Name: analysis of epididymal protein synthesis and secretion
Uploaded: 2018-08-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Epididymal Protein Synthesis and Secretion at JoVE.com

המחברים רוצה להכיר את הבריאות הלאומיים ואת רפואי מחקר המועצה של אוסטרליה פרויקט גרנט APP1103176 על התמיכה של עבודה זו.

כל ההליכים ניסויית הכוללת אוסף רקמה חיה אושרו על-ידי אוניברסיטת ניוקסל טיפול בעלי חיים, יו ר ועדת האתיקה.
1. immunofluorescence מכתים הסעיפים Epididymal פרפין-מוטבע (דמויות 1 ו- 2)
<ol><li>מיד לאחר המתת החסד של עכברים בוגרים באמצעות אינהלציה2 CO (עכברים שוויצרי, מעל בן 8 שבועות), בזהירות לנת?...

מחקרים אלה לשלב את השימוש של Bouin קבוע רקמת epididymal ולגופה פרפין הטבעה ופרוטוקולים סטנדרטיים אופטים. פתרון לשבועיים של Bouin כוללת תערובת של פורמלדהיד, חומצה picric, חומצה אצטית, עם כל רכיב יש פונקציה ספציפית ומשלימים. לפיכך, פורמלדהיד מגיב עם ראשי אמינים כדי ליצור חלבון חוצה קישורים, חומצה picric לאט ...

