Name: isolation and decellularization of a whole porcine pancreas
Uploaded: 2018-10-10T14:00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Decellularization of a Whole Porcine Pancreas at JoVE.com

מחקר זה מומן על ידי מענק מאלף LUA הממשלה השוודי S.S.H.

ניתוח לבלב חזירי וההליך decellularization המובאת כאן את ההנחיות האתית של אוניברסיטת גטבורג.
1. הכנת קביעת Decellularization
<ol><li>באמצעות צינורות סיליקון 3 x 5 מ מ, התחברות בסדרת המכולה כניסת דטרגנט המשאבה peristalic ועל ואז על הלבלב באיבר קאמרית ויה degasser (ראה איור 1). להתחבר עם סכינים סטריליים זכר לסוף צינור בחדר איברים ללא תשלום.</li>
	<li>באמצעות צינור סיליקון אחר של 3 x 5 מ מ, להתחבר לחדר עוגב אאוטלט דטרגנט מיכל דרך משאבת סחרור לאיסוף הנוזל perfused.</li>
	<li>להתחבר פיפטה ללא תווית של 2 ml הפנויות של צינורות כניסת דטרגנט המכיל ולא דטרגנט שקע cointainer.</li>
	<li>לשמור את כל התרמית ב 4 º C.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58302/58302fig1v2.jpg" style="opacity: 0.9; font-size: 14px;"> איור 1: הכנת הסידור זלוף. באמצעות צינור סיליקון 3 x 5 מ מ, כפי שמוצג בקביעת, להתחבר בסדרת המכולה כניסת דטרגנט את משאבת סחרור, את degasser ואת תא איברים. החצים השחורים מראה לכם את הכיוון זרימה של כניסת דטרגנט מכיל לתא איברים עבור השקע דטרגנט, להשתמש עוד 3 x 5 מ מ סיליקון שפופרת וחבר את איבר קאמרית באמצעות משאבת סחרור המכולה עודפים דטרגנט. החיצים האדומים מראה לכם את הכיוון זרימה של איברים קאמרית לגורם עודפים דטרגנט <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58302/58302fig1v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
2. הכנת Decellularization פתרונות
<ol><li>פתרון 1 (באגירה פוספט תמיסת מלח [PBS]): להוסיף 8 גרם של נתרן כלורי (137 מ מ), g 0.2 (2.7 מ"מ) אשלגן כלורי, 1.44 גר' (10 מ מ) סודיום פוספט ו- 0.24 גר' (1.8 מ"מ) אשלגן פוספט 1 ליטר של מים הנדסה גנטית ומערבבים עד התפרקה. להתאים את ה-pH ל 7.4 עם חומצת מלח (HCl). בסך הכל, 3.2 L של פתרון זה נדרש.</li>
	<li>פתרון 2 (PBS + הפארין): עד 1 L של פתרון 1, להוסיף 3.4 מיליליטר הפרין (17 יחידות הבינלאומי [IU] /mL). להכין טרי הפתרון הזה ולשמור אותו בקרח עד שיהפוך קר. בסך הכל, 1.2 L של פתרון זה נדרש.</li>
	<li>פתרון 3 (הנדסה גנטית מים + אזיד הנתרן + ניתרן ethylenediaminetetraacetic חומצה [EDTA]): עד 1 L של הנדסה גנטית מים, להוסיף 1.86 g של EDTA (5 מ מ), 200 מ ג של אזיד הנתרן (0.02%). מערבבים עד המלחים הם התפרקה. מגניב הפתרון עד 4 ° C לפני השימוש. בסך הכל, L 22 של פתרון זה נדרש.</li>
	<li>פתרון 4 (PBS + אזיד הנתרן + EDTA): עד 1 L של פתרון 1, להוסיף 200 מ ג של אזיד הנתרן (0.02%) ו- g 1.86 של (5 מ"מ) EDTA. מערבבים עד המלחים הם התפרקה. מגניב הפתרון עד 4 ° C לפני השימוש. בסך הכל, 1 ליטר של פתרון זה נדרש.</li>
	<li>פתרון 5 (הנדסה גנטית מים + אזיד הנתרן): עד 1 L של הנדסה גנטית מים, להוסיף 200 מ ג של אזיד הנתרן (0.02%). מערבבים עד המלחים הם התפרקה. מגניב הפתרון עד 4 ° C לפני השימוש. בסך הכל, 260 L של פתרון זה נדרש. הערה: EDTA טפסים של התמיסה עם SDC, נכללו 5 פתרון מאז זה ישמש לרחצה מיידית לפני ואחרי הטיפול SDC.</li>
	<li>פתרון 6 (SDC + טריטון X-100): 940 מ של מים הנדסה גנטית, להוסיף 40 גרם (4%) SDC, 60 מ ל (6%) טריטון X-100 200 מ ג של אזיד הנתרן (0.02%), 69.6 מ"ג של פלואוריד (0.4 מ מ) phenylmethylsulfonyl (PMSF). מערבבים עד התפרקה. מגניב הפתרון עד 4 ° C לפני השימוש. הוסף PMSF לפני השימוש. בסך הכל, 9.6 L של פתרון זה נדרש.</li>
	<li>פתרון 7 (DNase): להוסיף קוניץ 10,000 יחידות DNase-אני ב- 250 מ של PBS של Dulbecco (40 קוניץ יחידות/mL) המכיל CaCl2 ו- MgCl2. להכין טרי ולהשתמש מיד. חממו את הפתרון 37 ° C לפני השימוש.</li>
	<li>פתרון 8 (PBS + נתרן אזיד): עד 1 L של פתרון 1, להוסיף 200 מ ג של אזיד הנתרן (0.02%). מערבבים עד המלחים הם התפרקה. מגניב הפתרון עד 4 ° C לפני השימוש. בסך הכל, 1 ליטר של פתרון זה נדרש.</li>
</ol>3. ניתוח של הלבלב חזירי
הערה: במחקר זה, הלבלב חזירי היו גזור מן מורדמים, heparinized (400 IU/kg) חזירות במשקל של 45 ק ג של חווה.
<ol><li>מקם את החזיר על השולחן לנתיחה במצב פרקדן.</li>
	<li>עושים קו האמצע חתך מתהליך xiphoidal לעצם החיק (כ 40 ס מ) בעזרת אזמל, חשיפת כל אברי הבטן.</li>
	<li>לאתר את הטחול, תריסריון, ואת החיבור אונות.</li>
	<li>אתר רמת papilla תריסריון העיקריים ולחץ מאתרים ומפסיקים התריסריון אורלית מאתר זה בעזרת שני תפרים נפרדים.</li>
	<li>מאתרים ומפסיקים את הוושט נחות עם שני תפרים נפרד וחותכים בין ליגטורות עם מספריים כדי להוציא את הבטן.</li>
	<li>להפריד את רקמת המעי הגס כדי להגיע אל המעי הדק.</li>
