Name: isolation of primary mouse hepatocytes for nascent protein synthesis analysis by non-radioactive l-azidohomoalanine labeling method
Uploaded: 2018-10-23T13:30:00
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我们感谢 Drs Joonbae Seo 和维薇安的科学投入和讨论。这项工作得到了国家卫生研究院 (NIH) (R01DK107530) 的支持。T.N. 得到日本科技署的支持。这项研究的一部分是由 NIH (P30DK078392) 为辛辛那提的消化系统疾病研究核心中心提供资助的。

本协议包含实验室小鼠的使用。动物护理和实验程序是按照辛辛那提儿童医院医疗中心动物保育委员会批准的程序进行的。
1. 原代小鼠肝细胞的分离
<ol><li>预隔离准备<ol>
<li>如表 1所述, 准备450毫升40% 密度梯度缓冲器, 保持在4摄氏度 (15 mL/鼠标)。</li>
		<li>准备500毫升威廉姆斯的培养基, 如表 1所述, 保持在4摄氏度。</li>
		<li>准备500毫升的 DMEM 如...

虽然一些永生化的肝细胞系已经提出并用于调查肝功能49,50,51,52, 这些细胞一般缺乏重要的和基本的正常肝细胞的功能, 如白蛋白的表达 (图 3)。因此, 人们普遍认为, 利用原发性肝细胞是检查肝脏生理学和文化新陈代谢的一个有价值的选择, 尽管这些细胞的培养和维护的挑战。在?...

