Name: anaerobic protein purification and kinetic analysis via oxygen electrode for studying desb dioxygenase activity and inhibition
Uploaded: 2018-10-03T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Anaerobic Protein Purification and Kinetic Analysis via Oxygen Electrode for Studying DesB Dioxygenase Activity and Inhibition at JoVE.com

Camille Dr.Keller Wesleyan Üniversitesi Teknik destek için teşekkür etmek istiyorum. Anaerobik protein saflaştırma yöntemleri ve bir O2 kullanımı ile ilgili onların tavsiye için özel Profesör Lindsay D. Eltis ve Jenna K. Capyk British Columbia Üniversitesi gibi Christian Whitman Austin, Texas Üniversitesi teşekkür -hassas elektrot.

1. genel malzeme ve Yöntemler
<ol><li>Gerekli ortam Tablo 1' de açıklandığı şekilde hazırlayın. Otoklav 120 ˚C 15 dk. steril, MgCl2 ve glikoz, eklenmesinden sonra 0.2 µm filtreden geçirerek SOC çözüm filtre uygulayın. Miller'ın Lysogeny suyu (LB medya) çözüm ısıyla önce pH ayarlayın. LB-Amp medya çözüm ısıyla 0.2 mm L-sistein, sonra 0,1 mM demir amonyum protein ifade ve çözünürlük artırmak için sülfat steril çözümleri ile sonra ek.</li>
	<li>Laemmli ta...

Aktif, saf DesB protein almak üzere kritik adımlar oluşturan ve enzim azaltılmış Fe(II) aktif sitesinin bakımı içerir. Bu nedenle, indüksiyon, arıtma, konsantrasyon performansını düzeltmek ve desalting adımları başarıyla etkin enzim elde etmek için gereklidir. Protein ifade 1 mM demir amonyum sülfat huzurunda inducing Fe(II) doğru DesB aktif dahil sağlar. Bu yöntem genellikle metal uygun katlama izin vermek için büyüme ortamına ilavesi ve tam doluluk sitesi6,<...

