Name: analysis of epididymal protein synthesis and secretion
Uploaded: 2018-08-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Epididymal Protein Synthesis and Secretion at JoVE.com

Forfatterne vil gerne anerkende National sundhed og Medical Research Rådet af Australien Project Grant APP1103176 til støtte for dette arbejde.

Alle eksperimentelle procedurer, der involverer dyrs væv samling blev godkendt af University of Newcastle Animal Care og etiske komité.
1. immunofluorescens farvning af Paraffin-embedded epididymis sektioner (figur 1 og 2)
<ol><li>Umiddelbart efter eutanasi af voksen mus via CO2 inhalation (schweiziske mus, over 8 uger gammel), omhyggeligt dissekere epididymis (ved hjælp af kirurgiske saks og pincet) fri af overliggende bindevæv og fedt og fordybe i Bouins fiksativ løsning (>...

Disse undersøgelser indgår brugen af Bouins faste epididymis væv, der havde været udsat for paraffin indlejring og skære standardprotokoller. Bouins Fikseringsvæske løsning består af en blanding af formaldehyd, picrinsyre syre og eddikesyre, med hver komponent har en specifik og supplerende funktion. Således formaldehyd reagerer med primære aminer til at danne protein cross-links, picrinsyre syre trænger langsomt væv danner salte og dermed koagulation af grundlæggende proteiner og omvendt, eddikesyre hurtigt...