Spermatozoa של כל זני יונקים לרכוש את הפוטנציאל להצגת תנועתיות מתקדמת קדימה, כדי להפרות ביצית במהלך את התקדמותם. בכמאה ממושכת דרך יותרת האשך, אזור המערכת הגברי צינור במיוחד האשכים, אשר ייתכן מאוד מיוחדים 7-14 ימים כדי לנווט (תלוי בזן)1. בשל עיבוי קיצוני של כרומטין האבהי שפיכת הרוב המכריע של הציטופלסמה שמלווה את cytodifferentiation של spermatozoa בתוך האשכים, התפקודית עוקבות שלהם מונעת באופן בלעדי על ידי האינטראקציה שלהם עם microenvironment epididymal. סביבה זה, בתורו, נוצר על ידי הפעילות הפרשה ואת ספיגת ידע של סומה epididymal הבטנה ומציג רמה יוצאת דופן של קטע-קטע וריאציה1. כך, המקטעים הפעילים ביותר במונחים של סינתזת חלבונים והפרשת הם אלה הממוקמים בחלק הפרוקסימלית של יותרת האשך (כלומר, caput ו קורפוס)2. פעילות זו מראות לפרופיל תפקודי של spermatozoa, עם תחילת הראשונה תאים להצגת ההיכר של כשירות תפקודית (כלומר., תנועתיות מתקדמת ואת היכולת לאגד zona solubilized-חומצה glycoproteins) הבאים שלהם מעבר דרך יותרת האשך caput3. תכונות אלה פונקציונלי להמשיך לפתח לפני שהגיע רמות אופטימלית כמו הזרע להגיע דיסטלי epididymal המקטע (תסמונת), שבה הן מאוחסנות במצב של השבתה הדרגתית לקראת השפיכה. היווצרות ואת התחזוקה של מאגר אחסון זה הזרע קשורה באופן אינטימי גם האפיתל הציפוי, אשר תסמונת נשלטת על ידי פעילות ספיגת ידע חזק4,5. למרות הבדלים אנטומיים כבר דווח על6,7,8, כגון חלוקת העבודה שינגן מופיע להיות מאפיין של יותרת האשך שמשותף בין רוב זני יונקים למד עד כה, לרבות משלנו9,10. אכן, מנקודת מבט קליני, הוא מוכר שאת תפקוד epididymal גורם תרומה חשובה האטיולוגיה של גורם זכרי פוריות11, ובכך הדגשת החשיבות להבנת ברגולציה של רקמה מיוחדת זו.
לכן זה מצער כי ההבנה שלנו של פיזיולוגיה epididymal, ואת המנגנונים המווסתים את השלבים רציפים של זרע התבגרות ואחסון בתוך רקמה זו, יישארו לפתור באופן מלא. בין הגורמים התורמים, הגבלת ההתקדמות במחקר epididymal הם המורכבות הכוללת של רקמה זו וידע מנגנון רגולטורי לשלוט microenvironment luminal שלה. מבחינה אנטומית, אנו יודעים כי מעבר ההבחנה בין מקטעי caput, קורפוס, תסמונת, יותרת האשך נחלקים עוד מספר אזורי (איור 1 א'), אחד המופרדים באמצעות septa12 , המאופיינת פרופילים נפרדים של הגן/חלבון הביטוי13,14,15,16,17,18. ואכן, על בסיס נתונים היסטוריים תעתיק פרופיל של ביטוי גנים סגמנטלי של יותרת האשך, דווחו כ 6 ו 9 אזורים epididymal נפרדים במודלים עכבר, חולדה, בהתאמה19,20. כאלה המורכבות משקף ככל הנראה את ההרכב של סומה epididymal, אפיתל pseudostratified הכוללת סוגי תאים שונים רבים; כל שונות ביחס לפעילותם לשפע, הפצה, הפרשה/ספיגת ידע לאורך דרכי. כך, התאים העיקריים הם עד כה הנפוץ ביותר תא epididymal סוג המהוות למעלה מ- 80% של כל תאי אפיתל. בהתאם לכך, תאים עיקריים אחראים עיקר ביוסינטזה והפרשת חלבון epididymal5. לעומת זאת, האוכלוסייה התא ברורה לדרג כסוג התא השני הנפוץ ביותר בטווח סומה epididymal, מעורבים בעיקר סלקטיבית ספיגת רכיבי luminal, את לחומצי הזה microenvironment5. הוספת רמה נוספת של מורכבות, אנדרוגנים וגורמים אחרים lumicrine ממוצא האשכים להפעיל שליטה דיפרנציאלית על כל אחד מסוגי התאים epididymal בהתאם שלהם מיצוב לאורך מערכת.
למרות המגבלות שהוטלו על ידי כאלה המורכבות, התקדמות משמעותית ממשיכות להתבצע תוך פתרון הבסיס מכניסטית של פונקציה epididymal. מפתח מחקרים אלה כבר היישום של אסטרטגיות מתקדמות ספקטרומטר מסה כדי ליצור רשימות מלאי בהיקף נרחב של פרוטאום epididymal, במשולב עם ניתוח מפורט של חלבונים בודדים מתוך סקרים אלה הראשונית. איור של גישה זו הוא שלנו אפיון האחרונות של משפחת DNM mechanoenzymes העכבר דגם21. ההתעניינות DNM הראשונית שלנו הייתה מונעת על ידי פעילות כפולה צימוד של exo - ותהליכים endocytotic. בונים על תצפיות אלה, היינו מסוגלים להפגין כי שלושה איזופורמים הקנוני של DNM (DNM1 - DNM3) הם מאוד שבאה לידי ביטוי האשך העכבר וממוקמים כראוי כדי למלא את תפקידי רגולטוריות הפרשת חלבון וקליטה21 . יתר על כן, היינו יכולים להבחין בבירור כל isoform DNM על בסיס לוקליזציה הסלולר וסלולריות תת שלהם, ובכך רומז שיש ברשותם משלימים, לעומת פעילות עודפת, בתוך האפיתל epididymal21.
כאן, אנו מתארים את המתודולוגיה ניסיוני המועסקים לצורך המחקר של DNM ביטוי האשך עכבר עם תקווה כי מידע זה מצא יישום רחבות אפיון חלופי חלבונים epididymal, ובכך לתרום שלנו ההבנה של הפונקציה של יסוד חשוב זה של מערכת הרבייה הגברית. באופן ספציפי, אנו מתארים את פיתוח מתודולוגיה חזקים immunofluorescence תיוג של חלבונים היעד בסעיפים epididymal פרפין-מוטבע, זיהוי עוקבות של ההתפלגות המרחבי של חלבונים אלה באמצעות immunofluorescence מיקרוסקופ. בהמשך, ואנחנו מתעדים שלנו לאחרונה ממוטבת פרוטוקולים22 עבור בידוד ואפיון של epididymosomes; שלפוחית קטנה, כמו exosome מהווים רכיבי מפתח של הפרופיל הפרשה epididymal, מופיעים להחזיק תפקיד חשוב בקידום זרע התבגרות23. כמו בגישה המשלימה, אנו מתארים גם גילוי immunofluorescence של חלבונים היעד ב קו תא אפיתל epididymal (mECap18) caput מונצחים העכבר ושימוש של משאב זה כמודל שבה לחקור ברגולציה של epididymal הפרשה בפעילות חוץ גופית בתוך.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dynamin 1 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab108458</td>
			<td>Host species: Rabbit, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynamin 2 antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-6400</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynamin 3 antibody</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>14737-1-AP</td>
			<td>Host species: Rabbit, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP6V1B1 antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-21206</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD9 antibody</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>553758</td>
			<td>Host species: Rat, Isotype: IgG, Class: monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flotillin-1 antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1180</td>
			<td>Host species: Rabbit, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALOX15 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab80221</td>
			<td>Host species: Rabbit, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TUBB antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-5274</td>
			<td>Host species: Mouse, Isotype: IgG, Class: monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSMD7 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab11436</td>
			<td>Host species: Rabbit, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rabbit Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A11008</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Goat Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A11055</td>
			<td>Host species: Donkey, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Goat Alexa Fluor 594</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A11058</td>
			<td>Host species: Donkey, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rat Alexa Fluor 594</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A11007</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rabbit HRP</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>DC03L</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rat HRP</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>DC01L</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Mouse HRP</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-2005</td>
			<td>Host species: Goat, Isotype: IgG, Class: polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#39;, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9564</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propidium iodide (PI)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mowiol 4-88</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>475904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Bovogen</td>
			<td>SFBS-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>11960-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin/streptomycin</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5&#945;-androstan-17&#946;-ol-3-oneC-IIIN</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium pyruvate</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S1804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Astral</td>
			<td>0497-5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1, 4-diazabicyclo-(2.2.2)-octane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-gysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>78787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloroacetic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9159</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Ajax Finechem</td>
			<td>A6-2.5 L GL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly (vinyl alcohol)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Ajax Finechem</td>
			<td>783-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiPrep Density Gradient Medium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D1556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscopy</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Zeiss Axio Imager A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge</td>
			<td>BECKMAN COULTER</td>
			<td>Optima Max-XP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuges</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Heracell</td>
			<td>150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Orbital Shaker</td>
			<td>Ratek</td>
			<td>OM7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave</td>
			<td>LG</td>
			<td>MS3840SR /00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab pH Meter</td>
			<td>MeterLab</td>
			<td>PHM220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid-repellent slide marker</td>
			<td>Daido Sangyo</td>
			<td>Mini</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plate</td>
			<td>CELLSTAR</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 well plate</td>
			<td>CELLSTAR</td>
			<td>665180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Mikro-Glass</td>
			<td>SF41296PLMK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.45 &#181;m filter</td>
			<td>Millox-HV</td>
			<td>SLHV033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes Dustfree Paper</td>
			<td>KIMTECH</td>
			<td>34155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge tube (2.2 ml, 11 &#215; 35 mm)</td>
			<td>BECKMAN COULTER</td>
			<td>347356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge tube (3.2 ml, 13 &#215; 56 mm)</td>
			<td>BECKMAN COULTER</td>
			<td>362305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 70 &#181;m Nylon</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 35 &#215; 10 mm with cams</td>
			<td>SARSTED</td>
			<td>82.1135.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide jar</td>
			<td>TRAJAN</td>
			<td>#23 319 00</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of epididymal protein synthesis and secretion