蛋白质是一个重要的营养元素, 人体干重的大约50% 是由具有多种生物学特性和功能的蛋白质组成的1。因此, 蛋白质合成是最消耗能量的事件之一, 蛋白质代谢的改变与疾病的发展密切相关, 包括代谢疾病2,3,4。在肝脏中, 蛋白质生物合成占总能量消耗的大约 20–30%5,6。此外, 蛋白质不仅作用于肝脏的被动或构建块, 而且还有主动信号调解因子潜伏或给予调节系统代谢7。例如, 血清白蛋白的水平降低, 由肝脏合成和分泌, 血浆中最丰富的蛋白质8, 增加2型糖尿病发展的风险9,10, 11, 而更高浓度的血清白蛋白是预防发展代谢综合征12。此外, 干扰或中断分泌或膜束缚肝蛋白, 调节胆固醇稳态, 包括脂蛋白, LDLR, 和 LRP1, 可能导致胰岛素抵抗, 高脂血症, 或动脉粥样硬化的发展13. 因此, 鉴定肝脏蛋白质代谢紊乱中涉及的分子病理生理学机制及其相关代谢并发症可能有助于发现新的药理学延缓发病或治疗代谢性疾病的方法, 如胰岛素抵抗、糖尿病和无酒精脂肪肝。
蛋白质合成与细胞能量状态密切相关 (例如, 在蛋白质合成的伸长步骤中形成一个肽键, 需要4磷酸二酯键14), 并通过分子通路来调节细胞间和内营养的可用性15,16。AMP 活化蛋白激酶 (AMPK) 是维持能量稳态17的细胞内能量传感器之一。一旦 AMPK 被激活时, 细胞能量水平变得较低, AMPK 及其靶向基底功能刺激分解代谢通路和抑制合成代谢过程, 包括蛋白质合成18,19。蛋白质合成的调节通过多种转化因子和核糖体蛋白的磷酸化介导20。值得注意的是, 雷帕霉素复合物 1 (mTORC1) 的哺乳动物靶点是蛋白质合成的主要驱动力, 是 AMPK21的主要靶点之一。激活 mTORC1 通路通过刺激蛋白质转化和自噬20,21提高细胞生长和增殖。因此, AMPK 活化能抑制 mTORC1-mediated 蛋白合成22是合乎逻辑的。事实上, 激活 AMPK 抵消和直接 phosphorylates mTORC1 对苏氨酸残留 2446 (2446) 导致其失活23和抑制蛋白质生物合成24。此外, AMPK 可以间接抑制 mTORC1 功能的磷酸化和活化的结节性硬化复合 2 (TSC2)25是 mTORC1 信号级联的上游调节器。简而言之, 这些途径在肝脏中的失调经常与代谢疾病的发展有关, 因此迫切需要建立有效的实验工具来研究这些途径在调节能源和肝细胞蛋白质代谢。
分离的原发性肝细胞和体内肝细胞的功能特性与体外肝细胞系26、27、28之间有较强的相似性。结果表明, 原代人肝细胞与肝活检有77% 相似之处, 而 HepG2 细胞是分化良好的肝癌细胞, 广泛用于研究肝功能, 在其背景下显示小于48%。基因表达谱29。因此, 利用原发性肝细胞, 而不是永生化培养细胞, 对肝脏功能和生理研究具有重要意义, 并可用于原代肝细胞的分离与培养。特别是从大鼠30,31。虽然大鼠肝细胞是有用的在一个相对较高的产量, 小鼠肝细胞在许多科学方面有更大的潜力, 因为转基因小鼠的广泛可用性。然而, 从小鼠分离健康和丰富的原发性肝细胞的细胞和分子的评估有几个技术挑战: 首先, 套管插入灌注肝用缓冲试剂是非常困难的处理由于小而薄小鼠门静脉或下腔静脉;其次, 在分离过程中, 细胞的操作时间越长, 细胞数量和质量就会降低;第三, 非酶机械分离方法可能导致严重的损伤, 并产生低产量的存活的分离原代肝细胞32,33。在二十世纪八十年代, 采用胶原酶灌注技术, 从动物肝脏中分离肝细胞34。这种方法是基于胶原酶灌注肝35、36、37、肝灌注钙螯合剂溶液38、39、酶消化和肝实质的机械解离35。在第一步, 小鼠肝脏灌流与钙 [ca2 +] 免费缓冲区包含 [ca2 +] 螯合剂 (乙二胺四乙酸酸, EDTA)。第二步, 小鼠肝脏灌入含有胶原酶的缓冲液, 以水解细胞外基质的相互作用。与第一步中使用的缓冲液不同, 在第二步的缓冲液中存在 [Ca2 +] 离子是有效的胶原酶活性所必需的, 之后消化的肝脏必须进一步轻柔地与机械分离, 使用钳肝囊和薄壁组织。最后, 通过过滤去除结缔组织, 随后离心分离非实质细胞和非活体肝细胞的可行肝细胞与使用密度梯度缓冲液40,41 ,42。在本研究中, 我们展示了一种改良的两步法胶原酶灌注技术, 用于分离小鼠肝脏的原代肝细胞, 用于蛋白质合成分析。
蛋白质的简単被广泛用于量化的表达水平, 更替率, 并确定蛋白质的生物分布43由于高灵敏度的放射性检测44。然而, 使用放射性同位素需要高度控制的研究环境和程序45。替代性的非放射性方法已得到发展, 越来越受到欢迎。四甲基罗丹明 (塔姆拉) 蛋白检测方法的化疗选择性结扎反应是其中之一, 是基于叠氮化物和炔烃基团之间的化学选择性反应46, 可用于分析细胞事件, 如检测新生蛋白合成和用叠氮化物组修饰的糖蛋白子类。对于新生的蛋白质合成, l-Azidohomoalanine (l-AHA, 一种叠氮化物改性氨基酸) 可以代谢纳入蛋白质和检测通过使用塔姆拉蛋白检测方法47。通过在原代小鼠肝细胞中使用这种检测方法, 我们表明, 新生的蛋白质合成速率与线粒体和 AMPK 活化 ATP 的可用性密切相关 (图 1)。
总之, 利用主鼠肝细胞是研究蛋白质和能量代谢和量化新生蛋白质合成的重要因素, 这对于深入了解与发展相关的通路的生理作用是有价值的。肝细胞相关疾病的治疗。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>HEPES buffer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP310-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D16-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol-bis(&#946;-aminoethyl ether)-tetraacetic acid</td>
			<td>AmericanBio</td>
			<td>AB00505-00025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic (100X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (10X) no calcium, magnesium, phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14185-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Dihydrate (CaCl2.2H2O)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Density gradient buffer</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium) low glucose, pyruvate</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11885-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30910.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS) (1X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1897141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Williams medium E, no glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12551-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-alanyl-L-glutamine dipeptide supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type X</td>
			<td>Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td>039-17864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion pump</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>Masterflex L/S</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV administration set</td>
			<td>EXELINT</td>
			<td>29081</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A water bath</td>
			<td>REVSCI</td>
			<td>RS-PB-200</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube heater</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Isotemp</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Lab, Inc</td>
			<td>0-39613</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>PHOENIX</td>
			<td>10250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclaved Cotton Tips</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>23-400-124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm Petri Dish</td>
			<td>TPP</td>
			<td>93100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connector (Male Luer Lock Ring)</td>
			<td>Cole-Parmer instrument</td>
			<td>EW-4551807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24G catheters</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>Surflo 24Gx3/4&#39;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#956;m Filter (CELL STRAINERS)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10199-658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical-bottom centrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml conical-bottom centrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemoselective ligation reaction PROTEIN ANALYSIS DETECTION KIT, TAMRA ALKYNE</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C33370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AHA (L-azidohomoalanine)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C10102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (methionine free)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21013024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cystine Dihydrochloride</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>C2526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laemmli sample buffer</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>161-0737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>P9599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS solution (20%)</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>161-0418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCL (1M)</td>
			<td>American Bioanalytical</td>
			<td>AB14044-01000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphatase Inhibitor Cocktail</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>P5726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein concentration measuring Kit (Bovin Serum Albumin-BSA)</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>500-0207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well tissue culture plate</td>
			<td>TPP</td>
			<td>92006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Heatblock</td>
			<td>VWR</td>
			<td>12621-092</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-Rotator</td>
			<td>Grant-bio</td>
			<td>PTR-60</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic Sonicator</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>GE130PB</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Heavy-Duty Vortex Mixer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97043-566</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A variable mode laser scanner</td>
			<td>GE Healthcare Life Science</td>
			<td>FLA 9500</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie-dye reagent</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>24594</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX53</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Western Blotting apparatus</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1658004</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>TC20</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluorChem R system</td>
			<td>proteinsimple</td>
			<td>-</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-Ampka (T172) antibody</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>2535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Total-AMPK antibody</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>5832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin antibody</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>4929</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>beta actin antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-130656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors and forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of primary mouse hepatocytes for nascent protein synthesis analysis by non-radioactive l-azidohomoalanine labeling method