Sædcellerne af alle pattedyrarter erhverve potentiale til at vise frem progressive motilitet og befrugter en ægcelle under deres langvarig nedstigning gennem epididymis, et højt specialiseret område af den mandlige ekstra testikel kanalsystemet, som kan tage 7-14 dage til at navigere (afhængigt af arter)1. På grund af den ekstreme kondensering af den faderlige kromatin og afgivelse af størstedelen af cytoplasma, der ledsager cytodifferentiation af sædceller i testiklerne, er deres efterfølgende funktionelle modning drevet udelukkende af deres interaktion med den epididymis mikromiljø. Dette miljø er til gengæld lavet af sekretoriske og lydabsorberende aktiviteten af foring epididymis soma og viser en ekstraordinær grad af segment-segment variation1. Således, de mest aktive segmenter i form af proteinsyntese og sekretion er dem, der ligger i den proksimale del af bitestiklen (nemlig caput og corpus)2. Denne aktivitet afspejler den funktionelle profil af sædceller, med celler først begynder at vise kendetegnende for funktionel kompetence (dvs., progressive motilitet og evnen til at binde til syre-solubilized zona glykoproteiner) følgende deres passage gennem caput epididymis3. Disse funktionelle attributter fortsætte med at udvikle før at nå optimale niveauer, som sæden nå den distale epididymis segment (cauda), hvori de er gemt i en inaktiv tilstand i beredskab til sædafgang. Dannelsen og vedligeholdelse af denne sæd opbevaring reservoir er også nært knyttet til foring epitel, som i cauda er domineret af stærkt absorberende aktivitet4,5. Selv om anatomiske forskelle har været rapporteret6,7,8, synes sådan regionaliseret arbejdsdeling at være karakteristisk for epididymis, der er delt blandt fleste pattedyr arter studerede til dato, herunder vores egen9,10. Faktisk, fra et klinisk perspektiv, er det kendt, at epididymis dysfunktion er et vigtigt bidrag til ætiologien af mandlige faktor barnløshed11, hvilket understreger vigtigheden af at forstå reguleringen af denne specialiserede væv.
Det er derfor beklageligt, at vores forståelse af epididymis fysiologi, og de mekanismer, der regulerer de fortløbende faser af sperm modning og opbevaring i dette væv, mangler for at blive helt løst. Blandt de medvirkende faktorer er begrænsende fremskridt i epididymis forskning den samlede kompleksitet af dette væv og viden om de mekanismer, der udøver regulerende kontrol over sin luminale mikromiljø. Anatomisk, ved vi, at ud over skelnen af caput, corpus og cauda segmenter, epididymis kan yderligere opdeles i flere zoner (figur 1A), hver adskilt af septa12 og karakteriseret ved diskrete profiler af gen/protein udtrykket13,14,15,16,17,18. Ja, på grundlag af detaljerede transcriptional profilering af segmental genekspression i epididymis, så mange som 6 og 9 forskellige epididymis zoner er blevet rapporteret i mus og rotter-modeller, henholdsvis19,20. Sådan kompleksitet formentlig afspejler sammensætningen af de epididymis soma, en pseudostratified epitel, der består af mange forskellige celletyper; hver forskellige med hensyn til deres overflod, distribution og sekretoriske/lydabsorberende aktiviteter langs længden af tarmkanalen. Principal celler er således langt den mest rigelige epididymis celle type udgør op mod 80% af alle epitelceller. I overensstemmelse hermed, principal celler er ansvarlige for størstedelen af epididymis protein biosyntese og sekretion5. Derimod er klart celle befolkning, der rangerer som den anden mest rigelige celletype i epididymis soma, primært involveret i selektive absorption af luminale komponenter og forsuring af denne mikromiljø5. Tilføje endnu et lag af kompleksitet, udøve androgener og andre lumicrine faktorer testikel hjemlandene differentieret kontrol over hver af disse epididymis celletyper alt efter deres placering langs tarmkanalen.
Trods de begrænsninger af sådanne kompleksitet fortsat betydelige indhug gøres til løse mekanistiske grundlaget for epididymis funktion. En nøgle til disse undersøgelser har været anvendelsen af avancerede massespektrometri strategier at etablere brede skala opgørelser af epididymis proteomet, sammen med detaljerede analyser af individuelle proteiner udvalgt blandt disse indledende undersøgelser. En illustration af denne tilgang er vores seneste karakterisering af DNM familie af mechanoenzymes i mus model21. Vores indledende interesse i DNM blev næret af dets dual action i koblingen af exo- og endocytotic processer. Med udgangspunkt i disse observationer, var vi i stand til at demonstrere at de tre kanoniske isoformer af DNM (DNM1 - DNM3) er stærkt udtrykt i mus epididymis og korrekt placeret for at opfylde lovgivningsmæssige roller i protein sekretion og absorption21 . Desuden, vi har kunnet skelne klart mellem hver DNM isoform på grundlag af deres cellulære og subcellulære lokalisering, hvilket tyder på at de besidder supplerer hinanden, i stedet for redundant, aktivitet inden for epididymis epitel21.
Her beskriver vi de eksperimentelle metodologi til undersøgelse af DNM udtryk i mus epididymis med håbet om, at disse oplysninger vil finde større anvendelse i karakterisering af alternative epididymis proteiner og dermed bidrage til vores forståelsen af funktionen af denne vigtige del af den mandlige forplantningskanal. Specifikt, beskriver vi udviklingen af robust metode til immunofluorescens mærkning af target proteiner i paraffin-embedded epididymis sektioner og den efterfølgende opdagelse af den geografiske fordeling af disse proteiner via immunfluorescens mikroskopi. Vi yderligere dokumentere vores seneste optimerede protokoller22 til isolering og karakterisering af epididymosomes; lille exosome-lignende blærer, der udgør centrale elementer i epididymis sekretoriske profilen og synes at holde en fremtrædende rolle i at fremme sædceller modning23. Som en supplerende tilgang beskrive vi også immunofluorescens påvisning af target proteiner i cellelinie en udødeliggjort mus caput epididymis epitel (mECap18) og anvendelsen af denne ressource som en model til at undersøge regulering af epididymis sekretoriske aktivitet in vitro.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dynamin 1 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab108458</td>
			<td>Host species: Rabbit, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynamin 2 antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-6400</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynamin 3 antibody</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>14737-1-AP</td>
			<td>Host species: Rabbit, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP6V1B1 antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-21206</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD9 antibody</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>553758</td>
			<td>Host species: Rat, Isotype: IgG, Class: monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flotillin-1 antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1180</td>
			<td>Host species: Rabbit, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALOX15 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab80221</td>
			<td>Host species: Rabbit, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TUBB antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-5274</td>
			<td>Host species: Mouse, Isotype: IgG, Class: monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSMD7 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab11436</td>
			<td>Host species: Rabbit, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rabbit Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A11008</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Goat Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A11055</td>
			<td>Host species: Donkey, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Goat Alexa Fluor 594</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A11058</td>
			<td>Host species: Donkey, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rat Alexa Fluor 594</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A11007</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rabbit HRP</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>DC03L</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rat HRP</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>DC01L</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Mouse HRP</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-2005</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#39;, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9564</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propidium iodide (PI)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mowiol 4-88</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>475904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Bovogen</td>
			<td>SFBS-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>11960-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin/streptomycin</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5&#945;-androstan-17&#946;-ol-3-oneC-IIIN</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium pyruvate</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S1804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Astral</td>
			<td>0497-5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1, 4-diazabicyclo-(2.2.2)-octane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-gysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>78787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloroacetic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9159</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Ajax Finechem</td>
			<td>A6-2.5 L GL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly (vinyl alcohol)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Ajax Finechem</td>
			<td>783-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiPrep Density Gradient Medium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D1556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscopy</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Zeiss Axio Imager A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge</td>
			<td>BECKMAN COULTER</td>
			<td>Optima Max-XP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuges</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Heracell</td>
			<td>150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Orbital Shaker</td>
			<td>Ratek</td>
			<td>OM7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave</td>
			<td>LG</td>
			<td>MS3840SR /00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab pH Meter</td>
			<td>MeterLab</td>
			<td>PHM220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid-repellent slide marker</td>
			<td>Daido Sangyo</td>
			<td>Mini</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plate</td>
			<td>CELLSTAR</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 well plate</td>
			<td>CELLSTAR</td>
			<td>665180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Mikro-Glass</td>
			<td>SF41296PLMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.45 &#181;m filter</td>
			<td>Millox-HV</td>
			<td>SLHV033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes Dustfree Paper</td>
			<td>KIMTECH</td>
			<td>34155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge tube (2.2 ml, 11 &#215; 35 mm)</td>
			<td>BECKMAN COULTER</td>
			<td>347356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge tube (3.2 ml, 13 &#215; 56 mm)</td>
			<td>BECKMAN COULTER</td>
			<td>362305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 70 &#181;m Nylon</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 35 &#215; 10 mm with cams</td>
			<td>SARSTED</td>
			<td>82.1135.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide jar</td>
			<td>TRAJAN</td>
			<td>#23 319 00</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of epididymal protein synthesis and secretion

