Name: fabrication of anisotropic polymeric artificial antigen presenting cells for cd8+ t cell activation
Uploaded: 2018-10-12T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of Anisotropic Polymeric Artificial Antigen Presenting Cells for CD8+ T Cell Activation at JoVE.com

ما عدا (DGE-1746891) وكر (DGE-1232825) شكرا برنامج "زمالة بحوث الدراسات العليا جبهة الخلاص الوطني" للدعم. ذاكرة الوصول العشوائي وذلك بفضل الوطنية البحوث جائزة المعاهد الوطنية للصحة خدمة F31 NCI (F31CA214147) و "مكافآت الإنجاز" "زمالة علماء الكلية" للدعم. يشكر المؤلفون المعاهد الوطنية للصحة (R01EB016721 و R01CA195503)، والبحوث لمنع العمى جيمس وجائزة محفز حرة كارول، ومعهد "السرطان العلاج المناعي" لدعم بلومبرغ-كيميل الرهبان.

عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) من جامعة جون هوبكنز.
1-تصنيع جسيمات كروية بلجا لحجم الانضباطي
<ol><li>إعداد مواد تخليق الجسيمات<ol>
<li>إعداد 5% w/w البولي فينيل الكحول (PVA) الحل.<ol>
<li>إضافة 500 مل مياه (DI) إلى قارورة Erlenmeyer مع شريط إثارة ?...

