Name: detection and isolation of apoptotic bodies to high purity
Uploaded: 2018-08-12T15:00:00
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Isto trabalhou era suportada por concessões do nacional de saúde e Conselho de pesquisa médica (GNT1125033 e GNT1140187) e Australian Research Council (DP170103790) para I.K.H.P.

1. indução da apoptose
<ol><li>Centrifugar a amostra de célula a 300 x g por 5 min e descartar o sobrenadante para remover os detritos de células pré-existentes. Nota: Quando utilizar células aderentes, células de sementes com antecedência e lave com 1 x solução de tampão fosfato (PBS) antes da indução de apoptose.</li>
	<li>Determinar o número do celular e coletar as células. Nota: Dependendo do pós-isolamento ensaio, recomendamos um número de celular inicial de pelo menos 1 x 107 cé...

<ol>
	<li>Poon, I. K., Lucas, C. D., Rossi, A. G., Ravichandran, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+cell+clearance:+basic+biology+and+therapeutic+potential.">Apoptotic cell clearance: basic biology and therapeutic potential.</a> Nature Reviews. Immunology. 14, 166-180 (2014).</li><li>Atkin-Smith, G. K., Poon, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disassembly+of+the+Dying:+Mechanisms+and+Functions.">Disassembly of the Dying: Mechanisms and Functions.</a> Trends in Cell Biology. 27, 151-162 (2017).</li><li>Tixeira, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+morphologic+features+and+products+of+cell+disassembly+during+apoptosis.">Defining the morphologic features and products of cell disassembly during apoptosis.</a> Apoptosis: An International Journal on Programmed Cell Death. 22, 475-477 (2017).</li><li>Sebbagh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase-3-mediated+cleavage+of+ROCK+I+induces+MLC+phosphorylation+and+apoptotic+membrane+blebbing.">Caspase-3-mediated cleavage of ROCK I induces MLC phosphorylation and apoptotic membrane blebbing.</a> Nature Cell Biology. 3, 346-352 (2001).</li><li>Coleman, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+blebbing+during+apoptosis+results+from+caspase-mediated+activation+of+ROCK+I.">Membrane blebbing during apoptosis results from caspase-mediated activation of ROCK I.</a> Nature Cell Biology. 3, 339-345 (2001).</li><li>Atkin-Smith, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mechanism+of+generating+extracellular+vesicles+during+apoptosis+via+a+beads-on-a-string+membrane+structure.">A novel mechanism of generating extracellular vesicles during apoptosis via a beads-on-a-string membrane structure.</a> Nature Communications. 6, 7439 (2015).</li><li>Poon, I. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unexpected+link+between+an+antibiotic,+pannexin+channels+and+apoptosis.">Unexpected link between an antibiotic, pannexin channels and apoptosis.</a> Nature. 507, 329-334 (2014).</li><li>Moss, D. K., Betin, V. M., Malesinski, S. D., Lane, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+role+for+microtubules+in+apoptotic+chromatin+dynamics+and+cellular+fragmentation.">A novel role for microtubules in apoptotic chromatin dynamics and cellular fragmentation.</a> Journal of Cell Science. 119, 2362-2374 (2006).</li><li>Kerr, J. F., Wyllie, A. H., Currie, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis:+a+basic+biological+phenomenon+with+wide-ranging+implications+in+tissue+kinetics.">Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics.</a> British journal of cancer. 26, 239-257 (1972).</li><li>Witasp, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bridge+over+troubled+water:+milk+fat+globule+epidermal+growth+factor+8+promotes+human+monocyte-derived+macrophage+clearance+of+non-blebbing+phosphatidylserine-positive+target+cells.">Bridge over troubled water: milk fat globule epidermal growth factor 8 promotes human monocyte-derived macrophage clearance of non-blebbing phosphatidylserine-positive target cells.</a> Cell Death and Differentiation. 14, 1063-1065 (2007).</li><li>Orlando, K. A., Stone, N. L., Pittman, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho+kinase+regulates+fragmentation+and+phagocytosis+of+apoptotic+cells.">Rho kinase regulates fragmentation and phagocytosis of apoptotic cells.