Demir veya oksijen etkinleştirmek için diğer metaller enzimlerin kez onların kaldırılması nedeniyle azalan bakiyeli bir hücre ortamından inactivation arıtma işlemi sırasında yatkındır. Bu nedenle, bu proteinler hücre lysates kullanılması gerekir, dış azalan bakiyeli acentelere tabi veya anaerobik en uygun enzimatik aktivite1,2,3,4olması için saf. Çoğu bu enzimler için oksijen anaerobik koruyarak tüm arıtma ve karakterizasyonu adımları gerçekleştirme duyarlı (enzimler) özellikle demir içeren, tam olarak onları tanımlamak gereklidir. Bu araştırmacılar tüm Laboratuvar set-up anaerobik salonları protein ifade ile kristalografisi5,6,7,8 arasında değişen çalışmaları için sınırları içinde geliştirmek için neden olmuştur .
Burada, biz yöntemleri anaerobik arıtma ve enzim bir oksijen elektrot sistemi kullanarak DesB kinetik karakterizasyonu için rapor. DesB gallat dioxygenase bakteri Sphingobium sp. zorlanma LigAB, protocatecuate dioxygenase aynı organizmadan ilgili SYK-6 dan var. Her iki enzim olan kapsamlı tarihi9, kısmen ne zaman standart aerobik kullanarak saf inactivation için duyarlı olmak bu süper enzimler nedeniyle büyük olasılıkla araştırılmamıştır tip II protocatechuate dioxygenase (PCAD) süper ait protein saflaştırma yöntemleri. Süre diğer substrat özel2,10, are biraz PCAD enzim substrat karışıklık göstermek bu yana daha fazla bu süper karakterizasyonu özgüllük belirleyicileri tanımlamak gereklidir. Birkaç enzim superfamilies11,12,13,14,15' te gözlemlediği gibi küçük moleküller ile doğrudan rekabet inhibisyon aktivitesi veya bağlama alter molekülleri artışa neden olmaktadır allosteric cepler ayırmak veya enzimatik aktivite16azaltmak için. Kinetik yalnız bir modülatör ciltleme konumu ayırt edemez, bir etkinlik değişikliğin büyüklüğünü belirleme etkileri anlamak için önemlidir. Yerli DesB etkinliği ve faaliyete 4-nitrocatechol (4NC), karakterize ve dioxygenase enzimler2,17, inhibe için yaygın olarak kullanılan bir bileşik huzurunda kinetik karakterizasyonu böyle, yöntemleri 18, gösterilir.
DesB gallat, bir lignin elde edilen aromatik bileşik yolu ile extradiol dioxygenase (EDO) reaksiyon hangi ringde oksijen yüzeylerde10,19biri olarak kullanarak açılış katalizlenir yıkmak yapabiliyor. Bu enzimatik reaksiyon bir aromatik heteropolymer bitkiler hücre duvarında bulunan lignin, dağılımı bağlamında oluşur. Lignin depolymerized, aromatik bileşikler çeşitli verimli daha fazla merkezi metabolitleri3,20,21,22,23,24 bölünebilir ,25,26,27,28,29,30,31,32,33 . Extradiol dioxygenases (EDO) bir halka dihydroxylated aromatik bileşikler, bölünme bitişik metal koordine diol oluştuğu bir tepki açılış katalizler; Buna ek olarak, intradiol dioxygenases iki hidroksil grubu (Şekil 1) benzer aromatik bileşikler ayırmak. EDOs, birçok diğer metaloenzimlerde gibi bir iki-histidin, bir-karboksilat Triad'ın9,34,35oluşan koordinasyon Fe(II) için bir divalent metal merkezi var. Enzim etkin olmayan2,36,37,38işlenir, ancak bu metaloenzimlerde, autoxidation veya inactivation mekanizması tabanlı, okside olur.
Bu el yazması açıklanan deneysel yordamlar, biz DesB, PCAD süper gallat (Şekil 2A) C4-C5 bağ arasında oksijen eklenmesiyle katalizler için bakteri Sphingobium sp. SYK-6, üzerinden bir üyesi kullanmaktadır. Bu dekolte regiochemistry bir protocatechuate-4, 5-dioxygenase (Şekil 2B) olduğu LigAB için benzerdir. Şimdiye kadar bu gallat dioxygenase araştırmalar hiçbir rapor DesB10,19,39inhibe bileşikleri içerir. Anaerobik yöntemlerin kullanımı ile biz sürekli tekrarlanabilir aktivite ile protein almak mümkün iken Aerobik arıtma yöntemleri kullanımı ile değişken etkinlik, DesB sergiledi. Burada açıklanan kinetik çalışmalar DesB, DesB gallat ile reaksiyon ve DesB inhibisyonu 4-nitrocatechol (4NC) tarafından kinetik karakterizasyonu anaerobik arıtma için yöntemleri gösterir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Isopropyl &#946;-D-1-thiogalactopyranodise</td>
			<td>Gold Bio Technologies</td>
			<td>I2481C50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie Brilliant Blue R-250</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium persulfate</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Acrylamide</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N&#39;tetramethyl-ethylenediamine</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylose Resin High Flow</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>E8022S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BL21 (DE3) competent Escherichia coli cells</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>C2527I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gallic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G7384</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-nitrocatechol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N15553</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferrous ammonium sulfate</td>
			<td>Mallinckrodt</td>
			<td>5064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dithionite</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>33381-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>wheaton serum bottles</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-406G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mm Acrodisc PF Syringe Filter with Supor Membrane</td>
			<td>Pall Corportation</td>
			<td>4187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>400 mL Amicon Stirred Cell Concentrator</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>UFSC40001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>76 mm Millipore Ultracel 10 kDa cutoff reconsituted cellulose membrane filter</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>PLGC07610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-dithiothreitol</td>
			<td>Gold Bio Technologies</td>
			<td>DTT50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sephadex G-25 coarse desalting gal column</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0033-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL Crimp-Top Vials</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-391-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygraph Plus Electrode Control Unit</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td>OXYG1 Plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Eletrode Chamber</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td>DW1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode Disc</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td>S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE (0.0125 mmX25mm) 30m reel</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td>S4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode cleaning Kit</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td>S16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spacer paper</td>
			<td>Zig Zag</td>
			<td>available at any gas station</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>He-series Dri-Lab glove box</td>
			<td>Vacuum/Atmospheres Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE-493 Dri-Train</td>
			<td>Vacuum/Atmospheres Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double-Ended Micro-Tapered Stainless Steel Spatula</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>21-401-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DWK Life Sciences Kimble Kontes Flex Column Economy Column</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>k420400-1530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#956;L, Model 701 N SYR, Cemented NDL 26s ga, 2 in, point stlye 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DWK Life Sciences Kimble Kontes Flex Column Economy Column</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>K420401-1505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emulsiflex-C5 high-pressure homogenizer</td>
			<td>Avestin</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-PER Complete Bacterial Protein Extraction Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>89821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysozyme from chicken egg white</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>12650-88-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>151-21-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ampicillin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>7177-48-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP-1421-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1422-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P217-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M33-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D16-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S318-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris hydrochloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP153-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maltose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP684-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>G46-500</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

anaerobic protein purification and kinetic analysis via oxygen electrode for studying desb dioxygenase activity and inhibition

