Name: anaerobic protein purification and kinetic analysis via oxygen electrode for studying desb dioxygenase activity and inhibition
Uploaded: 2018-10-03T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Anaerobic Protein Purification and Kinetic Analysis via Oxygen Electrode for Studying DesB Dioxygenase Activity and Inhibition at JoVE.com

Vi vill tacka Dr Camille Keller Wesleyan University för teknisk support. Speciellt tack till Professor Lindsay D. Eltis och Jenna K. Capyk från University of British Columbia, samt Christian Whitman från University of Texas i Austin, för deras råd angående anaerob protein reningsmetoder och användning av en O2 -känslig elektrod.

1. allmänna material och metoder
<ol><li>Förbered alla nödvändiga som beskrivs i tabell 1. Autoklavera vid 120 ° c under 15 min. steril filtrera SOC lösningen, efter tillsats av MgCl2 och glukos, genom passering genom ett 0,2 µm filter. Justera pH-värdet i den Millers Lysogeny buljong (LB media) lösning före autoklavering. Komplettera den LB-Amp media lösningen efter autoklavering med sterila lösningar av 0,2 mM L-cystein, sedan 0,1 mM järnhaltigt ammoniumsulfat att förbättra ...

De kritiska steg i att få aktiva, renat DesB protein innebär formning och bibehålla den reducera Fe(II) aktiva platsen i enzymet. Som sådan, korrigera prestanda av induktion, rening, koncentration och avsaltning steg är avgörande för framgångsrikt att få aktivt enzym. Inducerande proteinuttryck i närvaro av 1 mM järnhaltigt ammoniumsulfat säkerställer att Fe(II) korrekt införlivas i den aktiva platsen av DesB. Denna metod är inspirerad av studier som de med amidohydrolase metalloenzymes, som ofta kräver t...