肝细胞是肝脏的实质细胞, 参与多种代谢功能, 包括蛋白质的合成和分泌对系统能量稳态至关重要。从小鼠肝脏分离的原发性肝细胞构成了一个重要的生物工具来了解肝脏的功能特性或变化。本文介绍了一种通过两步胶原酶灌注技术分离和培养原发性小鼠肝细胞的方法, 并讨论了其在蛋白质代谢研究中的应用。成年小鼠肝脏依次用乙二醇-双四乙酸酸 (EGTA) 和胶原酶灌流, 其次是肝细胞与密度梯度缓冲液的分离。这些分离的肝细胞在培养板上是可行的, 并保持肝细胞的大部分赋存特征。这些肝细胞可用于评估蛋白质新陈代谢, 包括新生的蛋白质合成与非放射性试剂。我们表明, 分离的肝细胞是易于控制, 并包含更高的质量和体积稳定性与能量代谢相关的蛋白质合成, 利用化疗选择性结扎反应与四甲基罗丹明 (塔姆拉) 蛋白检测方法和西方印迹分析。因此, 该方法对研究与能量稳态有关的肝新生蛋白合成具有重要意义。下面的协议概述了分离高质量原代小鼠肝细胞和检测新生蛋白质合成的材料和方法。

主要的小鼠肝细胞隔离导致约 20 x 106总细胞/小鼠的产量。组织学, 活体和附着的原代肝细胞出现多边形或典型的六角形与明确概述的膜边界后24小时孵育 (图 2)。
为了证实孤立细胞是否为原代肝脏, 我们比较了分离的原代小鼠肝细胞 (PMHs)、小鼠胚胎成纤维细胞 (MEFs)、小鼠肝癌细胞系 (Hepa 1-6) 和小?...