<ol>
	<li>Eggermont, L. J., Paulis, L. E., Tel, J., Figdor, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+efficient+cancer+immunotherapy:+Advances+in+developing+artificial+antigen-presenting+cells.">Towards efficient cancer immunotherapy: Advances in developing artificial antigen-presenting cells.</a> Trends in Biotechnology. 32 (9), 456-465 (2014).</li><li>Maus, M. V., Riley, J. L., Kwok, W. W., Nepom, G. T., June, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLA+tetramer-based+artificial+antigen-presenting+cells+for+stimulation+of+CD4++T+cells.">HLA tetramer-based artificial antigen-presenting cells for stimulation of CD4+ T cells.</a> Clinical Immunology. 106 (1), 16-22 (2003).</li><li>Oelke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+induction+and+expansion+of+antigen-specific+cytotoxic+T+cells+by+HLA-Ig-coated+artificial+antigen-presenting+cells.">Ex vivo induction and expansion of antigen-specific cytotoxic T cells by HLA-Ig-coated artificial antigen-presenting cells.</a> Nature Medicine. 9 (5), 619-624 (2003).</li><li>Rudolf, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+costimulation+of+human+CD8+T+cells+by+anti-4-1BB+and+anti-CD28+on+synthetic+artificial+antigen+presenting+cells.">Potent costimulation of human CD8 T cells by anti-4-1BB and anti-CD28 on synthetic artificial antigen presenting cells.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 57 (2), 175-183 (2008).</li><li>Tham, E. L., Jensen, P. L., Mescher, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+antigen-specific+T+cells+by+artificial+cell+constructs+having+immobilized+multimeric+peptide-class+I+complexes+and+recombinant+B7-Fc+proteins.">Activation of antigen-specific T cells by artificial cell constructs having immobilized multimeric peptide-class I complexes and recombinant B7-Fc proteins.</a> Journal of Immunological Methods. 249 (1-2), 111-119 (2001).</li><li>Perica, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+field-induced+T+cell+receptor+clustering+by+nanoparticles+enhances+T+cell+activation+and+stimulates+antitumor+activity.">Magnetic field-induced T cell receptor clustering by nanoparticles enhances T cell activation and stimulates antitumor activity.</a> ACS Nano. 8 (3), 2252-2260 (2014).</li><li>Steenblock, E. R., Fadel, T., Labowsky, M., Pober, J. S., Fahmy, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+artificial+antigen-presenting+cell+with+paracrine+delivery+of+IL-2+impacts+the+magnitude+and+direction+of+the+T+cell+response.">An artificial antigen-presenting cell with paracrine delivery of IL-2 impacts the magnitude and direction of the T cell response.</a> The Journal of Biological Chemistry. 286 (40), 34883-34892 (2011).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+release+of+IL-2+and+anti-CTLA-4+enhances+the+ability+of+artificial+polymer+antigen-presenting+cells+to+expand+antigen-specific+T+cells+and+inhibit+tumor+growth+in+a+mouse+model.">Paracrine release of IL-2 and anti-CTLA-4 enhances the ability of artificial polymer antigen-presenting cells to expand antigen-specific T cells and inhibit tumor growth in a mouse model.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 66 (9), 1229-1241 (2017).</li><li>Mescher, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+contact+requirements+for+activation+of+cytotoxic+T+lymphocytes.">Surface contact requirements for activation of cytotoxic T lymphocytes.</a> The Journal of Immunology. 149 (7), 2402-2405 (1992).</li><li>Steenblock, E. R., Fahmy, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+platform+for+ex+vivo+T-cell+expansion+based+on+biodegradable+polymeric+artificial+antigen-presenting+cells.">A comprehensive platform for ex vivo T-cell expansion based on biodegradable polymeric artificial antigen-presenting cells.</a> Molecular Therapy. 16 (4), 765-772 (2008).</li><li>Fifis, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-dependent+immunogenicity:+therapeutic+and+protective+properties+of+nano-vaccines+against+tumors.">Size-dependent immunogenicity: therapeutic and protective properties of nano-vaccines against tumors.</a> The Journal of Immunology. 173 (5), 3148-3154 (2004).</li><li>Sunshine, J. C., Perica, K., Schneck, J. P., Green, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particle+shape+dependence+of+CD8++T+cell+activation+by+artificial+antigen+presenting+cells.">Particle shape dependence of CD8+ T cell activation by artificial antigen presenting cells.</a> Biomaterials. 35 (1), 269-277 (2014).</li><li>Meyer, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+nanoellipsoidal+artificial+antigen+presenting+cells+for+antigen+specific+T-cell+activation.">Biodegradable nanoellipsoidal artificial antigen presenting cells for antigen specific T-cell activation.</a> Small. 11 (13), 1519-1525 (2015).</li><li>Champion, J. A., Katare, Y. K., Mitragotri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particle+shape:+a+new+design+parameter+for+micro-+and+nanoscale+drug+delivery+carriers.">Particle shape: a new design parameter for micro- and nanoscale drug delivery carriers.</a> Journal of Controlled Release. 121 (1-2), 3-9 (2007).</li><li>Meyer, R. A., Meyer, R. S., Green, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+multidimensional+thin+film+stretching+device+for+the+generation+of+anisotropic+polymeric+micro-+and+nanoparticles.">An automated multidimensional thin film stretching device for the generation of anisotropic polymeric micro- and nanoparticles.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 103 (8), 2747-2757 (2015).</li><li>Ho, C. C., Keller, A., Odell, J. A., Ottewill, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+monodisperse+ellipsoidal+polystyrene+particles.">Preparation of monodisperse ellipsoidal polystyrene particles.</a> Colloid and Polymer Science. 271 (5), 469-479 (1993).</li><li>Shum, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Droplet+microfluidics+for+fabrication+of+non-spherical+particles.">Droplet microfluidics for fabrication of non-spherical particles.</a> Macromolecular Rapid Communications. 31 (2), 108-118 (2010).</li><li>Lan, W., Li, S., Xu, J., Luo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controllable+preparation+of+nanoparticle-coated+chitosan+microspheres+in+a+co-axial+microfluidic+device.">Controllable preparation of nanoparticle-coated chitosan microspheres in a co-axial microfluidic device.</a> Lab on a Chip. 11 (4), 652-657 (2011).</li><li>Yang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+synthesis+of+multifunctional+Janus+particles+for+biomedical+applications.">Microfluidic synthesis of multifunctional Janus particles for biomedical applications.</a> Lab on a Chip. 12 (12), 2097-2102 (2012).</li><li>Zhou, Z., Anselmo, A. C., Mitragotri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+protein-based,+rod-shaped+particles+from+spherical+templates+using+layer-by-layer+assembly.">Synthesis of protein-based, rod-shaped particles from spherical templates using layer-by-layer assembly.</a> Advanced Materials. 25 (19), 2723-2727 (2013).</li><li>Jang, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Striped,+ellipsoidal+particles+by+controlled+assembly+of+diblock+copolymers.">Striped, ellipsoidal particles by controlled assembly of diblock copolymers.</a> Journal of the American Chemical Society. 135 (17), 6649-6657 (2013).</li><li>Petzetakis, N., Dove, A. P., O'Reilly, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cylindrical+micelles+from+the+living+crystallization-driven+self-assembly+of+poly(lactide)-containing+block+copolymers.">Cylindrical micelles from the living crystallization-driven self-assembly of poly(lactide)-containing block copolymers.</a> Chemical Science. 2 (5), 955-960 (2011).</li><li>Rolland, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+fabrication+and+harvesting+of+monodisperse,+shape-specific+nanobiomaterials.">Direct fabrication and harvesting of monodisperse, shape-specific nanobiomaterials.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (28), 10096-10100 (2005).</li><li>Meyer, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anisotropic+biodegradable+lipid+coated+particles+for+spatially+dynamic+protein+presentation.">Anisotropic biodegradable lipid coated particles for spatially dynamic protein presentation.</a> Acta Biomaterialia. 72, 228-238 (2018).</li></ol>

تفاصيل هذا البروتوكول وسيلة مرنة لتوليد جزيئات البوليمر متباين دقيقة. رقيقة تمتد التقنية المذكورة هنا قابلة للتطوير وعالية استنساخه وغير مكلفة. تقنيات بديلة لتوليد جزيئات متباين يعاني من قيود كثيرة، بما في ذلك تكلفة عالية ومنخفضة الإنتاجية، وحجم الجسيمات محدودة. رقيقة تمتد النهج هو أيض?...