	<li>להפריד את רקמת החיבור של המעי הגס שמתחבר האונה הטחול של הלבלב.</li>
	<li>הסר את המעי הגס המעי הדק לאחר נבדק העורקים.</li>
	<li>למצוא את וריד מצע המעי העליון נחות והעץ עורק מצע המעי העליון נחות, מאתרים ומפסיקים בתפר אחד שבו יופיעו הקליפה של הלבלב.</li>
	<li>מאתרים ומפסיקים את עורק הטחול ואת הווריד יחד עם תפר אחד, קרוב הטחול, ב hilum, וחותכים רחוק עם מספריים כדי להסיר את הטחול.</li>
	<li>בצע את התריסריון עד האונות תריסריון וחיבור נמחקים, מאתרים ומפסיקים התריסריון בסוף עם שני תפרים נפרדים.</li>
	<li>לנתח את וריד שער הכבד, מאתרים ומפסיקים אותו בתפר אחד כדי למנוע דליפה כלשהי הדם מן הכבד, לחתוך הציר הקרוב קשירה. וריד שער הכבד משמש לפורקן במהלך decellularization.</li>
	<li>לנתח, מאתרים ומפסיקים את צינור המרה ואת עורק הכבד עם שני תפרים. לחתוך יש תפרים.</li>
	<li>למצוא העורקים תחת וריד הכליה, לנתח את זה לכיוון הגולגולת של שרירים ורקמות. עד שהוא מגיע לאזור הלבלב.</li>
	<li>להתהפך הלבלב בעדינות, לנתח את העורקים, שמירה SMA ו- CT תקין, וחותכים העורקים ל CT לכוחו של SMA עם מספריים.</li>
	<li>לחתוך את הנותרים הרקמות הסובבות עם מספריים, להוציא את הלבלב.</li>
	<li>באמצעות מזרק 50-mL מחובר arteriotomy 4-מ מ בצינורית, לרוקן את האיבר דרך העורקים עם פתרון 2 עד זה perfuses את כל האיבר או עד האיבר כולו הופך קר.</li>
</ol>4. הכנה של הלבלב חזירי Decellularization
<ol><li>לשמור על הלבלב ב 4 ° C או על קרח לאורך כל התהליך.</li>
	<li>לחתוך את התפרים של התריסריון באמצעות מספריים, לנקות את זה של מזון על ידי שטיפה 50-150 מ ל מים הנדסה גנטית בעזרת פיפטה 25-mL ו מאתרים ומפסיקים אותו שוב עם תפרים.</li>
	<li>מאתרים ומפסיקים את קצה אחד של אבי העורקים ואת כל ענפי חוץ SMA ו- CT עם תפרים למניעת דליפה.</li>
	<li>הוספת מהקצה השני של אבי העורקים בצינורית 4-מ מ arteriotomy, מאתרים ומפסיקים את זה עם תפרים.</li>
	<li>Perfuse הלבלב עם פתרון 3 בשביל 1 h ב- 20 מ ל/דקה באמצעות את קביעת decellularization. הערה: Prefill הצינורות של משאבת עם פתרון 3 כזה כי אין בועות הזן הלבלב. לחפש כל leakages מכל הכיוונים של האיבר, מאתרים ומפסיקים סניפים כלי הדם הכל פתוח עם התפרים, למעט וריד שער הכבד.</li>
	<li>להקפיא הלבלב ב-20 ° C ב- 4 פתרון עד תחילת decellularization.</li>
</ol>5. decellularization של הלבלב חזירי
<ol><li>הפשרת הלבלב ב 4 º C.</li>
	<li>הפעל את משאבת סחרור בקביעת decellularization עם פתרון 3 ב- 20 מ ל/דקה עד אין בועות אוויר נראים בצינור כניסת דטרגנט.</li>
	<li>למקם את הלבלב המכולה decellularization וחבר את צינור כניסת דטרגנט העורקים של הלבלב. לשטוף את איבר המין על ידי זלוף עם פתרון 3 בן לילה-20 mL/min ב 4 º C.</li>
	<li>יוצקים את הפתרון השאיר בבית הבליעה איברים.</li>
	<li>להחליף 3 פתרון פתרון 5 ו perfuse הלבלב למשך 30 דקות ב- 20 mL/min ב 4 º C. יוצקים את הפתרון בבית הבליעה איברים.</li>
	<li>להוסיף פתרון 6, perfuse הלבלב עבור 8 שעות-20 mL/min ב 4 º C. יוצקים את הפתרון בבית הבליעה איברים.</li>
	<li>לשטוף את איבר המין על ידי זלוף עם 5 פתרון עבור 96 h ב- 20 mL/min ב 4 º C. יוצקים את הפתרון בבית הבליעה איברים.</li>
	<li>הכן הלבלב לטיפול DNase באמצעות צואה 500 מ ל- PBS של Dulbecco המכילה CaCl2 ו- MgCl2 למשך 30 דקות ב- 37 מעלות צלזיוס. יוצקים את הפתרון בבית הבליעה איברים.</li>
	<li>להוסיף 250 מ של פתרון 7, perfuse הלבלב במשך 4 שעות ב- 20 mL/min ב- 37 מעלות צלזיוס. יוצקים את הפתרון בבית הבליעה איברים.</li>
	<li>לשטוף את איבר המין על ידי זלוף עם 5 פתרון עבור h 120 20 mL/min ב 4 º C.</li>
	<li>אחסן את האיבר פתרון 8 ב 4 ° C לפרקי זמן קצרים או ב-20 ° C לתקופות ארוכות.</li>
</ol>6. אימות של Decellularization
<ol><li>בעזרת מספריים, לחתוך ביופסיות 3 עד 10-מ מ מ כל האונות של הלבלב ותקן אותן בפורמלין במשך 48 שעות בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>לשטוף את החלקים במים הנדסה גנטית למשך 15 דקות, לעבד אותם במעבד רקמות בעקבות פרוטוקולים סטנדרטיים, להטביע אותם בפרפין.</li>
	<li>סעיפים 5-מיקרומטר באמצעות מיקרוטום גזורה תכתים אותם על ידי hematoxylin ו- 0.2% אלכוהוליים אאוזין של מאייר (הוא) בעקבות פרוטוקולים סטנדרטיים.</li>
