي أقل شأنا واضطر مع خياطة واحدة حيث تظهر كودالي البنكرياس.</li>
	<li>سد شريان الطحال والوريد جنبا إلى جنب مع خياطة واحدة، ما يقرب من الطحال، في هيلوم، وقطع ديستالي مع مقص لإزالة الطحال.</li>
	<li>اتبع العفج حتى يتم مسح الفصوص الإثناعشرية واتصال وسد العفج في النهاية مع خيوط منفصلة اثنين.</li>
	<li>تشريح الوريد البابي، اضطر أنه مع خياطة واحد لمنع أي تسرب الدم من الكبد وخفض بروكسيمالي إلى حرف مزدوج. الوريد البابي بمثابة منفذ خلال ديسيلولاريزيشن.</li>
	<li>تشريح وسد القناة الصفراوية والشريان الكبدي مع خيوط اثنين. قطع ديستالي لخياطة الجروح.</li>
	<li>العثور على الشريان الاورطي تحت الوريد الكلوي وتشريح في اتجاه الجمجمة من العضلات والنسيج الضام حتى تصل إلى منطقة البنكرياس.</li>
	<li>اقلب البنكرياس بلطف وتشريح الشريان الاورطي، الحفاظ SMA والأشعة المقطعية سليمة، وقطع الشريان الاورطي متفوقة على الأشعة المقطعية وأقل شأنا من SMA مع المقص.</li>
	<li>قص المتبقية المحيطة بالانسجة مع المقص وإخراج البنكرياس.</li>
	<li>باستخدام حقنه 50 مل متصلاً قنية أرتيريوتومي 4 ملم، مسح الجهاز عن طريق الشريان الاورطي مع 2 الحل حتى أنه بيرفوسيس الجهاز كله أو حتى يصبح الجهاز كله الباردة.</li>
</ol>4-إعداد البنكرياس الخنزير ديسيلولاريزيشن
<ol><li>تبقى البنكرياس عند 4 درجة مئوية أو على الجليد طوال العملية.</li>
	<li>قطع خيوط العفج باستخدام مقص وتنظيفه من المواد الغذائية بالتنظيف 50-150 مل من الماء عالي النقاوة باستخدام ماصة 25 مل أنه اضطر مرة أخرى مع خياطة الجروح.</li>
	<li>اضطر أحد طرفي الشريان الاورطي وجميع فروع إلى جانب SMA والتصوير المقطعي مع خيوط لمنع التسرب.</li>
	<li>إدراج من الطرف الآخر للشريان الاورطي قنية أرتيريوتومي 4 ملم واضطر أنه مع خياطة الجروح.</li>
	<li>نتخلل البنكرياس مع 3 الحل ح 1 في 20 مل/دقيقة باستخدام الإعداد ديسيلولاريزيشن. ملاحظة: بريفيل أنابيب ضخ مع الحل 3 أن لا فقاعات أدخل البنكرياس. ابحث عن أي تسربات من جميع الأطراف للجهاز واضطر فتح جميع أفرع الأوعية الدموية مع خياطة الجروح، ما عدا الوريد البابي.</li>
	<li>تجميد البنكرياس في-20 درجة مئوية في 4 الحل حتى بداية ديسيلولاريزيشن.</li>
</ol>5-ديسيلولاريزيشن بنكرياس الخنزير
<ol><li>ذوبان الجليد في البنكرياس عند 4 درجة مئوية.</li>
	<li>تشغيل مضخة تمعجية في التشكيل ديسيلولاريزيشن مع الحل 3 في 20 مل/دقيقة حتى تشاهد لا فقاعات الهواء في أنبوب مدخل المنظفات.</li>
	<li>ضع البنكرياس في حاوية ديسيلولاريزيشن وربط أنبوب مدخل المنظفات إلى الشريان الاورطي البنكرياس. تغسل الجهاز قبل التروية مع 3 الحل بين عشية وضحاها في الدقيقة 20 مل عند 4 درجة مئوية.</li>
	<li>من أجل حل اليسار في قاعة الهيئة.</li>
	<li>استبدال 3 الحل مع الحل 5 ونتخلل البنكرياس لمدة 30 دقيقة في 20 مل/دقيقة عند 4 درجة مئوية. من أجل حل في قاعة الهيئة.</li>
	<li>إضافة 6 الحل ونتخلل البنكرياس ح 8 في 20 مل/دقيقة عند 4 درجة مئوية. من أجل حل في قاعة الهيئة.</li>
	<li>تغسل الجهاز قبل التروية مع 5 حل أجل 96 ساعة في 20 مل/دقيقة عند 4 درجة مئوية. من أجل حل في قاعة الهيئة.</li>
	<li>تعد البنكرياس لعلاج الدناز بتعميم 500 مل من برنامج تلفزيوني في دولبيكو يتضمن كاكل2 و مجكل2 لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. من أجل حل في قاعة الهيئة.</li>
	<li>إضافة 250 مل من 7 الحل ونتخلل البنكرياس ح 4 في 20 مل/دقيقة عند 37 درجة مئوية. من أجل حل في قاعة الهيئة.</li>
	<li>تغسل الجهاز قبل التروية مع 5 الحل ح 120 في 20 مل/دقيقة عند 4 درجة مئوية.</li>
	<li>تخزين الجهاز في 8 الحل عند 4 درجة مئوية لفترات قصيرة أو في-20 درجة مئوية لفترات طويلة.</li>
</ol>6-تحقق ديسيلولاريزيشن
<ol><li>استخدام مقص، قص خزعات 3-10 ملم من جميع الفصوص البنكرياس وإصلاحها في فورمالدهايد عن 48 ساعة في درجة حرارة الغرفة.</li>
	<li>تغسل القطع في الماء عالي النقاوة لمدة 15 دقيقة ومعالجتها في معالج أنسجة عقب البروتوكولات القياسية، وتضمينها في البارافين.</li>
	<li>قطع المقاطع 5-ميكرومتر باستخدام مبضع ووصمة عار لهم قبل الهيماتوكسيلين و 0.2 في المائة الكحولية ويوزين ماير (أنه) عقب البروتوكولات القياسية.</li>