مستضد الاصطناعي عرض الخلايا (آبك) أظهرت الوعد كوكلاء immunomodulatory نظراً لأنها يمكن أن تولد استجابة قوية محددة مستضد T خلية. الأساسية لهذه الأنظمة الأساسية هي قدرتها على كفاءة تقديم إشارات حاسمة لتنشيط الخلية T. AAPC اللاخلوي بديل جذاب ليستند إلى الخلية آبك لأنها أسهل وأقل تكلفة اختﻻق وتواجه تحديات أقل أثناء الصعود والترجمة، والتخفيف من المخاطر المرتبطة بالعلاجات المستندة إلى الخلية. AAPC اللاخلوي تسمح أيضا بدرجة عالية من السيطرة على إشارة عرض المعلمات والخصائص الفيزيائية للسطح التي سوف تتفاعل مع خلايا تي1.
يجب أن الخص آبك على الأقل ضرورية لتنشيط الخلية تي إشارتين. إشارة 1 يوفر الاعتراف مستضد ويحدث عندما تسلم مستقبلات خلية تي (تكر) ويشترك مع فئة MHC I أو II تحمل مستضد المشابهة لها، بلغت ذروتها في إشارة عن طريق تكر المعقدة. لتجاوز شرط التحديد مستضد، نظم aAPC غالباً ما تتحمل جسم [مونوكلونل] ناهضة ضد مستقبلات CD3، الذي يحفز المجمع تكر نونسبيسيفيكالي. المؤتلف أشكال MHC، لا سيما مولتيميرس MHC، استخدمت أيضا على سطح آبك لتوفير خصوصية مستضد2،3. هو إشارة 2 إشارة كوستيمولاتوري أن يوجه نشاط الخلايا T. توفير كوستيموليشن اللازمة لتنشيط الخلية T، هو حفز مستقبلات CD28 عموما مع جسم ناهضة عرضت على السطح آبك، على الرغم من أن مستقبلات كوستيمولاتوري أخرى مثل 4-1BB كانت مستهدفة بنجاح4. يتم عادة المعطل تداولها البروتينات إشارة 1 و 2 على سطح جسيمات صلبة توليف آبك. تاريخيا، وقد كانت ملفقة aAPC من مجموعة متنوعة من المواد، بما في ذلك البوليستيرين4،5 والحديد ديكستران6. استخدام أحدث أنظمة البوليمرات القابلة للتحلل الحيوي مثل بولي (حمض اللبن-co-الجليكوليك) (بلجا) لتوليد آبك التي يمكن بسهولة إضافة إلى إشارة البروتينات وهي مناسبة للإدارة المباشرة في فيفو، ويمكن تسهيل الإفراج عن المطرد تغليف السيتوكينات أو العوامل القابلة للذوبان لزيادة تنشيط الخلية تي7،8.
بالإضافة إلى وجود بروتينات الإشارات الضرورية، مشاركة مستقبلات على مساحة كبيرة بما فيه الكفاية خلال التفاعل خلية آبك/T ضروري لتنشيط الخلية T. وهكذا، البارامترات الفيزيائية ل aAPC مثل الحجم والشكل جذريا يغير مجال الاتصال المتاحة ويؤثر على قدرتها على حفز خلايا تي. أظهرت aAPC ميكرون الحجم لتكون أكثر فعالية في تحفيز خلايا تي من9،النظراء النانو على10. ومع ذلك، يمكن أن يكون نانو-آبك بيوديستريبوشن متفوقة وأفضل الصرف إلى الغدد الليمفاوية التي يمكن أن تعزز بها الأداء في فيفو أكثر من الصغرى-آبك11. الشكل متغير آخر للفائدة في النظم المستندة إلى الجسيمات آبك. مؤخرا أظهرت aAPC متباين يكون أكثر فعالية من الجسيمات الخواص في تحفيز خلايا تي، يرجع ذلك أساسا إلى تعزيز التفاعل مع الخلايا الهدف مقترنا مع الخلية غير محددة انخفاض الإقبال. ربط خلايا تفضيلي المحور الطويل للجسيمات ارتفاعات، وأكبر نصف قطر انحناء سطح تملق والسماح لمزيد من الاتصال بين أعبك وخلية T12. كما يثبط المحور الطويل للجسيمات ارتفاعات البلعمه، أسفر عن وقت التداول زيادة مقارنة بجسيمات كروية بعد في فيفو الإدارة12،13. وبسبب هذه المزايا، التوسط الجسيمات ارتفاعات أكبر توسع محددة مستضد تي الخلايا في المختبر و في فيفو مقارنة بجسيمات كروية، لاحظ تأثير في الجزئي ونانوسكاليس12، 13. وهناك استراتيجيات مختلفة لاختلاق الجسيمات متباين، ولكن تمتد غشاء رقيق أسلوب بسيط ومقبول على نطاق واسع تستخدم لتوليد مجموعة من الجسيمات المتنوعة الأشكال14. بعد التوليف، ويلقي في الأفلام الجسيمات وامتدت في أبعاد واحد أو اثنين في درجة حرارة فوق درجة حرارة التحول الزجاجي للمواد الجسيمات. ثم يتم حل الفيلم لاسترداد الجسيمات. وعلى الرغم من تزايد الاهتمام في جزيئات متباين، النهج الحالي لتصنيع آبك على أساس الجسيمات في معظمها تقتصر على نظم الخواص، وأساليب تغيير الشكل الجسيمات يمكن أن تكون صعبة التنفيذ، غير متوافقة مع بعض التوليف aAPC استراتيجيات، والافتقار إلى الدقة وإمكانية تكرار نتائج15. لدينا تقنية تمتد من غشاء رقيق يمكن تنفيذها يدوياً أو بطريقة إليه لسرعة توليد متباين الجزيئات توليفها من مجموعة متنوعة من البوليمرات القابلة للتحلل الحيوي، امتدت إلى نسبة العرض إلى الارتفاع المطلوب في واحد أو اثنين من أبعاد15.
يستند عملنا السابق، قمنا بتطوير نهج قائم على الجسيمات القابلة للتحلل الحيوي جنبا إلى جنب مع تقنية تمتد غشاء رقيق تحجيم سرعة توليد aAPC مع الانضباطي الحجم والشكل بطريقة موحدة للخلية T التوسع السابقين فيفو أو في فيفو. يمكن استخدام استراتيجيتنا تصريف البروتين لزوجين protein(s) أي اهتمام لمجموعات الكربوكسيل على سطح الجسيمات في كثافة المرجوة، يعطي هذا النظام آبك بدرجة عالية من المرونة. كما يصف لنا طرق لوصف حجم ومورفولوجيا، والمحتوى من آبك سطح البروتين، وتقييم تلك الوظائف في المختبر. هذا البروتوكول يمكن تكييفها بسهولة لتوسيع نطاق الخلايا المناعية السابقين فيفو أو في فيفو لمجموعة متنوعة من التطبيقات إيمونوثيرابيوتيك.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Poly(vinyl alcohol), MW 25000, 88% hydrolyzed</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>02975-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G9012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Thermometer</td>
			<td>Fluke</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model name: Fluke 52 II</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersion Temperature Probe</td>
			<td>Fluke</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model name: Fluke 80PK 22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Hotplate &#38; Stirrer</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>H3760-HS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multipoint stirrer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>50093538</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resomer RG 504 H, Poly(D,L-lactide-co-glycolide)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>719900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D65100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer</td>
			<td>IKA</td>
			<td>&#160;0003725001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonicator</td>
			<td>Sonics &#38; Materials, Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model number: VC 505</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonicator sound abating enclosure</td>
			<td>Sonics &#38; Materials, Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Part number: 630-0427</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonicator probe</td>
			<td>Sonics &#38; Materials, Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Part number: 630-0220</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonicator microtip</td>
			<td>Sonics &#38; Materials, Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Part number: 630-0423</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High speed centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model number: J-20XP (discontinued), alternative model: J-26XP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High speed centrifuge rotor</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>369691</td>