Pattedyr epididymis genererer en af de mest komplekse intraluminal væsker af en endokrin kirtel støtte post testikel modning og opbevaring af sædceller. Sådan kompleksitet opstår på grund af den kombinerede sekretoriske og lydabsorberende aktivitet af epitelceller foring. Her, beskriver vi teknikker til analyse af epididymis proteinsyntese og sekretion af fokus på familien model protein af dynamin (DNM) mechanoenzymes; store GTPases, der har potentiale til at regulere bi-directional membran menneskehandel begivenheder. Til undersøgelse af protein udtryk i epididymis væv beskriver vi robust metode til immunofluorescens mærkning af target proteiner i paraffin-embedded sektioner og den efterfølgende opdagelse af den geografiske fordeling af disse proteiner via immunfluorescens mikroskopi. Vi beskriver også optimeret metoder til isolering og karakterisering af exosome som blærer, kendt som epididymosomes, som udskilles i epididymis lumen til at deltage i intercellulær kommunikation med modning sædceller. Som en supplerende tilgang beskrive vi også immunofluorescens påvisning af target proteiner i cellelinie en SV40-udødeliggjort mus caput epididymis epitel (mECap18). Desuden diskuterer vi nytte af mECap18 cellelinje som egnede in vitro- model til at undersøge regulering af epididymis sekretoriske aktivitet. Til dette formål beskriver vi dyrkningsbaserede kravene til vedligeholdelse af mECap18-cellelinie og anvendelse af selektive farmakologisk hæmning regimer, der er i stand til at påvirke deres sekretoriske proteiner profil. Sidstnævnte er let vurderet via høst af konditioneret næringssubstrat, koncentration af udskilles proteiner via trichloreddikesyre/acetone nedbør og deres efterfølgende analyse via SDS-PAGE og immunoblotting. Vi hævder, at disse kombinerede metoder er velegnet til analyse af alternative epididymis protein mål som en optakt til bestemmelse af deres funktionelle rolle i sæd modning og/eller opbevaring.