</a> Experimental Cell Research. 312, 5-15 (2006).</li><li>Holmgren, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Horizontal+transfer+of+DNA+by+the+uptake+of+apoptotic+bodies.">Horizontal transfer of DNA by the uptake of apoptotic bodies.</a> Blood. 93, 3956-3963 (1999).</li><li>Zernecke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+microRNA-126+by+apoptotic+bodies+induces+CXCL12-dependent+vascular+protection.">Delivery of microRNA-126 by apoptotic bodies induces CXCL12-dependent vascular protection.</a> Science Signaling. 2, ra81 (2009).</li><li>Schiller, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantigens+are+translocated+into+small+apoptotic+bodies+during+early+stages+of+apoptosis.">Autoantigens are translocated into small apoptotic bodies during early stages of apoptosis.</a> Cell Death and Differentiation. 15, 183-191 (2008).</li><li>Elamin, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curcumin+inhibits+the+Sonic+Hedgehog+signaling+pathway+and+triggers+apoptosis+in+medulloblastoma+cells.">Curcumin inhibits the Sonic Hedgehog signaling pathway and triggers apoptosis in medulloblastoma cells.</a> Molecular Carcinogenesis. 49, 302-314 (2010).</li><li>Sagulenko, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AIM2+and+NLRP3+inflammasomes+activate+both+apoptotic+and+pyroptotic+death+pathways+via+ASC.">AIM2 and NLRP3 inflammasomes activate both apoptotic and pyroptotic death pathways via ASC.</a> Cell Death and Differentiation. 20, 1149-1160 (2013).</li><li>Crescitelli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+RNA+profiles+in+subpopulations+of+extracellular+vesicles:+apoptotic+bodies,+microvesicles+and+exosomes.">Distinct RNA profiles in subpopulations of extracellular vesicles: apoptotic bodies, microvesicles and exosomes.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 2, (2013).</li><li>Turiak, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+characterization+of+thymocyte-derived+microvesicles+and+apoptotic+bodies+in+BALB/c+mice.">Proteomic characterization of thymocyte-derived microvesicles and apoptotic bodies in BALB/c mice.</a> Journal of Proteomics. 74, 2025-2033 (2011).</li><li>Vermes, I., Haanen, C., Steffens-Nakken, H., Reutelingsperger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+assay+for+apoptosis.+Flow+cytometric+detection+of+phosphatidylserine+expression+on+early+apoptotic+cells+using+fluorescein+labelled+Annexin+V.">A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V.</a> Journal of Immunological Methods. 184, 39-51 (1995).</li><li>Jiang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+the+progression+of+cell+death+and+the+disassembly+of+dying+cells+by+flow+cytometry.">Monitoring the progression of cell death and the disassembly of dying cells by flow cytometry.</a> Nature Protocols. 11, 655-663 (2016).</li><li>Berda-Haddad, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterile+inflammation+of+endothelial+cell-derived+apoptotic+bodies+is+mediated+by+interleukin-1alpha.">Sterile inflammation of endothelial cell-derived apoptotic bodies is mediated by interleukin-1alpha.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 20684-20689 (2011).</li><li>Lleo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shotgun+proteomics:+identification+of+unique+protein+profiles+of+apoptotic+bodies+from+biliary+epithelial+cells.">Shotgun proteomics: identification of unique protein profiles of apoptotic bodies from biliary epithelial cells.</a> Hepatology. 60, 1314-1323 (2014).</li><li>Atkin-Smith, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+cell+type-specific+apoptotic+bodies+by+fluorescence-activated+cell+sorting.">Isolation of cell type-specific apoptotic bodies by fluorescence-activated cell sorting.</a> Scientific Reports. 7, 39846 (2017).</li><li>Jiang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+the+contents+and+cell+origins+of+apoptotic+bodies+by+flow+cytometry.">Determining the contents and cell origins of apoptotic bodies by flow cytometry.</a> Scientific Reports. 7, 14444 (2017).</li></ol>

