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October 10th, 2018
DOI :
October 10th, 2018
•0:04
Title
1:01
Porcine Pancreas Dissection
4:51
Decellularization Preparation
6:00
Porcine Pancreas Decellularization
7:33
Results: Representative Gross Morphology and H&E Staining of Normal and Decellularized Pancreata
8:11
Conclusion
Transcript
इस विधि का उपयोग पोर्सिन अग्न्याशय के विच्छेदन के लिए किया जा सकता है जिसमें कनेक्शन, डुओडेनल और प्लीहा लोब्स होते हैं और ठंडे तापमान पर डिटर्जेंट के पर्फ्यूजन के माध्यम से अंततः डिसेल्युलेशन होते हैं। हालांकि डिसेलुलराइजेशन की यह विधि पोर्सिन अग्न्याशय में अंतर्दृष्टि प्रदान करती है, लेकिन इसे अन्य बड़े जानवरों से अग्न्याशय पर भी लागू किया जा सकता है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह आगे के ऊतक इंजीनियरिंग अनुप्रयोगों के लिए अग्न्याशय जैसे जटिल अंग की अक्षुण्ण पुनः प्राप्ति की सुविधा प्रदान करता है।
आम तौर पर, इस विधि के लिए नए व्यक्ति, वे संघर्ष करेंगे क्योंकि आसपास की सभी रक्त वाहिकाओं की पहचान करते हुए और उन्हें फिर से लगाना होता है। प्रक्रिया शुरू करने से पहले, डिटर्जेंट कंटेनर को पेरिस्टाल्टिक पंप से जोड़ने के लिए १ ३-बाय-पांच मिलीमीटर सिलिकॉन ट्यूब का उपयोग करें और एक दूसरे तीन-बाय-पांच मिलीमीटर सिलिकॉन ट्यूब को डेगासर के माध्यम से अंग कक्ष से अंग कक्ष से जोड़ने के लिए । दूसरी ट्यूब के मुक्त अंत करने के लिए एक पुरुष Luer कनेक्ट, और एक तिहाई तीन से पांच मिलीमीटर सिलिकॉन ट्यूब का उपयोग करने के लिए परिष्ट पंप के माध्यम से डिटर्जेंट संग्रह कंटेनर से अंग कक्ष कनेक्ट ।
अंत में, डिटर्जेंट कंटेनर और डिटर्जेंट संग्रह कंटेनर में ट्यूबों के मुक्त सिरों के लिए एक दो मिलीमीटर अवेलेबल पिपेट कनेक्ट करें। इसके बाद डिसेल्युलराइजेशन सेटअप को चार डिग्री सेल्सियस पर रखें। अग्न्याशय की फसल के लिए, एक हेपरिनाइज्ड, 45-किलोग्राम, मादा सुअर को रीढ़ की स्थिति में विच्छेदन तालिका पर रखें, और पेट के अंगों को बेनकाब करने के लिए xiphoid प्रक्रिया से जघन हड्डी तक 40 सेंटीमीटर मिडलाइन चीरा बनाने के लिए एक स्केलपेल का उपयोग करें।
प्लीहा, डुओडेनल और कनेक्शन लोब्स की पहचान करने के बाद, प्रमुख डुओडेनल पैपिला का पता लगाएं, और साइट से डुओडेनम को मौखिक रूप से लिगेट करने के लिए दो व्यक्तिगत टांके का उपयोग करें। अतिरिक्त टांके के साथ अवर घेघा को लिगेट करें, और पेट को हटाने की सुविधा के लिए कैंची के साथ लिगेचर के बीच काट लें। छोटी आंत तक पहुंचने के लिए कोलन से कनेक्टिव ऊतकों को अलग करें, और कोलन के कनेक्टिव ऊतक को अलग करें जो अग्न्याशय के प्लीहा पालि से देता है।