	<li>הצגת השקופיות תחת מיקרוסקופ אור כדי לבדוק על האובדן של גרעין האטום. הערה: קטע רקמה טריים מעובדים באופן זהה יכול לשמש פקד כדי לבדוק נוכחות של גרעין האטום.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Yang, H. K., Yoon, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+encapsulated+islet+transplantation.">Current status of encapsulated islet transplantation.</a> Journal of Diabetes and its Complications. 29 (5), 737-743 (2015).</li><li>Badylak, S. F., Taylor, D., Uygun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-organ+tissue+engineering:+Decellularization+and+recellularization+of+three-dimensional+matrix+scaffolds.">Whole-organ tissue engineering: Decellularization and recellularization of three-dimensional matrix scaffolds.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 13, 27-53 (2011).</li><li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes.">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li><li>Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolution+of+metazoan+extracellular+matrix.">The evolution of metazoan extracellular matrix.</a> Journal of Cell Biology. 196 (6), 671-679 (2012).</li><li>Scarritt, M. E., Pashos, N. C., Bunnell, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+cellularization+strategies+for+tissue+engineering+of+whole+organs.">A review of cellularization strategies for tissue engineering of whole organs.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnol. 3, 43 (2015).</li><li>Goh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfusion-decellularized+pancreas+as+a+natural+3D+scaffold+for+pancreatic+tissue+and+whole+organ+engineering.">Perfusion-decellularized pancreas as a natural 3D scaffold for pancreatic tissue and whole organ engineering.</a> Biomaterials. 34 (28), 6760-6772 (2013).</li><li>Wu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+Culture+of+MIN-6+Cells+on+Decellularized+Pancreatic+Scaffold.">3D Culture of MIN-6 Cells on Decellularized Pancreatic Scaffold.</a> In Vitro and In Vivo Study. Biomed Research International. 2015, 432645 (2015).</li><li>Peloso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Human+Pancreas+as+a+Source+of+Protolerogenic+Extracellular+Matrix+Scaffold+for+a+New-generation+Bioartificial+Endocrine+Pancreas.">The Human Pancreas as a Source of Protolerogenic Extracellular Matrix Scaffold for a New-generation Bioartificial Endocrine Pancreas.</a> Annals of Surgery. 264 (1), 169-179 (2016).</li><li>Mirmalek-Sani, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Porcine+pancreas+extracellular+matrix+as+a+platform+for+endocrine+pancreas+bioengineering.">Porcine pancreas extracellular matrix as a platform for endocrine pancreas bioengineering.</a> Biomaterials. 34 (22), 5488-5495 (2013).</li><li>Taylor, M. J., Baicu, S., Greene, E., Vazquez, A., Brassil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+isolation+from+juvenile+porcine+pancreas+after+24-h+hypothermic+machine+perfusion+preservation.">Islet isolation from juvenile porcine pancreas after 24-h hypothermic machine perfusion preservation.</a> Cell Transplantation. 19 (5), 613-628 (2010).</li><li>Elebring, E., Kuna, V. K., Kvarnstrom, N., Sumitran-Holgersson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cold-perfusion+decellularization+of+whole-organ+porcine+pancreas+supports+human+fetal+pancreatic+cell+attachment+and+expression+of+endocrine+and+exocrine+markers.">Cold-perfusion decellularization of whole-organ porcine pancreas supports human fetal pancreatic cell attachment and expression of endocrine and exocrine markers.</a> Journal of Tissue Engineering. 8, 2041731417738145 (2017).</li><li>Gilpin, A., Yang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+Strategies+for+Regenerative+Medicine:+From+Processing+Techniques+to+Applications.">Decellularization Strategies for Regenerative Medicine: From Processing Techniques to Applications.</a> Biomed Research International. 2017, 9831534 (2017).</li><li>James, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+the+protease+inhibitor+phenylmethylsulfonyl+fluoride+in+buffers.">Inactivation of the protease inhibitor phenylmethylsulfonyl fluoride in buffers.</a> Analytical Biochemistry. 86 (2), 574-579 (1978).</li><li>Lichstein, H. C., Soule, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+the+Effect+of+Sodium+Azide+on+Microbic+Growth+and+Respiration:+I.+The+Action+of+Sodium+Azide+on+Microbic+Growth.">Studies of the Effect of Sodium Azide on Microbic Growth and Respiration: I. The Action of Sodium Azide on Microbic Growth.</a> Journal of Bacteriology. 47 (3), 221-230 (1944).</li></ol>