	<li>عرض الشرائح تحت مجهر خفيفة للتحقق من الخسائر في نوى. ملاحظة: يمكن استخدام قطعة من أنسجة طازجة المجهزة بنفس الطريقة كعنصر تحكم للتحقق من وجود نويات.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Yang, H. K., Yoon, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+encapsulated+islet+transplantation.">Current status of encapsulated islet transplantation.</a> Journal of Diabetes and its Complications. 29 (5), 737-743 (2015).</li><li>Badylak, S. F., Taylor, D., Uygun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-organ+tissue+engineering:+Decellularization+and+recellularization+of+three-dimensional+matrix+scaffolds.">Whole-organ tissue engineering: Decellularization and recellularization of three-dimensional matrix scaffolds.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 13, 27-53 (2011).</li><li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes.">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li><li>Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolution+of+metazoan+extracellular+matrix.">The evolution of metazoan extracellular matrix.</a> Journal of Cell Biology. 196 (6), 671-679 (2012).</li><li>Scarritt, M. E., Pashos, N. C., Bunnell, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+cellularization+strategies+for+tissue+engineering+of+whole+organs.">A review of cellularization strategies for tissue engineering of whole organs.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnol. 3, 43 (2015).</li><li>Goh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfusion-decellularized+pancreas+as+a+natural+3D+scaffold+for+pancreatic+tissue+and+whole+organ+engineering.">Perfusion-decellularized pancreas as a natural 3D scaffold for pancreatic tissue and whole organ engineering.</a> Biomaterials. 34 (28), 6760-6772 (2013).</li><li>Wu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+Culture+of+MIN-6+Cells+on+Decellularized+Pancreatic+Scaffold.">3D Culture of MIN-6 Cells on Decellularized Pancreatic Scaffold.</a> In Vitro and In Vivo Study. Biomed Research International. 2015, 432645 (2015).</li><li>Peloso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Human+Pancreas+as+a+Source+of+Protolerogenic+Extracellular+Matrix+Scaffold+for+a+New-generation+Bioartificial+Endocrine+Pancreas.">The Human Pancreas as a Source of Protolerogenic Extracellular Matrix Scaffold for a New-generation Bioartificial Endocrine Pancreas.</a> Annals of Surgery. 264 (1), 169-179 (2016).</li><li>Mirmalek-Sani, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Porcine+pancreas+extracellular+matrix+as+a+platform+for+endocrine+pancreas+bioengineering.">Porcine pancreas extracellular matrix as a platform for endocrine pancreas bioengineering.</a> Biomaterials. 34 (22), 5488-5495 (2013).</li><li>Taylor, M. J., Baicu, S., Greene, E., Vazquez, A., Brassil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+isolation+from+juvenile+porcine+pancreas+after+24-h+hypothermic+machine+perfusion+preservation.">Islet isolation from juvenile porcine pancreas after 24-h hypothermic machine perfusion preservation.</a> Cell Transplantation. 19 (5), 613-628 (2010).</li><li>Elebring, E., Kuna, V. K., Kvarnstrom, N., Sumitran-Holgersson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cold-perfusion+decellularization+of+whole-organ+porcine+pancreas+supports+human+fetal+pancreatic+cell+attachment+and+expression+of+endocrine+and+exocrine+markers.">Cold-perfusion decellularization of whole-organ porcine pancreas supports human fetal pancreatic cell attachment and expression of endocrine and exocrine markers.</a> Journal of Tissue Engineering. 8, 2041731417738145 (2017).</li><li>Gilpin, A., Yang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+Strategies+for+Regenerative+Medicine:+From+Processing+Techniques+to+Applications.">Decellularization Strategies for Regenerative Medicine: From Processing Techniques to Applications.</a> Biomed Research International. 2017, 9831534 (2017).</li><li>James, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+the+protease+inhibitor+phenylmethylsulfonyl+fluoride+in+buffers.">Inactivation of the protease inhibitor phenylmethylsulfonyl fluoride in buffers.</a> Analytical Biochemistry. 86 (2), 574-579 (1978).</li><li>Lichstein, H. C., Soule, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+the+Effect+of+Sodium+Azide+on+Microbic+Growth+and+Respiration:+I.+The+Action+of+Sodium+Azide+on+Microbic+Growth.">Studies of the Effect of Sodium Azide on Microbic Growth and Respiration: I. The Action of Sodium Azide on Microbic Growth.</a> Journal of Bacteriology. 47 (3), 221-230 (1944).</li></ol>