Figur 1 og Figur 2 viser repræsentative resultater af immunofluorescens lokalisering af DNM i mus caput bitestiklen. Hver af de tre DNM isoformer undersøgt display særskilte lokalisering profiler. Således er DNM1 kendetegnet ved forholdsvis beskedne diffuse mærkning af epididymis celler i hele den første segment og caput epididymis (figur 2A). Derimod DNM2 isoform blev først o...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Epididymal Protein Synthesis and Secretion at JoVE.com

Analysis of Epididymal Protein Synthesis and Secretion

Her rapporterer vi immunofluorescens lokalisering af dynamin til at illustrere protokollerne til påvisning af proteiner i paraffin-embedded mus epididymis sektioner og dem af en udødeliggjort epididymis cellelinje (mECap18). Vi beskriver også protokollerne til isolering af sekretoriske proteiner fra både epididymis væske og konditioneret celle medier.

Analyse af epididymis proteinsyntese og sekretion

The mammalian epididymis generates one of the most complex intraluminal fluids of any endocrine gland in order to support the post-testicular maturation ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Quantitative Analysis of Protein Expression to Study Lineage Specification in Mouse Preimplantation Embryos

Kvantitativ analyse af Protein Expression til Studieinformationen Lineage Specification i Mouse præimplantationsperioden Embryoner

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analyses of protein expression to study lineage specification in mouse ...

Simultaneous Assessment of Cardiomyocyte DNA Synthesis and Ploidy: A Method to Assist Quantification of Cardiomyocyte Regeneration and Turnover

Samtidig Vurdering af cardiomyocyte DNA Synthesis og Ploidi: En metode til at hjælpe Kvantificering af cardiomyocyte Regeneration og Omsætning

Although it is accepted that the heart has a limited potential to regenerate cardiomyocytes following injury and that low levels of cardiomyocyte turnover ...

A Simple Method to Identify Kinases That Regulate Embryonic Stem Cell Pluripotency by High-throughput Inhibitor Screening

En simpel metode til at identificere kinaser, der regulerer embryonisk stamcellepluripotens ved høj gennemstrømningshæmmende screening

Embryonic stem cells (ESCs) can self-renew or differentiate into all cell types, a phenomenon known as pluripotency. Distinct pluripotent states have been ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualisering og kvantitativ analyse af embryonisk angiogenese i<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...

Analysis of Protein-protein Interactions and Co-localization Between Components of Gap, Tight, and Adherens Junctions in Murine Mammary Glands

Analyse af protein-proteininteraktioner og co-lokalisering mellem komponenter af gap-, stram- og adherensforbindelser i murine mammakirtler

Cell-cell interactions play a pivotal role in preserving tissue integrity and the barrier between the different compartments of the mammary gland. These ...

Correlative Super-resolution and Electron Microscopy to Resolve Protein Localization in Zebrafish Retina

Korrelationsmaalinger super-opløsning og elektronmikroskopi at løse Protein lokalisering i zebrafisk nethinden

We present a method to investigate the subcellular protein localization in the larval zebrafish retina by combining super-resolution light microscopy and ...

Kinetic Analysis of Vasculogenesis Quantifies Dynamics of Vasculogenesis and Angiogenesis In Vitro

Kinetic Analysis of Vasculogenesis Quantifies Dynamics of Vasculogenesis and Angiogenesis In Vitro

Kinetic analyse af Vasculogenesis kvantificerer dynamikken i Vasculogenesis og angiogenese In Vitro

Vasculogenesis is a complex process by which endothelial stem and progenitor cells undergo de novo vessel formation. Quantitative assessment of ...

Isolation and Staining of Mouse Skin Keratinocytes for Cell Cycle Specific Analysis of Cellular Protein Expression by Mass Cytometry

Isolering og farvning af mus hud keratinocytter for celle cyklus specifik analyse af cellulært protein ekspression ved Massecytometri

The goal of this protocol is to detect and quantify protein expression changes in a cell cycle-dependent manner using single cells isolated from the ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Levende billeddannelse og analyse af muskelsammentrækninger i Drosophila embryo

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Protein Extract Preparation and Co-immunoprecipitation from Caenorhabditis elegans

Protein Extract Preparation and Co-immunoprecipitation from Caenorhabditis elegans

Proteinekstrakt Forberedelse og Co-immunoprecipitation fra Caenorhabditis elegans

Co-immunoprecipitation methods are frequently used to study protein-protein interactions. Confirmation of hypothesized protein-protein interactions or ...