Name: detection and isolation of apoptotic bodies to high purity
Uploaded: 2018-08-12T15:00:00
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일이 I.K.H.P. 국가 건강 및 의료 연구 위원회 (GNT1125033 및 GNT1140187) 및 호주 연구 협의회 (DP170103790)에서 교부 금에 의해 지원 되었다

1입니다. Apoptosis 유도
<ol><li>5 분 및 모든 기존의 세포 파편을 제거 하려면 삭제 상쾌한 300 x g에서 원심 분리기 셀 샘플. 참고: 부착 셀을 사용 하는 경우 사전에 셀 씨 고 apoptosis 유도 전에 인산 염 버퍼 솔루션 (PBS) x 1 씻어.</li>
	<li>휴대폰 번호를 확인 하 고 세포를 수집 합니다. 참고: 분석 결과 후 절연에 따라 좋습니다 적어도 1 x 10의 시작 셀 번호7 셀을.</li>
	<li>1 x 106 셀/mL의...

<ol>
	<li>Poon, I. K., Lucas, C. D., Rossi, A. G., Ravichandran, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+cell+clearance:+basic+biology+and+therapeutic+potential.">Apoptotic cell clearance: basic biology and therapeutic potential.</a> Nature Reviews. Immunology. 14, 166-180 (2014).</li><li>Atkin-Smith, G. K., Poon, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disassembly+of+the+Dying:+Mechanisms+and+Functions.">Disassembly of the Dying: Mechanisms and Functions.</a> Trends in Cell Biology. 27, 151-162 (2017).</li><li>Tixeira, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+morphologic+features+and+products+of+cell+disassembly+during+apoptosis.">Defining the morphologic features and products of cell disassembly during apoptosis.</a> Apoptosis: An International Journal on Programmed Cell Death. 22, 475-477 (2017).</li><li>Sebbagh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase-3-mediated+cleavage+of+ROCK+I+induces+MLC+phosphorylation+and+apoptotic+membrane+blebbing.">Caspase-3-mediated cleavage of ROCK I induces MLC phosphorylation and apoptotic membrane blebbing.</a> Nature Cell Biology. 3, 346-352 (2001).</li><li>Coleman, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+blebbing+during+apoptosis+results+from+caspase-mediated+activation+of+ROCK+I.">Membrane blebbing during apoptosis results from caspase-mediated activation of ROCK I.</a> Nature Cell Biology. 3, 339-345 (2001).</li><li>Atkin-Smith, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mechanism+of+generating+extracellular+vesicles+during+apoptosis+via+a+beads-on-a-string+membrane+structure.">A novel mechanism of generating extracellular vesicles during apoptosis via a beads-on-a-string membrane structure.</a> Nature Communications. 6, 7439 (2015).</li><li>Poon, I. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unexpected+link+between+an+antibiotic,+pannexin+channels+and+apoptosis.">Unexpected link between an antibiotic, pannexin channels and apoptosis.</a> Nature. 507, 329-334 (2014).</li><li>Moss, D. K., Betin, V. M., Malesinski, S. D., Lane, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+role+for+microtubules+in+apoptotic+chromatin+dynamics+and+cellular+fragmentation.">A novel role for microtubules in apoptotic chromatin dynamics and cellular fragmentation.</a> Journal of Cell Science. 119, 2362-2374 (2006).</li><li>Kerr, J. F., Wyllie, A. H., Currie, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis:+a+basic+biological+phenomenon+with+wide-ranging+implications+in+tissue+kinetics.">Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics.</a> British journal of cancer. 26, 239-257 (1972).</li><li>Witasp, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bridge+over+troubled+water:+milk+fat+globule+epidermal+growth+factor+8+promotes+human+monocyte-derived+macrophage+clearance+of+non-blebbing+phosphatidylserine-positive+target+cells.">Bridge over troubled water: milk fat globule epidermal growth factor 8 promotes human monocyte-derived macrophage clearance of non-blebbing phosphatidylserine-positive target cells.</a> Cell Death and Differentiation. 14, 1063-1065 (2007).</li><li>Orlando, K. A., Stone, N. L., Pittman, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho+kinase+regulates+fragmentation+and+phagocytosis+of+apoptotic+cells.">Rho kinase regulates fragmentation and phagocytosis of apoptotic cells.</a> Experimental Cell Research. 312, 5-15 (2006).</li><li>Holmgren, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Horizontal+transfer+of+DNA+by+the+uptake+of+apoptotic+bodies.">Horizontal transfer of DNA by the uptake of apoptotic bodies.