S.S.H. يحمل أسهم في فيريجرافت، إحدى الشركات التي رخصت تكنولوجيا الهندسة أنسجة الأوعية الدموية. ليس لها علاقة بالكشف عن المؤلفين الآخرين.

البروتوكول المقترح، استخدام التروية السويسرية و X-100 تريتون في 4 درجات مئوية، وسوف ديسيلولاريزي بنكرياس الخنزير كله بنجاح. ويتمثل التحدي في هذا الأسلوب تشريح البنكرياس سليمة تتضمن جميع الفصوص الثلاثة دون الأضرار لحمه وسفن الإمداد لها، فضلا عن ربط الأوعية الدموية الفروع الأخرى للعينة من أجل نتخلل الجهاز دون تسرب. وقد البنكرياس النقانق تشريح مختلفة مقارنة بالبنكرياس البشرية. ويتكون من ثلاثة فصوص، ويبقى على اتصال وثيق مع الأمعاء الدقيقة عن طريق جزئيا المحيطة به. نحن تشريح العفج جنبا إلى جنب مع البنكرياس، كما العديد من الأوعية الدموية الصغيرة من البنكرياس توصيل الأمعاء. خلال الدراسات الأمثل، قد أظهرت قطع حادة لهذه الأوعية الدموية التسرب ونضح ناقصة الحلول.
حيث يربط الشريان الاورطي إلى البنكرياس عن طريق الشرايين المساريقي العلوي الهضمية ومتفوقة، اخترنا الشريان الاورطي كمداخل للحفاظ التروية بسيطة باستخدام قنية واحد، ومن ثم مدخل واحد فقط. في تجربتنا، ربط الشريان الاورطي أعلاه الأشعة المقطعية وأدناه SMA سينخفض وقت تشريح ويقلل من خطر إلحاق الضرر بأي من السفينتين. وبالإضافة إلى خنزير هيبارينيزيد، ولاحظنا أيضا أن نضح من الهيبارين الباردة عبر الشريان الاورطي مباشرة بعد التشريح يساعد في تحقيق نضح حلول في جميع أنحاء الجهاز. يمكننا التكهن إذا كان هذا يحدث عن طريق منع تكوين جلطات الدم في الأوعية الدموية. سوف نضح الأولية البنكرياس مع الماء عالي النقاوة بعد تشريح خلايا الدم الحمراء وإزالة بقايا الدم في الجهاز، مما يحول دون تشكيل الجلطات الدموية. يمكن أيضا استخدام هذه الفترة للبحث عن أي فروع صغيرة أونليجاتيد الأوردة والشرايين، كما يمكن بسهولة ملاحظة تدفق الدم فوق الخلفية.
اخترنا أن يبقى الإجراء ديسيلولاريزيشن كله في درجات حرارة باردة (4 درجة مئوية)، كهذا سوف يعوق عمل إفرازات الإنزيمات التي تطلق من إفرازات خلايا البنكرياس. يمكن أن يسبب إفرازات الإنزيمات، عندما لا يعوق، تأثير ضار على الخلايا وإدارة المحتوى في المؤسسة، كما أنها يمكن هضم أغشية الخلية والبروتينات12. كما يمكن أن انفجر تجميد والغاء فعالية الخلايا، قمنا بتضمين خطوة تجميد/ذوبان الجليد، في البداية حتى قبل التروية من المنظفات4،13. الغسيل الأولى بعد ذوبان الجليد سيؤدي إلى إزالة بقايا رشقات نارية باتجاه الخلية. معاملة المنظفات استخدمنا عبارة عن مزيج من المركز و X-100 تريتون في تركيزات مرتفعة على نحو غير عادي، وفي سرعة عالية التروية. لقد اخترنا هذا النهج لتحقيق ديسيلولاريزيشن أسرع عن طريق إزالة إفرازات الخلايا التي تلحق الضرر إدارة المحتوى في المؤسسة. يمكننا التكهن بأن بروتوكول الجاد والسريع مفيد للبنكرياس ديسيلولاريزيشن، كما ستكون متاحة لإنزيمات البنكرياس للتفاعل مع المحتوى، ومن ثم الحفاظ على حسن إدارة المحتوى في المؤسسة مكونات وقت أقل. للحفاظ على مكونات إدارة المحتوى في المؤسسة، أضفنا أيضا سيرين مثبط البروتياز (بمسف) للحلول المنظفات، كما أنه سوف تمنع تنشيط الإنزيمات أطلق سراحهم من الخلايا إفرازات14. أزيد الصوديوم يضاف إلى جميع ديسيلولاريزيشن الحلول، كما أنها بمثابة عامل والاريثروسين، مما يحول دون فرصة للتلوث البكتيري15.
ديسيلولاريزيد البنكرياس بعد هذا البروتوكول الحفاظ على هياكل إدارة المحتوى في المؤسسة وإدارة المحتوى في المؤسسة بروتينات الكولاجين والايلاستين وأظهرت. ومع ذلك، لوحظ في البنكرياس ديسيلولاريزيد خسارة كبيرة من الجليكوزامينوجليكان. ديسيلولاريزيد البنكرياس في هذا الشكل كما أظهرت الوعد لمرفق الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في البنكرياس والتعبير عن علامات إفرازات الغدد الصماء، وفي ريسيلولاريزيد لمدة 14 يوما12قطعة. ومع ذلك، لتوليد بنكرياس سليمة والوظيفية، مطلوب إجراء مزيد من البحوث في تقييم مصادر الخلية الصحيحة وأنواع الخلايا، خلية استراتيجيات البذر والثقافة مفاعل حيوي.