S.S.H. מחזיקה החברה במניות Verigraft, חברה יש רישיון הטכנולוגיה של הנדסת רקמות כלי דם. המחברים האחרים אין לחשוף.

הפרוטוקול המוצע, באמצעות זלוף SDC, טריטון X-100 ב 4 ° C, decellularize הלבלב כל חזירי בהצלחה. האתגר בטכניקה זו הוא ניתוח הלבלב שלם המכיל כל האונות שלוש ללא פגיעה parenchyma ו. הקערות המספקת, וכן את מצדו של הסניפים כלי הדם של הדגימה כדי perfuse את האיבר בלי דליפה. הלבלב חזירי יש של האנטומיה שונה בהשוואה בלבלב האנושי. הוא מורכב משלוש אונות, נשאר בקשר הדוק עם המעי הדק על ידי חלקית המקיפים אותו. פרקנו התריסריון יחד עם הלבלב, כמו מספר כלי דם קטנים מן הלבלב מתחבר המעי. במהלך הלימודים אופטימיזציה, חיתוך בוטה של כלי דם אלה הראו זליגת זלוף לא שלם של פתרונות.
מאז העורקים מתחבר הלבלב דרך העורקים מצע המעי העליון הצליאק והסופריור, בחרנו העורקים כמו מעין שקע בחופו לשמור את זלוף פשוטה באמצעות רק בצינורית אחד ו, לכן, כניסה אחת. מניסיוננו, מצדו של אבי העורקים מעל ה-CT ומתחת של SMA יקטן הזמן של דיסקציה ומפחיתה את הסיכון של פגיעה כלשהי שתי הספינות. בנוסף חזיר heparinized, שמנו לב גם כי זלוף של הפארין קר ויה מיד לאחר דיסקציה אבי העורקים מסייעת בהשגת זלוף של פתרונות לכל אורך איבר המין. אנחנו משערים אם מצב זה מתרחש על-ידי מניעת היווצרות של קרישי דם בכלי הדם. זלוף הראשונית של לבלב עם הנדסה גנטית מים לאחר ניתוח lyse כדוריות דם אדומות ולהסיר שאריות הדם באיבר, ובכך מונע היווצרות של קרישי דם. בתקופה זו גם ניתן למצוא בכל סניפי קטן unligated של ורידים, עורקים, כמו זרימת הדם ניתן להבחין בקלות מעל הרקע.
בחרנו להשאיר את ההליך כולו decellularization בטמפרטורות קרות (4 ° C), כמו זה לעכב את הפעולה של אנזימים אקסוקרינית לשחרר מתאי אקסוקרינית של הלבלב. אנזימים אקסוקרינית, כאשר לא עכבות, יכול לגרום חד משמעית את ECM, והתאים כפי שהם מסוגלים לעכל קרום התא וב -חלבונים12. כפי הקפאה והפשרה של יכולות להתפוצץ ביעילות את התאים, כללנו צעד ההקפאה/ההפשרה, בתחילה עוד לפני זלוף של דטרגנטים4,13. לשטוף את הראשונית לאחר מפשיר יסיר את שרידי התא מתפרץ. הטיפול דטרגנט השתמשנו הוא שילוב של SDC טריטון X-100 בריכוזים גבוהים מהרגיל, במהירות גבוהה זלוף. בחרנו בגישה זו כדי להשיג decellularization מהר יותר על-ידי הסרת התאים אקסוקרינית נזק של ECM. אנו משערים כי פרוטוקול חזק ומהר הוא מועיל עבור הלבלב decellularization, כפי פחות זמן יהיה זמין עבור אנזימי לבלב לקיים אינטראקציה עם ה-ECM, וכך לשמר את רכיבי ה-ECM טוב. כדי לשמר את רכיבי ה-ECM, גם הוספנו סרין מעכב פרוטאז (PMSF) הפתרונות דטרגנט, כמו זה ימנע את ההפעלה של אנזימים שוחרר מן התאים אקסוקרינית14. אזיד הנתרן נוסף כל הפתרונות decellularization, כאשר היא פועלת כסוכן bacteriostatic, ובכך מעכבים את הסיכוי לזיהום חיידקי15.
הלבלב decellularized בעקבות פרוטוקול זה הראה על שימור מבנים ECM, ה-ECM חלבונים קולגן ואלסטין. עם זאת, לאובדן משמעותי של glycosaminoglycans היה לב בלבלב decellularized. הלבלב decellularized באופנה זה הראה גם ההבטחה עבור ההחזקה של האדם תאי גזע עובריים הלבלב ואת הביטוי של סמנים, האנדוקרינית אקסוקרינית חתיכות recellularized 14 ימים12. עם זאת, כדי ליצור של הלבלב שלמים ולא פונקציונלי, מחקר נוסף נדרש בהערכת מקורות התא הנכון, סוגי תאים, תא אסטרטגיות זריעה והתרבות ביוריאקטור.