Enzymer som använder järn eller andra metaller för att aktivera syre är ofta känsliga för inaktivering under reningsprocessen på grund av deras avlägsna från reducerande miljö i en cell. Därför dessa proteiner måste användas som cellen lysates, underkastas extern reduktionsmedel eller renas anaerobt för att säkerställa att de har optimal enzymaktivitet1,2,3,4. För de enzymer som är är syre-känsliga (speciellt järn-innehållande enzymer), utför alla rening och karakterisering steg bibehållen anaeroba förhållanden nödvändigt att fullständigt karakterisera dem. Detta har lett forskare att utveckla hela laboratorium uppställningar inom ramarna för anaerob kammare för studier alltifrån proteinuttryck genom kristallografi5,6,7,8 .
Häri, rapporterar vi metoder för anaerob rening och kinetiska karakterisering av enzymet DesB använder ett syre elektrod system. DesB är en gallate dioxygenas från bakterien Sphingobium sp. stam SYK-6 som är relaterade till LigAB, en protocatecuate dioxygenas från samma organism. Båda enzymer hör till typ II protocatechuate dioxygenas (PCAD) överfamiljen som inte har studerats datum9, troligen delvis på grund av enzymer av denna superfamiljen att vara mottagliga för inaktivering när renat med standard aerob protein reningsmetoder. Eftersom några av enzymerna som PCAD Visa substrat promiskuitet medan andra är substrat-specifika2,10, vidare är karakterisering av denna Överfamilj nödvändigt att identifiera specificitet bestämningsfaktorer. Såsom har påpekats i flera enzym superfamilies11,12,13,14,15, kan små molekyler ändra aktiviteten via direkta kompetitiv hämning eller bindningen av molekyler till separata Alloster fickor som orsakar en ökning eller minskning av enzymaktivitet16. Medan kinetik ensam inte kan skilja bindande platsen för en modulator, avgöra omfattningen av en aktivitet förändringen är viktigt för att förstå effekterna. Som sådan, metoder för kinetiska karakterisering infödda DesB verksamhet och dess verksamhet i närvaro av 4-nitrocatechol (4NC), en förening som vanligen används för att karakterisera och hämmar dioxygenas enzymer2,17, 18, visas.
DesB är kunna bryta ner Epigallocatechingallat, en lignin-derived aromatisk förening, via en extradiol dioxygenas (EDO) reaktion i vilken ring öppnandet catalyzeds använder syre som en av substrat10,19. Detta enzymatisk reaktion inträffar inom ramen för fördelningen av lignin, en aromatisk heteropolymer Funna i cellväggen av växter. Lignin kan vara depolymerized, vilket ger en mängd aromatiska föreningar som kan ytterligare delas upp i centrala metaboliter3,20,21,22,23,24 ,25,26,27,28,29,30,31,32,33 . Extradiol dioxygenases (EDO) katalyserar en ring öppning reaktion på dihydroxylated aromatiska föreningar, där klyvning sker i anslutning till en metall-samordnad diol; Däremot klyva intradiol dioxygenases liknande aromatiska föreningar mellan de två hydroxylgrupperna (figur 1). EDOs, som många andra metalloenzymes, har en tvåvärda metall center för samordnande Fe(II) består av en två-histidin, one-bildas triad9,34,35. Dessa metalloenzymes blir oxiderade, antingen genom autoxidation eller mekanism-baserade inaktivering, medan enzymet återges inaktiva2,36,37,38.
I de experimentella procedurer som beskrivs i detta manuskript, använder vi DesB, medlem av PCAD superfamiljen från det bakterie Sphingobium sp. SYK-6, katalysera tillsats av syre över C4-C5 förbindelsen av Epigallocatechingallat (figur 2A). Regiochemistry av denna klyvning är analogt med LigAB, som är en protocatechuate-4,5-dioxygenas (figur 2B). Hittills, inkluderar utredningar av detta gallate dioxygenas inga rapporter av föreningar som hämmar DesB10,19,39. Med användning av aerob reningsmetoder utställda DesB variabeln aktiviteten, medan med användning av anaerob metoder kunde vi konsekvent få protein med reproducerbara aktivitet. De kinetiska studier beskrivs här visar metoder för anaerob rening av DesB, kinetic karakterisering av reaktionen av DesB med Epigallocatechingallat, och hämning av DesB av 4-nitrocatechol (4NC).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Isopropyl &#946;-D-1-thiogalactopyranodise</td>
			<td>Gold Bio Technologies</td>
			<td>I2481C50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie Brilliant Blue R-250</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium persulfate</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Acrylamide</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N&#39;tetramethyl-ethylenediamine</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylose Resin High Flow</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>E8022S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BL21 (DE3) competent Escherichia coli cells</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>C2527I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gallic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G7384</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-nitrocatechol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N15553</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferrous ammonium sulfate</td>
			<td>Mallinckrodt</td>
			<td>5064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dithionite</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>33381-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>wheaton serum bottles</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-406G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mm Acrodisc PF Syringe Filter with Supor Membrane</td>
			<td>Pall Corportation</td>
			<td>4187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>400 mL Amicon Stirred Cell Concentrator</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>UFSC40001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>76 mm Millipore Ultracel 10 kDa cutoff reconsituted cellulose membrane filter</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>PLGC07610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-dithiothreitol</td>
			<td>Gold Bio Technologies</td>
			<td>DTT50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sephadex G-25 coarse desalting gal column</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0033-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL Crimp-Top Vials</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-391-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygraph Plus Electrode Control Unit</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td>OXYG1 Plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Eletrode Chamber</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td>DW1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode Disc</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td>S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE (0.0125 mmX25mm) 30m reel</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td>S4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode cleaning Kit</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td>S16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spacer paper</td>
			<td>Zig Zag</td>
			<td>available at any gas station</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>He-series Dri-Lab glove box</td>
			<td>Vacuum/Atmospheres Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE-493 Dri-Train</td>
			<td>Vacuum/Atmospheres Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double-Ended Micro-Tapered Stainless Steel Spatula</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>21-401-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DWK Life Sciences Kimble Kontes Flex Column Economy Column</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>k420400-1530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#956;L, Model 701 N SYR, Cemented NDL 26s ga, 2 in, point stlye 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DWK Life Sciences Kimble Kontes Flex Column Economy Column</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>K420401-1505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emulsiflex-C5 high-pressure homogenizer</td>
			<td>Avestin</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-PER Complete Bacterial Protein Extraction Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>89821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysozyme from chicken egg white</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>12650-88-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>151-21-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ampicillin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>7177-48-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP-1421-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1422-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P217-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M33-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D16-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S318-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris hydrochloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP153-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maltose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP684-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>G46-500</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

anaerobic protein purification and kinetic analysis via oxygen electrode for studying desb dioxygenase activity and inhibition