مرض البول السكري يتميز بوجود مستويات متزايدة من الجلوكوز في الدم. فإنه يعتبر تحديا رئيسيا لصحة العامة في معظم البلدان1. مستويات عالية من الجلوكوز في الدم تؤثر على الأوعية الدموية والجهاز العصبي، مما تسبب في أضرار للعيون والقلب، والكلى وأقصى الاسكيمية. وتشمل الطرق التقليدية للعلاج حقن الأنسولين الخارجية، والمخدرات، والتغييرات في أسلوب الحياة. وضع جانبا علاج لهذا المرض، وفي بعض الحالات، تفشل العلاجات المتاحة للحفاظ على الأنسولين على المستويات العلاجية، أسفر عن ارتفاع السكر في الدم. وبالرغم من أن زرع الجزيرات أو البنكرياس كله يزيل المرض، لم يتم عادة ذلك بسبب نقص في الهيئات المانحة مناسبة والمخاطر والصعوبات التي ينطوي عليها من الكبت المناعي وتغليف2.
التحسن الحالي في الميدان الطب الهندسة والتجدد الأنسجة تمتلك القدرة على تقديم حل لهذه المسائل. مع تقنية ديسيلولاريزيشن، يمكن إزالة المواد الخلوية من مانح الإنسان أو الحيوان بينما البروتينات الهامة المصفوفة خارج الخلية (ECM)، عوامل النمو، ويتم الحفاظ على جزيئات الإشارات في السقالة. يمكن يحتمل أن يكون زرع هذه السقالات دون الحاجة للكبت المناعي، لاستعادة وظيفة الجهاز بعد ريسيلولاريزيشن مع3،الخلايا الجذعية غير مكسبه للمستلم4. يمكن استخدام أجهزة هندسة الأنسجة من مصادر متمكنة أو إكسينوجينيك في زرع السريرية، البروتينات المصفوفة خارج الخلية الرئيسية هي المحافظة فيما بين الأنواع، وقد لا يرفض بعد زرع5.
ديسيلولاريزيشن أسلوب جيد استكشاف التي تنطوي على الاستخدام الأمثل للقوى المادية والمنظفات الكيماوية والأنزيمات في إعداد فسيولوجية إزالة المواد النووية والخلايا من الأنسجة أو الجهاز. ريسيلولاريزيشن إجراء لبذر خلايا مرة أخرى إلى الجهاز اللاخلوي. إجراء فكريا صعبة، تتطلب عدد كبير من الخلايا، واستراتيجية البذر خلية أمثل، ونظام مفاعل حيوي لثقافة الجهاز في ظروف مقبولة من الناحية الفسيولوجية مثل درجة الحرارة والضغط والغازات6.
ويمكن اعتبار البنكرياس نسيج تحديا لهندسة الأنسجة بسبب قدراته إفرازات الغدد الصماء. الأنسجة إفرازات تفرز عدة إنزيمات الجهاز الهضمي، في حين أن الجزء الغدد الصماء تفرز الهرمونات، بما في ذلك الأنسولين. ديسيلولاريزيشن البنكرياس سليمة من الماوس7،8و البشرية9خنزير10 سبق ذكر استخدام الإنزيمات (التربسين، ديوكسيريبونوكليسي [الدناز]) ومن (المنظفات الأيونية وغير الأيونية (Triton X-100) ديوكسيتشولاتي الصوديوم [المركز] ودوديسيل كبريتات الصوديوم [الحزب الديمقراطي الصربي]). ومع ذلك، عقب البروتوكولات المنشورة، نحن نناضل مع تشريح الناجحة، ونضح كاملة وديسيلولاريزيشن مع الحفاظ على بنية إدارة المحتوى في المؤسسة. نحن تكهنت أن المنظفات التطبيقية أثناء ديسيلولاريزيشن يسبب تحلل للخلايا، ثم الإفراج عن الإنزيمات الهضمية في الجهاز. سوف يتسبب ضرر لا يمكن إصلاحه سقالة ECM الإنزيمات المفرج عنهم وجعلها غير فعالة ديسيلولاريزيشن وريسيلولاريزيشن. تصميم الأسلوب الذي ديسيلولاريزيس فعالية البنكرياس بينما يعوق عمل إنزيمات الجهاز الهضمي قد يحل المشكلة. لقد اخترنا استراتيجية بيلوسو et al.، من ديسيلولاريزيشن في البنكرياس عند درجة حرارة باردة، على الرغم من أنها لم تبلغ عن السبب تستخدم9درجات الحرارة الباردة. في الوقت نفسه، قمنا بتصميم استراتيجية تشريح مع تعديلات من تايلور et al. باختيار الشريان الاورطي كمدخل التروية جذع الهضمية (CT) و الشريان المساريقي العلوي (SMA)11.
في مقال نشر مؤخرا12، نبدي أسلوب العزل الفعال وديسيلولاريزيشن من بنكرياس الخنزير مع الحفاظ على بعض مكونات إدارة المحتوى في المؤسسة. في هذه الورقة، وإظهار وصف مفصل لكيفية تشريح بنكرياس الخنزير كله تتضمن الطحال، الإثناعشرية، واتصال الفصوص، ويقدم بروتوكول التدرجي لنجاح ديسيلولاريزيشن.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
		<tbody>
		<tr >
			<td >4mm DLP arteriotomy cannula</td>
			<td >Medtronic</td>
			<td >31104</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >2ml Unlabelled pipette</td>
			<td >vWR</td>
			<td >612-3720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Degasser</td>
			<td >Biotech AB</td>
			<td >0001-6484</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DNase-I</td>
			<td >Worthington</td>
			<td >LS0020007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dulbecco&#39;s PBS with CaCl2 and MgCl2</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >D8662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EDTA disodium salt dihydrate</td>
			<td >AlfaAesar</td>
			<td >A15161.OB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Heparin</td>
			<td >Leo</td>
			<td >387107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Luer Male with 1/8&#34; ID Barb</td>
			<td >Oina</td>
			<td >LM-2PP-QC</td>
			<td>For 3X5mm silicon tube</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Peristaltic pump</td>
			<td >Oina</td>
			<td >SP-1X4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PMSF</td>
			<td >Roche</td>
			<td >10837091001</td>
			<td>Unstable in aqueous solution. Should be added fresh before perfusion.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Potassium chloride</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Potassium hydrogen phosphate</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >P9791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >SDC</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >30970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Silicon tube 3X5mm</td>
			<td >VWR</td>
			<td >2280706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium Azide</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >71290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium chloride</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >13423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium hydrogen phosphate</td>
			<td >Merck</td>
			<td >71640-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Suture</td>
			<td >V&#246;mel</td>
			<td >14817</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Syrringe 50mL</td>
			<td >Becton Dickinson</td>
			<td >300137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Triton-X-100</td>
			<td >AlfaAesar</td>
			<td >A16046.OF</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and decellularization of a whole porcine pancreas