Oksijen duyarlı proteinler, oksijen bir substrat olarak kullanan bu enzimler de dahil olmak üzere geleneksel Aerobik arıtma yöntemleri kullanarak saf zaman istikrar azaltılabilir. Bu makale tamponlar ve reaktifler, sütun Kromatografi için yöntemleri hazırlanması bir torpido ve kinetik önce protein desalting Anaerobik arıtma işlemi, ilgili teknik ayrıntılar gösterir. Ayrıca açıklanan hazırlama ve oksijen kullanan enzim kinetik karakterizasyonu gerçekleştirmek için bir oksijen elektrot kullanarak yöntemlerdir. Bu yöntemler dioxygenase enzim DesB, bakteri Sphingobium sp. zorlanma SYK-6 dan gallat dioxygenase kullanarak gösterilmiştir.

Gösterilen SDS-sayfa jel saflaştırılması maltoz DesB bağlayıcı protein (MBP) füzyon yapı (Şekil 3) üzerinden bireysel kesirler analizidir. Jel protein saf olduğunu ortaya koymaktadır (MW 91.22 kDa =), DesB varlığı dışında (MW 49.22 kDa =) ve MBP protein etki alanı (42 kDa) birbirinden i ciddi. Kesirler E2 ve E3 konsantrasyonu (adım 4.2) için seçildi.
DesB kinetik deneyleri te...

Watch this Scientific Journal Video about Anaerobic Protein Purification and Kinetic Analysis via Oxygen Electrode for Studying DesB Dioxygenase Activity and Inhibition at JoVE.com

Anaerobic Protein Purification and Kinetic Analysis via Oxygen Electrode for Studying DesB Dioxygenase Activity and Inhibition

Anaerobik Protein Saflaştırma ve DesB Dioxygenase etkinliği ve inhibisyon çalışmak için oksijen elektrodu ile kinetik Analizi

Burada anaerobik protein saflaştırma, anaerobik protein konsantrasyonu ve bir oksijen elektrot sistemi kullanarak sonraki kinetik karakterizasyonu için bir iletişim kuralı mevcut. Yöntem enzim DesB, daha istikrarlı ve etkin saflaştırılmış ve anaerobik bir ortamda bir dioxygenase enzim kullanarak gösterilmiştir.

Oxygen-sensitive proteins, including those enzymes which utilize oxygen as a substrate, can have reduced stability when purified using traditional aerobic ...