Syre-känsliga proteiner, inklusive de enzymer som utnyttjar syre som substrat, kan har nedsatt stabilitet när renat med traditionella aerob reningsmetoder. Detta manuskript illustrerar de tekniska detaljerna som är involverade i reningsprocessen anaerob, inklusive utarbetandet av buffertar och reagenser, metoder för kolonnkromatografi i ett handskfacket och avsaltning av proteinet innan kinetik. Beskrev också är metoder för att förbereda och använda en syre-elektrod för kinetiska karakterisering av ett syre-utnyttja enzym. Dessa metoder är illustrerade med hjälp av enzymet dioxygenas DesB, en gallate dioxygenas från bakterien Sphingobium sp. stam SYK-6.

Visas är SDS-PAGE gel analysen av enskilda fraktioner från rening av DesB-maltos bindande protein (MBP) fusion Konstrukt (figur 3). Gelen avslöjar att proteinet är ren (MW = 91.22 kDa), med undantag för förekomsten av DesB (MW = 49.22 kDa) och MBP protein domän (42 kDa) klyvs från varandra. Fraktioner E2 och E3 valdes för koncentration (steg 4.2).
Reproducerbara resultat från DesB kinetisk...

Watch this Scientific Journal Video about Anaerobic Protein Purification and Kinetic Analysis via Oxygen Electrode for Studying DesB Dioxygenase Activity and Inhibition at JoVE.com

Anaerobic Protein Purification and Kinetic Analysis via Oxygen Electrode for Studying DesB Dioxygenase Activity and Inhibition

Anaerob Protein rening och kinetiska analys via syre elektrod för att studera DesB dioxygenas aktivitet och hämning

Här presenterar vi ett protokoll för anaerob protein rening, anaerob proteinkoncentration och efterföljande kinetiska karakterisering använder ett syre elektrod system. Metoden illustreras med hjälp av enzymet DesB, en dioxygenas enzym som är mer stabil och aktiv när renat och lagras i en syrefri miljö.

Oxygen-sensitive proteins, including those enzymes which utilize oxygen as a substrate, can have reduced stability when purified using traditional aerobic ...