סוכרת מאופיין על ידי הנוכחות של רמות גבוהות של גלוקוז בדם. היא מוכרת בתור אתגר מרכזי בריאות הציבור המדינות רוב1. רמות גבוהות של גלוקוז בדם משפיע על כלי הדם, מערכת העצבים, גרימת נזק בעיניים, בלב, בכליות, ואת הגפיים איסכמיה. השיטות המסורתיות של הטיפול כוללים זריקות של אינסולין אקסוגני, תרופות, שינויים באורח החיים. שמה בצד תרופה למחלה, במקרים מסוימים, הטיפולים להיכשל לשמור על האינסולין ברמות טיפולית, וכתוצאה מכך היפרגליקמיה. למרות השתלת של איים קטנים או הלבלב כל מבטלת את המחלה, זה לא נפוץ נעשה בשל מחסור האיברים תורם מתאים ובשל הסיכונים והקשיים מעורב החיסוני, כימוס2.
שיפורים הנוכחי בתחום של הנדסת רקמות ורפואה רגנרטיבית בעלי היכולת למתן פתרון לבעיות אלה. עם הטכניקה של decellularization, ניתן להסיר את החומר הסלולר מתורם אדם או בעלי חיים תוך החלבונים החשובים מטריצה חוץ-תאית (ECM), גורמי גדילה, ואת מולקולות איתות יישמרו בלגרדום. פיגומים כזה יכול פוטנציאלית להיות מושתלים ללא צורך החיסוני, כדי לשחזר את תפקוד האיבר לאחר recellularization עם3,-immunogenic בתאי גזע של המטופל4. האברים רקמות מהונדסים ממקורות allogeneic או xenogeneic יכול לשמש השתלת קלינית, החלבונים העיקריים מטריצה חוץ-תאית נשמרים בין המינים, לא יכול להיות דחתה לאחר השתלת5.
Decellularization היא שיטה מוכר הכרוכות אופטימלית של הכוחות הפיזיקליים, חומרי ניקוי כימיים, אנזימים בסביבה הפיזיולוגית כדי להסיר תאים וחומרים גרעיניים רקמה או איבר. Recellularization הוא הליך של זריעת תאי בחזרה לתוך האיבר acellular. . זה הליך קשה מבחינה אינטלקטואלית, הדורשות מספר גדול של תאים, אסטרטגיית אופטימום זורעות תא, ומערכת ביוריאקטור לתרבות של האיבר-תנאים מקובלים מבחינה פיזיולוגית כמו טמפרטורה, לחץ, גזים6
הלבלב יכול להיחשב טישו מאתגרת עבור הנדסת רקמות בגלל שלה אקסוקרינית ויכולות האנדוקרינית. הרקמה האקסוקרינית מפריש אנזימי עיכול מספר, בעוד החלק האנדוקרינית מפרישה הורמונים, כולל אינסולין. Decellularization של הלבלב ללא פגע מן העכבר7,8, אנושי9ו חזיר10 כבר דווח באמצעות אנזימים (טריפסין, deoxyribonuclease [DNase]) ללא יונית (טריטון X-100) ו (דטרגנטים יוניים נתרן deoxycholate [SDC], נתרן גופרתי dodecyl [מרחביות]). עם זאת, בעקבות הפרוטוקולים שפורסמו, נאבקנו עם לנתיחה מוצלחת, מלאה זלוף, decellularization תוך שמירה על מבנה ה-ECM אנחנו משערים כי חומרי ניקוי יישומית במהלך decellularization גורם פירוק של התאים, ובכך משחרר אנזימי עיכול לתוך איבר המין. אנזימים שפורסמו לגרום לנזק בלתי הפיך של לגרדום ECM ולהפוך אותו יעיל עבור decellularization ו- recellularization. עיצוב של השיטה שבה ביעילות decellularizes הלבלב בזמן מעכב את הפעולה של אנזימי העיכול עשויה לפתור את הבעיה. בחרנו את האסטרטגיה של Peloso. et al., של decellularization של הלבלב בטמפרטורה קרה, למרות שהם לא דיווח על הסיבה וקרות מהטמפ בשימוש9. במקביל, תיכננו אסטרטגיה הקרע עם שינויים של טיילור et al. על-ידי בחירת אבי העורקים כמו כניסת זלוף מעל המטען הצליאק (CT), עורק מצע המעי העליון סופריור (SMA)11.
מאמר שפורסם לאחרונה12, נדגים שיטה עבור בידוד יעיל ו decellularization של הלבלב חזירי תוך שמירה על רכיבים מסוימים ECM. בנייר זה, אנו להציג תיאור מפורט של איך לנתח כל חזירי לבלב המכיל הטחול, תריסריון, חיבור אונות, ולהציג פרוטוקול stepwise עבור decellularization מוצלח.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
		<tbody>
		<tr >
			<td >4mm DLP arteriotomy cannula</td>
			<td >Medtronic</td>
			<td >31104</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >2ml Unlabelled pipette</td>
			<td >vWR</td>
			<td >612-3720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Degasser</td>
			<td >Biotech AB</td>
			<td >0001-6484</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DNase-I</td>
			<td >Worthington</td>
			<td >LS0020007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dulbecco&#39;s PBS with CaCl2 and MgCl2</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >D8662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EDTA disodium salt dihydrate</td>
			<td >AlfaAesar</td>
			<td >A15161.OB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Heparin</td>
			<td >Leo</td>
			<td >387107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Luer Male with 1/8&#34; ID Barb</td>
			<td >Oina</td>
			<td >LM-2PP-QC</td>
			<td>For 3X5mm silicon tube</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Peristaltic pump</td>
			<td >Oina</td>
			<td >SP-1X4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PMSF</td>
			<td >Roche</td>
			<td >10837091001</td>
			<td>Unstable in aqueous solution. Should be added fresh before perfusion.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Potassium chloride</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Potassium hydrogen phosphate</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >P9791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >SDC</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >30970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Silicon tube 3X5mm</td>
			<td >VWR</td>
			<td >2280706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium Azide</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >71290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium chloride</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >13423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium hydrogen phosphate</td>
			<td >Merck</td>
			<td >71640-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Suture</td>
			<td >V&#246;mel</td>
			<td >14817</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Syrringe 50mL</td>
			<td >Becton Dickinson</td>
			<td >300137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Triton-X-100</td>
			<td >AlfaAesar</td>
			<td >A16046.OF</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and decellularization of a whole porcine pancreas