</a> Blood. 93, 3956-3963 (1999).</li><li>Zernecke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+microRNA-126+by+apoptotic+bodies+induces+CXCL12-dependent+vascular+protection.">Delivery of microRNA-126 by apoptotic bodies induces CXCL12-dependent vascular protection.</a> Science Signaling. 2, ra81 (2009).</li><li>Schiller, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantigens+are+translocated+into+small+apoptotic+bodies+during+early+stages+of+apoptosis.">Autoantigens are translocated into small apoptotic bodies during early stages of apoptosis.</a> Cell Death and Differentiation. 15, 183-191 (2008).</li><li>Elamin, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curcumin+inhibits+the+Sonic+Hedgehog+signaling+pathway+and+triggers+apoptosis+in+medulloblastoma+cells.">Curcumin inhibits the Sonic Hedgehog signaling pathway and triggers apoptosis in medulloblastoma cells.</a> Molecular Carcinogenesis. 49, 302-314 (2010).</li><li>Sagulenko, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AIM2+and+NLRP3+inflammasomes+activate+both+apoptotic+and+pyroptotic+death+pathways+via+ASC.">AIM2 and NLRP3 inflammasomes activate both apoptotic and pyroptotic death pathways via ASC.</a> Cell Death and Differentiation. 20, 1149-1160 (2013).</li><li>Crescitelli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+RNA+profiles+in+subpopulations+of+extracellular+vesicles:+apoptotic+bodies,+microvesicles+and+exosomes.">Distinct RNA profiles in subpopulations of extracellular vesicles: apoptotic bodies, microvesicles and exosomes.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 2, (2013).</li><li>Turiak, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+characterization+of+thymocyte-derived+microvesicles+and+apoptotic+bodies+in+BALB/c+mice.">Proteomic characterization of thymocyte-derived microvesicles and apoptotic bodies in BALB/c mice.</a> Journal of Proteomics. 74, 2025-2033 (2011).</li><li>Vermes, I., Haanen, C., Steffens-Nakken, H., Reutelingsperger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+assay+for+apoptosis.+Flow+cytometric+detection+of+phosphatidylserine+expression+on+early+apoptotic+cells+using+fluorescein+labelled+Annexin+V.">A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V.</a> Journal of Immunological Methods. 184, 39-51 (1995).</li><li>Jiang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+the+progression+of+cell+death+and+the+disassembly+of+dying+cells+by+flow+cytometry.">Monitoring the progression of cell death and the disassembly of dying cells by flow cytometry.</a> Nature Protocols. 11, 655-663 (2016).</li><li>Berda-Haddad, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterile+inflammation+of+endothelial+cell-derived+apoptotic+bodies+is+mediated+by+interleukin-1alpha.">Sterile inflammation of endothelial cell-derived apoptotic bodies is mediated by interleukin-1alpha.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 20684-20689 (2011).</li><li>Lleo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shotgun+proteomics:+identification+of+unique+protein+profiles+of+apoptotic+bodies+from+biliary+epithelial+cells.">Shotgun proteomics: identification of unique protein profiles of apoptotic bodies from biliary epithelial cells.</a> Hepatology. 60, 1314-1323 (2014).</li><li>Atkin-Smith, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+cell+type-specific+apoptotic+bodies+by+fluorescence-activated+cell+sorting.">Isolation of cell type-specific apoptotic bodies by fluorescence-activated cell sorting.</a> Scientific Reports. 7, 39846 (2017).</li><li>Jiang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+the+contents+and+cell+origins+of+apoptotic+bodies+by+flow+cytometry.">Determining the contents and cell origins of apoptotic bodies by flow cytometry.</a> Scientific Reports. 7, 14444 (2017).</li></ol>

이후 1950 년대에 있는 그것의 초기 설명, apoptosis의 분야 전진 했다 현저 하 게, 저명한 연구 분야를 되 고. 광범위 한 관심과 광범위 한 노력에도 불구 하 고 apoptosis, 특히 ApoBDs의 대형에에서의 하지 되었습니다 잘 공부 적절 한 방법론의 부족. 특히 추적 apoptosis 진행과 동시에 전통적인 cytometry A5/PI 분석 및 ApoBD 격리의 불순물을 사용 하 여 ApoBD 형성에 제한이 포함 됩니다. 최근 접근 방법론 이러한 ?...