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Isolation of Primary Mouse Hepatocytes for Nascent Protein Synthesis Analysis by Non-radioactive L-azidohomoalanine Labeling Method

非放射性 l-azidohomoalanine 标记法分离原发性小鼠肝细胞对新生蛋白合成的研究

在这里, 我们提出了一个分离健康和功能的原发性小鼠肝细胞的协议。通过非放射性标记基底检测肝新生蛋白合成的说明, 帮助了解肝脏能量代谢稳态背景下蛋白质合成的机理。

Hepatocytes are parenchymal cells of the liver and engage multiple metabolic functions, including synthesis and secretion of proteins essential for ...

该方法有助于回答各种代谢疾病研究领域有关肥胖、非酒精性脂肪肝和二型糖尿病中肝能和蛋白质生物合成分子变化的关键问题。该技术的主要优点是，它便于通过非放射性标签基板分离功能性原位小鼠肝细胞和检测肝新生蛋白。这种方法的视觉演示是至关重要的，因为灌注步骤是很难学习，因为小和薄的小鼠血管。对于肝脏灌注，小心插入24表导管到劣质维纳卡瓦或 IVC 只是在分叉与正确的肾静脉。拆下导管针，保持 IVC 内导管的位置，并使用连接器将 24 表导管与灌注管连接。开始用温暖的HSS减去四毫升的永久流速来循环肝脏，迅速切断静脉，排出内部血液。10分钟后，用35毫升的HBVS加上辅以胶原蛋白X型的胶原蛋白，以每分钟4毫升的流量，每隔几分钟夹住10秒左右的静脉，以方便整个肝脏的香水分布。当所有的胶原蛋白酶被注入时，在停止泵之前将肝脏转移到实验室组织上，以避免血液回流到肝脏中。使用钳子切除胆囊，然后用新鲜的实验室组织轻轻擦拭肝脏以去除任何血液。将肝脏放在含有5毫升新鲜温暖HPS的100毫米培养皿中，并辅以胶原蛋白酶，并使用杂散的钳子轻轻取出肝脏胶囊。使用钳子小心地分散的皮毛组织，并在培养皿中加入15毫升冷DMEM。轻轻摇动撕裂的肝脏，将残留的白细胞释放到培养基中，再将15毫升的冷DMEM加入到培养皿中，以获得其余的细胞。然后通过100微米细胞过滤器将组织浆料过滤到50毫升的冰上锥形管中。要分离原发小鼠肝细胞，通过离心收集细胞，并在10毫升新鲜DMEM中重新供应颗粒。小心地将细胞分层到 40% 密度梯度缓冲区上，进行密度梯度分离，在离心后将细胞从上层和中层丢弃。用两到三毫升的威廉中 E 重新填充原发性白细胞颗粒，以避免从管壁收集死细胞，将细胞转移到新的 50 毫升管中。在离心前，将细胞与威廉E介质的另外7至8毫升混合，然后根据颗粒的大小，将颗粒重新在10、20或30毫升的新鲜威廉的中量E中重新下水。经过计数，种子六倍十至第五细胞到每井的六井板，在37摄氏度下孵育2至3小时。在孵化结束时，用DMEM代替用10%胎儿牛血清和抗药剂补充的介质，取出死亡和未连接的细胞，并在夜间将细胞返回到培养箱。对于经过azide修改的新生蛋白质标签，在50微升2X反应缓冲液中加入20至40微克细胞酸盐。将体积与蒸馏去维化水一起带到 80 微升，并旋转蛋白质溶液五秒钟。将五微升硫酸铜加入细胞，再产生5秒的涡流，然后是5微升的反应缓冲液添加剂，一个，5秒的涡旋。经过三分钟的孵育，在细胞中加入10微升重组反应缓冲液添加剂2个，再产生5秒的涡流，并在4摄氏度的高温下在多旋转机上旋转样品20分钟，不受光线影响。在旋转结束时，在酸盐中加入300微升甲醇，然后是75微升氯仿，200微升为双蒸馏水。通过离心收集标记的蛋白质，并在颗粒中加入250微升新鲜甲醇。涡旋后，再次离心，在室温下用无绒组织覆盖裸露的颗粒15分钟。对于 PAGE 分析，将干燥的颗粒溶解在 20 微升的装载缓冲液中，无需 β-墨卡托乙醇，并旋转颗粒 10 分钟。接下来，在70摄氏度的热块中加热蛋白质10分钟，将样品加载到10%的硫酸钠凝胶上，用于四甲基多胺胺检测。然后使用可变模式激光扫描仪精确定量AHA标记的新生蛋白质。从组织学上看，活体和附着原发性肝细胞在24小时培养后，通常以多边形或六边形出现，具有清晰勾勒的生物学边界。为了确认分离的细胞是否是原发性肝细胞，本实验中，比较了小鼠胚胎成纤维细胞、小鼠肝病细胞系、分离原发性小鼠肝细胞和小鼠肝脏中的白蛋白表达水平。白蛋白表达在原发小鼠肝细胞和小鼠肝脏中检测，但在小鼠胚胎成纤维细胞或肝细胞系细胞中检测不出。使用 10 微摩尔 Rotenone 进行初级肝细胞治疗 4 至 6 小时，揭示了肝安培-激活蛋白激酶的强健诱导，通过肝性 AMP-活性蛋白激酶 T172 的磷酸化水平检测出，与体内观察到的相似。事实上，与未治疗的对照细胞相比，5小时的10微摩尔Rotenone治疗对治疗中原发性肝细胞的新生蛋白质合成有深刻的抑制作用，如化学糖分结反应测定所证明的。在尝试此过程时，必须记住提前准备所有必需的试剂和介质。这项技术为肝代谢病理生理学领域的研究人员探索分离的原发性小鼠肝细胞中肥胖和二型糖尿病能量蛋白调控的分子机制铺平了道路。