יותרת האשך בתרבית של מפיק אחד הנוזלים intraluminal המורכבים ביותר של כל בלוטה אנדוקרינית על מנת לתמוך את ההבשלה פוסט-האשכים ואחסון של spermatozoa. המורכבות כזה מתעוררת עקב הפעילות הפרשה ואת ספיגת ידע משולב של תאי אפיתל רירית. כאן, אנו מתארים את הטכניקות לניתוח של סינתזת חלבונים epididymal והפרשת על-ידי התמקדות משפחת חלבונים המודל של dynamin (DNM) mechanoenzymes; GTPases גדולים שיש להם פוטנציאל להסדיר אירועים סחר ממברנה דו כיווני. לצורך המחקר של ביטוי חלבונים ברקמת epididymal, נתאר מתודולוגיה חזקים immunofluorescence תיוג של חלבונים היעד בסעיפים פרפין-מוטבע, זיהוי עוקבות של ההתפלגות המרחבי של חלבונים אלה באמצעות מיקרוסקופ immunofluorescence. אנו מתארים גם מתודולוגיה אופטימיזציה בידוד ואפיון של exosome כמו שלפוחית, הידועה בשם epididymosomes, אשר מופרשים לתוך לומן epididymal להשתתף בתקשורת המערכת עם התבגרות תאי זרע. כמו בגישה המשלימה, נתאר גם גילוי immunofluorescence של חלבונים היעד בתור תא העכבר מונצחים SV40 caput epididymal אפיתל (mECap18). יתר על כן, נדון בכלי השירות של שורת תאים mECap18 כדגם מתאים במבחנה בה לחקור את ויסות פעילות הפרשה epididymal. לענין זה, אנו מתארים את הדרישות culturing עבור התחזוקה של הקו תא mECap18 ושימוש של משטרי עיכוב תרופתי סלקטיבית כי הם מסוגלים להשפיע על הפרופיל שלהם חלבון הפרשה. האחרון הם העריכו בקלות באמצעות קציר של בינוני תרבות ממוזגים, ריכוז חלבונים המופרש בעזרת חומצת חומץ טריכלור/אצטון משקעים וניתוח עוקבות שלהם דרך מרחביות-דף ו- immunoblotting. אנו טוענים כי שיטות אלה משולבים מתאימים לניתוח של חלבון epididymal חלופי מטרות כהקדמה קביעת שלהם תפקיד פונקציונלי זרע התבגרות ו/או אחסון.