הנדסת רקמות הלבלב כל יכול לשפר טיפולים שוטפים עבור סוכרת. המטרה הסופית היא רקמת הלבלב מהנדס ממקור allogeneic או xenogeneic עם תאים אנושיים. הפגנה של שיטות עבור ניתוח יעיל, decellularization, recellularization של הלבלב חזירי יכול להפיק תועלת השדה. דומה הלבלב אנושי, חזירי הלבלב יש הסכם אנטומי מיוחד עם שלוש אונות (הטחול, תריסריון, וחיבור) מעוגל על ידי התריסריון והמעי הדק. האונה תריסריון הלבלב מתחבר התריסריון על ידי מספר כלי דם קטנים. הנדסת רקמות הלבלב הוא מסובך בשל טבעה, האנדוקרינית אקסוקרינית. בנייר זה, אנו מראים פרוטוקול מפורט לנתח הלבלב כל חזירי, decellularize אותו עם חומרי ניקוי בעת שמירת מבנהו ורכיבים מסוימים מטריצה חוץ-תאית. כדי להשיג זלוף מלאה, אבי העורקים נבחר כניסת ו וריד שער הכבד כמו שקע. כלי הדם (עורק הכבד, הטחול וריד, עורק הטחול, עץ עורק, וריד מצע המעי העליון) ואת צינור המרה אחרים מאתרים. כדי למנוע היווצרות של כגון, החזיר heparinized ו, מיד לאחר ניתוח, האיבר התרוקן עם הפרין קר. כדי לעכב את הפעולה של אנזימים אקסוקרינית, מוגדר decellularization הלבלב-4 מעלות צלזיוס. Decellularization מתבצע על ידי זלוף של טריטון X-100, סודיום deoxycholate, deoxyribonuclease, עם כביסה נרחב לסירוגין והאחרון. עם decellularization מוצלח, הלבלב מופיעה לבן ומראה הערכה היסטולוגית ועם hematoxylin אאוזין היעדרות של גרעינים עם מבנה מטריצה חוץ-תאית משומר. לכן, השיטה המוצעת יכול לשמש בהצלחה לנתח, decellularize הלבלב כל חזירי.

נציג הלבלב חזירי חיתוך תמונות, אשר יכול לעזור לאתר, לנתח את עורק מצע המעי העליון נחות הווריד עץ, וריד שער הכבד, עורק הכבד, המרה, העורקים המסתעפת CT ו- SMA, מוצגות באיור איור 2A, 2Bו- 2 C (צהוב חצים), בהתאמה. איור 3A מראה המורפולוגיה ברוטו של לבלב נורמלי, אשר מופיע אור ורוד והוא מכיל הטחול, חיבור, ואונות תריסריון. לאחר decellularization, צבע ורוד אובד, הלבלב decellularized נראה לבן חיוור בצבע. מורפולוגיה דוחה תמונה המציגה את הטחול, חיבור, ואונות תריסריון לבלב decellularized מוצג באיור 3B. איור 3C מציגה הנוכחות של גרעינים רבים כחול הלבלב נורמלי על ידי צביעת עם הוא. ב לבלב decellularized, שהוא מכתים הראה לאובדן של גרעינים, כמו גרעינים כחול לא נראים (דמות תלת-ממד).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58302/58302fig2v2.jpg"> איור 2: תמונות של הלבלב חזירי. הקרע. (א) מיקום של נחות מצע המעי העליון רואה העץ (חץ צהוב). (B) מצדו של וריד שער הכבד, עורק הכבד המרה (חץ צהוב). אבי העורקים (C) מ. המטען הצליאק, עורק מצע המעי העליון סופריור (חץ צהוב). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58302/58302fig2v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58302/58302fig3.jpg"> איור 3: ברוטו מורפולוגיה והוא מכתים של הלבלב נורמלי, decellularized. (א) מורפולוגיה ברוטו פוג'אלאדוצ'נוי זהאלאזי נורמלי. (B) דוחה המורפולוגיה של לבלב decellularized. (ג) הוא מכתים מציגה הנוכחות של גרעינים כחול הלבלב נורמלי. (ד) הוא מכתים מציג להעדר הגרעינים כחול לבלב decellularized. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58302/58302fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Decellularization of a Whole Porcine Pancreas at JoVE.com

Isolation and Decellularization of a Whole Porcine Pancreas

הנדסת רקמות הלבלב כל היא אתגר פונקציות האנדוקרינית אקסוקרינית שלה. אנו מראים שיטת ניתוח הלבלב חזירי שלם של תהליך של decellularization מוצלחת מאת זלוף של דטרגנטים טריטון X-100, סודיום deoxycholate, ואת deoxyribonuclease.

בידוד, Decellularization פוג'אלאדוצ'נוי זהאלאזי כל חזירי

Tissue engineering of the whole pancreas can improve current treatments for diabetes mellitus. The ultimate goal is to tissue engineer pancreas from an ...