Apoptosis, 프로그램 된 세포 죽음의 잘 공부 형태를 생리 적 항상성 유지 하 고 인체1내에서 잠재적으로 유해한 세포를 제거 해야 합니다. Apoptosis 유도 후 apoptotic 세포 (ApoCells) 일련의 형태학 적 변화를 받아야 하 고 ApoBDs 되 나 작은 막 도약 vesicles로 분해 수 있습니다. 전반적으로,이 과정 apoptotic 세포 분해로 알려져 있으며 형태2,3에 따라 3 가지 단계로 나눌 수 있습니다. 단계 1 (플라즈마 멤브레인 blebbing) 풍선 모양의 구조 blebs4,5로 알려진 세포 표면에 형성 특징 이다. 단계 2 (apoptotic 돌출 형성) apoptopodia, 파란색 apoptopodia 및 microtubule 스파이크6,,78등 긴 막 돌출의 형성을 포함합니다. 마지막으로, 3 단계 (ApoBD 형성) apoptotic 돌출 ApoBDs6,9를 생성 하는 ApoCells의 파편을 포함 한다. 이전 연구 결과 apoptotic 세포 클리어런스를 방 조 하 고 세포 통신을 중재에 ApoBDs의 역할을 제안 했다. 예를 들어 ApoBDs에는 ApoCell의 분열 식 세포2,10,11을 둘러싼에 의해 쉽게 제거 될 수 있는 작은 ' 입 크기 ' 조각 생성 수는 제안 합니다. 또한, ApoBDs DNA, RNA 및 단백질, 셀 통신12,,1314를 촉진 하기 위하여 주변 셀에는 인신 매매 수 등 생체의 일련을 항구 수 있습니다. 기능적으로이 프로세스를 조사, apoptosis 유도 및 ApoBD 형성의 유효성 검사 (i), (ii) ApoBDs, 절연 및 (iii) ApoBD 순수성의 확인을 포함 하 여 세 가지 주요 매개 변수를 확인 하는 생명 이다.
이전에, cytometry 등 전자 현미경 검사 법 방법의 수 ApoBDs15,16,,1718apoptosis를 공부 하 고 사용 되었습니다. 그러나, ApoBD 검출 및 정량화는 종종 어려운 또는 간과. 가장 일상적으로 사용 되는 흐름 cytometry 기반 apoptosis 고용 annexin V를 시험 하는 예를 들어, (A5, 단백질은 외부화는 ' 먹고-나 ' 신호 phosphatidylserine (PtdSer))과 핵 산 얼룩 propidium 요오드 화물 (PI)19. 그러나,이 범용 얼룩 조합을 사용 하 여 분석 가정 샘플에서 셀 하위 (가능한 셀, ApoCells 및 회 저 성 세포)의 3 종류가 있습니다. 또한, 비록 apoptosis에 대 한 많은 연구자에 의해 "금 표준"으로 간주, cytometry 분석 실험 및 후속 데이터 분석은 종종 FSC/SSC중간-높 은 이벤트를 선택 하는 초기 제어 단계를 통해 ApoBDs을 제외. 따라서, 우리는 최근에 a 5와 TO-프로-3를 사용 하 여 새로운 흐름 cytometry 분석 결과 개발, caspase 3/7-활성화 pannexin 1 (PANX1)에 의해 선택적으로 촬영 될 수 있는 또 다른 핵 얼룩 채널7,20. Caspase 3 유도 PANX1 활성화 apoptosis의 초기 단계에서 PtdSer 노출 앞로 TO-프로-3 차동 apoptotic 및 회 저 성 세포를 얼룩. 또한, 전략 게이팅 우리의 소설과 결합 된이 접근 데이터 분석 중 모든 획득된 이벤트를 포함 하 고 그 결과, 6 셀/입자 하위 집합 식별 됩니다, 포함 하 여: (i) 가능한 셀 (FSC/SSC중간/높은, A5낮은 , TO-프로-3낮은), (ii) A5- 초기 ApoCells (FSC/SSC중간/높은, A5낮은,중간에-프로-3), (iii) A5+ ApoCells (FSC/SSC중간/높은, A5높은 ,중간에-프로-3), (iv) 회 저 성 세포 또는 늦은 ApoCells (FSC/SSC중간/높은 A5높은,높은TO-프로-3), (v) ApoBDs (FSC/SSC낮은, A5중간, TO-프로-3낮은 중간 /), 그리고 (vi) 파편 (FSC/SSC낮은,낮은A5, TO-프로-3낮은)20. 우리의 접근 방식은 모든 셀/입자 하위 집합 및, 더 중요 한 것은, 세포와 파편20에서 ApoBDs의 분리 분석의 중요성을 강조 한다. 따라서,이 방법은 apoptosis와 ApoBD 형성의 유도 동시에 확인 하는 효율적인 기법을 보여 줍니다.
전통적으로, ApoBDs는 ApoBDs 셀 또는 밀도에 따라 다른 세포 외 소포에서 분리 될 수 있다 그것에 의하여 차별 원심 분리 방식의 다양 한 격리 되었습니다. 그러나, 이러한 원심 분리 방법은 종종 낮은 ApoBD 순수성, 샘플 순도 및 셀 형식 관련 ApoBDs17,,2122분리를 확인 정량화 단계의 부족에 의해 제한 됩니다. 따라서, 우리 최근 두 가지 방법, FACS 기반 및 새로운 차등 원심 분리-기반 접근 apoptosis와 샘플 순도23의 유도 확인 하기 위해 우리의 이전 설립된 흐름 cytometry 방법으로 결합 될 수 있는 개발. FACS 기반 접근을 통해 ApoBD 절연 99% 순도, 최대 ApoBDs을 풍요롭게 수 있습니다 하 고 혼합된 셀 인구, 조직 샘플 및 체액23에서 ApoBDs을 셀 유형 특정 항 체의 다양 한 결합 될 수 있다. 또한, 우리의 개정된 차등 원심 분리 방식을 보여줍니다 ApoBDs를 분리 하는 효율적인 방법 > 90% 순도23.
이 종이, 우리가 자세히 설명 apoptosis 유도, 유효성을 검사 하 고 검색 하 고 ApoBD 형성 계량 우리의 실험 절차. FACS 기반 및 차등 원심 기반 방법을 사용 하 여 ApoBD 절연 워크플로 또한 정교 하 고 비교. 대표적인 데이터 설명된 방법론 미래 ApoBD 연구에 대 한 효과적인 첨단 도구를 제공 합니다 보여줍니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1309px;" width="1309">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">Cells e.g. cultured human THP-1 monocytes (clone number: TIB-202)</td>
			<td style="width:149px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:513px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td style="width:149px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">22400-089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">Penicillin-streptomycin mixture</td>
			<td style="width:149px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">FSC</td>
			<td style="width:149px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">10099-141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1x PBS</td>
			<td style="width:149px;">-</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Annexin V FITC</td>
			<td style="width:149px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TO-PRO-3 iodide</td>
			<td style="width:149px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">T3605</td>
			<td>TO-PRO-3 may cause skin, eye and respiratory irration. Avoid direct contact.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x Annexin V binding buffer</td>
			<td style="width:149px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;">556454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EDTA</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">1001710526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">Centrifuge tube (15 mL)</td>
			<td style="width:149px;">Cellstar</td>
			<td style="width:119px;">188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">Microcentrifuge tube (1.5 mL)</td>
			<td style="width:149px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:119px;">72.690.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">Tissue culture incubator (37 &#176;C, 5% CO2)</td>
			<td style="width:149px;">-</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:149px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">392932</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FACS ARIA III Flow cytometer, configured with two lasers for FITC and APC detection</td>
			<td style="width:149px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FACS Canto II Flow cytometer, configured with two lasers for FITC and APC detection</td>
			<td style="width:149px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">FACS Diva 6.1.1 software</td>
			<td style="width:149px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">FlowJo 8.8.6 software</td>
			<td style="width:149px;">-</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;UV Stratalinker 1800</td>
			<td style="width:149px;">Stratagene</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection and isolation of apoptotic bodies to high purity