Desde sua descrição inicial na década de 1950, campo da apoptose tem avançado consideravelmente, tornando-se uma área de pesquisa proeminente. Apesar do amplo interesse e grandes esforços, certos aspectos da apoptose, em particular a formação de ApoBDs, não foi bem estudaram devido a falta de metodologias adequadas. Estes incluem nomeadamente a limitação no acompanhamento da progressão de apoptose e ApoBD formação simultaneamente utilizando a citometria de fluxo tradicional análise A5/PI e as impurezas de ...

Apoptose, uma forma bem estudada de morte celular programada, é necessário para manter a homeostase fisiológica e remover células potencialmente prejudiciais dentro do corpo humano1. Após a indução da apoptose, pilhas apoptotic (ApoCells) podem se submeter a uma série de alterações morfológicas e desmontar em pequenas vesículas de membrana-limite denominadas ApoBDs. Em geral, este processo é conhecido como desmontagem de célula apoptótica e pode ser dividido em 3 etapas distintas, com base na morfologia2,3. Passo 1 (membrana plasmática blebbing) é caracterizado pela formação de balão-como estruturas na superfície das células, conhecido como blebs4,5. Passo 2 (formação de protrusão de apoptotic) inclui a formação de saliências longa membrana tais como apoptopodia, apoptopodia-frisado e microtubule picos6,7,8. Por último, etapa 3 (formação ApoBD) inclui a fragmentação do apoptotic saliências e/ou ApoCells para gerar ApoBDs6,9. Achados anteriores sugeriram um papel de ApoBDs em ajudar o afastamento de célula apoptótica e mediando a comunicação intercelular. Por exemplo, propõe-se que a fragmentação de um ApoCell em ApoBDs pode gerar pequenos pedaços 'pequenos' que podem ser facilmente removidos, envolvendo os fagócitos2,10,11. Além disso, os ApoBDs podem abrigar uma série de biomoléculas, tais como DNA, RNA e proteínas, que podem ser traficadas para células circundantes para facilitar a célula-célula comunicação12,13,14. Para funcionalmente investigar esses processos, é vital para confirmar três parâmetros-chave incluindo (i) validação de indução de apoptose e formação de ApoBD, (ii) isolamento de ApoBDs e (iii) confirmação da pureza de ApoBD.
Anteriormente, um número de métodos, incluindo citometria de fluxo e microscopia eletrônica tem sido costumava estudar apoptose e ApoBDs15,16,17,18. No entanto, quantificação e deteção de ApoBD são muitas vezes difíceis ou negligenciado. Por exemplo, a apoptose de baseados em citometria de fluxo mais rotineiramente usados do ensaio emprega anexina V (A5, uma proteína que se liga a exteriorizados ' comer-me' sinal fosfatidilserina (PtdSer)) e ácido nucleico mancha propidium iodeto (PI)19. No entanto, usando esta combinação de mancha universal, análise pressupõe que existem apenas três tipos de subconjuntos de células (células viáveis, ApoCells e necróticas células) na amostra. Além disso, embora considerado como "padrão ouro" por muitos pesquisadores por apoptose, ensaios de citometria de fluxo e análise de dados subsequentes muitas vezes exclui ApoBDs através de um passo inicial associado selecionar eventos deintermediário-elevado do FSC/SSC. Portanto, temos recentemente desenvolvido um ensaio de citometria de fluxo romance usando A5 e TO-PRO-3,7,20canais de outra mancha de ácidos nucleico pode ser seletivamente absorvida por caspase 3/7-ativado pannexin 1 (PANX1). Como caspase 3-induzida PANX1 ativação precede PtdSer exposição a fase inicial da apoptose, TO-PRO-3 manchas diferencialmente apoptotic e células necróticas. Além disso, essa abordagem combinada com nosso romance gating estratégia inclui eventos todos adquiridos durante a análise de dados e como resultado, seis subconjuntos de célula/partícula são identificados, incluindo: (i) células viáveis (FSC/SSCintermediário/alto, A5baixa , TO-PRO-3baixa), (ii) A5– ApoCells precoce (FSC/SSCintermediário/alto, A5baixo,intermediárioTO-PRO-3), (iii) A5+ ApoCells (FSC/SSCintermediário/alto, A5alta , TO-PRO-3intermediário), (iv) necróticas células ou tarde ApoCells (FSC/SSCintermediário/alto, A5alta,altaTO-PRO-3), (v) ApoBDs (FSC/SSCbaixa, A5intermediário, TO-PRO-3baixa / intermediárias) e (vi) detritos (FSC/SSCbaixa, A5baixo, TO-PRO-3baixo)20. Nossa abordagem enfatiza a importância de analisar todos os subconjuntos de células/partícula e, mais importante, a separação do ApoBDs de células e detritos20. Assim, essa abordagem demonstra uma técnica eficiente para validar a indução de apoptose e formação ApoBD simultaneamente.