هندسة الأنسجة في البنكرياس كله يمكن تحسين العلاجات الحالية لمرض البول السكري. والهدف النهائي مهندس أنسجة البنكرياس من مصدر متمكنة أو إكسينوجينيك مع الخلايا البشرية. وقد يستفيد مظاهرة أساليب للتشريح تتسم بالكفاءة، وديسيلولاريزيشن، وريسيلولاريزيشن من بنكرياس الخنزير الحقل. أقرب إلى البنكرياس البشرية، يكون البنكرياس الخنزير ترتيب تشريحي خاص مع الفصوص الثلاثة (الطحال، الإثناعشرية، واتصال) مقربا من الإثني عشر والأمعاء الدقيقة. الفص الإثناعشرية البنكرياس يتصل العفج بالعديد من الأوعية الدموية الصغيرة. هندسة الأنسجة البنكرياس معقدة بسبب طابعها إفرازات الغدد الصماء. في هذه الورقة، ونظهر بروتوكول مفصل لتشريح البنكرياس كله الخنزير وديسيلولاريزي مع المنظفات أثناء حفظ هيكلها وبعض عناصر المصفوفة خارج الخلية. ولتحقيق التروية الكاملة، يتم اختيار الشريان الاورطي كمدخل والوريد البابي كمخرج. هي متصلة الأوعية الدموية (الشريان الكبدي، المنوال الطحال، شريان الطحال، شجرة الشريان والوريد المساريقي العلوي) وأخرى من القناة الصفراوية. هو هيبارينيزيد لمنع تكوين خثرة، الخنزير، ومباشرة بعد التشريح، يتم مسح الجهاز مع الهيبارين الباردة. أن يعوق عمل إفرازات الإنزيمات، يتم تعيين ديسيلولاريزيشن البنكرياس عند 4 درجة مئوية. ديسيلولاريزيشن يقوم نضح X-100 تريتون، ديوكسيتشولاتي الصوديوم، وديوكسيريبونوكليسي، مع غسيل واسعة النطاق المتقطع والنهائي. مع ديسيلولاريزيشن نجاح، البنكرياس تظهر بيضاء، وإجراء تقييم نسيجية ذات الهيماتوكسيلين ويوزين يبين وجود نويات ذات هيكل مصفوفة خارج الخلية يتم الحفاظ عليها. وهكذا، يمكن استخدام الطريقة المقترحة لتشريح وديسيلولاريزي بنكرياس الخنزير كله بنجاح.