			<td>Model number: JA-17</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High speed polycarbonate centrifuge tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>3118-0050</td>
			<td>50 mL, screw cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectangular disposable petri dish</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>25384-322</td>
			<td>75 x 50 x 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square disposable petri dish</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>10799-140</td>
			<td>100 mm x 100 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEAF&#160;Purified anti-mouse CD3&#949; Antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InVivoMab anti-mouse CD28, clone 37.51</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0015-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-(3-Dimethylaminopropyl)-N&#8242;-ethylcarbodiimide hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E6383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Hydroxysulfosuccinimide sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3671</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-mouse CD3 Antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-mouse CD28 Antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>102109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;96 Well Solid Polystyrene Microplate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS3915</td>
			<td>flat bottom, black polystyrene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein LoBind Tubes, 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22431081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium (+ L-Glutamine)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4135</td>
			<td>Heat Inactivated, sterile-filtered</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ciprofloxacin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>17850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human IL-2 (carrier-free)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>589102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Vitamin Solution (100X)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11120052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8a+&#160;T Cell Isolation Kit, mouse</td>
			<td>Miltenyi Biotech</td>
			<td>130-104-075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTrace CFSE Cell Proliferation Kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS Columns</td>
			<td>Miltenyi Biotech</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MidiMACS Separator</td>
			<td>Miltenyi Biotech</td>
			<td>130-042-302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS Multistand</td>
			<td>Miltenyi Biotech</td>
			<td>130-042-303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cytometer</td>
			<td>Accuri C6</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synergy 2 Multi-Detection Microplate Reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>autoMACS Running Buffer</td>
			<td>Miltenyi BIotech</td>
			<td>130-091-221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>22363548</td>
			<td>Sterile, 70 &#181;m nylon mesh</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysing Buffer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J (Black 6) Mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td>Male, at least 7 weeks old</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U-Bottom Tissue Culture Plates</td>
			<td>VWR</td>
			<td>353227</td>
			<td>Sterile, 96-well tissue culture treated polystyrene plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 V DC Power Supply</td>
			<td>Probotix</td>
			<td>LPSK-4010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE Coated Wire</td>
			<td>Mouser</td>
			<td>602-5858-100-01</td>
			<td>This is for a 100 ft. spool but an equivalent wire will work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stepper Motor Driver</td>
			<td>Probotix</td>
			<td>MondoStep5.6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IDC Connector Kit</td>
			<td>Probotix</td>
			<td>IDCM-10-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcontroller</td>
			<td>Probotix</td>
			<td>PBX-RF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4A Fuses</td>
			<td>Radio Shack</td>
			<td>2701026</td>
			<td>Equivalent fuses will work as well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DB25 Male to Male Cable</td>
			<td>Probotix</td>
			<td>DB25-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB-A to USB-B Cable</td>
			<td>Staples</td>
			<td>2094915</td>
			<td>Equivalent cable will work as well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-Pin Amphenol Connectors Male and Female</td>
			<td>Mouser</td>
			<td>654-97-3100A-20-7P and 654-97-3106A20-7S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stepper Motor</td>
			<td>Probotix</td>
			<td>HT23-420-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Right Hand Lead Screw</td>
			<td>Roton</td>
			<td>60722</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Left Hand Lead Screw</td>
			<td>Roton</td>
			<td>60723</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screws</td>
			<td>McMaster Carr</td>
			<td>92196A151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neoprene Rubber</td>
			<td>McMaster Carr</td>
			<td>8698K51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Right Handed Flanged Lead Nut</td>
			<td>Roton</td>
			<td>91962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Left Handed Flanged Lead Nut</td>
			<td>Roton</td>
			<td>91963</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linux Control Computer</td>
			<td>Probotix</td>
			<td>LCNC-PC</td>
			<td>Any computer with matching specification and Linux operating system will work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning bottle-top vacuum filter system</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS431097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Solution, 0.4 %</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15250061</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fabrication of anisotropic polymeric artificial antigen presenting cells for cd8+ t cell activation