Apoptotic 시체 (ApoBDs), microvesicles 및 exosomes ApoBDs 가장 큰 종류 중 하나 되 고 함께 세포 외 기 가족의 주요 회원입니다. 그것은 ApoBDs 밀매 생체 세포 통신으로 셀 정리 도움이 될 수 있습니다 제안 되었습니다. 식별 및 ApoBDs의 격리에 사용 하는 기존의 접근은 종종 정확한 정량화 및 낮은 샘플 순도의 부족에 의해 제한 됩니다. 여기, 우리는 apoptosis 유도 확인 하 고, ApoBD 형성, 검증 순도를 ApoBDs를 분리 하는 워크플로 설명 합니다. 우리 또한 약술 하 고 형광 활성화 된 세포 (FACS) 정렬 및 ApoBDs을 기반으로 하는 차등 원심 분리 접근 비교 것입니다. 또한, 고립 된 ApoBDs의 순도 확인 될 것 이다 사용 하는 이전 교류 cytometry 기반 얼룩이 지 고 분석 방법 확립. 기술된 접근을 사용 하 여 함께 찍은 THP 1 monocyte apoptosis와 apoptotic 세포 분해 했다 유도 검증, 그리고 THP 1 monocytes에서 생성 된 ApoBD 97-99%의 순수성에 고립 되었다.