صور تشريح البنكرياس الخنزير الممثل، التي يمكن أن تساعد في تحديد مكان وتشريح الشريان المساريقي العلوي السفلي والوريد شجرة والوريد البابي والشريان الكبدي، والقناة الصفراوية والشريان الاورطي المتفرعة للأشعة المقطعية و SMA، مبينة في الشكل 2 ألف، 2 (ب)و ( ج) 2 (أصفر السهام)، على التوالي. يبين الشكل 3 ألف مورفولوجية الإجمالي البنكرياس الطبيعي، الذي يظهر الضوء الوردي ويحتوي على الطحال، اتصال، والفصوص الإثناعشرية. بعد ديسيلولاريزيشن، يتم فقدان اللون الوردي والبنكرياس ديسيلولاريزيد تبدو شاحبة بيضاء في لون. تظهر في الشكل 3Bالصورة مورفولوجيا إجمالي عرض الطحال، الاتصال والفصوص الإثناعشرية البنكرياس ديسيلولاريزيد. يبين الشكل 3 وجود العديد من الأنوية الأزرق في بنكرياس طبيعي تلطيخ مع أنه. في بنكرياس ديسيلولاريزيد، أنه تلطيخ أظهرت خسارة نويات، كما ينظر إلى لا الأنوية الأزرق (3D الشكل).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58302/58302fig2v2.jpg"> رقم 2: صور لتشريح البنكرياس الخنزير. (أ) موقع أدنى المساريقي العلوي الشريان والوريد الشجرة (السهم الأصفر). (ب) ربط الوريد البابي والشريان الكبدي والقناة الصفراوية (السهم الأصفر). (ج) الشريان الاورطي المتفرعة من الجذع الهضمية وفي الشريان المساريقي العلوي (السهم الأصفر). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58302/58302fig2v2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58302/58302fig3.jpg"> الشكل 3: الإجمالي مورفولوجيا وأنه يلطخ من البنكرياس الطبيعي وديسيلولاريزيد. (أ) إجمالي مورفولوجية البنكرياس الطبيعي. (ب) إجمالي مورفولوجية البنكرياس ديسيلولاريزيد. تلطيخ (ج) أنه يظهر وجود نويات الأزرق في بنكرياس طبيعي. تلطيخ (د) أنه يظهر عدم وجود نواة الأزرق في بنكرياس ديسيلولاريزيد. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58302/58302fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Decellularization of a Whole Porcine Pancreas at JoVE.com

Isolation and Decellularization of a Whole Porcine Pancreas

هندسة الأنسجة في البنكرياس كله يشكل تحديا بسبب وظائفها إفرازات والغدد الصماء. نعرض طريقة للتشريح بنكرياس الخنزير سليمة وعملية ناجحة ديسيلولاريزيشن من نضح المنظفات X-100 تريتون، ديوكسيتشولاتي الصوديوم، وديوكسيريبونوكليسي.

والعزلة وديسيلولاريزيشن من بنكرياس الخنزير كله

Tissue engineering of the whole pancreas can improve current treatments for diabetes mellitus. The ultimate goal is to tissue engineer pancreas from an ...