Tradicionalmente, ApoBDs foram isolados através de uma variedade de abordagens de centrifugação diferencial, pelo qual ApoBDs podem ser separadas das células ou outras vesículas extracelulares, com base na densidade. No entanto, tais métodos de centrifugação são muitas vezes limitados pela baixa pureza de ApoBD, falta de uma etapa de quantificação para confirmar a pureza da amostra, e/ou incapacidade de separar as células específicas do tipo ApoBDs17,21,22. Portanto, desenvolvemos recentemente duas abordagens, uma baseada em FACS e uma nova diferencial centrifugação abordagem baseada que pode ser acoplada com o nosso método de citometria de fluxo estabelecido anteriormente para validar a indução de apoptose e amostra de pureza23. ApoBD isolamento através de nossa abordagem baseada em FACS pode enriquecer ApoBDs para até 99% de pureza e pode ser acoplado com uma variedade de anticorpos de tipo específico de célula para isolar ApoBDs de populações de células mistas, amostras de tecidos e fluidos corporais23. Além disso, nossa abordagem de centrifugação diferencial revisada demonstra um método eficiente para isolar ApoBDs a > 90% de pureza23.
Neste trabalho, descrevemos em detalhes nosso procedimento experimental para validar a indução de apoptose e para detectar e quantificar a formação de ApoBD. Os fluxos de trabalho de isolamento ApoBD usando métodos baseados em centrifugação de FACS-baseado e diferenciais também são elaborados e comparados. Os dados representativos demonstram que a metodologia descrita fornece uma ferramenta eficaz de ponta para estudos futuros ApoBD.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1309px;" width="1309">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">Cells e.g. cultured human THP-1 monocytes (clone number: TIB-202)</td>
			<td style="width:149px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:513px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td style="width:149px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">22400-089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">Penicillin-streptomycin mixture</td>
			<td style="width:149px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">FSC</td>
			<td style="width:149px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">10099-141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1x PBS</td>
			<td style="width:149px;">-</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Annexin V FITC</td>
			<td style="width:149px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TO-PRO-3 iodide</td>
			<td style="width:149px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">T3605</td>
			<td>TO-PRO-3 may cause skin, eye and respiratory irration. Avoid direct contact.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x Annexin V binding buffer</td>
			<td style="width:149px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;">556454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EDTA</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">1001710526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">Centrifuge tube (15 mL)</td>
			<td style="width:149px;">Cellstar</td>
			<td style="width:119px;">188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">Microcentrifuge tube (1.5 mL)</td>
			<td style="width:149px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:119px;">72.690.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">Tissue culture incubator (37 &#176;C, 5% CO2)</td>
			<td style="width:149px;">-</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:149px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">392932</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FACS ARIA III Flow cytometer, configured with two lasers for FITC and APC detection</td>
			<td style="width:149px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FACS Canto II Flow cytometer, configured with two lasers for FITC and APC detection</td>
			<td style="width:149px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">FACS Diva 6.1.1 software</td>
			<td style="width:149px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:528px;">FlowJo 8.8.6 software</td>
			<td style="width:149px;">-</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;UV Stratalinker 1800</td>
			<td style="width:149px;">Stratagene</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection and isolation of apoptotic bodies to high purity