שיטה זו יכולה לשמש עבור ניתוח של לבלב פורצ'ין המכיל חיבור, התריסוריות, ואונות טחול ובסופו של דבר decellularization באמצעות זלוב של חומרי ניקוי בטמפרטורות קרות. למרות שיטה זו של דקלולריזציה מספק תובנה לתוך הלבלב החזירי, זה עשוי להיות מיושם גם על הלבלב מבעלי חיים גדולים אחרים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מקלה על אחזור שלם של איבר מסובך, כגון הלבלב, עבור יישומים נוספים להנדסת רקמות.בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו, הם יתקשו כי ניתוח של הלבלב שלם תוך זיהוי ו קשירה של כל כלי הדם שמסביב דורש הרבה תרגול לשלוט. לפני תחילת ההליך, השתמש בצינור סיליקון אחד של שלושה על חמישה מילימטרים כדי לחבר את מיכל הדטרגנט למשאבה ההיסטנטית וצינור סיליקון שני של שלושה על חמישה מילימטרים כדי לחבר את המשאבה ההיסטנטית לתא האיברים באמצעות הדגסר. חבר לולר זכר לקצה החופשי של הצינור השני, ולהשתמש שלישי שלושה על חמישה מילימטר צינור סיליקון לחבר את תא האיברים למיכל איסוף חומר ניקוי באמצעות המשאבה peristaltic.לבסוף, לחבר פיפטה שני מילימטר ללא חגורה לקצוות החופשיים של הצינורות במיכל הדטרגנט ואת מיכל איסוף חומר הניקוי. לאחר מכן, מניחים את מערך ההדקה בארבע מעלות צלזיוס. כדי לקצור את הלבלב, מניחים חזיר נקבה בעל הפריניזציה של 45 ק"ג על שולחן ניתוח בתצורת העל-חלל, ולהשתמש באזמל כדי לבצע חתך של 40 ס"מ בקו האמצע מתהליך השיפויד לעצם הערווה כדי לחשוף את איברי הבטן.לאחר זיהוי האונות הטחול, התריסיון והחיבור, אתרו את האפיפיורות התריסורית העיקרית, ולהשתמש בשני תפרים בודדים כדי לקשר בעל פה את התריסיון מהאתר. Ligate הוושט הנחות עם תפרים נוספים, לחתוך בין הקשירה עם מספריים כדי להקל על הסרת הבטן. הפרד את רקמות החיבור מהמעי הגס כדי להגיע למעי הדק, והפרד את רקמת החיבור של המעי הגס המתחברת לאונה הטחולה של הלבלב.המעי הדק מחובר ללבלב על ידי רקמת חיבור על האונה הטחול, אלא גם מקיף את הלבלב. אתה צריך בזהירות לעקוב אחר נתיב המעי כדי להתיר ולהפריד את רקמת החיבור בין המעי ללבלב. לאחר קשירה העורקים, להסיר את המעי הגס מהמעי הדק.זהה את הוריד הקסנטרי הנחות, את עץ העורק הקסנטרי הנחות, וצרף את כלי הדם בתפר אחד ללבלב וחתוך במספריים. Ligate את העורק הטחול ואת וריד יחד hilum, קרוב הטחול, לחתוך distally עם מספריים כדי להסיר את הטחול. עקבו אחר התריסירה עד שהתריסריונים ואונות החיבור ינוקו, וקשרו את התריסירה בסוף עם שני תפרים נפרדים.החלק של התריסום כי הוא במגע הדוק עם החיבור ואת האונות התריסוריות מוסר עם הלבלב, כמו קשירה של כל כלי הדם הקטנים בין שני האיברים קשה מדי. לאחר ניתוח וריד הפורטל, יש ללקט את הכלי בתפר אחד כדי למנוע דליפת דם מהכבד, ול לנתח וללקט את צינור המרה ואת עורק הכבד עם שני תפרים. לאחר מכן, לחתוך וריד פורטל, עורק בהפטרה, צינור מרה עם מספריים.אתר את האב העורקים מתחת לווריד הכליה, ו לנתח את האב העורקים בכיוון הגולגולתי מן השריר ואת רקמת החיבור עד הכלי מגיע הלבלב. עכשיו, בעדינות להפוך את הלבלב מעל, ול לנתח את העורקים, שמירה על העורק mesenteric מעולה ואת גזע הצליאק שלם. חותכים את גולגולת העורקים לתא המטען של הצליאק, ובוטה לנתח את הרקמה שמסביב הנותרת כדי לאפשר קציר של הלבלב.לאחר מכן, השתמש במזרק 50 מיליליטר המחובר לקאנולה עורקית של ארבעה מילימטרים כדי לשטוף את האיבר דרך העורקים עם פתרון שני עד האיבר כולו הוא חדור או עד האיבר כולו הופך קר. מניחים את הפתרון שני לבלב מנוון על מגש מתכת על קרח, עם aorta פונה כלפי מעלה, ולהשתמש מספריים לחתוך את התפרים מן התריסום. השתמש פיפטה 25 מיליליטר כדי לשטוף את התריסום עם 50 עד 150 מיליליטר של מים אולטרה חום, ולהשנות מחדש את הרקמה עם תפרים טריים.Ligate קצה אחד של העורקים וכל הענפים, למעט העורק mesenteric מעולה גזע הצליאק, כדי למנוע דליפה, ולהכניס צינורית עורקים ארבעה מילימטר לתוך הקצה השני של העורקים. לאחר מכן, מניחים את הלבלב בתא האיברים, ולחבר את ה cannula בלבלב ל Luer זכר. לאחר מכן, לפנק את הלבלב עם פתרון שלוש במשך שעה אחת ב 20 מיליליטר לדקה, ולהקפיא את הלבלב כפול מנוון במינוס 20 מעלות צלזיוס בתתא ארבע עד תחילת decellularization.ביום תחילת הדפלולריזציה, מפשירים את הלבלב בארבע מעלות צלזיוס, ומציבים את הלבלב המופשר בתא האיברים הדפלולריזציה. חבר את צינור המשרתת לאורטה של הלבלב, ולשטוף את הלבלב עם פתרון שלוש ב 20 מיליליטר לדקה לילה בארבע מעלות צלזיוס. למחרת בבוקר, תפזר כל פתרון שנותר בתא האיברים, ותתפלל בלבלב במשך 30 דקות ב-20 מיליליטר לדקה בפתרון חמש בארבע מעלות צלזיוס.בסוף הפתרון חמש חליטות, לפנק את הלבלב במשך שמונה שעות ב 20 מיליליטר לדקה בתתכנון שש וארבע מעלות צלזיוס, ואחריו לשטוף 96 שעות בתתכנון טרי חמש ב 20 מיליליטר לדקה וארבע מעלות צלזיוס. החלף את הכביסה עם 500 מיליליטר של DPBS בתוספת סידן ומגנזיום במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס, ואחריו חליטה עם 250 מיליליטר של פתרון שבע במשך ארבע שעות ב 20 מיליליטר לדקה ו 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, לשטוף את האיבר עוד 120 שעות עם פתרון טרי חמש ב 20 מיליליטר לדקה וארבע מעלות צלזיוס, ולאחסן את האיבר בתתיק שמונה.כאן, ניתן לראות את המורפולוגיה הגולמית של לבלב רגיל, המופיע ורוד בהיר ומכיל טחול, חיבור ואונות התריסוריות. לאחר דקלולריזציה, הצבע הוורוד אובד, והלבלב המעובד נראה לבן חיוור בצבע. בלבלב רגיל, גרעינים כחולים רבים ניכרים על ידי כתמי H ו- E, ואילו בלבלב דקלולרי הגרעינים כבר לא ניתן לדמיין, המאשר את אובדנם.הלבלב הפורצ'ין המבודד שלם, בעקבות הליך זה, הוא יאפשר זלוש מלא ודקלולריזציה מוצלחת תוך שמירה על המבנה וגם מאפשר כמה חלבוני מטריצה חוץ תאית להתקבל. הלבלב המפורק יכול לשמש לפיתוח אסטרטגיות מדקלולריזציה של איברים שלמים במערכות bioreactor עם סוגי תאים רלוונטיים. לאחר recellularization עם תאי גזע הנמען, הלבלב מהונדס רקמה עשוי לשמש עבור יישומים קליניים ובדיקות סמים.אל תשכח כי עבודה עם טריטון X-100 ו SDC יכול להיות מסוכן מאוד, כי אמצעי זהירות, כגון ללבוש כפפות והכנת הפתרונות תחת מכסה המנוע אדים, תמיד צריך להילקח בעת ביצוע הליך זה.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Decellularization and Recellularization of Whole Livers