مستضد الاصطناعي عرض الخلايا (آبك) منصة واعدة للتحوير المناعي نظراً لقدرتها القوية لتحفيز خلايا تي. ركائز اللاخلوي توفر مزايا رئيسية على aAPC يستند إلى الخلية، بما في ذلك مراقبة دقيقة لمعلمات عرض الإشارات والخصائص الفيزيائية لسطح آبك تعدل تفاعلاته مع خلايا تي. آبك مصنوع من جسيمات متباين، جسيمات ارتفاعات خاصة، قد ثبت أن يكون أكثر فعالية من نظرائهم كروية في تحفيز خلايا تي بسبب زيادة الربط وأكبر من المساحة المتوفرة للخلية T الاتصال، كذلك كما أن انخفاض الإقبال غير محدد وتعزيز خصائص الحرائك الدوائية. وعلى الرغم من الاهتمام المتزايد بالجسيمات متباين، مقبولة على نطاق واسع حتى أساليب توليد جسيمات متباين مثل تمتد غشاء رقيق يمكن أن يكون تحديا لتنفيذ واستخدام تكاثر.
وتحقيقا لهذه الغاية، وصف بروتوكول لتصنيع سريع وموحد للتحلل aAPC المستندة إلى الجسيمات متباين مع الانضباطي الحجم، الشكل، وإشارة العرض التقديمي لخلية تي توسع السابقين فيفو أو في فيفو، جنبا إلى جنب مع أساليب تميز حجمها ومورفولوجيا، والبروتين السطحي المحتوى، وتقييم الوظائف الخاصة بهم. هذا النهج إلى اختﻻق aAPC متباين للتحجيم واستنساخه، مما يجعله مثاليا لتوليد آبك إيمونوثيرابيس "الجاهزة للاستخدام".