छोटी आंतों को प्लीहा पालि में संयोजी ऊतक द्वारा अग्न्याशय से जोड़ा जाता है, लेकिन अग्न्याशय को भी घेर लेता है। आपको आंतों को अलग करने और आंत और अग्न्याशय के बीच संयोजी ऊतक को अलग करने के लिए सावधानीपूर्वक आंतों के रास्ते का पालन करना होगा। धमनियों को लिगामेंट करने के बाद, कोलन को छोटी आंत से हटा दें।
अवर मेसेनेटिक नस, अवर मेसेंटेरिक धमनी के पेड़ की पहचान करें, और अग्न्याशय के लिए एक सीवन कौडल के साथ जहाजों को लिगेट करें और कैंची से काटें। प्लीहा धमनी और नस को एक साथ हिलाल में, तिल्ली के करीब, और तिल्ली को हटाने के लिए कैंची से काट लें। डुओडेनम का पालन करें जब तक कि डुओडेनल और कनेक्शन लोब्स को मंजूरी नहीं दी जाती है, और अंत में दो अलग-अलग टांके के साथ डुओडेनम को लिगेट करें।
डुओडेनम का हिस्सा जो कनेक्शन और डुओडेनल लोब्स के निकट संपर्क में है, अग्न्याशय के साथ हटा दिया जाता है, क्योंकि दोनों अंगों के बीच सभी छोटी रक्त वाहिकाओं का बंधन बहुत मुश्किल है। पोर्टल नस विच्छेदन के बाद, जिगर से किसी भी रक्त रिसाव को रोकने के लिए एक सीवन के साथ पोत को लिगेट करें, और दो टांके के साथ पित्त वाहिनी और हेपेटिक धमनी को विच्छेदन और लिगेट करें। फिर, कैंची के साथ पोर्टल नस, हेपेटिक धमनी, और पित्त वाहिनी काटें।
गुर्दे की नस के नीचे महाधमनी का पता लगाएं, और मांसपेशियों और संयोजी ऊतक से कपाल दिशा में महाधमनी विच्छेदन जब तक पोत अग्न्याशय तक पहुंचता है। अब, धीरे से अग्न्याशय पर फ्लिप, और महाधमनी विच्छेदन, बेहतर mesenteric धमनी और सीलिएक ट्रंक बरकरार रखते हुए । अजवाइन ट्रंक के लिए महाधमनी कपाल काटें, और अग्न्याशय की फसल की अनुमति देने के लिए शेष आसपास के ऊतकों को काटना कुंद करें।
फिर, एक 50-मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग चार मिलीमीटर आर्टेरियोटॉमी कैनुला से जुड़ा हुआ है ताकि पूरे अंग को ठंडा न होने तक समाधान दो के साथ महाधमनी के माध्यम से अंग को फ्लश किया जा सके या जब तक कि पूरा अंग ठंडा न हो जाए। समाधान को बर्फ पर धातु की ट्रे पर दो पर्फ्यूस्ड अग्न्याशय रखें, जिसमें महाधमनी का सामना करना पड़ रहा है, और डुओडेनम से टांके काटने के लिए कैंची का उपयोग करें। 50 से 150 मिलीलीटर अल्ट्रापुरे पानी के साथ डुओडेनम को फ्लश करने के लिए 25 मिलीलीटर पिपेट का उपयोग करें, और ताजा टांके के साथ ऊतक को फिर से करें।
लीकेज को रोकने के लिए, बेहतर मेसेंटेरिक धमनी और सीलिएक ट्रंक को छोड़कर महाधमनी और सभी शाखाओं के एक छोर को लिगेट करें, और महाधमनी के दूसरे छोर में चार मिलीमीटर आर्टेरियोटॉमी कैनुला डालें। इसके बाद, अग्न्याशय को अंग कक्ष में रखें, और अग्न्याशय में कैनुला को एक पुरुष लूयर से कनेक्ट करें। फिर, प्रति मिनट 20 मिलीलीटर पर एक घंटे के लिए समाधान तीन के साथ अग्न्याशय को छिद्रित करें, और डिसेलुलराइजेशन की शुरुआत तक समाधान चार में शून्य से 20 डिग्री सेल्सियस पर डबल-पर्फ्यूस्ड अग्न्याशय को फ्रीज करें।