يمكن استخدام هذه الطريقة لتشريح البنكرياس بورسين التي تحتوي على اتصال، الاثني عشري، والفصوص splenic و decellularization في نهاية المطاف عن طريق ضخ المنظفات في درجات الحرارة الباردة. على الرغم من أن هذه الطريقة من إزالة الخلايا يوفر نظرة ثاقبة البنكرياس بورسين، فإنه يمكن أيضا أن تطبق على pancreata من الحيوانات الكبيرة الأخرى. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسهل استرجاع الجهاز المعقد ، مثل البنكرياس ، للتطبيقات الهندسية الإضافية للأنسجة.عموما، الأفراد الجدد لهذه الطريقة، وأنها سوف النضال لأن تشريح البنكرياس سليمة في حين تحديد وربط جميع الأوعية الدموية المحيطة بها يتطلب الكثير من الممارسة لإتقان. قبل البدء في الإجراء ، استخدم أنبوب سيليكون واحد من ثلاثة إلى خمسة ملليمترات لتوصيل حاوية المنظفات بالمضخة ال peristaltic وثاني أنبوب سيليكون ثلاثي في خمسة ملليمترات لتوصيل المضخة ال peristaltic إلى غرفة الجهاز عن طريق degasser. ربط ليتر ذكر إلى الطرف الحر من الأنبوب الثاني، واستخدام ثالث أنبوب سيليكون ثلاثة في خمسة ملليمترات لربط غرفة الجهاز لحاوية جمع المنظفات عن طريق مضخة ال peristaltic.وأخيرا، قم بتوصيل ماصة غير مُدلى بها من عيارين إلى النهايات الحرة للأنابيب في حاوية المنظفات وحاوية جمع المنظفات. ثم ضع إعداد إزالة الخلية عند أربع درجات مئوية. لحصاد البنكرياس، ضع خنزيرًا أنثويًا يزن 45 كجم على طاولة تشريح في موضع الضم، واستخدم مشرطًا لصنع شق متوسط طوله 40 سنتيمترًا من عملية الـ xiphoid إلى عظم العانة لفضح أعضاء البطن.بعد تحديد splenic، الاثني عشري، وفص اتصال، وتحديد موقع البابية الاثني عشر الرئيسية، واستخدام اثنين من الغرز الفردية لligate شفويا الاثني عشر من الموقع. Ligate المريء السفلي مع خياطة إضافية ، وقطع بين الأربطة مع مقص لتسهيل إزالة المعدة. افصل الأنسجة الضامة عن القولون للوصول إلى الأمعاء الدقيقة، وافصل النسيج الضام في القولون الذي يعلق على الفص الزنجي من البنكرياس.يتم توصيل الأمعاء الدقيقة بالبنكرياس عن طريق النسيج الضام في الفص الزلي، ولكنها تحيط أيضًا بالبنكرياس. عليك أن تتبع بعناية مسار الأمعاء لفك و فصل النسيج الضام بين الأمعاء والبنكرياس. بعد ربط الشرايين، قم بإزالة القولون من الأمعاء الدقيقة.تحديد الوريد الأدنى mesenteric، وأدنى شجرة الشريان المساريق، وligate الأوعية مع خياطة واحدةcaudal البنكرياس وقطع مع مقص. Ligate الشريان الجنبي والوريد معا في الحلوم، على مقربة من الطحال، وقطع distally مع مقص لإزالة الطحال. اتبع الاثني عشر حتى يتم مسح الفصوص الاثني عشر والاتصال ، وligate الاثني عشر في النهاية مع اثنين من الغرز منفصلة.يتم إزالة الجزء من الاثني عشر الذي هو على اتصال وثيق مع اتصال وفصوص الاثني عشر مع البنكرياس، كما ربط جميع الأوعية الدموية الصغيرة بين الجهازين من الصعب جدا. بعد تشريح الوريد المدخل ، ligate السفينة مع خياطة واحدة لمنع أي تسرب الدم من الكبد ، وتشريح وligate القناة الصفراوية والشريان الكبدي مع اثنين من الغرز. ثم، وقطع الوريد المدخل، الشريان الكبدي، والقناة الصفراوية مع مقص.حدد مكان الشريان الأورطي تحت الوريد الكلوي، وتشريح الشريان الأبهر في اتجاه الجمجمة من العضلات والأنسجة الضامة حتى يصل الوعاء إلى البنكرياس. الآن، بلطف قلب البنكرياس أكثر، وتشريح الشريان الأورطي، والحفاظ على الشريان المينارتيك متفوقة والجذع الاضطرابات الهضمية سليمة. قطع الشريان القحفي الأورطي إلى جذع الاضطرابات الهضمية، وحاد تشريح الأنسجة المحيطة المتبقية للسماح بالحصاد من البنكرياس.ثم، استخدام حقنة 50 ملليلتر متصلة قنية استئصال الشرايين أربعة ملليمتر لطرد الجهاز من خلال الشريان الأبهر مع الحل الثاني حتى يتم perfused الجهاز كله أو حتى يصبح الجهاز كله الباردة. وضع الحل اثنين من البنكرياس perfused على صينية معدنية على الجليد، مع الشريان الأورطي التي تواجه، واستخدام مقص لقطع الغرز من الاثنيع. استخدام ماصة 25 ملليلتر لطرد الاثني عشر مع 50 إلى 150 ملليلتر من الماء فائقة البور، religate الأنسجة مع الغرز الطازجة.Ligate نهاية واحدة من الشريان الأورطي وجميع الفروع، باستثناء الشريان المسنتيبيرية العليا والجذع الاضطرابات الهضمية، لمنع التسرب، وإدراج قنية استئصال الشرايين أربعة ملليمترات في الطرف الآخر من الشريان الأبهر. بعد ذلك، ضع البنكرياس في غرفة الأعضاء، وربط القنية في البنكرياس بـ Luer ذكر. ثم، اثقب البنكرياس بالمحلول ثلاثة لمدة ساعة واحدة عند 20 ملليلتر في الدقيقة، وتجميد البنكرياس المزدوج عند ناقص 20 درجة مئوية في محلول أربعة حتى بداية إزالة الخلايا.في يوم بدء إزالة الخلايا ، ذوبان البنكرياس عند أربع درجات مئوية ، ووضع البنكرياس المذاب في غرفة الجهاز نزع الخلية. قم بتوصيل أنبوب مدخل المنظفات إلى الشريان الأورطي للبنكرياس، وغسل البنكرياس بالمحلول الثالث بمعدل 20 ملليلترًا في الدقيقة بين عشية وضحاها عند أربع درجات مئوية. في صباح اليوم التالي، إلغاء أي حل المتبقية في غرفة الجهاز، وثقب البنكرياس لمدة 30 دقيقة في 20 ملليلتر في الدقيقة الواحدة في حل خمسة في أربع درجات مئوية.في نهاية محلول خمسة ضخ, ضخ البنكرياس لمدة ثماني ساعات في 20 ملليلتر في الدقيقة في حل ست وأربع درجات مئوية, تليها 96 ساعة غسل في محلول جديد خمسة في 20 ملليلتر في الدقيقة وأربع درجات مئوية. استبدل الغسل بـ 500 ملليلتر من DPBS مكمّلة بالكالسيوم والمغنيسيوم لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية، تليها الضخ مع 250 ملليلتر من الحل سبعة لأربع ساعات بمعدل 20 ملليلتر في الدقيقة و37 درجة مئوية. ثم، وغسل الجهاز لمدة 120 ساعة أخرى مع حل جديد خمسة في 20 ملليلتر في الدقيقة وأربع درجات مئوية، وتخزين الجهاز في الحل ثمانية.هنا ، يمكن ملاحظة المورفولوجيا الإجمالية للبنكرياس العادي ، والتي تظهر باللون الوردي الفاتح وتحتوي على splenic ، والاتصال ، والفصوص الاثني عشرية. بعد إزالة الخلية، يتم فقدان اللون الوردي، والبنكرياس معالجتها يظهر أبيض شاحب في اللون. في البنكرياس العادي، العديد من النوى الزرقاء واضحة من قبل H وE تلطيخ، في حين في البنكرياس غير الخلوية لم يعد من الممكن تصور النوى، مما يؤكد فقدانها.البنكرياس بورسين سليمة معزولة, بعد هذا الإجراء, وسوف تسمح ضخ كامل وفك الخلايا الناجحة مع الحفاظ على هيكل وأيضا السماح بعض البروتينات مصفوفة خارج الخلية يمكن الحصول عليها. يمكن استخدام البنكرياس المزيل الخلية لتطوير استراتيجيات إعادة الخلية في الجهاز كله في أنظمة مفاعلات حيوية مع أنواع الخلايا ذات الصلة. بعد إعادة الخلية مع الخلايا الجذعية المتلقية، يمكن استخدام البنكرياس الأنسجة هندسيا للتطبيقات السريرية واختبار المخدرات.لا ننسى أن العمل مع تريتون X-100 وSDC يمكن أن تكون خطرة للغاية، وأن الاحتياطات، مثل ارتداء القفازات وإعداد الحلول تحت غطاء محرك الدخان، ينبغي دائما أن تتخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Decellularization and Recellularization of Whole Livers