ويرد في الشكل 1تخطيطي للألى 2D رقيقة تمتد الجهاز. ويرد في هو et al.17 نقالة يتكون من أجزاء الألومنيوم استخدام التفريز القياسية وتقنيات القطع التخطيطي، ووصف لطبقة رقيقة 1 د تمتد الجهاز. مماثلة على نقالة د 1، نقالة 2D يتكون من قبضة معدنية والقضبان دلي?...

Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of Anisotropic Polymeric Artificial Antigen Presenting Cells for CD8+ T Cell Activation at JoVE.com

Fabrication of Anisotropic Polymeric Artificial Antigen Presenting Cells for CD8+ T Cell Activation

نقدم هنا، بروتوكول بسرعة وتكاثر توليد مستضد أرتيسيفيكال القابلة للتحلل بيولوجيا من وحي، وعرض الخلايا (آبك) مع الانضباطي الحجم والشكل والعرض التقديمي البروتين السطحي للخلية T التوسع السابقين فيفو أو الحية .

تصنيع متباين مستضد الاصطناعية البوليمر عرض خلايا CD8 + تي خلية التنشيط

Artificial antigen presenting cells (aAPC) are a promising platform for immune modulation due to their potent ability to stimulate T cells. Acellular ...

يمكن أن يساعد هذا الأسلوب في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الهندسة الأمينية. مثل, ما هو دور الخواص الفيزيائية الجسيمات على التفاعلات الخلايا المناعية الحيوية الحيوية وتنشيط. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تمكن من التحكم المستقل في حجم وشكل الجسيمات الحيوية.الآثار المترتبة على هذه التقنية تمتد نحو علاج السرطان كما هو خارج العلاج الجسيمات الجرف التي يمكن أن تسبب في استجابات المناعة الخلايا الحية بوساطة. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في علاج السرطان الأمينية، ويمكن أيضا أن تطبق على أنظمة أخرى. مثل الأمراض المعدية أو مرض السكري من النوع الأول.لتخليق الجسيمات الدقيقة، تبدأ من خلال وزنها من أصل 100 ملليغرام من بولي (اللاكتيك شارك الجليكوليك حمض) أو PLGA، في قارورة التلألؤ وحل PLGA في خمسة ملليلتر من ديكلوروميثان عن طريق دوامة. وضع التجانس في الكلاك التي تحتوي على 50 ملليلتر من 1٪ من البولي فينيل الكحول، أو حل PVA، بحيث التجانس هو أقرب إلى الجزء السفلي من الكوابر ممكن دون لمسه. بدوره على التجانس إلى السرعة المناسبة وإضافة حل PLGA إلى beaker لمدة دقيقة واحدة من التجانس.في نهاية التجانس، صب حل الجسيمات الدقيقة PLGA الكحول بوليفينيل في الكوابر التي تحتوي على 100 ملليلتر من 5٪ محلول PVA على لوحة ضجة في غطاء محرك السيارة الكيميائية وتحريك الحل لمدة أربع ساعات على الأقل. عندما يتبخر المذيب، صب حل الجسيمات في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر وجمع الجسيمات عن طريق الطرد المركزي. استبدل المابير في كل أنبوب بـ 20 ملليلتر من الماء المُتأين ثم أعد تعليق الجسيمات عن طريق الدوامة.ثم جلب حجم النهائي في كل أنبوب تصل إلى 50 ملليلتر مع المياه الطازجة دي المتأينة وغسل الجسيمات مرتين أكثر كما هو موضح للتو. لتخليق الجسيمات النانوية، قم بحل 200 ملليغرام من PLGA في خمسة ملليلتر من ديكلوروميثان ووضع مسبار صوتاتور في منبر يحتوي على 50 ملليلتر من محلول PVA 1٪ على الجليد دون لمس الجزء السفلي من القارص. تبدأ سونيكيشن في 12 واط وعلى الفور إضافة حل PLGA إلى beaker لمدة دقيقتين سونيكيشن لتوليد جزيئات نانو مع قطر 200 نانومتر تقريبا.بعد سونيكيشن، صب 1٪ بوليفينيل الكحول PLGA حل الجسيمات النانوية في beaker تحتوي على 100 ملليلتر من 5 محلول PVA على لوحة ضجة لمدة أربع ساعات من التبخر المذيب في غطاء الدخان الكيميائية. عندما يتبخر كل من المذيبات، صب حل الجسيمات في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر للطرد المركزي لإزالة أي جزيئات صغيرة وإزالة المواد الفوقية. ثم نقل جزيئات النانو إلى أنابيب أجهزة الطرد المركزي عالية السرعة لثلاثة يغسل في المياه دي المؤين كما هو موضح.لتصنيع الجسيمات البوليمرية، بعد الغسيل الأخير، إعادة تعليق الجسيمات في ما يقرب من ملليلتر من المياه الطازجة دي المتأينة وإضافة حل صب الفيلم إلى الجسيمات إلى تركيز نهائي من 2.5 ملليغرام لكل ملليلتر الجسيمات. نقل تعليق الجسيمات في 10 ملليلتر aliquots في 75 من 50 ملليمتر مستطيلة أطباق بيتري لتمتد واحدة الأبعاد. أو في 15 ملليلتر aliquots في 100 من قبل 100 ملليمتر أطباق بيتري مربع لتمتد ثنائية الأبعاد.