Decellularization ו Recellularization של כבדים שלמים

The liver is a complex organ which requires constant perfusion for delivery of nutrients and oxygen and removal of waste in order to survive1. Efforts to ...

Procedure for Decellularization of Porcine Heart by Retrograde Coronary Perfusion

נוהל Decellularization של לב חזירי ידי זלוף כלילית המדרדר

Perfusion-based  whole organ decellularization has recently gained interest in the field of  tissue engineering as a means to create site-specific ...

A Decellularization Methodology for the Production of a Natural Acellular Intestinal Matrix

Decellularization מתודולוגיה לייצור של המעיים מטריקס הטבעי acellular

Successful tissue engineering involves the  combination of scaffolds with appropriate cells in vitro or in vivo.  Scaffolds may be synthetic, ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Procedure for Decellularization of Rat Livers in an Oscillating-pressure Perfusion Device

נוהל Decellularization של כבדי עכברוש בהתקן זלוף נדנוד לחץ

Decellularization and recellularization of parenchymal organs may enable the generation of functional organs in vitro, and several protocols for rodent ...

Quantification of Strain in a Porcine Model of Skin Expansion Using Multi-View Stereo and Isogeometric Kinematics

כימות של זנים במודל חזירי של הרחבת עור באמצעות סטריאו Multi-הצגת Isogeometric קינמטיקה

Tissue expansion is a popular technique in plastic and reconstructive surgery that grows skin in vivo for correction of large defects such as burns and ...

High Resolution 3D Imaging of the Human Pancreas Neuro-insular Network

הדמיה תלת-ממדית ברזולוציה גבוהה של הרשת נוירו-סקסיסטית לבלב אנושי

Using traditional histological methods, researchers are hampered in their ability to image whole tissues or organs in large-scale 3D. Histological ...

Comparable Decellularization of Fetal and Adult Cardiac Tissue Explants as 3D-like Platforms for In Vitro Studies

דומה Decellularization של רקמת הלב העוברי ומבוגרים Explants כמו פלטפורמות דמויי תלת-ממד עבור לימודי חוץ גופית

Current knowledge of extracellular matrix (ECM)-cell communication translates to large two-dimensional (2D) in vitro culture studies where ECM components ...

Two Methods for Decellularization of Plant Tissues for Tissue Engineering Applications

שתי שיטות Decellularization של רקמות הצמח ליישומים הנדסת רקמות

The autologous, synthetic, and animal-derived grafts currently used as scaffolds for tissue replacement have limitations due to low availability, poor ...

Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins

Decellularization ומתודולוגיה Recellularization עבור האדם הורידים saphenous גדולות

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and ...