Corpos apoptotic (ApoBDs), microvesicles e exosomes são os principais membros da família vesículas extracelulares, com ApoBDs sendo um dos maior tipo. Tem sido proposto que a ApoBDs pode ajudar apuramento da célula, bem como a comunicação intercelular através do tráfico de biomoléculas. Abordagens convencionais utilizadas para a identificação e isolamento de ApoBDs são muitas vezes limitadas pela falta de quantificação exata e pureza da amostra de baixo. Aqui, descrevemos um fluxo de trabalho para confirmar a indução da apoptose, validar a formação ApoBD e isolar ApoBDs de alta pureza. Nós também irá delinear e comparar fluorescência-ativado da pilha (FACS) de triagem e centrifugação diferencial com base em abordagens para isolar ApoBDs. Além disso, a pureza de ApoBDs isoladas será confirmada usando um estabelecer previamente a coloração de baseados em citometria de fluxo e o método analítico. Tomados em conjunto, utilizando a abordagem descrita, THP-1 monócito apoptose e apoptose celular desmontagem foi induzida e validada, e ApoBD, gerado a partir de monócitos THP-1 foram isolados de uma pureza de 97-99%.

Usando o procedimento descrito aqui, THP-1 monócito apoptose foi induzido e ApoBDs foram detectados e isolados através um FACS-baseado ou uma abordagem de centrifugação diferencial (Figura 1). Em primeiro lugar, apoptose foi induzida por irradiação UV e as amostras foram coletadas após 2-3 h de incubação, quando demonstrado de células apoptóticas morfologias, incluindo blebbing, formação de protrusão da membrana apoptotic e a geração de ApoBDs...

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Detection and Isolation of Apoptotic Bodies to High Purity

Um fluxo de trabalho usando a centrifugação diferencial ou citometria de fluxo é desenvolvido para detectar, quantificar e isolar corpos apoptotic de uma amostra de apoptotic de alta pureza.

Detecção e isolamento de corpos Apoptotic de alta pureza

Apoptotic bodies (ApoBDs), microvesicles and exosomes are the key members of the extracellular vesicle family, with ApoBDs being one of the largest type. ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

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Bioquímica

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A purificação Protocolo Tailored HPLC que os rendimentos de alta pureza beta-amilóide 42 e beta-amilóide 40 Peptides, capaz de Formação Oligï¿½ero

Amyloidogenic peptides such as the Alzheimer's disease-implicated Amyloid beta (A&#946;), can present a significant challenge when trying to obtain high ...

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Extracellular Protein Microarray Technology for High Throughput Detection of Low Affinity Receptor-Ligand Interactions

Tecnologia de Microarray da proteína extracelular para a deteção de alta taxa de transferência de interações ligante-Receptor de baixa afinidade

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Examining the Dynamics of Cellular Adhesion and Spreading of Epithelial Cells on Fibronectin During Oxidative Stress

Examinando a dinâmica da adesão celular e disseminação de células epiteliais em fibronectina durante o estresse oxidativo

The adhesion and spreading of cells onto the extracellular matrix (ECM) are essential cellular processes during organismal development and for the ...

Paper-Based Preconcentration and Isolation of Microvesicles and Exosomes

Pré-concentração baseada em papel e isolamento de microvesículos e exosóis

Microvesicles and exosomes are small membranous vesicles released to the extracellular environment and circulated throughout the body. Because they ...