بعد التجفيف بين عشية وضحاها في غطاء محرك السيارة الكيميائية، واستخدام ملاقط لإزالة الأفلام وتقليم حواف مع مقص. لتمتد 1D، ضع حواف قصيرة اثنين من فيلم واحد بين قطعتين من المطاط النيوبرين لتركيب على كتل الألومنيوم من محور واحد من جهاز تمديد فيلم رقيقة الآلي. ثم استخدام وجع ألن المسمار قبضة معدنية على رأس المطاط لعقد الفيلم في مكان.لتمتد 2D، جبل جميع حواف أربعة على أربع كتل الألومنيوم لتمتد الفيلم على كلا محاور قياس وتسجيل طول الفيلم في ما بين كتل الألومنيوم على محور واحد لD واحد تمتد أو كلا المحورين لتمتد 2D وحساب المسافة المطلوبة لتمتد الفيلم في اتجاه واحد أو اثنين على أساس امتداد أضعاف المطلوب. ثم ضع الفيلم تحميل جهاز التمدد في فرن في 90 درجة مئوية بجانب أكبر من كمية كبيرة من الماء لجلب الفيلم إلى درجة الحرارة أكثر من 10 دقيقة. عندما يكتمل التمدد، دع الفيلم يبرد لدرجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة.لتمدد 1D، قطع الفيلم من جهاز تمتد على حواف. ل2D تمتد، وقطع وحفظ مربع مركز الفيلم الذي يتم امتدت بشكل موحد على كلا المحورين. ضع الأفلام في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر مع ما لا يزيد عن فيلمين لكل أنبوب وإضافة ما يقرب من 25 ملليلتر من المياه المنزوعة المؤينة إلى كل أنبوب للدوامة.عندما تكون الأفلام قد حلت، وغسل الجسيمات ثلاث مرات في المياه دي المتأين كما هو موضح. إعادة تعليق الجسيمات في ما يقرب من ملليلتر من المياه الطازجة دي المتأينة لكل أنبوب بعد الغسيل الماضي. ثم تجميد الجسيمات في ناقص 80 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة أو بين عشية وضحاها التجميل.في صباح اليوم التالي، إعادة تعليق الجسيمات الصغيرة أو النانوية الlyophilized في 20 ملليغرام لكل ملليلتر في عازلة ميس الطازجة المعدة مع دوامة. إضافة 100 ميكرولترات من حل الجسيمات إلى أنبوب الطرد المركزي الجزئي البولي بروبلين التي تحتوي على 900 ميكرولترات من المخزن المؤقت ميس وإضافة 100 ميكرولترات من حل NHS EDC الطازجة. اخلط الجسيمات عن طريق الدوامة واحتضان الجسيمات على العاكس في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.في نهاية الحضانة، وجمع الجسيمات عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق كريات الجسيمات الدقيقة في ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني عن طريق دوامة أو إعادة تعليق الجسيمات النانوية في ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني من قبل خمس ثوان من سونيكيشن في اثنين إلى ثلاثة واط. بعد ذلك، إضافة ثمانية ميكروغرام من إشارة مناسبة بروتين واحد و 10 ميكروغرام من الأجسام المضادة للماوس CD28 إلى الجسيمات الدقيقة، أو 16 ميكروغرام من إشارة بروتين واحد و 20 ميكروغرام من المضادة للماوس CD28 إلى الجسيمات النانوية. جلب حجم النهائي في كل أنبوب إلى 1.1 ملليلتر مع برنامج تلفزيوني واحتضان الجسيمات بين عشية وضحاها على العاكس في أربع درجات مئوية.في اليوم التالي، غسل الجسيمات ثلاث مرات في المياه دي المتأين كما هو موضح. تم تصنيع هذه الجزيئات النانوية والصغرى PLGA باستخدام تقنيات مستحلب واحدة كما هو موضح وصور باستخدام المجهر الإلكتروني انتقال ومسح. وبعد التجانس، أظهرت الجسيمات الدقيقة قطرها المتوسط البالغ حوالي ثلاثة ميكرومترات.وكان للجسيمات الدقيقة الكروية حصة جانبية تبلغ حوالي واحد، في حين أن الجسيمات الإهليلية الزهجية الممتدة من الـ 1D كانت لها نسبة أكبر من الارتفاع تبلغ حوالي ثلاثة ونصف، وكانت الجسيمات الإهليلية المتمددة 2D ذات نسبة إلى الارتفاع تبلغ حوالي 1.2، مما يحافظ على نسبة إلى الارتفاع تبلغ 1. تكشف نتائج كفاءة الاقتران عن كميات مماثلة من البروتين على سطح الخلايا الاصطناعية الدقيقة المجهرية الكروية والإهليلجية التي تقدم، أو AAPC و NANO-AAPC، مما يدل على أن اقتران البروتين أثناء تخليق AAPC يحدث بطريقة تعتمد على التركيز. تم العثور على prolate اهبسويديال AAPC للحث على مستويات أعلى من انتشار الخلايا T في جرعات دون تشبع من AAPC كروية مع أفضل فصل يتحقق في جرعة 01 مليغرام.بعد سبعة أيام، كشف العد اليدوي للخلايا التائية أن البرلات الإهليلجي AAPC تحفز الخلايا التائية بشكل أكثر فعالية مقارنة بنظرائها الكروية في النطاق الصغير والنانو بطريقة تعتمد على الجرعة. بعد هذا الإجراء، يمكن أن يكون مدير AAPC في الجسم الحي لقياس فعاليتها العلاجية و الدوائية. بعد تطورها ، ساعدت هذه التقنية في تمهيد الطريق للباحثين في مجال الهندسة المناعية لاستكشاف تأثير النظائر على فعالية AAPC.