Bu yöntem, oksijene duyarlı metaller içeren proteinlerde enzim aktivitesinin nasıl sürdürülür hakkında, alan inorganik biyokimya önemli soruları cevaplamak için tasarlanmıştır. Bu tekniğin en büyük avantajı, bir proteinin metalini azaltılmış durumda tutmanın yollarını görselleştirmenize yardımcı olmasıdır. Genel olarak, bu teknik yeni bireyler tamamen anaerobik olmak malzeme ve reaktifler korumak zordur çünkü mücadele edecek.Protein ekspresyonunu indükledikten 24 saat sonra, hücreleri santrifüj le toplayın ve 1,5 litre büyüme başına 20 mililitre amilose sütun tamponunda bakteri hücresi peletini yeniden askıya alın. Hücre süspansiyonuna bir miligram lysozyme ekleyin ve hücreleri 20 dakika buzüzerinde karıştırın. Kuluçka sonunda, yaklaşık 15,000 psi üç ila beş geçer ile yüksek basınçlı homojenizasyon yoluyla resuspended hücre çözeltisi lyse ve 50 mililitrelik bir santrifüj tüpü protein transferi.Bir dakika boyunca azot ile headspace floş ve çözünmez enkaz kaldırmak için hücre lisat santrifüj. Supernatant'ı en az bir adet 50 mililitrelik tüpe aktarın ve lysat'ı kauçuk bir septumla kaplayın. 20-gauge iğne kullanarak, yavaş yavaş oksijen yerinden etmek için iki dakika boyunca çözelti ile azot gazı kabarcık.Daha sonra, parafin film ile septum sarın, bakır tel ile Parafilm güvenli ve sütun malzemeleri ile eldiven kutusuna supernatant yerleştirin. Çözücü reçine yatağının hemen üzerinde olduğunda, önceden hazırlanmış bir amylose sütununda, 50 mililitre protein süpernatantını kolona yükleyin ve dakikada yaklaşık beş mililitre lik orta basınçlı azot altında beş mililitrelik fraksiyonlarda akışı toplayın. Tüm akış eluted olduğunda, amylose sütun arabellek başka üç sütun birimleri ile sütun yıkayın.Beş elüsyon tamponu CV ekleyin ve sonra orta basınçlı azot altında cam test tüpleri üç mililitre fraksiyonları manuel olarak toplamak. Demir amonyum sülfat ve dithiothreitol ile oksijen varlığı için çözümler test edin. Oksijen varsa çözelti koyu mavi veya siyaha dönüşür, sağdaki tüp gibi.Oksijen varlığı düşük katalitik aktivite ile saflaştırılmış protein neden olacaktır. Minimal oksijen mevcut çözümler lavanta veya açık mavi yarı saydam renk olacak, soldaki tüp gibi. Daha sonra, karıştırılan hücre odası basınç için harici bir azot hattı kullanın ve iki kez orta karıştırma hızında 50 mililitre protein konsantre.Daha sonra proteini 10 mililitreye konsantre edin ve konsantre proteini 0,45 mikrometrelik gözenek şırınga filtresinden filtreleyin. Aliquot 150 mikrolitre proteini tek tek 200 mikrolitre polimeraz zincir reaksiyon tüpleri içine. Daha sonra, sıvı nitrojen ve depolama eksi 80 santigrat derece anında flaş dondurma için eldiven kutusundan kapaklı aliquots çıkarın.DesB tuzsuzlaştırma için, ilk sephadex G-25 Kaba tuzsuz jel üç mililitre dokuz mililitre borosilikat sütun ekleyin ve gazsız tuz tampon iki sütun hacimleri ile sütun yıkayın. DesB çözüldüğünde, saflaştırılmış proteini yerçekimi kontrollü bir işlemle kolona yükleyin ve yaklaşık beş mililitre tuzsuzluk tamponu yla 12 şişenin her birine üç damla protein atmadan önce akışı atın. Oksijen elektrodu hazırlamak için, bir spacer kağıt yaklaşık 1,5 inç kare kesmek için makas kullanın ve kare her yüzüne küçük üçgenler kesmek, elektrot sarma yardımcı olmak için köşelerinde yarıklar ile.Elektrodun gümüş anod oluğuna %50 potasyum klorür çözeltisi beş damla ekleyin ve damlaları sürekli bir çözelti halkası oluşturacak şekilde bağlayın. Platin elektrotüstüne iki damla potasyum klorür çözeltisi ekleyin ve uzay kağıdını platin elektrotun üzerine dikkatlice yerleştirin ve uzay kağıdını hava kabarcığı olmaması için düzeltin. Yaklaşık iki inç uzunluğunda bir S4 30m PTFE membran parçasını kesin ve elektrotun dış halkası ile hizalanır şekilde membranın kenarlarını çıkararak boşluk kağıdının üzerine yerleştirin.Bir O-ring aplikatör kullanarak, elektrot üzerine spacer kağıt ve membran güvenli elektrot üzerinde küçük bir O-halka itin ve elektrot dairesel oluk üzerine daha büyük bir O-halkası yerleştirin, altında hiçbir membran olduğunu dikkat. Elektrotun üst haznesini taban üzerine kaydırın ve iki parçayı birbirine vidalayın. Monte edilen elektrotun tabanına yerleştirin ve elektrotı izleme sistemine bağlayın.Enzimatik reaksiyon oranını belirlemek için, elektrot kontrol ünitesi aracılığıyla oksijen tüketimini ölçmek için bilgisayar entegrasyonu ile oksijene duyarlı Clark tipi elektrot kullanın. Elektrot odasına uygun substrat hacmine bir mililitre Tris tampon ekleyin ve çözeltiyi 10 saniye karıştırın. 10 saniye sonra, yavaşça piston ile oda mühür ve üst aşağı vida.Hazneden yerinden edilen fazla sıvıyı emmek için temiz bir doku kullanın ve elektrotun çözeltideki oksijen konsantrasyonunun en az bir dakika boyunca sabit bir ölçüm üretebileceği bir yerde dengede durmasını bekleyin. Daha sonra, piston aracılığıyla elektrot odasına yaklaşık bir mikrolitre enzim eklemek ve hız verilerini toplamak için gaz geçirmez, 10 mikrolitrelik bir şırınga kullanın. Belirli bir substrat konsantrasyonu için tüm oran toplandığında, elektrot odası boşaltmak için yan kol vakum şişesine bağlı plastik bir tüp kullanın ve tekrar tekrar su ile dört ila altı döngü boyunca oda durulayın.Daha sonra, yeni bir substrat konsantrasyonu kullanarak, sadece gösterildiği gibi elektrot çözeltisi kurmak. DesB-maltoz bağlayıcı protein füzyon yapısı saflaştırma bireysel fraksiyonları SDS-PAGE jel analizi saf protein ürün izolasyon ortaya koymaktadır, bir kenara DesB ve maltoz bağlayıcı protein etki alanı ürünleri varlığı için birbirinden ayrıldı. Tüm kinetik ölçümler yapıldıktan sonra, örneğin DesB'nin gallate ile aktivitesi, değişen gallate konsantrasyonlarında oksijen tüketimi nin oranının ölçülmesi ile elde edilebilir.Tersine, dört-nitrocatechol ile DesB inhibisyonu oranı dört-nitrocatechol değişen konsantrasyonlarda varlığında bir milimolar gallate ile DesB oksijen tüketiminde azalma gözlemleyerek belirlenebilir, gösteren, örneğin, dört nitrocatechol oksijen tüketimini inhibe ve böyle dedeB reaksiyonu. Bu yöntem demirbağımlı dioksijenaz enzimlerinin incelenmesiiçin içgörü sağlasa da, diğer metalloenzimler gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Bir torpido kutusu içinde çalışmanın zor olabileceğini unutmayın, bu yüzden bu tekniği yaparken acele etmemeye dikkat edin.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Method for Identifying Small Molecule Inhibitors of the Protein-protein Interaction Between HCN1 and TRIP8b