डिसेलुलराइजेशन शुरू करने के दिन, अग्न्याशय को चार डिग्री सेल्सियस पर गल जाता है, और गल वाले अग्न्याशय को डिसेलुलराइजेशन ऑर्गन चैंबर में रखें। डिटर्जेंट इनलेट ट्यूब को अग्न्याशय के महाधमनी से कनेक्ट करें, और अग्न्याशय को चार डिग्री सेल्सियस पर रात भर 20 मिलीलीटर प्रति मिनट पर समाधान तीन के साथ धोएं। अगली सुबह, अंग कक्ष में शेष किसी भी समाधान को कम करें, और चार डिग्री सेल्सियस पर समाधान पांच में 20 मिलीलीटर प्रति मिनट पर 30 मिनट के लिए अग्न्याशय को छिद्रित करें।
समाधान के अंत में पांच perfusion, समाधान छह और चार डिग्री सेल्सियस में प्रति मिनट 20 मिलीलीटर पर आठ घंटे के लिए अग्न्याशय perfuse, ताजा समाधान पांच में एक ९६ घंटे धोने के बाद 20 मिलीलीटर प्रति मिनट और चार डिग्री सेल्सियस । 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए कैल्शियम और मैग्नीशियम के साथ पूरक डीपीबीएस के ५०० मिलीलीटर के साथ धोने की जगह, २५० मिलीलीटर समाधान के साथ परफ्यूजन के बाद चार घंटे के लिए 20 मिलीलीटर प्रति मिनट और ३७ डिग्री सेल्सियस । फिर, 20 मिलीलीटर प्रति मिनट और चार डिग्री सेल्सियस पर ताजा समाधान पांच के साथ एक और १२० घंटे के लिए अंग धोएं, और आठ समाधान में अंग स्टोर करें ।
यहां, एक सामान्य अग्न्याशय की सकल आकृति, जो हल्के गुलाबी दिखाई देती है और इसमें प्लीहा, कनेक्शन और डुओडेनल लोब्स होते हैं, देखा जा सकता है। डिसेलुलराइजेशन के बाद, गुलाबी रंग खो जाता है, और प्रसंस्कृत अग्न्याशय रंग में पीला सफेद दिखाई देता है। एक सामान्य अग्न्याशय में, कई नीले नाभिक एच और ई धुंधला द्वारा स्पष्ट कर रहे हैं, जबकि एक विश्रेदार अग्न्याशय में नाभिक अब कल्पना नहीं की जा सकती है, उनके नुकसान की पुष्टि ।
इस प्रक्रिया का पालन करते हुए, अलग-थलग अक्षुण्ण पोर्सिन अग्न्याशय, यह संरचना को संरक्षित करते हुए एक पूर्ण पर्फ्यूजन और सफल डिसेल्युलराइजेशन की अनुमति देगा और कुछ बाह्य मैट्रिक्स प्रोटीन प्राप्त करने की अनुमति भी देगा। डिसेलुलराइज्ड अग्न्याशय का उपयोग प्रासंगिक सेल प्रकारों के साथ बायोरिएक्टर सिस्टम में पूरे अंग पुनर्कोशिकीयरण रणनीतियों को विकसित करने के लिए किया जा सकता है। प्राप्तकर्ता स्टेम कोशिकाओं के साथ पुनर्कोशिकीकरण के बाद, ऊतक इंजीनियर अग्न्याशय नैदानिक अनुप्रयोगों और दवा परीक्षण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
मत भूलना कि ट्राइटन एक्स-100 और एसडीसी के साथ काम करना बेहद खतरनाक हो सकता है और इस प्रक्रिया को निष्पादित करते समय दस्ताने पहनना और समाधान तैयार करना, सावधानियों को हमेशा लिया जाना चाहिए।
पूरे अग्ंयाशय के ऊतक इंजीनियरिंग अपनी exocrine और अंत में स्रावी कार्यों की वजह से एक चुनौती है । हम एक बरकरार सुअर का अग्ंयाशय के विच्छेदन और डिटर्जेंट ट्राइटन एक्स-१००, सोडियम deoxycholate, और deoxyribonuclease के छिड़काव द्वारा सफल decellularization की प्रक्रिया के लिए एक विधि दिखाते हैं ।
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