איור 1 ו איור 2 הצג תוצאות נציג של immunofluorescence לוקליזציה של DNM האשך caput העכבר. כל אחד שלושה איזופורמים DNM חקר פרופילים נפרדים לוקליזציה התצוגה. לפיכך, DNM1 מאופיין על ידי תיוג ' מאטום לשקוף ' צנוע יחסית של תאי epididymal במהלך האשך פלח ואת caput ה?...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Epididymal Protein Synthesis and Secretion at JoVE.com

Analysis of Epididymal Protein Synthesis and Secretion

כאן, אנו מדווחים על לוקליזציה immunofluorescence של dynamin כדי להמחיש את הפרוטוקולים עבור זיהוי חלבונים בסעיפים epididymal העכבר פרפין-מוטבע ואלו של קו מונצחים תא epididymal (mECap18). אנו מתארים גם את הפרוטוקולים עבור הבידוד של חלבונים הפרשה של נוזל epididymal והן תאים ממוזגים מדיה.

ניתוח של סינתזת חלבונים Epididymal והפרשת

The mammalian epididymis generates one of the most complex intraluminal fluids of any endocrine gland in order to support the post-testicular maturation ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Quantitative Analysis of Protein Expression to Study Lineage Specification in Mouse Preimplantation Embryos

ניתוח כמותי של ביטוי חלבון לחקר מפרט Lineage עכבר preimplantation עוברים

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analyses of protein expression to study lineage specification in mouse ...

Simultaneous Assessment of Cardiomyocyte DNA Synthesis and Ploidy: A Method to Assist Quantification of Cardiomyocyte Regeneration and Turnover

הערכה סימולטני של DNA Cardiomyocyte סינתזה ploidy: שיטה Assist כימות Cardiomyocyte רגנרציה מחזור

Although it is accepted that the heart has a limited potential to regenerate cardiomyocytes following injury and that low levels of cardiomyocyte turnover ...

A Simple Method to Identify Kinases That Regulate Embryonic Stem Cell Pluripotency by High-throughput Inhibitor Screening

שיטה פשוטה לזהות קינאזות כי לווסת עובריים גזע עובריים גזע על ידי תפוקה גבוהה מעכב הקרנה

Embryonic stem cells (ESCs) can self-renew or differentiate into all cell types, a phenomenon known as pluripotency. Distinct pluripotent states have been ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

ויזואליזציה וניתוח כמותי של אנגיוגנזה עובריים ב<em&gt; Xenopus טרופי</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...

Analysis of Protein-protein Interactions and Co-localization Between Components of Gap, Tight, and Adherens Junctions in Murine Mammary Glands

ניתוח אינטראקציות חלבון חלבון שיתוף לוקליזציה בין רכיבי פערים, צמודים, ו adherens צמתים Murine בלוטות החלב

Cell-cell interactions play a pivotal role in preserving tissue integrity and the barrier between the different compartments of the mammary gland. These ...

Correlative Super-resolution and Electron Microscopy to Resolve Protein Localization in Zebrafish Retina

רזולוציה סופר correlative ואלקטרון לפתרון חלבון לוקליזציה ברשתית דג זברה

We present a method to investigate the subcellular protein localization in the larval zebrafish retina by combining super-resolution light microscopy and ...

Kinetic Analysis of Vasculogenesis Quantifies Dynamics of Vasculogenesis and Angiogenesis In Vitro

Kinetic Analysis of Vasculogenesis Quantifies Dynamics of Vasculogenesis and Angiogenesis In Vitro

ניתוח קינטי של Vasculogenesis מכמתת את הדינמיקה של Vasculogenesis ואנגיוגנזה במבחנה

Vasculogenesis is a complex process by which endothelial stem and progenitor cells undergo de novo vessel formation. Quantitative assessment of ...

Isolation and Staining of Mouse Skin Keratinocytes for Cell Cycle Specific Analysis of Cellular Protein Expression by Mass Cytometry

בידוד וכתמים של העור העכבר Keratinocytes עבור ניתוח מחזור התא הספציפי של חלבון הביטוי הסלולרי על ידי המוני הקיקומטריה

The goal of this protocol is to detect and quantify protein expression changes in a cell cycle-dependent manner using single cells isolated from the ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

הדמיה חיה וניתוח של התכווצויות שרירים בתוך העובר דרוזופילה

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Protein Extract Preparation and Co-immunoprecipitation from Caenorhabditis elegans

Protein Extract Preparation and Co-immunoprecipitation from Caenorhabditis elegans

הכנת תמצית חלבון ושיתוף חיסוני מאלגנים של קנורהאביטיס

Co-immunoprecipitation methods are frequently used to study protein-protein interactions. Confirmation of hypothesized protein-protein interactions or ...