Research

JoVE Journal

Medicine

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

一个型号的不安流致动脉粥样硬化小鼠颈动脉部分结扎术和颈动脉内皮细胞的RNA分离的简单方法

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified ...

科研

医学

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

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在体外化培养基层小鼠结肠肿瘤

Several  human and murine colon cancer cell lines have been established, physiologic  integrity of colon tumors such as multiple cell layers, basal-apical ...

Coculture Analysis of Extracellular Protein Interactions Affecting Insulin Secretion by Pancreatic Beta Cells

共培养影响胰腺β细胞的胰岛素分泌细胞外蛋白质相互作用分析

Interactions between cell-surface proteins help coordinate the function of neighboring cells. Pancreatic beta cells are clustered together within ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

对于异位小鼠心脏移植技术的一种改进方法

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

为获取原发性卵巢癌细胞固体样品的方法

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

分离培养犬从动脉和静脉主血管内皮细胞

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

Fluorescent Dye Labeling of Erythrocytes and Leukocytes for Studying the Flow Dynamics in Mouse Retinal Circulation

用于研究小鼠视网膜循环中流动动力学的红细胞和白细胞的荧光染料标记

The retinal and choroidal blood flow dynamics may provide insight into the pathophysiology and sequelae of various ocular diseases, such as glaucoma, ...

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猪自体移植肝细胞外细胞外细胞基因治疗

Gene therapy is an ideal choice to cure many inborn errors of metabolism of the liver. Ex-vivo, lentiviral vectors have been used successfully in the ...

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