Research

JoVE Journal

Environment

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

الإنتاج الضخم ل Aedes aegypti المعدلة وراثيا للإصدارات الميدانية في البرازيل

New techniques and methods are being sought to try to win the battle against mosquitoes. Recent advances in molecular techniques have led to the ...

Measuring Fluxes of Mineral Nutrients and Toxicants in Plants with Radioactive Tracers

قياس تدفقاتها من المغذيات المعدنية والمواد السامة في النباتات مع المشعة الراسمات

Unidirectional influx and efflux of nutrients and toxicants, and their resultant net fluxes, are central to the nutrition and toxicology of plants. ...

A Whole Cell Bioreporter Approach to Assess Transport and Bioavailability of Organic Contaminants in Water Unsaturated Systems

ككل نهج Bioreporter خلية لتقييم النقل والتوافر الحيوي للملوثات العضوية في أنظمة غير المشبعة المياه

Bioavailability of contaminants is a prerequisite for their effective biodegradation in soil. The average bulk concentration of a contaminant, however, is ...

Use of Chironomidae (Diptera) Surface-Floating Pupal Exuviae as a Rapid Bioassessment Protocol for Water Bodies

Use of Chironomidae Diptera Surface-Floating Pupal Exuviae as a Rapid Bioassessment Protocol for Water Bodies

استخدام الوامئات (ذوات الجناحين) العذراء سلخ بمثابة بروتوكول Bioassessment السريع لالمسطحات المائية العائمة السطحية

Rapid bioassessment protocols using benthic macroinvertebrate assemblages have been successfully used to assess human impacts on water quality. ...

Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge

استخراج المواد الإنشائية خارج الخلية البوليمرية من هوائية حبيبي الحمأة

To evaluate and develop methodologies for the extraction of gel-forming extracellular polymeric substances (EPS), EPS from aerobic granular sludge (AGS) ...

Functionalization and Dispersion of Carbon Nanomaterials Using an Environmentally Friendly Ultrasonicated Ozonolysis Process

فونكتيوناليزاشيون وتشتت المواد النانوية الكربون باستخدام عملية أوزونوليسيس أولتراسونيكاتد الصديقة للبيئة

Functionalization of carbon nanomaterials is often a critical step that facilitates their integration into larger material systems and devices. In the ...

Ecosystem Fabrication (EcoFAB) Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

Ecosystem Fabrication EcoFAB Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

بروتوكولات النظام الإيكولوجي تلفيق (اكوفاب) لتشييد مختبر النظم الإيكولوجية تهدف إلى دراسة التفاعلات بين الميكروبات والنبات

Beneficial plant-microbe interactions offer a sustainable biological solution with the potential to boost low-input food and bioenergy production. A ...

A Strain Gauge Monitor (SGM) for Continuous Valve Gape Measurements in Bivalve Molluscs in Response to Laboratory Induced Diel-cycling Hypoxia and pH

A Strain Gauge Monitor SGM for Continuous Valve Gape Measurements in Bivalve Molluscs in Response to Laboratory Induced Diel-cycling Hypoxia and pH

قياس الضغط مراقب (SGM) "قياسات تثاءب صمام المستمر" في "الرخويات الصدفتين" في استجابة لنقص ركوب الدراجات "البحرية الناجمة عن المختبر" والأس الهيدروجيني

An inexpensive, laboratory-based, strain gauge valve gape monitor (SGM) was developed to monitor the valve gape behavior of bivalve molluscs in response ...

Bioindication Testing of Stream Environment Suitability for Young Freshwater Pearl Mussels Using In Situ Exposure Methods

Bioindication Testing of Stream Environment Suitability for Young Freshwater Pearl Mussels Using In Situ Exposure Methods

بيوينديكيشن اختبار لمدى ملاءمة البيئة تيار للشباب المياه العذبة بيرل بلح البحر باستخدام طرق التعرض في الموقع

Knowledge of habitat suitability for freshwater mussels is an important step in the conservation of this endangered species group. We describe a protocol ...

Cultivation of Green Microalgae in Bubble Column Photobioreactors and an Assay for Neutral Lipids

زراعة الطحالب الخضراء في فقاعة العمود Photobioreactors وفحص للدهون محايدة

There is significant interest in the study of microalgae for engineering applications such as the production of biofuels, high value products, and for the ...