وDecellularization Recellularization الأكباد من الجامعة

The liver is a complex organ which requires constant perfusion for delivery of nutrients and oxygen and removal of waste in order to survive1. Efforts to ...

Procedure for Decellularization of Porcine Heart by Retrograde Coronary Perfusion

إجراءات Decellularization من القلب التاجي لحم الخنزير من قبل الإرواء الوراء

Perfusion-based  whole organ decellularization has recently gained interest in the field of  tissue engineering as a means to create site-specific ...

A Decellularization Methodology for the Production of a Natural Acellular Intestinal Matrix

منهج Decellularization لإنتاج وغير خلوي الطبيعية المعوية ماتريكس

Successful tissue engineering involves the  combination of scaffolds with appropriate cells in vitro or in vivo.  Scaffolds may be synthetic, ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Procedure for Decellularization of Rat Livers in an Oscillating-pressure Perfusion Device

إجراءات Decellularization من الجرذ الأكباد في تتأرجح ضغط الإرواء الأجهزة

Decellularization and recellularization of parenchymal organs may enable the generation of functional organs in vitro, and several protocols for rodent ...

Quantification of Strain in a Porcine Model of Skin Expansion Using Multi-View Stereo and Isogeometric Kinematics

الكمي للسلالة في نموذج الخنزير من التوسع الجلد عن طريق متعدد ستيريو وIsogeometric الكينماتيكا

Tissue expansion is a popular technique in plastic and reconstructive surgery that grows skin in vivo for correction of large defects such as burns and ...

High Resolution 3D Imaging of the Human Pancreas Neuro-insular Network

التصوير عالية الدقة 3D الشبكة العصبية الجزر البنكرياس البشري

Using traditional histological methods, researchers are hampered in their ability to image whole tissues or organs in large-scale 3D. Histological ...

Comparable Decellularization of Fetal and Adult Cardiac Tissue Explants as 3D-like Platforms for In Vitro Studies

ديسيلولاريزيشن مماثلة لانسجة القلب الجنين والكبار Explants كمثل 3D منهاجي في المختبر الدراسات

Current knowledge of extracellular matrix (ECM)-cell communication translates to large two-dimensional (2D) in vitro culture studies where ECM components ...

Two Methods for Decellularization of Plant Tissues for Tissue Engineering Applications

طريقتين ديسيلولاريزيشن أنسجة النباتية لتطبيقات هندسة الأنسجة

The autologous, synthetic, and animal-derived grafts currently used as scaffolds for tissue replacement have limitations due to low availability, poor ...

Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins

ديسيلولاريزيشن ومنهجية ريسيلولاريزيشن للاوردة الصافن البشرية

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and ...