Denna metod är utformad för att besvara viktiga frågor inom området oorganisk biokemi, om hur man kan upprätthålla enzymaktivitet i proteiner som innehåller syrekänsliga metaller. Den största fördelen med denna teknik är att den hjälper dig att visualisera sätt på vilka du kan behålla ett proteins metall i dess reducerade tillstånd. Generellt, individer nya till denna teknik kommer att kämpa eftersom det är svårt att upprätthålla material och reagenser att vara helt anaerob.24 timmar efter inducering protein uttryck, samla cellerna genom centrifugeringen, och resuspend den bakteriecell pellet i 20 milliliter av amylose kolumn buffert per 1,5 liter tillväxt. Tillsätt ett milligram lysozym till cellen suspension, och rör om cellerna i 20 minuter på is. I slutet av inkubationen, lysa den återanvända celllösningen via högtrycks homogenisering med tre till fem pass vid ungefär 15, 000 psi, och överföra proteinet till en 50-milliliter centrifugeringsrör.Spola huvudutrymmet med kväve i en minut, och centrifug cellen lysate att ta bort olösliga skräp. Överför supernatanten till minst ett 50-milliliterrör och kepsen lysaten med en gummiseptum. Med hjälp av en 20-gauge nål, långsamt bubbla kvävegas genom lösningen i två minuter för att tränga undan syre.Linda sedan septum med paraffinfilm, säkra Parafilmen med koppartråd och placera supernatanten i handskfacket med kolonnmaterialen. När lösningsmedlet ligger strax ovanför hartsbädden, i en tidigare beredd amylospelare, lasta 50 milliliter protein supernatant på kolonnen, samla in genomflödet i fem-milliliter fraktioner under måttligt trycksatt kväve på cirka fem milliliter per minut. När allt genomflöde har eluterats, tvätta kolonnen med ytterligare tre kolonnvolymer av amyloskolumnbuffert.Tillsätt fem CV av elueringsbuffert, och samla sedan in tre milliliterfraktioner manuellt i provrör av glas under måttligt trycksatt kväve. Testa lösningarna för syre närvaro med järn ammoniumsulfat och dithiothreitol. Lösningen kommer att bli mörkblå eller svart om syre är närvarande, som röret till höger.Förekomsten av syre kommer att resultera i renat protein med låg katalytisk aktivitet. Lösningar med minimal syre närvarande kommer att vara lavendel eller ljusblå genomskinlig färg, som röret till vänster. Använd därefter en extern kvävelinje för att tryckstäcka den omrörda cellkammaren och koncentrera proteinet till 50 milliliter med en måttlig omrörningshastighet två gånger.Koncentrera sedan proteinet till 10 milliliter och filtrera det koncentrerade proteinet genom ett 0,45-mikrometer-porsprutefilter. Alikvot 150 mikroliter av protein till individuella 200-mikroliter polymeraskedjereaktionsrör. Ta sedan bort de begränsade alikvoterna från handskfacket för omedelbar flash-frysning i flytande kväve och lagring vid minus 80 grader Celsius.För DesB avsaltning, först lägga till tre milliliter sephadex G-25 Grov desalting gel till en nio-milliliter borosilikat kolumn, och tvätta kolumnen med två kolumn volymer av avgasade desalt buffert. När DesB har tinat, ladda det renade proteinet på kolonnen via en gravitationsstyrd process, och kassera genomflödet innan du elutera tre droppar protein i vardera av 12 injektionsflaska, med cirka fem milliliter av desalting buffert. För att förbereda syreelektroden, använd sax för att skära en cirka 1,5-tums-kvadrat av distanspapper, och skär små trianglar på varje ansikte av torget, med slitsar i hörnen för att hjälpa i omslaget till elektroden.Tillsätt fem droppar av en 50%kaliumkloridlösning på elektrodens silveranodspår, och anslut dropparna så att de bildar en kontinuerlig ring av lösning. Tillsätt två droppar av kaliumkloridlösningen till toppen av platinaelektroden, och placera försiktigt distanspapperet ovanpå platinaelektroden, vilket jämnar ut distanspapperet så det inte finns några luftbubblor. Skär en cirka två tum lång bit av S4 30m PTFE membran, och placera den ovanpå distanspapper, ta bort kanterna på membranet så att de är i linje med den yttre ringen av elektroden.Med hjälp av en O-ring applikator, tryck en liten O-ring över elektroden för att säkra distanspapper och membran på elektroden, och placera en större O-ring på cirkulärspåret av elektroden, var noga med att det inte finns något membran under. Skjut upp elektrodens översta kammare på basen, och skruva ihop de två bitarna. Placera den monterade elektroden på dess bas, och anslut elektroden till övervakningssystemet.För att bestämma graden av enzymatisk reaktion, använd en syrekänslig Clark-typ elektrod, med datorintegration för att mäta syreförbrukningen via elektrodstyrenheten. Tillsätt en milliliter Tris buffert i lämplig volym av substrat till elektrodkammaren, och rör om lösningen i 10 sekunder. Efter 10 sekunder, sakta försegla kammaren med kolven, och skruva uppifrån och ner.Använd en ren vävnad för att suga upp den vätska som är förskjuten från kammaren och låt elektroden ekvillibrera där den kan producera en stabil mätning av syrekoncentrationen i lösningen i minst en minut. Därefter använder en gas-tight, 10-mikroliter spruta för att lägga till cirka en mikroliter av enzym till elektrodkammaren genom kolven, och samla in hastighetsdata. När hela hastigheten för en viss substratkoncentration har samlats in, använd ett plaströr som är anslutet till en vakuumkolv med sidoarm för att tömma elektrodkammaren, och skölj kammaren upprepade gånger i fyra till sex cykler med vatten.Sedan, ställa in lösningen i elektroden som just visat, med hjälp av en ny substratkoncentration. SDS-PAGE gel analys av enskilda fraktioner från DesB-maltose bindande proteinfusion konstruera rening avslöjar isolering av en ren proteinprodukt, bortsett för förekomsten av DesB och maltose bindande protein domän produkter som klyvts från varandra. När alla kinetiska mätningar har gjorts, aktiviteten av DesB med gallate, till exempel, kan erhållas genom att mäta graden av syreförbrukning i varierande gallat koncentrationer.Omvänt kan inhibitionshastigheten av DesB med fyrnitriter bestäms genom att observera minskningen av syreförbrukningshastigheten för DesB med en millimolargallat i närvaro av varierande koncentrationer av fyranitacatechol, vilket till exempel indikerar att fyranitekkoli hämmar förbrukningen av syre och därigenom DesB-reaktionen. Även om denna metod kan ge insikt i att studera järnberoende dioxygenasenzymer, kan den tillämpas på andra system, såsom andra metalloenzymer. Glöm inte att arbeta inom en handskfacket kan vara utmanande, så var noga med att inte rusa när du utför denna teknik.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Method for Identifying Small Molecule Inhibitors of the Protein-protein Interaction Between HCN1 and TRIP8b