여기에 설명 된 절차를 사용 하 여, THP 1 monocyte apoptosis 유도 되었다 그리고 ApoBDs 탐지 되 고 고립 FACS 기반 또는 차등 원심 분리 방식 (그림 1)를 통해. 첫째, apoptosis UV 방사선에 의해 유도 되었다 및 샘플 셀 apoptotic 형태학, blebbing, apoptotic 막 돌출 형성 및 ApoBDs6의 세대를 포함 하 여 전시 하는 때 외피의 2-3 h 후 수집 된. TO-프로-3와 A5 ?...

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Detection and Isolation of Apoptotic Bodies to High Purity

교류 cytometry 또는 차등 원심 분리를 사용 하 여 워크플로 검색, 계량 및 apoptotic 시체는 apoptotic 샘플 고 순도 분리 개발 된다.

검색 및 Apoptotic 몸 높은 순도 절연

Apoptotic bodies (ApoBDs), microvesicles and exosomes are the key members of the extracellular vesicle family, with ApoBDs being one of the largest type. ...

Research

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Biochemistry

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연구

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세포 외 단백질 Microarray 기술은 낮은 친 화력 수용 체 Ligand 상호 작용의 높은 처리량 검색

Secreted factors, membrane-tethered receptors, and their interacting partners are main regulators of cellular communication and initiation of signaling ...

Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR

곰 팡이의 준비 및 동적인 핵 분극 고체 NMR을 사용 하 여 구조 설명에 대 한 식물 재료

This protocol shows how uniformly 13C, 15N-labeled fungal materials can be produced and how these soft materials should be proceeded for solid-state NMR ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

차에서 파생된 새로 설립된 세포 현탁액 배양에서 6개의 전신 살충제의 물질대사에 관한 연구(동백나무시넨시스 L.) 잎

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Examining the Dynamics of Cellular Adhesion and Spreading of Epithelial Cells on Fibronectin During Oxidative Stress

세포 부착의 역학 을 검사 하 고 산화 스트레스 동안 Fibronectin에 상피 세포의 확산

The adhesion and spreading of cells onto the extracellular matrix (ECM) are essential cellular processes during organismal development and for the ...

Paper-Based Preconcentration and Isolation of Microvesicles and Exosomes

마이크로베식및 엑소좀의 종이 기반 전농도 및 격리

Microvesicles and exosomes are small membranous vesicles released to the extracellular environment and circulated throughout the body. Because they ...