Yöntem HCN1 ve TRIP8b arasında protein-protein etkileşimi küçük molekül önleyicilerinin tespit edilmesi için

Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated (HCN) channels are expressed ubiquitously throughout the brain, where they function to regulate the ...

Expression, Purification, and Antimicrobial Activity of S100A12

S100A12&#39;nin Ekspresyon, Saflaştırma ve Antimikrobiyal Aktivitesi

Calgranulin proteins are important mediators of innate immunity and are members of the S100 class of the EF-hand family of calcium binding proteins. Some ...

2 in 1: One-step Affinity Purification for the Parallel Analysis of Protein-Protein and Protein-Metabolite Complexes

2 in 1: tek adımlı benzeşme arıtma paralel analizi için Protein-Protein ve Protein-metaboliti kompleksleri

Cellular processes are regulated by interactions between biological molecules such as proteins, metabolites, and nucleic acids. While the investigation of ...

Purification and Reconstitution of TRPV1 for Spectroscopic Analysis

Arıtma ve TRPV1 sulandırma spektroskopik analizi için

Polymodal ion channels transduce multiple stimuli of different natures into allosteric changes; these dynamic conformations are challenging to determine ...

Efficient Purification and LC-MS/MS-based Assay Development for Ten-Eleven Translocation-2 5-Methylcytosine Dioxygenase

Etkili arınma ve on-Eleven Translocation-2 5-metilsitozin Dioxygenase için tahlil LC-MS/MS tabanlı geliştirme

The epigenetic transcription regulation mediated by 5-methylcytosine (5mC) has played a critical role in eukaryotic development. Demethylation of these ...

Sampling and Pretreatment of Tooth Enamel Carbonate for Stable Carbon and Oxygen Isotope Analysis

Örnekleme ve diş minesini Önarıtma kararlı karbon ve oksijen izotop analizi için karbonat

Stable carbon and oxygen isotope analysis of human and animal tooth enamel carbonate has been applied in paleodietary, paleoecological, and ...

Studying Protein Import into Chloroplasts Using Protoplasts

Önceki kullanarak kloroplast eğitim Protein içe aktarma işlemi

The chloroplast is an essential organelle that is responsible for various cellular processes in plants, such as photosynthesis and the production of many ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Ölçme ve oksijen Tüketim oranları tamamen yorumlama kafa kesimleri sinek

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

Proteomic Analysis of Human Macrophage Polarization Under a Low Oxygen Environment

Düşük oksijen ortamı altında insan makrofaj polarizasyon proteomik analizi

Macrophages are innate immune cells involved in a number of physiological functions ranging from responses to infectious pathogens to tissue homeostasis. ...

Studying RNA Interactors of Protein Kinase RNA-Activated during the Mammalian Cell Cycle

RNA Interactors Protein kinaz memeli hücre döngüsü sırasında RNA-harekete geçirmek, eğitim

Protein kinase RNA-activated (PKR) is a member of the innate immune response proteins and recognizes the double-stranded secondary structure of viral ...