Metod för att identifiera små molekylhämmare av protein-proteininteraktion Mellan HCN1 och TRIP8b

Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated (HCN) channels are expressed ubiquitously throughout the brain, where they function to regulate the ...

Expression, Purification, and Antimicrobial Activity of S100A12

Expression, rening och antimikrobiell aktivitet av S100A12

Calgranulin proteins are important mediators of innate immunity and are members of the S100 class of the EF-hand family of calcium binding proteins. Some ...

2 in 1: One-step Affinity Purification for the Parallel Analysis of Protein-Protein and Protein-Metabolite Complexes

2 i 1: enstegs affinitet rening för parallell analys av Protein-Protein och Protein-metaboliten komplex

Cellular processes are regulated by interactions between biological molecules such as proteins, metabolites, and nucleic acids. While the investigation of ...

Purification and Reconstitution of TRPV1 for Spectroscopic Analysis

Rening och beredning av TRPV1 för spektroskopisk analys

Polymodal ion channels transduce multiple stimuli of different natures into allosteric changes; these dynamic conformations are challenging to determine ...

Efficient Purification and LC-MS/MS-based Assay Development for Ten-Eleven Translocation-2 5-Methylcytosine Dioxygenase

Effektiv rening och LC-MS/MS-baserad analys utveckling för tio-elva translokation-2 5-metylcytosin dioxygenas

The epigenetic transcription regulation mediated by 5-methylcytosine (5mC) has played a critical role in eukaryotic development. Demethylation of these ...

Sampling and Pretreatment of Tooth Enamel Carbonate for Stable Carbon and Oxygen Isotope Analysis

Provtagning och förbehandling av tandemaljen karbonat för stabil kol och syre isotoper analys

Stable carbon and oxygen isotope analysis of human and animal tooth enamel carbonate has been applied in paleodietary, paleoecological, and ...

Studying Protein Import into Chloroplasts Using Protoplasts

Studera Protein Import till kloroplaster som använder Protoplasts

The chloroplast is an essential organelle that is responsible for various cellular processes in plants, such as photosynthesis and the production of many ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Mäta och tolka syre förbrukning helt flyga Head segment

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

Proteomic Analysis of Human Macrophage Polarization Under a Low Oxygen Environment

Proteomiska analys av mänskliga makrofag polarisering Under en låg syrehalt miljö

Macrophages are innate immune cells involved in a number of physiological functions ranging from responses to infectious pathogens to tissue homeostasis. ...

Studying RNA Interactors of Protein Kinase RNA-Activated during the Mammalian Cell Cycle

Studera RNA interactmedlemmar av proteinkinas RNA-aktiverad under däggdjur cellcykeln

Protein kinase RNA-activated (PKR) is a member of the innate immune response proteins and recognizes the double-stranded secondary structure of viral ...